γ-氨基丁酸在葛根素注射劑中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及γ-氨基丁酸在葛根素注射劑中的醫(yī)藥應用，該注射劑將γ-氨基丁酸與葛根素相互配伍制成含葛根素的注射劑，或者γ-氨基丁酸注射劑與葛根素聯注射劑聯合應用，有效克服了含有葛根素注射劑的偶發(fā)性溶血不良反應，提高了葛根素注射給藥的安全性。
【專利說明】Y-氨基丁酸在葛根素注射劑中的應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及氨基丁酸的醫(yī)藥新用途，具體涉及在葛根素注射劑中的應用。

【背景技術】
[0002] γ-氨基丁酸（簡稱GABA)，是一種四碳非蛋白氨基酸，廣泛存在于動植物中。據文 獻記載，早在1949年就從土豆中發(fā)現了 GABA，1950年又在動物大腦中發(fā)現GABA。在神經中 樞中，1/3的神經突觸部位都是以GABA為遞質，與大腦皮質、垂體、下丘腦、生殖器官、肝臟 和腎臟等存在著密切的關系。它對人體存在諸多益處，如對心肺血管有直接或間接作用，調 節(jié)血壓與心率；營養(yǎng)神經系統(tǒng)的發(fā)育，促進膜蛋白的合成；廣泛應用于癲癇、帕金森、亨廷 頓氏病等疾病的治療；促進細胞新陳代謝，提高腦活力；抑制谷氨酸脫羧反應，降低血氨， 保護肝臟；降低神經元活性，鎮(zhèn)靜神經，抑制焦慮等癥；還具有保護腎臟、抗衰老、促進生長 激素分泌、預防肥胖、促進酒精代謝等功效。具有保肝、利腎、健腦、延緩衰老等多種生理活 性，應用于醫(yī)藥、保健食品、新資源食品和飼料添加劑等領域（見楊晶晶、曲媛、崔秀明撰寫 的《Y -氨基丁酸的制備方法與含量測定研究進展》，食品工業(yè)科技，2014, 35 (3) :351-356 頁）。
[0003] 葛根素是從豆科植物野葛的干燥根中提取的單體-異黃酮化合物，4'，7 -二羥 基-8-i3_D葡萄糖基異黃酮。臨床上廣泛用于心血管疾病的治療。目前應用于臨床的含有 葛根素的藥物制劑主要是注射劑。隨著葛根素的廣泛使用，近年來有關葛根素不良反應的 報道也越來越多，引起醫(yī)藥界廣泛關注。通過分析近20年中藥不良反應，葛根素注射液位 列第18位。國家藥品不良反應監(jiān)測中心曾在2003年1月第3期《藥品不良反應信息通報》 中通報了葛根素注射液的不良反應。大多數研究者認為，葛根素注射液是以50%丙二醇為 溶媒配制而成，不可避免因提取工藝、技術等方面的差異產生純度不夠，引入雜質而導致各 種反應（見徐向輝撰寫的《對臨床使用葛根素注射液出現不良反應的分析》，上海中醫(yī)藥雜 志，2006,40(8) :71-72 ;和徐世國撰寫的《葛根素的臨床應用及不良反應》，時珍國醫(yī)國藥， 2005,16 (12) :1307-1308)。在對2000-2004年國內主要醫(yī)藥期刊報道的63例葛根素不良 反應進行分析后發(fā)現，男40例，女23例；年齡34?81 (57. 5±23. 5)歲。所有病例均為靜 脈滴注給藥。給藥劑量為0. 4?0. 6g，藥品稀釋液均為5%葡萄糖液、生理鹽水、5%葡萄糖 鹽水等。反應發(fā)生時間最快者為3min，最慢者為13d，均發(fā)生在給藥過程中。首次給藥出現 反應者47例，重復給藥出現反應者16例。統(tǒng)計顯示，常見不良反應有變態(tài)反應（發(fā)熱、顫 抖等，24例）、過敏性休克（4例）、溶血性貧血（13例）、肝損害、腎損害（7例）、藥物熱（10 例）、死亡（5例）。所有病例均無過敏史，反應發(fā)生后停藥經對癥處理均恢復（死亡病例 除外）。用藥劑量及所用稀釋液在藥品說明書提示范圍內，所有反應均肯定為葛根素所致。 不良反應的發(fā)生與所患疾病無關，與年齡、性別無關，與藥物稀釋液無多大聯系。與患者體 質差異有關，特別是年老體弱者易發(fā)生。反應發(fā)生時間的長短與中藥制劑起效緩慢程度有 關（見全心榮撰寫的《葛根素不良反應63例文獻分析》，現代中西醫(yī)結合雜志，2005,14 (1): 140)。一患者靜滴葛根素約lOmin，即出現為急性腎功能不全，溶血性貧血（見關銘華撰寫 的《葛根素致溶血性貧血》，藥物不良反應雜志，2003, 5 :291)。因此，葛根素引起的溶血性貧 血是葛根素本身所致。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供氨基丁酸藥物的新用途，即氨基丁酸在葛根素注 射劑中的應用，氨基丁酸可有效防治葛根素誘發(fā)的血管內溶血不良反應。
[0005] 實際上，本發(fā)明涉及Y -氨基丁酸在制備葛根素注射用復方制劑時的應用，也可 以和葛根素注射劑以注射和輸液的方式臨時配合應用，或者在以注射和輸液的方式應用 Y-氨基丁酸后再接著應用葛根素注射劑。
[0006] 為達到上述目的，本發(fā)明采用的技術方案是：Y -氨基丁酸在制備葛根素注射劑 的新用途。氨基丁酸和葛根素注射劑以注射和輸液的方式臨時配合應用。在以注射和 輸液的方式應用氨基丁酸后再接著應用葛根素注射劑。
[0007] 上述技術方案中的有關內容解釋如下：
[0008] 1、上述方案中，所述的注射劑，含有以下重量份藥物：氨基丁酸1?50份，葛 根素1?500份。
[0009] 2、上述方案中，所述的注射劑，還含有輔料1?50重量份，注射用水1?10000重 量份。所述的輔料為碳酸氫鈉溶液、葡萄糖液、丙二醇液、葡萄糖鹽水、氯化鈉注射液或生理 鹽水。
[0010] 3、上述方案中，所述的注射劑可以是臨床上可接受的注射液、粉針或輸液。
[0011] 4、上述方案中，所述的注射劑的制備方法如下所述：
[0012] 所述的粉針，由氨基丁酸和葛根素混合、滅菌制得；或者由氨基丁酸、葛根 素和氯化鈉混合，加注射用水溶解，再用鹽酸或碳酸氫鈉溶液調整pH值至5. 0-8. 5,過濾， 濾液滅菌后灌封在粉狀安瓿中再次滅菌制得；
[0013] 所述的注射劑，由氨基丁酸、葛根素和氯化鈉混合，加注射用水溶解，再用鹽 酸或碳酸氫鈉溶液調整pH值5. 0-8. 5,過濾，濾液灌封在安瓿中滅菌制得?；虬被?酸由5%葡萄糖液，5%葡萄糖鹽水，丙二醇液（由丙二醇與生理鹽水按體積比（1 : 1)配 置而成，內含丙二醇〇. 5mL/mL)，氯化鈉注射液或生理鹽水溶解，再與葛根素注射劑混合，過 濾，濾液灌封在安瓿中滅菌制得。
[0014] 所述的輸液，由氨基丁酸、葛根素和氯化鈉混合，加注射用水溶解，再用鹽酸 或碳酸氫鈉溶液調整pH值5. 0-8. 5,溶解，過濾，濾液灌封在鹽水玻璃瓶中滅菌制得?；?氨基丁酸由5%葡萄糖液，5%葡萄糖鹽水，丙二醇液（由丙二醇與生理鹽水按體積比 (1 : 1)配置而成，內含丙二醇〇.5mL/mL)，氯化鈉注射液或生理鹽水溶解，再與葛根素注射 劑混合，過濾，濾液灌封在安瓿中滅菌制得。
[0015] 5、上述方案中，所述的臨時配合應用是指在醫(yī)院，在應用葛根素注射劑的同時與 Y-氨基丁酸混合一同輸液或注射。
[0016] 6、上述方案中，所述的在以注射和輸液的方式應用氨基丁酸后再接著應用葛 根素注射劑，是指在醫(yī)院，以注射和輸液的方式應用Y -氨基丁酸后，再接著以注射和輸液 的方式應用葛根素注射劑。
[0017] 葛根素具有有擴張冠狀動脈和腦血管、降低心肌耗氧量，改善微循環(huán)和抗血小板 聚集的作用。臨床上用于輔助治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞、視網膜動靜脈阻塞、突發(fā)性耳 聾及缺血性腦血管病、小兒病毒性心肌炎、糖尿病等。葛根素還可以與氨基丁酸配伍制 成復方葛根素注射劑用于防治多種疾病，如用于防治糖尿病周圍神經病變、高血壓合并糖 尿病、糖尿病腎病、急性腦梗死、穩(wěn)定型心絞痛、下肢深部靜脈血栓形成以及椎基底動脈供 血不足性眩暈等。但是，含葛根素注射劑中的葛根素極易引起血管內溶血。氨基丁酸不 僅具有保肝、利腎、健腦、延緩衰老等多種生理活性，本
【發(fā)明者】經過研究證實Y-氨基丁酸 還具有拮抗由葛根素誘發(fā)的血管內溶血不良反應，提高葛根素注射給藥的安全性。
[0018] 下面結合一些試驗進一步來說明本發(fā)明的目的和所能達到的效果。
[0019] 本實驗參考《中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術指導原則》對溶血試驗進 行預試驗，發(fā)現8mM葛根素能夠引起1 %的綿羊紅細胞溶血10 %，體外溶血試驗發(fā)生概率為 100%，溶血試驗結果均得到重現，說明方法可重復。該方法可用于發(fā)現注射劑的潛在的偶 發(fā)溶血現象，是進行注射劑新藥開發(fā)判斷是否存在偶發(fā)性溶血的可行試驗方法，有利于減 少不良反應的發(fā)生，提高注射劑的安全性。
[0020] 一、氨基丁酸拮抗含有葛根素的注射劑溶血不良反應的作用及效果
[0021] (一）葛根素注射劑溶血試驗
[0022] 研究氨基丁酸與葛根素合用對綿羊紅細胞的影響。取10只小尾寒羊的紅細 胞，分別加入一定劑量的Y -氨基丁酸與葛根素，l〇min后，觀察紅細胞的狀態(tài)和溶血發(fā)生 率，用X2檢驗統(tǒng)計分析實驗結果，探尋Y -氨基丁酸對葛根素注射劑偶發(fā)性溶血的對抗作 用?，F將結果報告如下：
[0023] 1實驗材料
[0024] 1. 1受試藥物
[0025] Y -氨基丁酸（Y -Aminobutyric acid，GABA)注射劑①：γ -氨基丁酸購自 BAOXIN 公司，CASNumber :56-12-2。用電子天平準確稱取GABA1.031g，溶于生理鹽水溶液，用10mL 容量瓶將GABA溶液定容至10mL，此為注射劑①，濃度為1M。用微孔濾膜（0. 22 μ m)過濾除 菌，4°C保存。
[0026] 注射劑②：用滅菌生理鹽水將注射劑①稀釋至100mM，10mL，4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0027] 注射劑③：用滅菌生理鹽水將注射劑①稀釋至10mM，10mL，4°C保存?zhèn)溆谩?br> [0028] 葛根素注射劑④：由浙江康恩貝制藥股份有限公司提供，2mL，產品批號090501， 每mL注射劑含葛根素50mg。
[0029] 葛根素注射劑（250mM)⑤：用電子天平精確稱取葛根素粉末（購自江蘇天晟藥品 有限公司）l.〇41g，用40%二甲基亞砜（DMS0，DZ0231，AMRESC0)溶解，超聲助溶，生理鹽水 溶液稀釋至9mL，容量瓶定容至10mL，溶液顏色呈無色（配置環(huán)境：超凈工作臺中進行）。溶 劑為40% DMS0溶液。用微孔濾膜（0. 22 μ m)過濾除菌，4°C保存。
[0030] 復方葛根素注射劑⑥：取注射劑①0. 04mL，注射劑④0. 27mL，混勻，共0. 31mL，組 成注射劑⑥。每mL注射劑含葛根素43. 55mg、γ-氨基丁酸1330mg。
[0031] 復方葛根素注射劑⑦：取注射劑②0. 04mL，注射劑④0. 27mL，混勻，共0. 31mL，組 成注射劑⑦。每mL注射劑含葛根素43. 55mg、γ -氨基丁酸1. 33mg。
[0032] 復方葛根素注射劑⑧：取注射劑③0. 04mL，注射劑④0. 27mL，混勻，共0. 31mL，組 成注射劑⑧。每mL注射劑含葛根素43. 55mg、γ -氨基丁酸0. 133mg。
[0033] 復方葛根素注射劑⑨：取注射劑①0. 04mL，注射劑⑤0. 13mL，混勻，共0. 17mL，組 成注射劑⑨。每mL注射劑含葛根素79. 61mg、γ -氨基丁酸24. 26mg。
[0034] 復方葛根素注射劑⑩：取注射劑②0. 04mL，注射劑⑤0. 13mL，混勻，共0. 17mL，組 成注射劑⑩。每mL注射劑含葛根素79. 61mg、γ -氨基丁酸2. 426mg。
[0035] 復方葛根素注射劑? :取注射劑③0. 04mL，注射劑⑤0. 13mL，混勻，共0. 17mL，組 成注射劑〇。每mL注射劑含葛根素79. 61mg、氨基丁酸0. 2426mg。
[0036] 1. 2實驗動物
[0037] 小尾寒羊10只（20?30Kg)，由西北農林科技大學動物實驗中心提供。在室溫 15?25°C，相對濕度50%條件下飼養(yǎng)。
[0038] 1.3試劑、儀器
[0039] 氯化鈉注射劑，批號：31213042402,石藥銀湖制藥有限公司生產；注射用水，自 制；TGL-16B高速離心機，湖南星科科學儀器有限公司；HPY-01B生化培養(yǎng)箱，黃石恒豐醫(yī)療 器械有限公司；BI0-RAD680酶標儀；酶標條購由江蘇海門三和興亞醫(yī)療器械廠生產，購自 陜西省楊凌寶鑫器材有限公司。
[0040] 2 方法
[0041] 2. 1紅細胞懸浮液的制備
[0042] 小尾寒羊10只，分別進行溶血實驗。每只綿羊采頸靜脈血10mL，肝素鈉（江蘇萬 邦生化醫(yī)藥股份有限公司）160IU抗凝后，置于刻度離心管內，以2000轉/分鐘離心10分 鐘，棄去血漿，加入適量的氯化鈉注射劑洗滌，離心棄去上清液及白細胞層。再加適量生理 鹽水搖勻、離心，如此反復洗滌3次，至離心后上清液呈無色透明為止。將所得壓積紅細胞 用生理鹽水稀釋成11% (體積比）的紅細胞懸液。至此，紅細胞懸液準備完畢。
[0043] 2. 2葛根素溶液體外溶血實驗設計
[0044] 設葛根素溶液作用于紅細胞的濃度為8mM(0. 00333g ^171)。設陰性對照組，溶劑 對照組（用DMS0代替葛根素溶液作用于紅細胞），藥物處理組及陽性對照組。用METTLER TOLEDO臺式pH計測定葛根素溶液的pH值為7. 16。
[0045] 按照下表1中所示，分別往試管里加入相應成分，注意加樣順序。每加完一種成分 后，都輕輕搖勻。等體系中所有成分都加入體系中后，輕輕震蕩混勻，放置37°C的生化培養(yǎng) 箱溫育。lOmin后觀察溶血和凝聚反應。凝聚反應判定方法：若溶液中有紅棕色或棕紅色 絮狀沉淀，振搖后不分散，表明有紅細胞凝集發(fā)生，若凝聚物振搖后又能均勻分散，則為假 凝集，若凝聚物不被搖散者則為真凝集。接著各管按照5000rpm/min條件離心，肉眼觀察上 清液顏色。取上清液，于540nm波長處檢測光吸收值（0D值）。根據2005年《中藥、天然藥 物刺激性和溶血性研究的技術指導原則》，按公式計算各組各管的溶血率:
[0046] 溶血率（％ )=(藥物處理組0D值-陰性對照組0D值）八陽性對照組00值-陰 性對照組0D值）
[0047] 參考評價標準：溶血率> 5%表明有溶血現象發(fā)生，并進行統(tǒng)計學處理。
[0048] 表1葛根素溶液與Y -氨基丁酸（GABA)體外溶血實驗分組設計
[0049]

【權利要求】
1. 氨基丁酸在葛根素注射劑中的應用。
2. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于：Υ-氨基丁酸可以和葛根素注射劑做成復 方注射劑應用，也可以和葛根素注射劑以注射和輸液的方式臨時配合同時應用，或者在以 注射和輸液的方式應用Υ-氨基丁酸后再接著應用葛根素注射劑。
3. 根據權利要求2所述的同時應用，其特征在于：葛根素注射劑和γ-氨基丁酸注射 劑在為患者應用前混勻，再以注射和輸液的方式應用。
4. 根據權利要求2所述的以注射和輸液的方式應用γ-氨基丁酸后再接著應用葛根 素注射劑，其特征在于：先為患者應用氨基丁酸注射劑結束后，再接著應用葛根素注射 劑。
5. 根據權利要求1、2、3、4所述的注射劑和注射劑的應用，其特征在于：含有以下重量 份藥物：Υ -氨基丁酸1?50份，葛根素1?500份。
6. 根據權利要求1、2、3、4、5所述的注射劑和注射劑的應用，其特征在于：可以含有輔 料1?50重量份、注射用水1?10000重量份。
7. 根據權利要求1、2、3、4、5、6所述的注射劑和注射劑的應用，其特征在于：所述的輔 料可以為碳酸氫鈉溶液、葡萄糖液、葡萄糖鹽水、丙二醇液、氯化鈉注射液或生理鹽水注射 液。
8. 根據權利要求1、2、3、4、5、6或7所述的注射劑和注射劑的應用，其特征在于：所述 的注射劑和注射劑的應用可以是臨床上可接受的注射液、粉針或輸液。
【文檔編號】A61K31/197GK104042603SQ201410248193
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2014年5月28日 優(yōu)先權日:2014年5月28日
【發(fā)明者】李新平, 周博, 寧利華, 曹統(tǒng) 申請人:西北農林科技大學