一種板藍根提取物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種板藍根提取物的制備方法，該提取物中含有DL-告依春，所述制備方法包括粉碎、加水于20～60℃浸提3～6小時、過濾、濾液濃縮干燥的步驟；該方法極大地簡化了現(xiàn)有板藍根提取工藝，并且顯著地提高了DL-告依春的提取率。
【專利說明】一種板藍根提取物的制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種板藍根提取物的制備方法，特別是一種簡便并可以提高DL-告依春含量的板藍根提取物制備方法。
【背景技術】
[0002]板藍根為十字花科蔣藍屬植物蔣藍(Isantis indigotica Fort.)的干燥根,味苦性寒，具有清熱、解毒、涼血、利咽等功效，用于瘟毒發(fā)斑、高熱頭痛、肝炎、流行性感冒等，是清熱解毒類中藥的代表藥物。板藍根制劑生產(chǎn)、銷售量堪稱中成藥之最，僅單味制劑就包括板藍根顆粒、板藍根片、板藍根口服液、板藍根膠囊、板藍根滴丸、板藍根分散片在內(nèi)的十余個品種，批準文號近1000個。
[0003]板藍根制劑的開發(fā)和應用歷史悠久，其療效早已獲得醫(yī)患的普遍認可。但由于板藍根化學成分復雜，早期對其有效物質(zhì)基礎和作用機理都不夠了解，所以現(xiàn)有制劑多采用傳統(tǒng)提取方法，如水提醇沉法(水煎煮乙醇沉淀)、乙醇回流提取法等，這些方法存在工藝繁瑣、耗時長、活性成分提取率低等不足，同時，各廠家的提取方法的差異也導致了療效不夠穩(wěn)定。
[0004]經(jīng)過近幾年的研究，人們逐漸認識到板藍根中所含的DL-告依春具有明顯的抗病毒活性，中國藥典2010年版也將DL-告依春((R，S)-告依春)的含量做為板藍根藥材及飲片的質(zhì)控指標。但由于 現(xiàn)有制劑采用的制備工藝不利于DL-告依春的提取，使得制劑中DL-告依春的含量極低，甚至有部分批次未檢出。這嚴重影響了板藍根制劑的藥效，從另一個角度來講，也是對板藍根藥材的浪費。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對現(xiàn)有板藍根制劑提取方法中存在的不足，發(fā)明人經(jīng)過大量的系統(tǒng)實驗研究，建立了一種板藍根提取物的制備方法，該制備方法不但簡單易行、重復性好，更顯著地提高了提取物中DL-告依春的含量。
[0006]本發(fā)明提供了一種板藍根提取物的制備方法，所述的提取物中含有DL-告依春，該制備方法包括以下步驟:
[0007]⑴將板藍根粉碎至20~80目的顆?；蚍勰?；
[0008]⑵向步驟⑴得到板藍根顆?；蚍勰┲屑?0~60倍量的水，于20~60°C浸泡3~6小時，過濾，得濾液；
[0009]⑶將步驟⑵得到濾液濃縮、干燥，得到板藍根提取物。
[0010]本發(fā)明所述的DL-告依春也可稱為(R，S)-告依春。
[0011]上述板藍根可以是板藍根藥材或其飲片，優(yōu)選干燥品。所述“10~60倍量的水”是指，加水量為板藍根顆?；蚍勰┲亓康?0~60倍，下同。
[0012]實驗表明，提取方法對板藍根中DL-告依春含量的影響，與硫代葡萄糖苷-芥子酶系統(tǒng)有關。硫代葡萄糖苷(簡稱硫苷)本身不具備生物活性，但其酶水解、熱分解或腸內(nèi)分解產(chǎn)物具有多種生物活性，D-告依春和L-告依春分別由板藍根中的硫代葡萄糖苷前表告依春和前告依春經(jīng)芥子酶水解產(chǎn)生。硫苷與芥子酶共同存在，但在微觀空間上卻相互隔離，因此如何激活并保持芥子酶的活性、促進二者反應使硫苷完全轉化，是提高板藍根提取物中DL-告依春含量的關鍵。
[0013]發(fā)明人研究中發(fā)現(xiàn)，提取溶媒中水的比例越低，有機試劑(如甲醇、乙醇等)的比例越高，酶越容易失活、DL-告依春提取率越低。除了提取溶媒及提取方式外，板藍根的粒度及提取溫度對DL-告依春提取率影響更為顯著。當提取溫度高于60°C時，芥子酶隨溫度升高而迅速失活，相應的，酶解產(chǎn)物DL-告依春含量下降。由于硫苷與芥子酶所處的空間位置不同，當板藍根粒度大于20目時，細胞破碎不完全，二者不能完全溶出、接觸、相互反應，從而影響活性產(chǎn)物(DL-告依春)的含量，但該粒度并非越小越好，當小于80目時，提取液中的DL-告依春含量明顯降低，這是一方面是由于表面吸附作用，造成化學成分溶出受限，另一方面是因為在粉碎過程中，物料與刀片劇烈抵觸產(chǎn)熱(眾所周知，粉碎粒度越細所需時間越長)，破壞了部分芥子酶活性。
[0014]傳統(tǒng)方法的水提(煎煮)溫度為100°C，時間通常在I小時以上，嚴重破壞了芥子酶活性，雖然也有研究人員采用超聲法(約I小時)，但超聲同樣產(chǎn)熱，特別是長時間超聲，試驗證明，超聲I小時水溫可高達70°c，也對芥子酶的酶活性具有一定的破壞作用，更重要的是，目前超聲方法僅停留在實驗室小規(guī)模提取，尚不能應用到大生產(chǎn)中去，實用性較差。
[0015]經(jīng)過大量的試驗研究，發(fā)明人篩選優(yōu)化出本發(fā)明所述制備方法，該方法有效保障了芥子酶活性，滿足了芥子酶與硫苷的結合條件、環(huán)境，從而大大提高了 DL-告依春前體的轉化率，即，提高了板藍根藥材中DL-告依春的提取率，從而提高了以該提取物所制備藥品的療效，并可降低服用劑量。該方法極大地簡化了現(xiàn)有板藍根提取工藝，減少人力、能源等耗費，更令人^(喜的是顯著地提高了提取物中有效成分DL-告依春的含量。
[0016]步驟⑴所述的粉碎，可采用任何本領域常規(guī)粉碎方法。
[0017]所述步驟⑵的于20~60°C浸泡3~6小時，可以通過本領域常規(guī)手段實現(xiàn)，如直接加入20~60°C的水，并進行保溫處理，或加入常溫水后加熱至所需溫度后再進行保溫處理。步驟⑶的濃縮、干燥，為本領域常規(guī)的濃縮干燥方法，如減壓濃縮至干、加熱濃縮蒸干等。[0018]所述板藍根粉碎的粒度，優(yōu)選40~65目，該粒度范圍的粉碎過程不會影響芥子酶活性，又可基本滿足硫苷與芥子酶的反應條件；進一步的，優(yōu)選粉碎至50目，該粒度是利于硫苷與芥子酶的溶出、充分反應與保持酶活性的最佳結合，該粒度板藍根DL-告依春的提取最為完全。
[0019] 所述的浸泡溫度，優(yōu)選采用20~39°C，該優(yōu)選溫度并不是本領域通常說的溫浸的溫度，溫浸在《中國藥典》中的規(guī)定為40-50°C，高于本發(fā)明所述的優(yōu)選溫度，20~39°C的溫度范圍更有利于芥子酶發(fā)揮其活性；本發(fā)明浸泡溫度進一步優(yōu)選為36~38°C，最優(yōu)選為37 0C，該溫度條件下芥子酶活性最高。
[0020]本發(fā)明所述制備方法中的用水量優(yōu)選為20~40倍，試驗證明，當水量超過40倍后，DL-告依春含量隨用水量增加的提高幅度逐漸變小，特別是超過60倍后，上升幅度更小，說明，40倍量水硫苷基本水解完全，因此，考慮到水資源利用率問題，用水量優(yōu)選20~40倍，更優(yōu)選30倍。[0021]所述的浸泡時間，優(yōu)選為4小時，該優(yōu)選時間既保證了 DL-告依春的提取率，又兼顧提取效率，同時，也有利于保證提取物的質(zhì)量。長時間浸提(浸泡)過程中，水液非常容易霉變，特別是當溫度達到或超過30°C時。試驗表明，37°C浸泡12小時后，可檢出霉點。
[0022]所述步驟⑵優(yōu)選為:向步驟⑴得到板藍根顆?；蚍勰┲屑?0~60倍量的水，于36~38°C浸泡4小時，過濾，得濾液。該用水量、提取溫度及時間的結合，可顯著提高DL-告依春的提取率。
[0023]當需要得到表告依春單體時，可將本發(fā)明制備方法得到的提取物進一步純化分離，如，先經(jīng)柱層析純化，再進行手性色譜拆分。
[0024]為了加快提取，可在本發(fā)明制備方法步驟⑵浸泡過程中添加震搖、攪拌等步驟。
[0025]本發(fā)明的另一個目的在于，提供一種上述制備方法得到的提取物，及含有該提取物的藥用組合物，該藥物組合物可以通過本領域常規(guī)工藝制成口服形式或注射形式的藥物制劑，所述的口服形式，如片劑、顆粒劑、口服液、膠囊劑等，注射形式，如注射液、凍干粉針等。該藥物組合物還含有常規(guī)輔料，所述的常規(guī)輔料為本領域可接受的藥用輔料。本發(fā)明制備方法制得的板藍根提取物中的有效成分一DL-告依春含量更高，療效更有保障。
[0026]發(fā)明人通過以下實驗來優(yōu)化得到本發(fā)明制備方法。
[0027]再次重申:以下實驗只是本發(fā)明研制過程中眾多實驗中的舉例性實驗，并未涵蓋和窮盡了發(fā)明人為本發(fā)明所 做的所有實驗，目的僅僅在于用那些數(shù)據(jù)來闡述本發(fā)明制備方法對DL-告依春的提取效率的影響。
[0028]I提取方法對板藍根中DL-告依春的影響
[0029]1.1儀器與試藥
[0030]Waters2695液相色譜儀,Waters2996 二極管陣列檢測器,CLIMACELL恒溫恒濕箱。色譜純乙腈購于Merck，分析純甲醇、三乙胺、冰醋酸購于北京化學試劑公司，水為超純水。
[0031]DL-告依春((R，S)-告依春)對照品來自中國食品藥品檢定研究院。
[0032]三產(chǎn)地板藍根藥材購于藥材市場。
[0033]1.2色譜條件
[0034]色譜柱:AlltimaC18 柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m)。流動相:水-乙腈-三乙胺(90:10:0.2)，用冰醋酸調(diào)pH值至5.2，流速:0.8ml/min。檢測波長:241nm。進樣量:10 μ I。
[0035]1.3提取方式的影響
[0036]稱取不同產(chǎn)地50目的板藍根藥材粉末lg，加溶劑30ml，分別按表1中所示方法制備供試品溶液，每組平行3份，進樣測定，外標法計算DL-告依春含量，并折算提取率(提取率是指提取出的DL-告依春占投料藥材的重量百分比含量，下同)，結果顯示，不同產(chǎn)地板藍根藥材的DL-告依春提取率規(guī)律一致，即水浸泡 > 水超聲 > 乙醇回流 > 水煎煮 > 甲醇回流〉乙醇超聲〉甲醇超聲。
[0037]表1不同提取方式DL-告依春的提取率％
【權利要求】
1.一種板藍根提取物的制備方法，該提取物中含有DL-告依春，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟: ⑴將板藍根粉碎至20~80目的顆?；蚍勰? ⑵向步驟⑴得到板藍根顆?；蚍勰┲屑?0~60倍量的水，于20~60°C浸泡3~6小時，過濾，得濾液； ⑶將步驟⑵得到濾液濃縮、干燥，得到板藍根提取物。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟⑴的板藍根粉碎至40~65目的粉末。
3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟⑴的板藍根粉碎至50目的粉末。
4.如權利要求 1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟⑵浸泡溫度為20~39°C。
5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟⑵浸泡溫度為36~38°C。
6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟⑵的加水量為20~40倍量。
7.如權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟⑵的加水量為30倍量。
8.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟⑵的浸泡時間為4小時。
9.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的步驟⑵為:向步驟⑴得到板藍根顆?；蚍勰┲屑?0~60倍量的水，于36~38°C浸泡4小時，過濾，得濾液。
10.一種含有DL-告依春的藥用組合物，其特征在于，該組合物含有權利要求1-9任一項所述的制備方法制得的提取物及藥學上可接受的輔料。
【文檔編號】A61K36/195GK104013655SQ201410250141
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月6日 優(yōu)先權日:2014年6月6日
【發(fā)明者】聶黎行, 戴忠, 馬雙成 申請人:中國食品藥品檢定研究院