軸突變性的調(diào)節(jié)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明一般地涉及神經(jīng)障礙和神經(jīng)系統(tǒng)損傷的治療。本發(fā)明具體地提供了使用特定靶蛋白的調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)神經(jīng)元或其部分(如軸突)的變性的方法。
【專利說明】軸突變性的調(diào)節(jié)
[0001] 本申請是申請日為2010年10月21日、發(fā)明名稱為"軸突變性的調(diào)節(jié)"的中國專 利申請No. 201080047538. 8的分案申請。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002] 本發(fā)明一般涉及神經(jīng)障礙和神經(jīng)系統(tǒng)損傷的治療。本發(fā)明尤其涉及特定靶蛋白和 過程的調(diào)節(jié)劑在抑制神經(jīng)元和軸突變性的方法中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0003] 神經(jīng)元或軸突變性在神經(jīng)系統(tǒng)的正確發(fā)育中起關(guān)鍵作用，并且是許多神經(jīng)變 性疾病的標(biāo)志，所述神經(jīng)變性疾病包括例如，肌萎縮性側(cè)索硬化（amyotrophic lateral sclerosis, ALS)、阿爾茨海默?。ˋlzheimer，s disease)和帕金森?。≒arkinson，s disease)，以及腦和脊髓的外傷。這些疾病和損傷對患者和看護者具有破壞性，并還產(chǎn)生極 大的經(jīng)濟負(fù)擔(dān)，目前僅在美國年度費用就超過幾千億美元。用于這些疾病和病癥最近的治 療是不足夠的。增加這些疾病產(chǎn)生的問題緊急性的是這樣的事實：許多此類疾病與年齡相 關(guān)，因此它們的發(fā)病率隨人口統(tǒng)計學(xué)改變而快速升高。極其需要開發(fā)有效的方法來治療神 經(jīng)變性疾病和神經(jīng)系統(tǒng)損傷。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了用于抑制神經(jīng)元或其部分（例如，神經(jīng)元細(xì)胞體、軸突或樹突）的變 性的方法。所述方法包括：向神經(jīng)元或其部分施用這樣的試劑，其調(diào)節(jié)：（i)神經(jīng)元或其部 分中靶蛋白的活性或表達，或（ii)神經(jīng)元或其部分中的過程。
[0005] 可在本發(fā)明方法中靶向的蛋白的實例包括：雙亮氨酸拉鏈激酶（dual leucine zipper-bearing kinase, DLK)、糖原合酶激酶3 β (GSK3 β )、p38促分裂原活化蛋白激酶 (P38MAPK)、β-聯(lián)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子4(TCF4)、表皮生長因子受體（EGFR)、磷酸肌醇3-激 酶（PI3K)、細(xì)胞周期蛋白依賴性的激酶5(cdk5)、腺苷酸環(huán)化酶、c-Jun N-端激酶（JNK)、 BCL2-相關(guān)的X蛋白（Bax)、Ih通道、鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性的蛋白激酶激酶（CaMKK)、G-蛋 白、G-蛋白偶聯(lián)的受體、轉(zhuǎn)錄因子4(TCF4)或β-聯(lián)蛋白，而可靶向的過程的實例是轉(zhuǎn)錄和 蛋白合成。
[0006] 神經(jīng)元或其部分可由選自以下的神經(jīng)元組成，或可以在選自以下的神經(jīng)元內(nèi)：小 腦顆粒神經(jīng)元、背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元、皮質(zhì)神經(jīng)元、交感神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元。
[0007] 試劑可以是例如，靶蛋白或過程的抑制劑。此外，所述試劑例如可以選自：抗 體、多肽、肽、肽體（peptibodies)、核酸分子、短的干擾RNA(siRNA)、多核苷酸、適配體 (aptamer)、小分子和多糖。在抗體的情況下，抗體可以是單克隆抗體、嵌合抗體、人源化 抗體、人抗體或抗體片段（例如，F(xiàn)v、Fab、Fab'或F(ab'） 2片段）。在小分子的情況下， 所述試劑例如可以選自：MG132、SB415286、GSK30抑制劑I、GSK30抑制劑VII、GSK33 抑制劑 VIII、GSK3 β 抑制劑 XII、氯化鋰、SB202190、SB239063、SB239069、SB203580、 SB203580HC1、AG556、AG555、AG494、PD168393、酪氨酸磷酸化抑制劑B44、酪氨酸磷酸化 抑制劑 B42 (AG490)、LY294022、茵香霉素（Anisomycin)、放線菌麗（Cycloheximide)、 Roscovitine、毛喉素（Forskolin)、NKH477、放線菌素 D(Actinomycin D)、SP600125、Bax 通道阻斷劑、ZD7288、ST0-609、bortezomid、雙硫侖（disulfiram)、pamapimod、吉非替尼 (gefitinib)、厄洛替尼（erlotinib)、二甲苯磺酸拉帕替尼（lapatinib ditosylate)、鹽酸 地美環(huán)素 （demeclocycline hydrochloride)、硫酸慶大霉素 （gentamicin sulfate)、硫酸新 霉素 （neomycin sulfate)、硫酸巴龍霉素 （paromomycin sulfate)及其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0008] 神經(jīng)元或其部分可存在于受試者，如人受試者中。所述受試者可以例如患有或處 于發(fā)生疾病或病癥的風(fēng)險中，所述疾病或病癥選自：（i)神經(jīng)系統(tǒng)的病癥，（ii)在神經(jīng)系統(tǒng) 外具有主要效果的疾病、病癥或治療繼發(fā)的神經(jīng)系統(tǒng)病癥，（iii)由物理、機械或化學(xué)損傷 引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷，（iv)疼痛，（v)眼相關(guān)的神經(jīng)變性，（vi)記憶喪失和（vii)精神疾 病。
[0009] 神經(jīng)系統(tǒng)病癥的實例包括：肌萎縮性側(cè)索硬化（amyotrophic lateral sclerosis，ALS)、三叉神經(jīng)痛（trigeminal neuralgia)、舌咽神經(jīng)痛（glossopharyngeal neuralgia)、貝耳麻瘦（Bell' s Palsy)、重癥肌無力（myasthenia gravis)、肌營養(yǎng)不良 (muscular dystrophy)、進行性肌萎縮（progressive muscular atrophy)、原發(fā)性側(cè)索硬 化（primary lateral sclerosis，PLS)、假延髓性麻瘦（pseudobulbar palsy)、進行性延髓 性麻瘦（progressive bulbar palsy)、脊髓性肌萎縮（spinal muscular atrophy)、遺傳性 肌萎縮（inherited muscular atrophy)、椎間盤綜合征（invertebrate disk syndromes)、 頸椎?。╟ervical spondylosis)、神經(jīng)叢病癥（plexus disorders)、胸廓出口破壞綜合征 (thoracic outlet destruction syndromes)、夕卜周神經(jīng)病（peripheral neuropathies)、 口卜啉?。╬rophyria)、阿爾茨海默?。ˋlzheimer，s disease)、亨廷頓?。℉untington，s disease)、帕金森?。≒arkinson，s disease)、帕金森疊加?。≒arkinson，s-plus diseases)、多系統(tǒng)萎縮（multiple system atrophy)、進行性核上性麻瘦（progressive supranuclear palsy)、皮質(zhì)基底節(jié)變性（corticobasal degeneration)、雷維小體癡 呆（dementia with Lewy bodies)、額顳癡呆（frontotemporal dementia)、脫髓鞘病 (demyelinating diseases)、吉蘭-巴雷綜合征（Guillain_Barr6syndrome)、多發(fā)性硬化 (multiple sclerosis)、進行性神經(jīng)性排骨肌萎縮癥（Charcot-Marie-Tooth disease)、 月元病毒?。╬rion disease)、克-雅病（Creutzfeldt-Jakob disease)、格-施-沙綜合 征（Gerstmann- SlriUissIcr -Scheinker syndrome，GSS)、致命性家族性失眠癥（fatal familial insomnia，F(xiàn)FI)、牛海綿樣腦病（bovine spongiform encephalopathy)、皮克病 (Pick，s disease)、痛癇（epilepsy)和艾滋病癡呆綜合征（AIDS demential complex)。
[0010] 疼痛的實例包括：慢性痛（chronic pain)，纖維肌痛（fibromyalgia)，脊柱痛 (spinal pain)，腕管綜合征（carpel tunnel syndrome)，來自癌癥、關(guān)節(jié)炎的疼痛、坐骨 神經(jīng)痛（sciatica)，頭痛（headaches)，來自手術(shù)、肌肉痙攣的疼痛，背痛（back pain)，內(nèi) 臟痛（visceral pain)，來自損傷的疼痛，牙痛（dental pain)，神經(jīng)痛（neuralgia)如神 經(jīng)源性疼痛（neuogenic pain)或神經(jīng)性疼痛（neuropathic pain)，神經(jīng)炎癥或損傷，帶 狀皰疫（shingles)，椎間盤突出（herniated disc)，韌帶撕裂（torn ligament)和糖尿病 (diabetes)〇 toon] 繼在神經(jīng)系統(tǒng)外具有主要效果的疾病、病癥或治療之后的神經(jīng)系統(tǒng)病癥的實例包 括：由糖尿病、癌癥、艾滋病、肝炎（hepatitis)、腎功能異常（kidney dysfunction)、科羅拉 多蜱傳熱（Colorado tick fever)、白喉（diphtheria)、HIV 感染、麻風(fēng)?。╨eprosy)、萊姆病 (lyme disease)、結(jié)節(jié)性多動脈炎（polyarteritis nodosa)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis)、結(jié)節(jié)?。╯arcoidosis)、舍格倫綜合征（Sjogren syndrome)、梅毒（syphilis)、 系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus)和淀粉樣變性（amyloidosis)引起的外 周神經(jīng)病或神經(jīng)痛。
[0012] 由物理、機械或化學(xué)損傷引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷的實例包括：由暴露于毒性化合物、 重金屬、工業(yè)溶劑、藥物、化學(xué)治療劑、氨苯砜、HIV藥物、降低膽固醇的藥物、心臟或血壓藥 物、和甲硝唑引起的神經(jīng)損傷。額外的實例包括：燒傷、創(chuàng)傷、手術(shù)、意外傷害、局部缺血、對 冷溫度的延長暴露、中風(fēng)、顱內(nèi)出血和腦出血。
[0013] 精神疾?。╬sychiatric disorders)的實例包括：精神分裂癥（schizophrenia)、 妄想性障礙（delusional disorder)、情感分裂性精神障礙（schizoaffective disorder)、 精神分裂癥（schizopheniform)、分享性精神障礙（shared psychotic disorder)、精神 ?。╬sychosis)、偏執(zhí)型人格障礙（paranoid personality disorder)、精神分裂樣人格 障礙（schizoid personality disorder)、邊緣型人格障礙（borderline personality disorder)、反社會性人格障礙（anti-social personality disorder)、自戀性人格 障石辱（narcissistic personality disorder)、強制性障石辱(obsessive-compulsive disorder)、妄想（delirium)、癡呆（dementia)、心境障礙（mood disorders)、雙相性精神 障礙（bipolar disorder)、抑郁（depression)、應(yīng)激障礙（stress disorder)、驚恐性障礙 (panic disorder)、廣場恐怖癥（agoraphobia)、社會恐怖（social phobia)、創(chuàng)傷后應(yīng)激障 礙（post-traumatic stress disorder)、焦慮障礙（anxiety disorder)和沖動控制障礙 (impulse control disorders) 〇
[0014] 眼相關(guān)的神經(jīng)變性的實例包括：青光眼（glaucoma)、格子狀營養(yǎng)不良 (lattice dystrophy)、色素性視網(wǎng)膜炎（retinitis pigmentosa)、年齡相關(guān)的黃斑變 性（age-related macular degeneration，AMD)、與濕性或干性AMD相關(guān)的光受體變性 (photoreceptor degeneration associated with wet or dry AMD)、其它視網(wǎng)膜變性、 視神經(jīng)脈絡(luò)膜小疵（optic nerve drusen)、視神經(jīng)?。╫ptic neuropathy)和視神經(jīng) 炎（optic neuritis)。青光眼的實例包括：原發(fā)性青光眼（primary glaucoma)、低眼 壓性青光眼（low-tension glaucoma)、原發(fā)性閉角型青光眼（primary angle-closure glaucoma)、急性閉角型青光眼（acute angle-closure glaucoma)、慢性閉角型青光眼 (chronic angle-closure glaucoma)、間歇性閉角型青光眼（intermittent angle-closure glaucoma)、慢性開角閉角型青光眼（chronic open-angle closure glaucoma)、色素性 青光眼（pigmentary glaucoma)、脫落性青光眼（exfoliation glaucoma)、發(fā)育性青光眼 (developmental glaucoma)、繼發(fā)性青光眼（secondary glaucoma)、晶狀體溶解性青光眼 (phacogenic glaucoma)、眼內(nèi)出血（intraocular hemorrhage)繼發(fā)的青光眼、夕卜傷性青 光眼（traumatic glaucoma)、新生血管性青光眼（neovascular glaucoma)、藥物誘導(dǎo)的青 光眼（drug-induced glaucoma)、中毒青光眼（toxic glaucoma)和眼內(nèi)瘤（intraocular tumors)相關(guān)性青光眼、視網(wǎng)膜脫離（retinal deatchments)、眼睛的嚴(yán)重化學(xué)灼傷和虹膜 萎縮（iris atrophy) 〇
[0015] 根據(jù)本發(fā)明的方法使神經(jīng)元或其部分與試劑接觸可以包括：向受試者施用包括所 述試劑的藥物組合物。例如通過靜脈內(nèi)輸注；通過靜脈內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、大腦內(nèi)的、肌肉內(nèi) 的、眼內(nèi)的、動脈內(nèi)的或損害內(nèi)的途徑注射；或通過局部或眼睛應(yīng)用，可進行施用。此外，本 發(fā)明的方法可以包括：向受試者施用一種或多種另外的藥物試劑。
[0016] 在其它實施例中，根據(jù)本發(fā)明的方法治療的神經(jīng)元或其部分是離體（ex vivo)或 體外的（in vitro)(例如神經(jīng)移植物或神經(jīng)移植體）。
[0017] 在上述的本發(fā)明方法中，所述DLK信號傳導(dǎo)抑制劑會導(dǎo)致JNK磷酸化的減少（例 如，JNK2和/或JNK3磷酸化的減少）、JNK活性的降低（例如，JNK2和/或JNK3活性的降 低）和/或JNK表達的降低（例如，JNK2和/或JNK3表達的降低）。在這些方法中，所述 DLK信號傳導(dǎo)抑制劑可以是本文所述的DLK信號傳導(dǎo)抑制劑中的任一種（例如，小分子，諸 如 JNKV 或 JNKVII 或 siRNA)。
[0018] 在上述的本發(fā)明方法中，所述試劑可以是G-蛋白抑制劑。所述G-蛋白抑制劑可 以是本文所述的G-蛋白抑制劑中的任一種（例如，小分子）。
[0019] 本發(fā)明還包括鑒定試劑的方法，所述試劑用于抑制神經(jīng)元或其部分的變性。這 些方法包括：在軸突或神經(jīng)元變性的測定（例如，抗-神經(jīng)生長因子（NGF)抗體、血清剝 奪/KC1減少和/或魚藤酮治療）中，使神經(jīng)元或其部分與候選試劑接觸。在候選試劑存 在下對神經(jīng)元或其部分相對于對照的變性減少的檢測，指示用于抑制神經(jīng)元或其部分變 性的試劑的鑒定。所述候選試劑例如可以選自：抗體、多肽、肽、肽體、核酸分子、短的干擾 RNA(siRNA)、多核苷酸、適配體、小分子和多糖。
[0020] 本發(fā)明還包括藥物組合物和試劑盒，其含有如上述用于抑制神經(jīng)元或其部分變性 的一種或多種試劑。所述藥物組合物和試劑盒可以包括例如選自以下的一種或多種試劑： MG132、SB415286、GSK3P 抑制劑 I、GSK3P 抑制劑 VII、GSK3P 抑制劑 VIII、GSK3P 抑制 劑 XII、氯化鋰、SB202190、SB239063、SB239069、SB203580、SB203580HC1、AG556、AG555、 AG494、PD168393、酪氨酸磷酸化抑制劑B44、酪氨酸磷酸化抑制劑B42(AG490)、LY294022、 茴香霉素、放線菌酮、Roscovitine、毛喉素、NKH477、放線菌素 D、SP600125、Bax通道阻斷 齊[J、ZD7288、ST0-609、bortezomid、雙硫侖、pamapimod、吉非替尼、厄洛替尼、二甲苯磺酸拉 帕替尼、鹽酸地美環(huán)素、硫酸慶大霉素、硫酸新霉素、硫酸巴龍霉素、及其藥學(xué)上可接受的 鹽。所述藥物組合物和試劑盒可任選地包括一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。此外，所 述藥物組合物和試劑盒可任選地包括在抑制神經(jīng)元或其部分變性的方法中使用所述藥物 組合物和試劑盒的說明書。
[0021] 在本發(fā)明的任何方法、組合物和試劑盒中，所述試劑可以是：DLK信號傳導(dǎo)抑 制劑（例如，靶向DLK的s iRNA分子，其包含例如想要的GCACTGAATTGGACAACTCTT (SEQ ID N0:1), GAGTTGTCCAATTCAGTGCTT (SEQ ID NO: 2), GACATCGCCTCCGCTGATTT (SEQ ID NO: 3), ATCAGCGGAGGCGATGTCCTT(SEQ ID NO:4), GCAAGACCCGTCACCGAAATT (SEQ ID NO:5), TTTCGGTGACGGGTCTTGCTT(SEQ ID N0:6)、GCGGTGTCCTGGTCTACTATT(SEQ ID N0:7)或 TAGTAGACCAGGACACCGCTT(SEQ ID N0:8)的序列；抗體，例如抗體 317、抗體 318、抗體 319、 抗體 320、抗體 321、抗體 322,靶向 TTGGATGAAGCCATTAGACTA(SEQ ID N0:9)的 JNK1 序列的 siRNA 分子，靶向 ACCTTTAATGGACAACATTAA(SEQ ID N0:10)或 AAGGATTAGCTTTGTATCATA(SEQ ID NO: 11)的 JNK2 序列的 siRNA 分子，祀向 CCCGCATGTGTCTGTATTCAA(SEQ ID NO: 12)的 JNK3 序列的 siRNA 分子，SP600125, JNKV 抑制劑，JNKVIII 抑制劑，SC-202673, SY-CC-401， SP600125, As601245, XG-102,楊梅黃酮，T278A DLK，S281A DLK，K152A DLK，和 DLK 的亮氨 酸拉鏈結(jié)構(gòu)域），GSK3 β抑制劑（例如，SB415287、GSK3 β抑制劑I、GSK3 β抑制劑VII、 GSK3 0抑制劑VIII、GSK3 0抑制劑XII和氯化鋰），EGFR途徑抑制劑（例如，厄洛替尼、酪氨 酸磷酸化抑制劑B44、酪氨酸磷酸化抑制劑B42/AG490、AG555、AG494、roi68393、SB203580、 SB239063、SB202190、SB239069、ST0-609 和 SP600125)，或 G-蛋白抑制劑（例如，SCG292676 和百日咳毒素）。
[0022] 在任何上述方法中，施用試劑導(dǎo)致以下疾病的一種或多種（例如，1、2、3、4、5、6、 7、8、9或10種）癥狀減少至少10% (例如，減少至少15%、20%、25%、30%、35%、40%、 45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或甚至100%):神經(jīng)系統(tǒng) 病癥；在神經(jīng)系統(tǒng)外具有主要效果的疾病、病癥或治療繼發(fā)的神經(jīng)系統(tǒng)病癥；由物理、機械 或化學(xué)損傷引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷；疼痛；眼相關(guān)的神經(jīng)變性；記憶喪失；或精神疾病。這些 癥狀的非限制性實例包括：震顫（tremors)、運動緩慢（slowness of movement)、運動失調(diào) (ataxia)、平衡缺失（loss of balance)、抑郁（depression)、降低的認(rèn)知功能（decreased cognitive function)、短期記憶喪失（short-term memory loss)、長期記憶喪失 (long-term memory loss)、意識錯舌L (confusion)、人格改變（changes in personality)、 語言困難（language difficulties)、感知覺喪失（loss of sensory perception)、對 觸覺靈敏（sensitivity to touch)、四肢麻木（numbness in extremities)、肌無力 (muscle weakness)、肌肉麻搏（muscle paralysis)、肌肉痛性痙攣（muscle cramps)、肌 痙攣（muscle spasms)、飲食習(xí)慣的明顯改變、過度恐懼或憂愁、失眠（insomnia)、妄想 (delusions)、幻覺（hallucinations)、疲勞（fatigue)、背痛（back pain)、胸痛（chest pain)、消化問題（digestive problems)、頭痛（headache)、快速的心率（rapid heart rate)、頭暈（dizziness)、視力模糊（blurred vision)、視力區(qū)域的陰影或缺失（shadows or missing areas of vision)、視物變形癥（metamorphopsia)、色覺損傷（impairment in color vision)、暴露于強光后視覺功能的降低恢復(fù)和視覺對比敏感性喪失。
[0023] 在任何上述方法中，與不施用所述試劑的受試者的對照群體相比，施用導(dǎo)致患以 下疾病的可能性降低至少10% (例如，降低至少15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或甚至100%):神經(jīng)系統(tǒng)病癥； 在神經(jīng)系統(tǒng)外具有主要效果的疾病、病癥或治療繼發(fā)的神經(jīng)系統(tǒng)病癥；由物理、機械或化學(xué) 損傷引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷；疼痛；眼相關(guān)的神經(jīng)變性；記憶喪失；或精神疾病。
[0024] 本發(fā)明還提供了用于激活神經(jīng)元或其部分變性的方法。這些方法包括向神經(jīng) 元或其部分施用試劑，所述試劑調(diào)節(jié)：（i)神經(jīng)元或其部分中靶蛋白的活性，或（ii)神經(jīng) 元或其部分中的過程。靶蛋白例如可以選自：雙亮氨酸拉鏈激酶（DLK)、糖原合酶激酶 3 β (GSK3 β )、p38促分裂原活化蛋白激酶（p38MAPK)、表皮生長因子受體（EGFR)、磷酸肌 醇3-激酶（PI3K)、細(xì)胞周期蛋白依賴性的激酶5(cdk5)、腺苷酸環(huán)化酶、c-Jun N-端激酶 (JNK)、BCL2-相關(guān)的X蛋白（Bax)、Ih通道、鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性的蛋白激酶激酶（CaMKK)、 G-蛋白、G-蛋白偶聯(lián)的受體、轉(zhuǎn)錄因子4(TCF4)或β-聯(lián)蛋白，而所述過程可以是例如轉(zhuǎn)錄 或蛋白合成。此外，所述試劑例如可以是靶蛋白或過程的激活劑（在上文列出的靶標(biāo)情況 下，排除腺苷酸環(huán)化酶）。在激活上述神經(jīng)元或其部分變性的方法中，靶蛋白的調(diào)節(jié)可以是 GSK3 β的活性或表達升高、β -聯(lián)蛋白的活性或表達降低和/或TCF4的活性或表達喪失。
[0025] 本發(fā)明還提供了特異性結(jié)合DLK的磷酸化形式的純化的抗體（例如，抗體 318、抗體319、抗體320、抗體321或抗體322)和抑制性核酸（例如siRNA)，其包含期 望的 GCACTGAATTGGACAACTCTT(SEQ ID NO: 1)、GAGTTGTCCAATTCAGTGCTT(SEQ ID N0:2)、 GGACATCGCCTCCGCTGATTT(SEQ ID NO: 3) , ATCAGCGGAGGCGA TGTCCTT (SEQ ID NO :4), GCAAGACCCGTCACCGAAATT(SEQ ID NO :5), TTTCGGTGACGGGTCTTGCTT (SEQ ID NO :6), GCGGTGTCCTGGTCTACTATT(SEQ ID N0:7)或 TAGTAGACCAGGACACCGCTT(SEQ ID N0:8)的序列， 所述序列介導(dǎo)DLK表達的降低。
[0026] 本發(fā)明另外提供了調(diào)節(jié)神經(jīng)元（例如，小腦顆粒神經(jīng)元、背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元、皮質(zhì) 神經(jīng)元或交感神經(jīng)元）的生長、細(xì)胞大小和/或增殖的方法，其中使神經(jīng)元接觸DLK信號傳 導(dǎo)抑制劑。在這些方法中使用的DLK信號傳導(dǎo)抑制劑可以是本文所述的任意DLK信號傳導(dǎo) 抑制劑（例如，靶向DLK的siRNA分子、靶向JNK1的siRNA分子、靶向JNK2的siRNA分子、 靶向JNK3的siRNA分子、小分子、T278A DLK、S281A DLK、K152A DLK和DLK的亮氨酸拉鏈結(jié) 構(gòu)域）。
[0027] 在某些實施例中，本發(fā)明提供了用于抑制或預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS)神經(jīng)元或其 部分（例如，CNS神經(jīng)元的軸突或細(xì)胞體部分）的變性的方法。這些方法可以包括：向CNS 神經(jīng)元施用抑制雙亮氨酸拉鏈激酶（DLK)的活性（例如，信號傳導(dǎo)活性）或表達的試劑。在 某些實施例中，所述CNS神經(jīng)元或其部分是例如選自下述的CNS神經(jīng)元：小腦顆粒神經(jīng)元、 皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元。在不同的實施例中，所述CNS神經(jīng)元不是多巴胺能神經(jīng)元。根據(jù) 本發(fā)明的方法，所述施用可以導(dǎo)致：例如，與未用所述試劑治療的神經(jīng)元群體相比，神經(jīng)元 群體的變性減少了至少10% (例如，減少了至少15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或甚至100%)。
[0028] 上述試劑可以選自：例如，抗體、短的干擾RNA (siRNA)、多肽、肽體、反義多核苷 酸、適配體、小分子和多糖。在抗體的情況下，所述抗體例如可以選自：多克隆抗體、單克隆 抗體、嵌合抗體、人源化抗體、Fv片段、Fab片段、Fab'片段和F(ab'） 2片段。在更具體的 實施例中，所述試劑可以選自：靶向DLK的siRNA分子、靶向JNK1的siRNA分子、靶向JNK2 的siRNA分子、祀向JNK3的siRNA分子、小分子、DLK的顯性失活形式（dominant negative form)、DLK的激酶死亡形式（kinase-dead form)和它們的組合。
[0029] 本發(fā)明的方法可以包括：將試劑施用給離體的CNS神經(jīng)元。這樣的方法可以另外 包括：在所述試劑施用后，將所述CNS神經(jīng)元移植或植入到人患者中。在本發(fā)明的方法的其 它實施例中，所述CNS神經(jīng)元存在于人患者中。在這樣的方法中，可以在藥學(xué)上可接受的載 體中施用所述試劑。此外，可以通過例如選自下述的途徑，進行試劑的施用：腸胃外的、皮下 的、靜脈內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、大腦內(nèi)的、損害內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、眼內(nèi)的和動脈內(nèi)的途徑，或通過間 質(zhì)輸注，或使用植入式遞送裝置。此外，本發(fā)明的方法可以包括：施用一種或多種另外的藥 物試劑。
[0030] 上面關(guān)于本發(fā)明的方法指出的患者可以具有神經(jīng)變性疾病或病癥（諸如在上面 或在本文別處列出的一種或多種神經(jīng)變性疾病或病癥），或處于發(fā)展所述病癥的風(fēng)險中。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的方法施用一種或多種試劑，可以導(dǎo)致：（i) JNK磷酸化、JNK活性和/ 或JNK表達的降低，（ii)cjun磷酸化、cjun活性和/或cjun表達的降低，和/或（iii)p38 磷酸化、p38活性和/或p38表達的降低。
[0032] 本發(fā)明還提供了用于減輕或預(yù)防神經(jīng)變性疾病或病癥（諸如在上面或在本文別 處列出的一種或多種神經(jīng)變性疾病或病癥）的一種或多種癥狀或減少其進展的方法。這些 方法包括：給患者施用本文所述的抑制雙亮氨酸拉鏈激酶（DLK)的活性或表達的試劑。
[0033] 此外，本發(fā)明包括，抑制雙亮氨酸拉鏈激酶（DLK)的活性或表達的一種或多種試 劑（參見，例如，在上面或在本文別處列出的試劑）在藥物生產(chǎn)中的應(yīng)用，所述藥物抑制或 預(yù)防中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS)神經(jīng)元或其部分的變性。所述藥物可以，例如，減輕神經(jīng)變性疾病 或病癥（例如，在上面或在本文別處列出的一種或多種神經(jīng)變性疾病或病癥）的一種或多 種癥狀或發(fā)展所述病癥的可能性。所述藥物可以配制成通過例如選自下述的途徑來施用： 腸胃外的、皮下的、靜脈內(nèi)的、腹膜內(nèi)的、大腦內(nèi)的、損害內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、眼內(nèi)的和動脈內(nèi)的 途徑，或通過間質(zhì)輸注，或使用植入式遞送裝置。此外，所述藥物還可以包括一種或多種另 外的藥物試劑。本文所述的一種或多種試劑根據(jù)本發(fā)明的應(yīng)用，可以導(dǎo)致：（i)JNK磷酸化、 JNK活性和/或JNK表達的降低，（ii) cjun磷酸化、cjun活性和/或cjun表達的降低，和 /或（iii)p38磷酸化、p38活性和/或p38表達的降低。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0034] 圖1顯示利用抗-NGF抗體處理神經(jīng)元20小時，導(dǎo)致軸突變性。上排中的兩個圖像 顯示在利用和不利用抗-NGF抗體治療20小時的情況下，利用Tujl (神經(jīng)元特異性的β -微 管蛋白）抗體顯示的神經(jīng)元。下排的兩個圖像顯示與或不與（對照）50yg/ml抗-NGF抗 體溫育的情況下，利用肌動蛋白抗體顯示的神經(jīng)元。
[0035] 圖2顯示用抗-NGF抗體培養(yǎng)1、3、6、9、12或16小時的神經(jīng)元中的膨體 (varicosity)形成。
[0036] 圖3顯示用抗-NGF抗體培養(yǎng)16小時的軸突缺少伸長的線粒體，并顯示線粒體在 膨體中的累積。
[0037] 圖4顯示，在用抗-NGF抗體培養(yǎng)0到48小時的軸突中，微管網(wǎng)絡(luò)在肌動蛋白或神 經(jīng)絲網(wǎng)絡(luò)前不進行分解。
[0038] 圖5闡明了沃勒變性（Wallerian degeneration)，其在從神經(jīng)元細(xì)胞體分離的軸 突中發(fā)生（上圖；Raff等人，Science (科學(xué)）296(5569) :868-871, 2002)，并且表明，與對 照（下圖；Araki等人，Science (科學(xué)）305 (5686) : 1010-1013, 2004)相比，緩慢沃勒變性 (WldS)突變體中損傷后的軸突變性的顯著延遲。
[0039] 圖6A-6D表明，在基于抗-NGF抗體的NGF撤除測定中，蛋白酶體抑制劑和GSK抑 制劑防止軸突變性。
[0040] 圖7A-7D表明，在基于抗-NGF抗體的NGF撤除測定中，P38MAPK抑制劑和腺苷酸 環(huán)化酶激活劑防止軸突變性。
[0041] 圖8A-8D表明，在基于抗-NGF抗體的NGF撤除測定中，轉(zhuǎn)錄抑制劑和EGFR激酶抑 制劑防止軸突變性。
[0042] 圖9A-9D表明，在基于抗-NGF抗體的NGF撤除測定中，JNK抑制劑和Bax通道阻 斷劑防止軸突變性。
[0043] 圖10A-10D表明，在基于抗-NGF抗體的NGF撤除測定中，Ih通道阻斷劑和CAMKK 抑制劑防止軸突變性。
[0044] 圖11的圖顯示了當(dāng)在NGF撤除（t = 0)或在NGF撤除后3、6、9或12小時加 入時，GSK3(30yMSB415286)、EGFR 激酶（10yMAG555)、p38MAPK(30yMSB239063)、 CAMKK(15 μ M ST0-609)和 JNK(10 μ M SP600125)的抑制劑活性。
[0045] 圖12闡明Campenot室，其中體環(huán)境（細(xì)胞體環(huán)境）與軸突環(huán)境是分開的。
[0046] 圖13表明，軸突變性在Campenot室研究中定位，并且在無細(xì)胞凋亡的情況下進 行，在所述Campenot室研究中，NGF撤除發(fā)生在含軸突的室中。通過微管蛋白免疫熒光顯 示變性。
[0047] 圖14表明，在圖13闡明的基于Campenot室的測定中，細(xì)胞體區(qū)室中沒有變性跡 象。
[0048] 圖15表明，在存在30μΜ SB415(GSK抑制劑；GSKi)或15yMAct D(轉(zhuǎn)錄抑制劑； TXNi)的情況下，細(xì)胞體（左圖）而非軸突（右圖）受到保護免于局部變性。
[0049] 圖 16表明，在存在 10yMAG555(EGFR抑制劑；EGFRi)或30yMSB239(p38抑制劑； p38i)的情況下，暴露在抗-NGF抗體中的軸突（右圖）而非細(xì)胞體（左圖）受到保護免于 局部變性。
[0050] 圖17的圖顯示了 Campenot室中軸突變性的定量，其中在軸突環(huán)境（軸突）或體環(huán) 境（細(xì)胞）中存在或缺少（DMS0)15yM 放線菌素 D(ActD)、30yM SB415286(SB415)、10yM AG555或30 μ M SB239063 (SB239)的情況下，向軸突環(huán)境中加入抗-NGF抗體。
[0051] 圖18是基于來自本文描述的篩選的數(shù)據(jù)的模型。
[0052] 圖19表明，當(dāng)在Campenot室中從軸突區(qū)室去除NGF時，細(xì)胞體顯得更小。
[0053] 圖20表明，軸突區(qū)室中NGF被剝奪的許多神經(jīng)元具有增加的胱天蛋白 酶-3(caspase_3)切割，并顯示核凝縮。（神經(jīng)元健康可能受膜染料Dil的影響）。
[0054] 圖21的圖顯示了在細(xì)胞體或軸突區(qū)室中NGF撤除開始（t = 0)和NGF撤除1、3、 6、9和12小時后GSK3的活性（通過磷酸化的GSK3 β的水平降低來測定）。
[0055] 圖22的圖顯示了在細(xì)胞體或軸突區(qū)室中NGF撤除開始（t = 0)和NGF撤除1、3、 6、9和12小時后JNK的活性（通過磷酸化的JNK的水平增加來測定）。
[0056] 圖23表明，當(dāng)向細(xì)胞體區(qū)室中加入細(xì)胞體抑制劑（30 μ M SB415(GSKi)和15 μ Μ Act D(TXNi))時，觀察到具有膨體的大量軸突，以及片段化的軸突。向軸突區(qū)室中加入軸突 抑制劑（1(^]?46555出6?把）和3(^]\138239(?38丨））顯示較少的膨體，并且所述軸突似乎 直接進行片段化。
[0057] 圖24表明，在用GSK、EGFR和p38抑制劑處理的NGF剝奪神經(jīng)元中可能具有更多 的功能線粒體，但仍然沒有伸長的線粒體。
[0058] 圖25表明，GSK抑制劑SB415可在損傷后延遲軸突變性。
[0059] 圖26表明，整體NGF撤除后，10 μ Μ或25 μ M GSK抑制劑阻斷軸突變性，但不阻斷 細(xì)胞死亡。
[0060] 圖27表明，與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ眨∟TG ;左圖）相比，EGFR表達在用抗-EGFR抗體（右 圖）染色的S0D1小鼠（Tg)脊髓切片中增加。
[0061] 圖28表明，EGFR通常在神經(jīng)元（運動神經(jīng)元）中表達，并且與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ?(非-Tg)相比，磷酸化的EGFR(pEGFR)的水平在ALSS0D1小鼠模型（SODl-Tg)中增加。 [0062] 圖29表明，與非轉(zhuǎn)基因?qū)φ眨ǚ?Tg)相比，軸突數(shù)量在ALS S0D1小鼠模型 (S0D1-Tg)中減少，并且ALSS0D1模型中磷酸化的EGFR(pEGFR)與軸突部分地共定位。
[0063] 圖 30 表明，JNK(5 μ M SP600125)、CaMKK(5 μ M ST0-609)、EGFR(1 μ Μ 或 10 μ Μ AG555)、ρ38 (5 μ Μ SB239063)和GSK (10 μ Μ SB415286)的小分子抑制劑保護小腦顆粒神經(jīng) 元免于血清剝奪/KC1減少。
[0064] 圖31表明，EGFR、GSK、CaMKK、JNK和ρ38的小分子抑制劑保護海馬神經(jīng)元免于 1〇以]/[魚藤酮（1'(^6110116)損害。
[0065] 圖32表明，EGFR、GSK、CaMKK、JNK和ρ38的小分子抑制劑保護皮質(zhì)神經(jīng)元免于 10 μ Μ魚藤酮損害。
[0066] 圖33表明，使用對EGFR(左上圖）、Her2 (右上圖）、Her3 (左下圖）和Her4 (右下 圖）特異性的抗體，通過免疫細(xì)胞化學(xué)檢測背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中軸突上的ErbB受體。
[0067] 圖34表明，使用免疫細(xì)胞化學(xué)，EGFR在背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元的軸突中表達。
[0068] 圖35表明，當(dāng)加給背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元時100 μ g/mL EGF不誘導(dǎo)軸突變性，而在處理 的神經(jīng)元中加入100 μ g/mL EGF會誘導(dǎo)ERK的磷酸化。
[0069] 圖36表明，EGFR胞外結(jié)構(gòu)域（50 μ g/mL)不阻斷在背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中的NGF撤 除誘導(dǎo)的軸突變性。
[0070] 圖 37 表明，3·4μΜ、11· 1μΜ、33·3μΜ 和 ΙΟΟμΜ 特羅凱 ? (Tarceva?)(厄洛替 尼）阻斷在背部脊髓外植體中的變性。
[0071] 圖38表明，在軸突變性中雙亮氨酸拉鏈激酶（DLK)在JNK上游起作用。與用對照 質(zhì)?；蚓幋a激酶死亡DLK(DLK-KD)的質(zhì)粒模擬品轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，293細(xì)胞中編碼野生型 DLK的質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染導(dǎo)致JNK激活（如通過磷酸化的JNK的升高水平測定）。背根神經(jīng)節(jié)、周 邊系統(tǒng)神經(jīng)元中siRNA對DLK表達的敲降（knockdown)，會保護軸突免于NGF撤除誘導(dǎo)的變 性。使用定量PCR證實了與對照siRNA (右下圖）相比，使用DLKsiRNA對DLK表達的敲降。
[0072] 圖39表明，DLK信號傳導(dǎo)的siRNA敲降會延遲局部軸突變性。
[0073] 圖40A和40B描述了這樣的實驗的結(jié)果，所述實驗使用相差顯微術(shù)觀察神經(jīng)元，以 評估DLK敲降對NGF撤除誘導(dǎo)的交感神經(jīng)元變性的影響。
[0074] 圖41表明，與對照siRNA (NT)處理的神經(jīng)元相比，使用DLK siRNA (DLK)敲降DLK 表達，會保護交感神經(jīng)元免于喜樹堿和長春新堿誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
[0075] 圖42表明，與用編碼野生型DLK(DLK)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的神經(jīng)元相比，用編碼激酶死亡 DLK(KD)的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染交感神經(jīng)元，會保護神經(jīng)元免于NGF撤除誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
[0076] 圖43A-43D顯示了這樣的實驗的結(jié)果，所述實驗評估實施例15A中描述的抗-pDLK 抗體的結(jié)合特異性。圖43A顯示在顯性失活DLK和對照激酶MLK3存在下，本文描述的每種 抗-pDLK抗體與DLK的結(jié)合的蛋白印跡分析。圖43B顯示抗-pDLK抗體318和319與培養(yǎng) 的293T細(xì)胞的結(jié)合的免疫熒光顯微圖像，所述293T細(xì)胞被DLK (上面兩個圖像）或?qū)φ占?酶MLK3(下面兩個圖像）轉(zhuǎn)化。圖43C顯示了在用DLK和缺少活性的DLK突變體（T278A和 S281A)轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞中的JNK和磷酸-JNK抗體的蛋白印跡檢測。圖43D的蛋白印跡表 明，與未處理的（對照）皮質(zhì)神經(jīng)元相比，用長春新堿處理的皮質(zhì)神經(jīng)元中的磷酸化的DLK 水平升高。
[0077] 圖44A和44B顯示在野生型和S0D1突變體小鼠中疾病末期（圖43A)和癥狀發(fā)作 (圖44B)時抗-pDLK抗體（抗體318)與脊髓切片的結(jié)合。圖44C描述了在人阿爾茨海默 病患者皮質(zhì)樣品中pDLK、pJNK和pcJUN水平的蛋白印跡分析。
[0078] 圖45A和45B描述了這樣的實驗的結(jié)果，所述實驗評估DLK沉默對JNK磷酸化的 影響，所述影響響應(yīng)于交感神經(jīng)元和背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中的NGF撤除應(yīng)激和皮質(zhì)神經(jīng)元中 的長春新堿誘導(dǎo)的應(yīng)激，如實施例15C和實施例14B所述。
[0079] 圖46顯示JNK抑制劑對經(jīng)受NGF撤除應(yīng)激的DRG外植體的保護效果，如實施例 15C所述。
[0080] 圖47描述了這樣的實驗的結(jié)果，所述實驗評估在DRG神經(jīng)元中分別沉默JNK1、 JNK2、JNK3以及一起沉默JNK2與JNK3對NGF撤除應(yīng)激后觀察到的軸突變性的影響，如實 施例15C中所述。
[0081] 圖48A顯示DLK siRNA和對照siRNA對皮質(zhì)神經(jīng)元存活的影響。圖48B顯示DLK siRNA和對照siRNA對交感神經(jīng)元存活的影響。
[0082] 圖49是一組免疫顯微照片，它們顯示G偶連蛋白受體的抑制劑（SCH202676 ; 10 μ Μ或100 μ M)的防止DRG中的NGF撤除誘導(dǎo)的變性的能力。
[0083] 圖50是一組免疫顯微照片，它們顯示SCH202676 (0. 1 μ Μ或1 μ Μ)的防止DRG中 的NGF撤除誘導(dǎo)的變性的能力。
[0084] 圖51是一組免疫顯微照片，它們顯示0. 01 μ g/mL、0. 1 μ g/mL或1 μ g/mL百日咳 毒素（G-蛋白信號傳導(dǎo)的抑制劑）的防止DRG中的NGF撤除誘導(dǎo)的變性的能力。
[0085] 圖52是大鼠海馬神經(jīng)元的一組免疫顯微照片，它們顯示活性突變體 GSK(GSK3S9A)、野生型TCF4和突變體失活的TCF4的表達對變性的影響。
[0086] 圖53顯示了如在實施例18中所述的N-甲基-D-門冬氨酸（NMDA)處理引起的 DLK敲除小鼠中皮質(zhì)神經(jīng)元變性的減少。具體地，圖53(A)的蛋白印跡顯示了在有或沒有 NMDA處理下，在來自野生型小鼠（WT)、DLK雜合的小鼠（dlk7_) (HET)和DLK敲除小鼠 （DLK K0)的皮質(zhì)神經(jīng)元中的DLK、磷酸化的cjun (P CJUN)、磷酸化的p38 (P P38)和磷酸化的JNK (P JNK)的水平。圖53(B)的圖顯示了 LDH釋放測定的結(jié)果。與WT和HET神經(jīng)元相比，觀察到 在NMDA處理后來自DLK敲除小鼠的皮質(zhì)神經(jīng)元的存活增加。
[0087] 圖54顯示了 DLK的顯性失活形式對cjun活化的影響，如實施例19所述。簡而言 之，給小鼠注射表達GFP(AAVGFP)或DLK的顯性失活形式（AAVDLK-LZ)的腺伴隨病毒載 體。使用免疫組織化學(xué)和熒光顯微術(shù)方法，定量表達磷酸化的cjun (p-cjun)或p-cjun和 GFP的神經(jīng)元。
[0088] 圖55顯示了實驗的結(jié)果，在所述實驗中，給小鼠注射AAVGFP或AAVDLK-LZ，然后 進行卡英酸誘導(dǎo)的癲癇發(fā)作，如在實施例20中所述。在3小時時段內(nèi)，測量癲癇發(fā)作的嚴(yán) 重性。

【具體實施方式】 [0089] A.定義
[0090] 術(shù)語"靶標(biāo)"在本文中用于指這樣的蛋白和過程：當(dāng)受影響其活性的試劑調(diào)節(jié)時， 其抑制或降低軸突變性。當(dāng)與抑制其活性的試劑接觸時，本文描述的大多數(shù)靶標(biāo)抑制或降 低軸突變性，但是本發(fā)明的靶標(biāo)還包括當(dāng)被激活時抑制或降低軸突變性的蛋白和過程。本 發(fā)明的示例性靶標(biāo)如下：雙亮氨酸拉鏈激酶（DLK)、糖原合酶激酶3 β (GSK3 β )、p38促分裂 原活化蛋白激酶（P38MAPK)、表皮生長因子受體（EGFR)、磷酸肌醇3激酶（PI3K)、細(xì)胞周期 蛋白依賴性的激酶5 (Cdk5)、腺苷酸環(huán)化酶、c-Jun N-端激酶（JNK)、BCL2-相關(guān)的X蛋白 (Bax)、Ih通道、鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性的蛋白激酶激酶（CaMKK)、G-蛋白、G-蛋白偶聯(lián)的受 體、轉(zhuǎn)錄因子4(TCF4)、i3-聯(lián)蛋白、轉(zhuǎn)錄和蛋白合成。在表1中列出了這些靶標(biāo)中的幾種的 通用備選命名的選擇。所述靶標(biāo)包括天然的人序列和來自猴子、小鼠、大鼠和其它非人哺乳 動物的這些序列的同源物，包括所有天然存在的變體，如可變剪接的和等位的變體與同種 型，及其可溶形式。在表1中還提供了示例性的非限制性的序列參照。也可認(rèn)為額外的序 列（包括多種靶標(biāo)同種型、變體、同源物和片段的序列）是根據(jù)本發(fā)明的靶標(biāo)。
[0091] 表 1
[0092]

【權(quán)利要求】
1. 抑制雙殼氣酸拉鏈激酶（DLK)活性或表達的試劑在制備用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng) (CNS)神經(jīng)元或其部分的變性的藥物或試劑盒中的用途，其中所述試劑用于向所述CNS神 經(jīng)元施用和抑制或預(yù)防所述CNS神經(jīng)元的軸突或細(xì)胞體部分中的變性。
2. 如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述CNS神經(jīng)元選自由以下各項組成的組：小腦顆 粒神經(jīng)元、皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬神經(jīng)元。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的用途，其中，與未用所述試劑治療的神經(jīng)元群體相比，所述 施用導(dǎo)致神經(jīng)元群體的變性減少至少10%。
4. 如權(quán)利要求1所述的用途，其中所述CNS神經(jīng)元不是多巴胺能神經(jīng)元。
5. 如權(quán)利要求1-4所述的用途，其中所述試劑是DLK信號傳導(dǎo)或DLK表達的抑制劑。
6. 如權(quán)利要求1-5所述的用途，其中所述試劑選自由以下各項組成的組：抗體、短的干 擾RNA(siRNA)、多肽、肽體、反義多核苷酸、適配體、小分子、多糖、DLK的顯性失活形式、DLK 的激酶死亡形式和它們的組合，其中所述抗體選自由以下各項組成的組：多克隆抗體、單克 隆抗體、嵌合抗體、人源化抗體、Fv片段、Fab片段、Fab'片段和F(ab'） 2片段，和所述siRNA 分子靶向 DLK, JNK1，JNK2 或 JNK3。
7. 如權(quán)利要求1-6所述的用途，其中所述神經(jīng)元存在于人患者中，存在于神經(jīng)移植物 或神經(jīng)移植體中。
8. 如權(quán)利要求1-7所述的用途，其中所述試劑在藥學(xué)上可接受的載體中，和/或所述藥 物或試劑盒還包括一種或多種另外的藥物試劑。
9. 如權(quán)利要求1-8所述的用途，其中所述試劑或所述一種或多種另外的藥物試劑處于 適合用于選自由下述各項組成的組的施用途徑的形式中：腸胃外的、皮下的、靜脈內(nèi)的、腹 膜內(nèi)的、大腦內(nèi)的、損害內(nèi)的、肌肉內(nèi)的、眼內(nèi)的、動脈內(nèi)的、間質(zhì)輸注和植入式遞送裝置。
10. 如權(quán)利要求1-9所述的用途，其中所述試劑的施用導(dǎo)致：JNK磷酸化、JNK活性、JNK 表達、cjun磷酸化、cjun活性、cjun表達、p38磷酸化、p38活性和/或p38表達的降低。
11. 如權(quán)利要求1-10所述的用途，其中所述患者患有神經(jīng)變性疾病或病癥，或處于發(fā) 生神經(jīng)變性疾病或病癥的風(fēng)險中。
12. 如權(quán)利要求11所述的用途，其中所述神經(jīng)變性疾病或病癥選自由以下各項組成的 組：阿爾茨海默病、亨廷頓病、帕金森病、帕金森疊加病、肌萎縮性側(cè)索硬化（ALS)、缺血、中 風(fēng)、顱內(nèi)出血、腦出血、三叉神經(jīng)痛、舌咽神經(jīng)痛、貝耳麻痹、重癥肌無力、肌營養(yǎng)不良、進行 性肌萎縮、原發(fā)性側(cè)索硬化（PLS)、假延髓性麻痹、進行性延髓性麻痹、脊髓性肌萎縮、遺傳 性肌萎縮、椎間盤綜合征、頸椎病、神經(jīng)叢病癥、胸廓出口破壞綜合征、外周神經(jīng)病、嚇啉病、 多系統(tǒng)萎縮、進行性核上性麻痹、皮質(zhì)基底節(jié)變性、雷維小體癡呆、額顳癡呆、脫髓鞘病、吉 蘭-巴雷綜合征、多發(fā)性硬化、進行性神經(jīng)性腓骨肌萎縮癥、朊病毒病、克-雅病、格-施-沙 綜合征（GSS)、致命性家族性失眠癥（FFI)、牛海綿樣腦病、皮克病、癲癇、艾滋病癡呆綜合 征；神經(jīng)損傷，其由暴露于毒性化合物、重金屬、工業(yè)溶劑、藥物或化學(xué)治療劑引起；神經(jīng)系 統(tǒng)損傷，其由物理、機械或化學(xué)損傷引起；青光眼、格子狀營養(yǎng)不良、色素性視網(wǎng)膜炎、年齡 相關(guān)的黃斑變性（AMD)、與濕性或干性AMD相關(guān)的光感受器變性、其它視網(wǎng)膜變性、視神經(jīng) 脈絡(luò)膜小疣、視神經(jīng)病和視神經(jīng)炎。
【文檔編號】A61P25/16GK104043126SQ201410255391
【公開日】2014年9月17日 申請日期:2010年10月21日 優(yōu)先權(quán)日:2009年10月22日
【發(fā)明者】約瑟夫·威斯利·盧科克, 克里斯蒂娜·波茲尼亞克, 阿倫哈蒂·森古普塔-高希 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司