肉蓯蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了肉蓯蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的應(yīng)用， 申請人:通過實(shí)驗(yàn)證實(shí)肉蓯蓉苯乙醇苷提取物可以通過抗缺氧、抗炎、抗氧化應(yīng)激及調(diào)節(jié)水通道蛋白表達(dá)，使得生物體適應(yīng)高原缺氧環(huán)境，預(yù)防腦水腫和肺水腫的發(fā)生。此外治療給藥實(shí)驗(yàn)證實(shí)肉蓯蓉苯乙醇苷提取物可以降低慢性高原病大鼠四肢水腫發(fā)生率及死亡率，并能有效降低慢性高原病大鼠的肺動(dòng)脈高壓和心室肥厚程度，改善心肺病理改變。相應(yīng)的，本發(fā)明還公開了一種含有肉蓯蓉苯乙醇苷提取物的防治高原病的藥物組合物。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及肉蓯蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的應(yīng)用，屬于藥理學(xué)領(lǐng)域。 肉蓯蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的應(yīng)用

【背景技術(shù)】
[0002] 我國是世界上高原面積最大的國家，而我國地勢整體呈西高東低分布，使得位于 西北及西部邊陲的國界線主要為高原地形。新疆、西藏兩個(gè)自治區(qū)面積占到我國總面積 3〇%以上，資源富集，擁有我國陸地邊境線的很大部分，戰(zhàn)略地位極為重要。新疆西藏礦藏 和旅游資源極其豐富，隨著陸路國際通道的打通，兩地的能源開發(fā)及旅游業(yè)將獲得長足發(fā) 展，成為重要的經(jīng)濟(jì)支點(diǎn)。大力發(fā)展西部，對國家經(jīng)濟(jì)建設(shè)及穩(wěn)定具有重要意義。西部一些 重要礦業(yè)和經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)海拔高度達(dá)到4000米至5000米，所以國家能源基地等四個(gè)基地的 建設(shè)以及旅游業(yè)的長足發(fā)展必然會(huì)帶來大量的平原居住環(huán)境者進(jìn)入高原環(huán)境，加上我國生 活在海撥3000米以上的人群有近6千萬，所以防治由高原極端環(huán)境引發(fā)的高原病將極為重 要。
[0003] 常見的高原極端環(huán)境包含高寒低壓低氧環(huán)境、干熱的沙漠戈壁環(huán)境，高輻射環(huán)境 等重要組成因素 。高原病是由于人體對高原低壓性缺氧不適應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體病理生理上一系 列改變而引起的各種臨床表現(xiàn)的總稱。該病一般分為急性和慢性兩類。急性高原病（Acute mountain sickness，AMS)指初入高原（海拔3000米以上）時(shí)出現(xiàn)的急性缺氧反應(yīng)或疾 病，輕型急性高原病即急性高原反應(yīng)；重型急性高原病又分為：高原腦水腫（high altitude cerebral edema'HACE)、高原肺水腫（high altitude pulmonary edema,HAPE)、混合型。慢 性高原?。–hronic mountain sickness，CMS)指原有急性高原病癥狀遷延不愈或抵高原后 半年以上方發(fā)病者。中國將慢性高原病又分為：高原心臟病、高原紅細(xì)胞增多癥、高原血壓 異常、混合型慢性高原病 [1]。
[0004]目前急性高原病的治療方法主要是預(yù)防為主，西藥多采用地塞米松、乙酰唑胺、氨 茶堿等，會(huì)引起嚴(yán)重的不良反應(yīng)。中藥防治高原病在我國被公認(rèn)為是一種有效的措施。在 這之中，銀杏葉提取物的有效性尚存在爭議，刺五加注射液僅適合高原低血壓癥的治療。而 高原植物紅景天提取物及其復(fù)方制劑應(yīng)用較多，具有一定的預(yù)防效果。其中紅景天苷具有 抗缺氧、抗氧化、抗疲勞、抗輻射作用，是預(yù)防高原反應(yīng)的最有效成分之一。
[0005]中藥肉蓯蓉是肉蓯蓉屬植物的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖，具有補(bǔ)腎壯陽、益精血等功 效。管花肉蓯蓉（C_tubul〇Sa(Schrenk)Wight)主產(chǎn)于我國新疆南部，資源豐富。為目前 肉蓯蓉的主要基源植物。
[0006]- 申請人:在長期研究中發(fā)現(xiàn)，肉蓯蓉中的苷類成分具有抗氧化、抗衰老、清除自由 基、抗福射、提高免疫力和改善學(xué)習(xí)功能等作用，并且對腦缺血/腦缺血再灌注也有一定的 保護(hù)作用，可提高血液循環(huán)能力，對低氧誘導(dǎo)的氧化損害有強(qiáng)的抗氧化和細(xì)胞保護(hù)活性。具 備與紅景天苷相似的藥理作用并具有資源優(yōu)勢。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 基于上述研究成果，本發(fā)明公開了肉蓯蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的應(yīng) 用。
[0008] 申請人:在實(shí)驗(yàn)過程中，利用西北地區(qū)人工實(shí)驗(yàn)艙模擬高原環(huán)境制備了急慢性高原 病大鼠模型，驗(yàn)證了肉蓯蓉苯乙醇苷對其的防治作用。
[0009] 本發(fā)明的肉蓯蓉苯乙醇苷提取物，包含松果菊苷（根據(jù)具體制備工藝的差別，占 總質(zhì)量的15-75%左右）及毛蕊花糖苷，可以通過多種方法制備，尤其可以通過下述制備方 法獲得（具體的制備實(shí)施例可參考CN1268341C)，所述制備方法包括下述步驟：
[0010] a)將管花肉蓯蓉的肉質(zhì)莖以第一極性溶劑加予萃取；
[0011] b)將步驟a)獲得的萃取物加到裝有疏水大孔隙聚合物的柱中，使得苯乙醇苷成 分吸附在聚合物上；
[0012] C)用第二極性溶劑作為流動(dòng)相流洗液洗脫該柱以除去游離的化合物，在此情況 下，大部份的苯乙醇苷仍然吸附在聚合物上；
[0013] d)用第三極性溶劑將苯乙醇苷從聚合物上洗脫下來，得到含有苯乙醇苷的洗脫 液，除去含有苯乙醇苷洗脫液中的溶劑以得到干燥產(chǎn)物。
[0014] 在上述方法中，步驟a)的第一極性溶劑為水或水與乙醇的混合溶劑；所述的步驟 c)的第二極性溶劑為水，步驟d)的第三極性溶劑為甲醇、乙醇、水與甲醇的混合溶劑，或水 與乙醇的混合溶劑。
[0015] 由于肉蓯蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中效果優(yōu)異，因此本發(fā)明還公開了含有 肉蓯蓉苯乙醇苷提取物的防治高原病的藥物組合物，包括輔料、肉蓯蓉苯乙醇苷提取物，肉 蓯蓉苯乙醇苷提取物與輔料的重量比為1 : 99?99 : 1。
[0016] 上述的輔料，可根據(jù)具體劑型的需要，選擇藥學(xué)上任意可用的藥用輔料，具體的劑 型包括但不限于口服液、片劑、丸劑、膠囊、注射劑、滴丸劑或膏劑。
[0017] 在上述藥物組合物中，肉蓯蓉苯乙醇苷提取物包含松果菊苷及毛蕊花糖苷。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0018] 圖1為各組大鼠腦組織病理結(jié)果（HEX400)，其中A-F依次為正常對照組、模型組、 大花紅景天組、肉蓯蓉苯乙醇苷提取物（PhGCs)低劑量組、肉蓯蓉苯乙醇苷提取物（PhGCs) 中劑量組、肉蓯蓉苯乙醇苷提取物（PhGCs)高劑量組；
[0019] 圖2為各組大鼠腦組織AQP4表達(dá)量圖（X400)，其中A-F依次為正常對照組、模型 組、大花紅景天組、PhGCs低劑量組、PhGCs中劑量組、PhGCs高劑量組；
[0020] 圖3為各組大鼠肺組織病理結(jié)果（HEX400)，其中A-F依次為正常對照組、模型組、 大花紅景天組、PhGCs低劑量組、PhGCs中劑量組、PhGCs高劑量組；
[0021] 圖4為各組大鼠肺組織AQP5表達(dá)結(jié)果（X400)，其中A-F依次為正常對照組、模型 組、大花紅景天組、PhGCs低劑量組、PhGCs中劑量組、PhGCs高劑量組；
[0022] 圖5為各組大鼠肺組織病理結(jié)果（HEX40)，其中A-F依次為正常對照組、模型組、 大花紅景天組、PhGCs低劑量組、PhGCs中劑量組、PhGCs高劑量組；
[0023] 圖6為各組大鼠右心室病理結(jié)果（HExlOO)，其中A-F依次為正常對照組、模型組、 大花紅景天組、PhGCs低劑量組、PhGCs中劑量組、PhGCs高劑量組；
[0024] 圖7為各組大鼠肺組織HIF1 α表達(dá)圖（ΙΟΟχ)，其中A-F依次為正常對照組、模型 組、大花紅景天組、PhGCs低劑量組、PhGCs中劑量組、PhGCs高劑量組；
[0025] 圖8為各組大鼠肺組織VEGF表達(dá)圖（ΙΟΟχ)，其中A-F依次為正常對照組、模型組、 大花紅景天組、PhGCs低劑量組、PhGCs中劑量組、PhGCs高劑量組。

【具體實(shí)施方式】
[0026] 實(shí)施例1 :小鼠常壓缺氧實(shí)驗(yàn)
[0027] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：清潔級(jí)KM小鼠，體重18_22g，自由飲水?dāng)z食，清潔級(jí)動(dòng)物SPF實(shí)驗(yàn)室適 應(yīng)性飼養(yǎng)3天，溫度（20±2)°C，濕度（60±5)%，12h光照周期。實(shí)驗(yàn)儀器與試劑：250mL廣 口瓶，秒表，醫(yī)用鈉石灰（上海五四化學(xué)試劑有限公司，20121218)，凡士林，大花紅景天口 服液（西藏藏藥集團(tuán)股份有限公司，120503,國藥準(zhǔn)字B20070002)，肉蓯蓉苯乙醇苷提取物 (杏輝天力藥業(yè)有限公司，1 2〇401)
[0028] 實(shí)驗(yàn)方法：
[0029] (1)選用18?22g昆明種小鼠50只，雌雄各半，購自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心， 動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK (新）2011-0004,動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK (新）2011-0004。隨機(jī) 區(qū)組法均衡體重性別隨機(jī)分為5組：空白對照組，肉蓯蓉苯乙醇苷低劑量組（112. 5mg/kg)、 肉蓯蓉苯乙醇苷中劑量組（225mg/kg)、肉蓯蓉苯乙醇苷高劑量組（450mg/kg)，大花紅景天 口服液組（2.57mL/kg)，每組10只，各組均在SPF環(huán)境飼養(yǎng)。灌胃給藥（空白對照組給蒸 餾水，其余各組按相應(yīng)劑量給藥，灌胃體積為0. 2mL/10g)，連續(xù)給藥7d，末次給藥lh后，將 小鼠放入含有15g鈉石灰的250mL廣口瓶中，每瓶1鼠。瓶底鈉石灰上置濾紙，瓶塞用凡士 林密封。立即計(jì)時(shí)，觀察小鼠從瓶塞封閉到呼吸停止時(shí)間，稱為缺氧生存時(shí)間。計(jì)算各組小 鼠缺氧生存時(shí)間均值，并計(jì)算藥物對生存時(shí)間的延長百分比。
[0030] 生存時(shí)間延長百分比=(給藥組平均生存時(shí)間-正常對照組平均生存時(shí)間）/正 常對照組平均生存時(shí)間X 100%。
[0031] ⑵選用18?22g昆明種小鼠50只，雌雄各半，購自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心， 動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK (新）2011-0004,動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK (新）2011-0004。隨機(jī) 區(qū)組法均衡體重性別隨機(jī)分為5組：空白對照組，肉蓯蓉苯乙醇苷劑量組（112. 5mg/kg)，中 劑量組（225mg/kg)，高劑量組（450mg/kg)，大花紅景天口服液組（0. 42mL/kg)，每組10只， 各組均在SPF環(huán)境飼養(yǎng)。腹腔注射給藥（空白對照組給蒸餾水，其余各組按相應(yīng)劑量給藥， 給藥體積為〇· 2mL/10g)，給藥0. 5h后，將小鼠放入含有15g鈉石灰的250mL廣口瓶中，每瓶 1鼠。瓶底鈉石灰上面放置濾紙，瓶塞用凡士林密封。立即計(jì)時(shí)，觀察小鼠從瓶塞封閉到呼 吸停止時(shí)間，稱為缺氧生存時(shí)間。計(jì)算各組小鼠缺氧生存時(shí)間均值，并計(jì)算藥物對生存時(shí)間 延長百分比。
[0032] 生存時(shí)間延長百分比=(給藥組平均生存時(shí)間-正常對照組平均生存時(shí)間）/正 常對照組平均生存時(shí)間X 100%
[0033] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下所示：
[0034] 與空白對照組相比，灌胃給肉蓯蓉苯乙醇苷低、中、高劑量組及大花紅景天組小 鼠缺氧生存時(shí)間顯著延長（P < 0. 05)，延長百分率分別為22. 46 %、33. 75 %、41. 51 %和 30. 23%。腹腔注射肉蓯蓉苯乙醇苷低、中、高劑量及大花紅景天后小鼠缺氧生存時(shí)間也顯 著延長（P <0· 01)，延長百分率分別為33. 38%、69· 39%、105. 67%和95. 52%。具體結(jié)果 見表1_1。
[0035] 表1-1各組小鼠缺氧存活時(shí)間<1·；^):
[0036]

【權(quán)利要求】
1. 肉蓯蓉苯乙醇苷提取物在防治高原病中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述肉蓯蓉苯乙醇苷提取物包含松果菊苷 及毛蕊花糖苷。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述肉蓯蓉苯乙醇苷提取物制備方法包括 下述步驟：a)將管花肉蓯蓉的肉質(zhì)莖以第一極性溶劑加予萃?。籦)將步驟a)獲得的萃取 物加到裝有疏水大孔隙聚合物的柱中，使得苯乙醇苷成分吸附在聚合物上；c)用第二極性 溶劑作為流動(dòng)相流洗液洗脫該柱以除去游離的化合物；d)用第三極性溶劑將苯乙醇苷從 聚合物上洗脫下來，得到含有苯乙醇苷的洗脫液，除去含有苯乙醇苷洗脫液中的溶劑以得 到干燥產(chǎn)物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3的應(yīng)用，其特征在于步驟a)的第一極性溶劑為水或水與乙醇的混合 溶劑；步驟c)的第二極性溶劑為水，步驟d)的第三極性溶劑為甲醇、乙醇、水與甲醇的混合 溶劑，或水與乙醇的混合溶劑。
5. 含有肉蓯蓉苯乙醇苷提取物的防治高原病的藥物組合物，其特征在于包括輔料、肉 蓯蓉苯乙醇苷提取物，肉蓯蓉苯乙醇苷提取物與輔料的重量比為1:99?99:1。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5的藥物組合物，其特征在于所述肉蓯蓉苯乙醇苷提取物包含松果菊 苷及毛蕊花糖苷。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5的藥物組合物，其特征在于為口服液、片劑、丸劑、膠囊、注射劑、滴 丸劑或膏劑。
【文檔編號(hào)】A61K31/7032GK104189099SQ201410270792
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年6月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月17日
【發(fā)明者】陶義存, 毛新民, 李琳琳, 駱新, 王燁, 靳春麗 申請人:新疆醫(yī)科大學(xué)