一種含絲裂霉素c的微泡超聲造影劑及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種絲裂霉素C超聲微泡造影劑的制備方法。本發(fā)明采用磷脂與絲裂霉素C制備成磷脂復(fù)合物，大大改善了絲裂霉素的脂溶性，用磷脂復(fù)合物制備脂質(zhì)體，提高了絲裂霉素C脂質(zhì)體的包封率與載藥量。將得到的脂質(zhì)體加入凍干保護(hù)劑冷凍干燥，充填氣體，得到絲裂霉素C脂質(zhì)超聲微泡。臨用前按需要量加注射用生理鹽水，經(jīng)振蕩水合后應(yīng)用。得到的載藥超聲微泡可以通過超聲成像對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及療效進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)和診斷，也可通過微泡的被動(dòng)靶向和超聲擊碎微泡釋放藥物，達(dá)到可控地靶向釋放藥物的目的。從而對(duì)腫瘤的預(yù)防、診斷及治療均有著重要的意義。
【專利說明】一種含絲裂霉素 C的微泡超聲造影劑及其制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，具體涉及一種載藥微泡超聲造影劑。

【背景技術(shù)】
[0002] 超聲醫(yī)學(xué)不但在傳統(tǒng)的診斷領(lǐng)域發(fā)展迅速，而且逐漸延伸到治療領(lǐng)域。微泡超聲 造影劑在作為診斷工具的同時(shí)也可以作為一種新型的藥物的載體，不僅可以增強(qiáng)超聲顯 像，還可作為靶向給藥的載體。微泡超聲造影劑，是一種用外殼固定氣體的微泡，它大大增 強(qiáng)超聲的背向散射，從而增強(qiáng)血流的同波信號(hào)和血流在血管中的多普勒信號(hào)，超聲造影劑 已經(jīng)普遍應(yīng)用于超聲診斷。構(gòu)成微泡超聲造影劑膜材料是藥物的良好載體，可將藥物吸附、 整合或包裹。經(jīng)靜脈注射后，攜帶藥物的微泡到達(dá)特定器官，在超聲輻照下微泡破裂，使周 圍靶細(xì)胞間隙增寬，微泡空化產(chǎn)生的沖擊波可提高細(xì)胞的滲透性；利于微泡所攜帶藥物進(jìn) 入靶組織，增加靶組織藥物濃度，可降低藥物的毒副作用，達(dá)到提高治療效果的目的。超聲 誘導(dǎo)微泡破裂產(chǎn)生的生物效應(yīng)還可對(duì)病變組織產(chǎn)生破壞作用，有利于病變細(xì)胞凋亡。隨著 對(duì)超聲造影劑研究的深入，靶向超聲造影劑在疾病診斷及治療中的潛在作用越來(lái)越受到重 視。
[0003] 絲裂霉素 C (Mitomycin C，MMC，以下簡(jiǎn)稱絲裂霉素，結(jié)構(gòu)如式（I )所示）是一種 細(xì)胞周期非特異性抗腫瘤藥，抗瘤譜廣。絲裂霉素主要作用為使互補(bǔ)的DNA雙鍵之間形成 交聯(lián)，從而抑制DNA而不直接影響RNA的蛋白質(zhì)合成。臨床用于治療肝癌、肺癌、乳腺癌、消 化道癌、膀胱癌、前列腺癌等。普通制劑中，藥物通過分布和被動(dòng)擴(kuò)散分布至全身，而在腫瘤 部位藥量不大，且消失也快，導(dǎo)致腫瘤部位藥物有效濃度持續(xù)時(shí)間短，全身不良反應(yīng)大，如 產(chǎn)生白細(xì)胞減少、脫發(fā)、變態(tài)反應(yīng)、惡心、組織壞死、腎衰、眼部傷害等。據(jù)報(bào)道，在接受絲裂 霉素治療5?12個(gè)月后，約10%的腺癌患者發(fā)生溶血性尿毒綜合征（HUS)，引起腎功能減 退，當(dāng)累計(jì)劑量超過60mg后，更易發(fā)生HUS，且停藥后癥狀持續(xù)加重。絲裂霉素對(duì)心臟等臟 器的毒性也有報(bào)道，這些毒副作用極大地限制了其應(yīng)用。目前市場(chǎng)使用的絲裂霉素制劑有 粉針劑，臨床上常常因毒副作用大，或患者不能耐受而被迫停藥，因而急需對(duì)絲裂霉素進(jìn)行 劑型設(shè)計(jì)，研制絲裂霉素新劑型和給藥途徑，以降低其毒性。
[0004] 脂質(zhì)體包裹氣體的微泡造影劑是目前常用的微泡超聲造影劑。將絲裂霉素制成脂 質(zhì)體，然后包裹氣體制成脂質(zhì)微泡造影劑，能更好地發(fā)揮絲裂霉素的抗腫瘤作用，而降低它 的毒性，然而絲裂霉素在水中溶解度大，脂質(zhì)體包封率小。楊冬發(fā)等用復(fù)乳法制備絲裂霉素 C脂質(zhì)體，得到的包封率為8.25% (楊冬發(fā)，覃健，侯之啟。復(fù)乳法制備絲裂霉素 C脂質(zhì)體 及包封率的測(cè)定中國(guó)醫(yī)藥指南2012,10 (34) 8?10)。張美俠等在處方中加入油酸，使絲裂 霉素 C包封率由原來(lái)的7%增長(zhǎng)至15% (張美俠、胡晉.絲裂霉素 c脂質(zhì)體的制備工藝研 究沈陽(yáng)部隊(duì)醫(yī)藥1994,7(5)454)。胡蘭榮等制備絲裂霉素 C免疫脂質(zhì)體的包封率為10? 15% (胡蘭榮，齊曉峰，鄭昌學(xué)，吳健，董志偉。絲裂霉素靶向免疫脂質(zhì)體對(duì)胃癌細(xì)胞M85的 體外殺傷作用生物化學(xué)雜志1991，7 (3) 381?3)。這些方法制備的絲裂霉素 C脂質(zhì)體的包 封率小，不能滿足靶向給藥的需要。有專利制備絲裂霉素多囊脂質(zhì)體，包封率達(dá)45% (申 請(qǐng)?zhí)枺篊N200610025159. 4)，但不適合制備微泡造影劑。為了提高絲裂霉素 C脂質(zhì)體的包封 率，很多研究者將絲裂霉素 C制成脂溶性的前體藥物（吳道澄、徐梁、張學(xué)庸。油酸絲裂霉 素的合成及其脂質(zhì)體制劑的研制第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)1994,15 (2) 148，美國(guó)專利7, 303, 760、 7, 276, 248、6, 984, 396、6, 365, 179)，但是前體藥物很難成為新藥應(yīng)用于臨床。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是制備一種載有絲裂霉素的微泡超聲造影劑，使它既是超聲造影的 對(duì)比劑，又?jǐn)y帶絲裂霉素到達(dá)靶部位起靶向治療作用。本發(fā)明另一個(gè)特色是采用磷脂與絲 裂霉素 C制備成磷脂復(fù)合物，提高絲裂霉素 C脂質(zhì)體的包封率與載藥量。本發(fā)明得到絲裂霉 素 C脂質(zhì)微泡超聲造影劑可以通過超聲成像對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及療效進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)和診 斷，也可通過微泡的被動(dòng)靶向和超聲擊碎微泡釋放藥物，達(dá)到可控地靶向釋放藥物的目的。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：
[0007] -種微泡超聲造影劑，由脂質(zhì)體和包裹于所述的脂質(zhì)體內(nèi)的微泡組成，所述脂質(zhì) 體由如下重量份的組分制成：
[0008] 絲ΙΤ?丨/; +桌C 丨份 磷脂 0.8?30份 穩(wěn)記劑 0?15份 抗鋱劑 0?20份 粉末載體 20?90份
[0009] 本發(fā)明采用磷脂與絲裂霉素 c制備成磷脂復(fù)合物，改善絲裂霉素 c的脂溶性，用磷 脂復(fù)合物制備脂質(zhì)體，提高絲裂霉素脂質(zhì)體的包封率與載藥量，繼而制備絲裂霉素脂質(zhì)微 泡超聲造影劑，可提高絲裂霉素的靶向性。得到的載藥微泡超聲可以通過超聲成像對(duì)腫瘤 的發(fā)生、發(fā)展及療效進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)和診斷，也可通過微泡的被動(dòng)靶向和超聲擊碎微泡釋放 藥物，達(dá)到可控地靶向釋放藥物的目的。從而對(duì)腫瘤的預(yù)防、診斷及治療均有著重要的意 義。
[0010] 作為優(yōu)選，所述的磷脂為卵磷脂、大豆磷脂、氫化磷脂和合成磷脂中的一種或幾種 的混合物，其中，所述的合成磷脂包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿和二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺。
[0011] 作為優(yōu)選，所述的穩(wěn)定劑為膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、油酸、油酸鈉、膽固醇、單硬脂酸 甘油酯中的一種或幾種的混合物；
[0012] 作為優(yōu)選，所述的抗氧劑為維生素 E、維生素 C、金屬絡(luò)合劑等的一種或幾種的混 合物。
[0013] 作為優(yōu)選，所述的粉末載體為葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、右旋糖苷、甘露糖、山梨 醇、木糖醇等中的一種或幾種的混合物。
[0014] 作為優(yōu)選，所述的微泡中填充的氣體選自空氣、氧氣、氮?dú)?、二氧化碳、六氟化硫?氟碳?xì)怏w中的一種或幾種的混合物。
[0015] 作為優(yōu)選，所述脂質(zhì)體由如下重量份的組分制成：
[0016] 絲裂裕索C 1份 _脂 8?15 # 穩(wěn)記劑 1?10份 _7] 抗氧劑 0?5份 粉末載體 40?80份。
[0018] 采用這些組分制成的微泡超聲造影劑包封率高，能達(dá)到持久增強(qiáng)肝實(shí)質(zhì)超聲顯像 效果，并且能夠達(dá)到可控地靶向釋放藥物的目的。
[0019] 本發(fā)明還提供了一種所述的微泡超聲造影劑的制備方法，它包含以下步驟：
[0020] (1)取絲裂霉素 C與磷脂加入到有機(jī)溶劑中，于25°C?60°C溫度下攪拌或振蕩2h 以上得到磷脂復(fù)合物；
[0021] 所述的有機(jī)溶劑優(yōu)選為無(wú)水乙醇、氯仿、二氯甲烷或丙酮；
[0022] (2)在（1)所得到的磷脂復(fù)合物中加入穩(wěn)定劑、抗氧劑攪拌或振蕩溶解；
[0023] (3)在（2)得到的溶液中加入粉末載體，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干溶劑得到前體脂質(zhì)體；
[0024] (4)在無(wú)菌條件下，取出（3)得到的前體脂質(zhì)體分裝于西林瓶中，然后注入惰性氣 體以置換西林瓶頭部的空氣，密封即得。
[0025] 本發(fā)明還提供了一種所述的微泡超聲造影劑在制備含絲裂霉素 C水溶性抗腫瘤 藥物中的應(yīng)用。
[0026] 本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步主要體現(xiàn)在：制備了一種載有絲裂霉素 C的微 泡超聲造影劑，并采用磷脂復(fù)合物技術(shù)增加了微泡超聲造影劑的載藥量。
[0027] 絲裂霉素 C在臨床可用于治療肝癌等腫瘤，但因藥物通過分布和被動(dòng)擴(kuò)散在全身 分布，而在腫瘤部位藥量不大，全身不良反應(yīng)大。本發(fā)明得到的載有絲裂霉素 C的微泡超聲 造影劑可以通過超聲成像對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及療效進(jìn)行實(shí)時(shí)檢測(cè)和診斷，也可通過微泡 的被動(dòng)靶向和超聲擊碎微泡釋放藥物，達(dá)到可控地靶向釋放藥物的目的。
[0028] 本發(fā)明采用磷脂與絲裂霉素 C制備成磷脂復(fù)合物，大大改善了絲裂霉素的脂溶 性，用磷脂復(fù)合物制備脂質(zhì)體包裹氣體，提高了絲裂霉素 C微泡超聲造影劑的包封率與載 藥量。
[0029] 本發(fā)明為肝癌的診治提供了一種新的藥物與療法，具有較大的臨床意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0030] 圖1為制備得到的絲裂霉素 C微泡超聲造影劑；
[0031] 圖2為水化后的絲裂霉素 C微泡超聲造影劑顯微鏡圖；
[0032] 圖3為絲裂霉素 C微泡超聲造影劑家兔肝臟顯影；
[0033] 圖4為絲裂霉素 C微泡超聲造影劑時(shí)間-強(qiáng)度曲線。

【具體實(shí)施方式】
[0034] 下面實(shí)施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不以任何形式限制本發(fā)明涉及的內(nèi)容。
[0035] 實(shí)施例1
[0036] 絲裂裕尜C 0.3g 卵i粦脂 3g 膽固醇 0.75g 油酸 0.6g 乳糖 19.5g
[0037] 取卵磷脂與絲裂霉素加二氯化碳適量（約100mL)溶解，密封，35°C恒溫振蕩4h，力口 入膽固醇和油酸溶解，移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，加入乳糖，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥。在無(wú)菌條件下分裝于 西林瓶中，每瓶0. 8g，然后注入六氟化硫氣體以置換西林瓶頭部的空氣，密封即得，見圖1。
[0038] 向絲裂霉素 C微泡超聲造影劑小瓶?jī)?nèi)注入0. 9 %氯化鈉注射液3mL然后振搖瓶子， 直至微泡均均勻分散，吸取少許，用水稀釋100倍，在顯微鏡下觀察微泡的形態(tài)特征，可見 微泡呈圓形，中間透亮，壁薄，大小均勻且穩(wěn)定，見圖2。采用激光粒度分析儀測(cè)定所得微泡 平均直徑為2. 7 μ m，。
[0039] 實(shí)施例2
[0040] 絲裂裕索C 0.3g 卵磷脂 2g 維叱索E 0.7g ΙΓ?^糖 21g
[0041] 取卵磷脂與絲裂霉素加無(wú)水乙醇適量（約100mL)溶解，密封，50°C恒溫振蕩6h，力口 入維生素 E溶解，移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，加入甘露糖，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥。在無(wú)菌條件下分裝于西 林瓶中，每瓶〇.8g，然后注入六氟化硫氣體以置換西林瓶頭部的空氣，密封即得。
[0042] 實(shí)施例3
[0043] 絲裂霉索C 0.3g -'·棕櫚酸_斷·膽堿 1.5g + :棕櫚酰_斷酰乙酢胺0.5g 油酸 〇.7g 山梨醇 21 g
[0044] 取二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺與絲裂霉素加氯仿適量（約 100mL)溶解，密封，40°C恒溫振蕩6h，加入油酸溶解，移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，加入山梨醇，旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)干燥。在無(wú)菌條件下分裝于西林瓶中，每瓶〇.8g，然后注入全氟丙烷氣體以置換西林瓶 頭部的空氣，密封即得。
[0045] 實(shí)施例4包封率的測(cè)定
[0046] 取實(shí)施例1制得的超聲造影劑，隔塞注入3ml生理鹽水，輕輕搖動(dòng)形成微泡混懸 液。
[0047] 藥物總量的測(cè)定：取微泡混懸液lmL加入500mL量瓶中，加入lmL7. 5 %吐溫-80溶 液使微泡混懸液溶解，加 PH7. 2磷酸鹽緩沖溶液至刻度，用0. 45um微孔濾膜過濾，于364nm 處測(cè)定紫外吸光度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度，并計(jì)算總藥物量。
[0048] 游離藥物量的測(cè)定：取微泡混懸液以300r/min離心3min，用帶0. 45um微孔濾膜 的注射器吸取下層溶液，精密移取0. 5mL加入250mL量瓶中，加 pH7. 2磷酸鹽緩沖溶液至刻 度，于364nm處測(cè)定紫外吸光度，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算濃度，并計(jì)算游離藥物量。
[0049] 包封率的計(jì)算：將上述測(cè)得的藥物總量與游離藥物量按下式計(jì)算絲裂霉素 C的包 封率。
[0050] 包封率=(1 -游離藥物量/總藥物量）X 100%。
[0051] 測(cè)得實(shí)施例1制得的絲裂霉素 C超聲造影劑包封率為39. 26%
[0052] 實(shí)施例5絲裂霉素 C超聲造影劑體內(nèi)成像實(shí)驗(yàn)
[0053] 以家兔為模擬動(dòng)物，經(jīng)耳緣靜脈注射苯巴比妥鈉（100mg/kg)麻醉后，仰臥位固 定，腹部去毛。使用Philips IU22彩色多普勒超聲診斷儀，線陣探頭頻率7-12MHZ，機(jī)械指 數(shù)0. 64,常規(guī)掃查獲得家兔肝聲像圖。取實(shí)施例1制得的超聲造影劑，隔塞注入3ml生理 鹽水，輕輕搖動(dòng)形成微泡混懸液，按lml/kg劑量經(jīng)耳緣靜脈注射，隨后推注5ml生理鹽水沖 洗，動(dòng)態(tài)觀察肝造影后的顯像時(shí)間和顯像效果。結(jié)果注射造影劑即刻，肝實(shí)質(zhì)未見有明顯增 強(qiáng)，于注射后15秒，肝實(shí)質(zhì)開始出現(xiàn)增強(qiáng)，并于注射后26秒左右達(dá)到高峰，然后逐漸衰退。 存儲(chǔ)圖像后（見圖3)，應(yīng)用隨機(jī)所帶的Qlab軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析，先勾畫出感興趣區(qū)，然 后將自動(dòng)繪制的時(shí)間-強(qiáng)度曲線進(jìn)行分析，獲取定量指標(biāo)即：峰值強(qiáng)度、達(dá)峰時(shí)間、曲線尖 度、曲線下面積等。本發(fā)明超聲造影劑在造影過程中可形成明顯的完整增強(qiáng)-衰退的曲線 圖（見圖4)，上升時(shí)間13. 59sec，達(dá)峰時(shí)間25. 80sec，峰值強(qiáng)度16. 95dB，結(jié)果表明本發(fā)明 超聲造影劑能達(dá)到持久增強(qiáng)肝實(shí)質(zhì)超聲顯像效果。
[0054] 實(shí)施例6絲裂霉素 C超聲造影劑肝內(nèi)藥物量測(cè)定
[0055] 家兔經(jīng)耳緣靜脈注射3%苯巴比妥鈉（100mg/kg)麻醉后，仰臥位固定，腹部脫毛。 向?qū)嵤├?制得的絲裂霉素 C微泡超聲造影劑（劑量10mg)小瓶?jī)?nèi)注入0. 9%氯化鈉注射 液3mL，然后用力振搖瓶子，直至微泡均均勻分散。將微泡混懸液抽吸至注射器后按lml/kg 劑量經(jīng)耳緣靜脈注射，隨后推注5ml生理鹽水沖注。如實(shí)施例5,用超聲波處理。5min后摘 取肝臟，于-60°C保存。采用絲裂霉素 C注射劑（劑量10mg)作對(duì)照。
[0056] 采用Agilent6460三重串聯(lián)四級(jí)桿高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定肝臟中絲裂霉 素 C含量。樣品處理方法：稱取約lg肝臟，精密稱定，按lml/g的比例加水，勻漿，取勻漿 1〇〇μ 1，加入內(nèi)標(biāo)溶液1〇〇μ 1(克拉霉素），加入lml甲醇沉淀蛋白，離心，取上清LC-MS 測(cè)定。色譜條件：Zorbax XDB C18(2. l*150mm，3· 5μπι)，柱溫：35°C，流動(dòng)相：甲醇-0· 1% 甲酸，梯度洗脫.流速：〇. 3mL/min，質(zhì)譜條件：ESI離子源，毛細(xì)管電壓3. 5kV，多反應(yīng)監(jiān) 測(cè)（MRM)掃描模式檢測(cè)。測(cè)定結(jié)果是：絲裂霉素 C微泡超聲造影劑組肝中絲裂霉素 C含量 為0. 262 μ g/g，而對(duì)照組為0. 099 μ g/g，二組有顯著差異，微泡造影劑組是注射劑組的2. 6 倍。
【權(quán)利要求】
1. 一種微泡超聲造影劑，由脂質(zhì)體和包裹于所述的脂質(zhì)體內(nèi)的微泡組成，其特征在于， 所述脂質(zhì)體由如下重量份的組分制成： 絲裂霉素C 1份 磷脂 0.8?30份 穩(wěn)定劑 0?15份 抗氣劑 0?20份 粉末載體 20?90份。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微泡超聲造影劑，其特征在于，所述磷脂為卵磷脂、大豆磷 月旨、氫化磷脂和合成磷脂中的一種或幾種的混合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微泡超聲造影劑，其特征在于，所述穩(wěn)定劑為膽酸鈉、脫氧膽 酸鈉、油酸、油酸鈉、膽固醇、單硬脂酸甘油酯中的一種或幾種的混合物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微泡超聲造影劑，其特征在于，所述抗氧劑為維生素 E、維生 素 C、金屬絡(luò)合劑中的一種或幾種的混合物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微泡超聲造影劑，其特征在于，所述粉末載體為葡萄糖、蔗 糖、乳糖、海藻糖、右旋糖苷、甘露糖、山梨醇、木糖醇中的一種或幾種的混合物。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微泡超聲造影劑，其特征在于，所述微泡中填充的氣體選自 空氣、氧氣、氮?dú)狻⒍趸?、六氟化硫、氟碳?xì)怏w中的一種或幾種。
7. -種如權(quán)利要求1?6任一項(xiàng)所述的微泡超聲造影劑的制備方法，其特征在于，包括 如下步驟： (1) 將絲裂霉素 C與磷脂加入到有機(jī)溶劑中，于25°C?60°C溫度下攪拌或振蕩2h以上 得到磷脂復(fù)合物； (2) 在步驟（1)得到的磷脂復(fù)合物中加入穩(wěn)定劑、抗氧劑攪拌或振蕩溶解形成溶液； (3) 在步驟（2)得到的溶液中加入粉末載體，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干有機(jī)溶劑得到前體脂質(zhì)體； (4) 在無(wú)菌條件下，取出步驟（3)得到的前體脂質(zhì)體分裝于西林瓶中，然后注入惰性氣 體以置換西林瓶頭部的空氣，密封后得到所述的微泡超聲造影劑。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的微泡超聲造影劑的制備方法，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑 為無(wú)水乙醇、氯仿、二氯甲烷或丙酮。
9. 一種如權(quán)利要求1?6任一項(xiàng)所述的微泡超聲造影劑在制備含絲裂霉素 C水溶性抗 腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K47/48GK104043139SQ201410277814
【公開日】2014年9月17日 申請(qǐng)日期:2014年6月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月20日
【發(fā)明者】梁哲浩, 孫華琴, 孫泉, 袁帥, 郭家寶, 董蓓莉, 王 華, 俞振偉, 梁漪, 梁文權(quán) 申請(qǐng)人:浙江省中醫(yī)院