用于治療由剪接異常引起的疾病的抑制剪接機(jī)理的化學(xué)分子的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及式I-XXI之一的化合物；包含至少一種這樣的化合物的藥物組合物；和至少一種這樣的化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于在受試者中治療由至少一種剪接異常引起的遺傳疾病。
【專利說明】用于治療由剪接異常引起的疾病的抑制剪接機(jī)理的化學(xué)分子
[0001]本申請是申請日為2009年I月12日、申請?zhí)枮?00980106361.1、發(fā)明名稱為“用于治療由剪接異常引起的疾病的抑制剪接機(jī)理的化學(xué)分子”的中國發(fā)明專利申請的分案申請。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本專利申請要求2008年I月10日提交的法國專利申請F(tuán)R08/50144的優(yōu)先權(quán)，它通過參考并入本文。
[0003]本發(fā)明涉及新的吲哚衍生的化合物，其用于制備可用于治療剪接過程的變化引起的疾病的組合物。

【背景技術(shù)】
[0004]已經(jīng)知道某些吲哚衍生的化合物例如玫瑰樹堿衍生物和氮雜-玫瑰樹堿衍生物作為嵌入分子用于校正基因表達(dá)，尤其是DNA復(fù)制中的功能異常。它們已經(jīng)被更具體地描述用于治療癌癥、白血病或AIDS等疾病(具體參見專利FR2，627，493，F(xiàn)R2, 645，861，F(xiàn)R2, 436，786)。
[0005]關(guān)于AIDS 的現(xiàn)有治療，目的在于減少HIV感染的患者的病毒負(fù)載的各種方案，利用預(yù)期會抑制病毒逆轉(zhuǎn)錄酶的酶活性或參與病毒蛋白成熟的蛋白酶的酶活性的分子。關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，它們在性質(zhì)上可以是核苷的(NRTIs)、非核苷的(NNRTIs)或核苷酸的。使用這些化合物的目的是阻止生成逆轉(zhuǎn)錄病毒基因組的DNA拷貝，并從而阻止整合進(jìn)入宿主細(xì)胞的基因組中。蛋白酶抑制劑(PIs)會阻礙病毒蛋白的適當(dāng)成熟，并造成具有改變的感染能力的不完整顆粒的生成。存在另一類抗逆轉(zhuǎn)錄病毒的化合物，使用它阻止病毒進(jìn)入細(xì)胞的能力。這些進(jìn)入的抑制劑可以是干擾病毒糖蛋白gp41或gpl20與⑶4細(xì)胞膜融合的肽，或靶向HIV細(xì)胞共受體CCR5和CXCR4的分子。還已經(jīng)利用類似于HIV整合酶的細(xì)胞蛋白的缺失，開發(fā)抑制該酶活性的新的抗-HIV分子。盡管許多整合酶抑制劑處于臨床試驗期，還沒有分子可在市場上得到。
[0006]關(guān)于癌癥，超過90 %源自上皮細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化，在大多數(shù)病例中，癌癥患者死亡不是由于原發(fā)性腫瘤，而是由于源自原發(fā)性腫瘤的轉(zhuǎn)移。導(dǎo)致轉(zhuǎn)移和它們的后續(xù)侵入的該惡化進(jìn)展最初包含細(xì)胞粘附的喪失和能力性的增加，因而允許侵入細(xì)胞從起始部位逃逸和遷移到靶組織。在大量的病例中，腫瘤進(jìn)展機(jī)理似乎與異常剪接有關(guān)，后者導(dǎo)致具有原-致癌活性的同種型的形成。目前，不存在具有抗侵入功能的分子。這突出了缺乏真正有力的抗擊轉(zhuǎn)移的工具。目前在市場上也缺乏這類分子，使它們具有最高級別的經(jīng)濟(jì)潛力。
[0007]假肥大性肌營養(yǎng)不良(DMD)是一種嚴(yán)重的疾病，它源自肌養(yǎng)蛋白基因中的突變。該蛋白的缺失導(dǎo)致骨骼肌和心肌的退化。目前構(gòu)思出幾種治療策略，包括所謂的外顯子跳躍，它的原理是從肌養(yǎng)蛋白切掉攜帶突變的內(nèi)部外顯子，從而生成更短的、但是有功能的肌養(yǎng)蛋白。
[0008]核纖維蛋白病(Laminopathy)是導(dǎo)致令人不滿意的生活質(zhì)量的病癥,需要昂貴的護(hù)理，且在許多病例中，會導(dǎo)致過早死亡(即，橫紋肌組織的核纖維蛋白病和特征在于過早老化的核纖維蛋白病)。核纖維蛋白病是由核纖層蛋白(普遍存在的位于細(xì)胞核中的蛋白)和它們的分子伴侶中的功能變化造成的。大多數(shù)早衰或過早老化綜合癥病例是由在外顯子11中(即在特異性地編碼核纖層蛋白A的基因部分中)發(fā)生的復(fù)發(fā)性新生點突變(c.1824C>T, “G608G”)造成。已經(jīng)證實，該突變會改變剪接機(jī)理，并導(dǎo)致生成截短的核纖層蛋白A前體(“progerin”，核纖層蛋白Δ 50，p.V607_Q656del),對殘余的野生型蛋白發(fā)揮顯性負(fù)效應(yīng)。
[0009]在所有這些病理狀態(tài)(pathology)中，剪接過程起著關(guān)鍵的作用。該細(xì)胞內(nèi)剪接過程包括，消除前信使RNA中的內(nèi)含子，以生成可以被細(xì)胞的翻譯機(jī)理使用的成熟信使RNA (SHARP, Cell, vol.77, p.805-815，1994)。在選擇性剪接的情況下，相同的前體可以是編碼具有不同功能的蛋白的信使RNA的來源(BLACK，Annu.Rev.B1chem.vol.72，p.291-336，2003)。5’和3’剪接位點的精確選擇因而是產(chǎn)生多樣性和可以根據(jù)組織類型或在生物發(fā)育過程中調(diào)芐基因表達(dá)的機(jī)理。參與該選擇的因子包括稱作SR的蛋白兩家族，其特征在于存在一個或兩個RNA識別基序(RRM)和稱作RS結(jié)構(gòu)域的富含精氨酸和絲氨酸殘基的結(jié)構(gòu)域(MANLEY&TACKE, Genes Dev.，vol.10, p.1569-1579，1996)。通過結(jié)合被稱作ESE (外顯子剪接增強(qiáng)子)或ISE (內(nèi)含子剪接增強(qiáng)子)的前-mRNA的短外顯子或內(nèi)含子序列，SR蛋白能以劑量依賴性的方式激活次佳的剪接位點，并確保包含外顯子(GRAVELEY, RNA, vol.6，p.1197-1211，2000)。選擇性剪接中SR蛋白的活性是特異性的，在對應(yīng)的基因失活的情況下是致命的(WANG等人，Mol.Cell, vol.7，p.331-342，2001)。
[0010]人基因組的測序和EST(已表達(dá)序列標(biāo)志)庫的分析已經(jīng)揭示，65%的基因以選擇性剪接的變體形式表達(dá)(EWING&GREEN, Nat.Genet., vol.25，p.232-234，2000 ；JOHNSON等人，Science, vol.302，p.2141-2144，2003)。該機(jī)理因而是可以影響參與調(diào)節(jié)剪接的因子的修飾和影響該調(diào)節(jié)必需的序列的突變的有利靶標(biāo)。目前，據(jù)估計大約50%的引起遺傳疾病的點突變會誘導(dǎo)異常剪接。這些突變可以通過滅活或建立剪接位點來干擾剪接，但是也通過修飾或產(chǎn)生調(diào)節(jié)元件例如特定基因中的剪接增強(qiáng)子或剪接沉默子來干擾剪接(CARTEGNI 等人，Nat.Rev.Genet.，vol.3，p.285-298，2002 ；TAZI 等人，TIBS, vol.40，p.469-478，2005)。
[0011]目前開發(fā)的校正這些剪接缺陷的策略依賴于各類分子的應(yīng)用(TAZI等人，同上，2005)。
[0012]一種策略是針對開發(fā)新的分子來校正或消除異常剪接，例如，依賴于干擾這類剪接的蛋白的過表達(dá)(NISSM-RAFINIA 等人，Hum.Mol.Genet.，vol.9，p.1771-1778，2000 ；H0FINANN 等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.，vol.97，p.9618-9623，2000)。
[0013]其它策略依賴于反義寡核苷酸(SAZANI等人，Nat.B1technol.，vol.20, p.1228-1233，2002 ；SAZANI&K0LE, Prog.Mol.Subcell.B1l.，vol.31，p.217-239，2003)或PNA(CARTEGNI 等人，Nat.Struct.B1l.，vol.10，p.120-125，2003)的應(yīng)用，它們分別能抑制或激活剪接事件。
[0014]另一種策略依賴于影響目標(biāo)前-mRNA的剪接效率的化合物的鑒定(ANDREASSI等人,Hum.Mol.Genet., vol.10, p.2841-2849，2001)。
[0015]最后，已經(jīng)描述了基于使用反式剪接來替換突變型外顯子的策略(LIU等人，Nat.B1technol., vol.20, p.47-52，2002)。
[0016]上述開發(fā)校正或消除異常剪接的策略的缺點之一是它們的生產(chǎn)成本。的確，生產(chǎn)必須修飾以提高它們的穩(wěn)定性的反義寡核苷酸和PNA分子的成本很高。
[0017]上述開發(fā)策略的另一個缺點是，它們需要使用表達(dá)載體，例如，用于基于使用反式剪接的策略。
[0018] 申請人:提交的要求法國優(yōu)先權(quán)FR0310460和FR0400973的國際申請W005023255，公開了吲哚衍生物用于治療與細(xì)胞中前信使RNA剪接過程有關(guān)的疾病的用途。
[0019]因而，最近證實，某些吲哚衍生物可以特別有效地治療轉(zhuǎn)移癌和AIDS(BAKK0UR等人,PLoS Pathogens, vol.3, p.1530-1539，2007)。
[0020]但是，所述的化合物具有含有4個環(huán)的扁平結(jié)構(gòu)，其具有嵌入DNA堿基之間的缺點，因而可以導(dǎo)致細(xì)胞毒性。
[0021]為了使這些吲哚衍生物嵌入DNA堿基之間的風(fēng)險最小化，本發(fā)明人開發(fā)了可以特別有效地治療與剪接過程有關(guān)的疾病的新的化合物，而它們以令人驚奇的方式，具有明顯小于現(xiàn)有技術(shù)的吲哚衍生物的細(xì)胞毒性。另外，這些化合物能選擇性地抑制某些剪接事件。

【專利附圖】

【附圖說明】
圖1顯示了得到的聚丙烯酰胺凝膠的細(xì)節(jié)，顯示出從未處理的細(xì)胞(Clt)或用化合物IDC16、C48、C49、C55或C56處理過的細(xì)胞得到的不同的同種型(Nef2, RevU Rev2、Nef3,Nef4.Nef5.Tatl 和 Tat2)。
圖2表明，與陰性對照(CTL)相比，化合物MB260、FMB008和FMMB22.3強(qiáng)烈抑制細(xì)胞遷移。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0022]本發(fā)明的第一個目的因而涉及下式(I)-(XXI)之一的化合物:
[0023]

【權(quán)利要求】
1.一種化合物，所述化合物具有下式(IX):
其中， ?Xl代表氮原子或CRlO基團(tuán)，其中RlO選自氫原子或NR11R12或ORll基團(tuán)，其中Rll和R12彼此獨立地代表氫原子、C1-C3烷基或三氟甲基； ?Rl代表氫原子、NR11R12或0R12基團(tuán)，其中Rll和R12如上面所定義，當(dāng)Rl代表NR11R12或0R12基團(tuán)時，Xl代表CH基團(tuán)；?Y2代表氮原子或CRll基團(tuán)，其中Rll選自氫原子、
基團(tuán)或
基團(tuán)，其中RH代表: ?氫原子，或 ?直鏈的或支鏈的C1-C3烷基，其中一個或多個碳原子可以被氮原子置換，所述烷基被一個或多個-OH和/或=O基團(tuán)任選地取代；當(dāng)R8或R8’不是氮原子或CH基團(tuán)時且當(dāng)R8’不是氫或鹵素原子時，Y2代表氮原子或CRll基團(tuán),其中Rll是氫原子， ?R8和R8’代表氫或鹵素原子、
或c( = 0)NR18R19基團(tuán)，其中R18和R19彼此獨立地代表: ?氫原子，或 ?直鏈的或支鏈的C1-C3烷基，其中一個或多個碳原子可以被氮原子置換，所述烷基被一個或多個-OH和/或=O基團(tuán)和/或諸如下述的取代的或未取代的基團(tuán)任選地取代:
當(dāng)Y2不是氮原子或CH基團(tuán)時且當(dāng)R8’不是氫或鹵素原子時，R8代表氫或鹵素原子；和 當(dāng)Υ2不是氮原子或CH基團(tuán)時且當(dāng)R8不是氫或鹵素原子時，R8’代表氫或鹵素原子； ?R4代表氫原子或C1-C3烷基或
基團(tuán)，當(dāng)R5或R6不是氫原子時，R4代表氫原子或C1-C3烷基；


?R5代表氫原子、C( = 0)NR14R15基團(tuán)或
基團(tuán)，當(dāng)R4或R6不是氫原子時，R5代表氫原子；

?R6代表氫原子或C ( = 0)NR14R15基團(tuán)或基團(tuán)’且當(dāng)R5不是氫原子時或當(dāng)R4不是氫原子或C1-C3烷基時，R6代表氫原子； ?R14和R15彼此獨立地代表: 氫原子，或 直鏈的或支鏈的Cl-ClO烷基，其中一個或多個碳原子可以被氮原子置換，所述烷基被一個或多個-OH和/或=O基團(tuán)和/或諸如下述的取代的或未取代的基團(tuán)任選地取代:
?R21和R22代表氫原子或甲基； 所述化合物的藥學(xué)上可接受的鹽、其異構(gòu)體和/或它們的混合物。
2.一種化合物，所述化合物選自: ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-[4- ((E) -2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]_苯甲酰胺；?N-(3-甲基-丁基)-3-[4-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?(N- 二乙氨基)-3-(1-{3-[4-((Ε)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1H-1, 2，3-三唑-4-基)-甲胺; ?3-(1-{3-[4-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1Η-1，2，3-三唑-4-基)-丙-1-醇；?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-甲基-4- [4- ((E) -2-吡啶_4_基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?3-甲基-N-(3-甲基-丁基)-4-[4-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?3-(1-{4-[4-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1Η-1，2，3-三唑-4-基)-丙-1-醇； ?4-甲基-N-(3-甲基-丁基)-3-[3-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-[3- ((E) -2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]_苯甲酰胺； ?N-(3-甲基-丁基)-3-[3-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?(N- 二乙氨基)_3_(1-{3-[3-((E)-2-吡卩定-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1H-1, 2，3-三唑-4-基)-甲胺; ?3-(1-{3-[3-((E)-2-吡 P定 _4_ 基-乙烯基)-苯基氨基]-苯基}-1H-1, 2, 3- 二唑-4-基)-丙-1-醇； ?N-(3- 二乙氨基-丙基)-3-甲基-4-[3-((E)-2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3-甲基-丁基)-4- [3- ((E) -2-吡啶-4-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-[3- ((E) - (4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3-甲基-丁基)-3- [3-((E) - (4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-3-甲基-4- [3- ((E) - (4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N-(3-甲基-丁基)-3-甲基-4-[3-((E)-(4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N- (3-甲基-丁基)-4-[3- ((E) - (4-甲氧基-苯乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?N-(3- 二乙氨基-丙基)_3_[3-((E)-2-吡唳-2-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酸胺； ?N-(3-甲基-丁基)-3-[3-((E)-2-吡啶-2-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺； ?3-(1- {3- [4- ((E) -2-批 P定 _4_ 基乙烯基)-苯基氨基]-苯基} -1H-1, 2, 3- 二唑-4-基)-丙-1-醇； ?N- (3- 二乙氨基-丙基)-4- [3- ((E) -2-吡啶-2-基-乙烯基)-苯基氨基]_苯甲酰胺； ?N- (3-甲基-丁基)-3-甲基-4- [3- ((E) -2-吡啶-2-基-乙烯基)-苯基氨基]-苯甲酰胺；和 3-(1- {3- [3- ((E) -2-批 P定 _2_ 基乙烯基)-苯基氨基]-苯基} -1H-1, 2, 3- 二唑-4-基)-丙-1-醇。
3.一種藥物組合物，其中所述藥物組合物包含權(quán)利要求1的至少一種化合物,和任選的藥學(xué)上可接受的載體。
4.權(quán)利要求1的至少一種化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于在受試者中治療與細(xì)胞中前信使RNA的剪接過程有關(guān)的疾病，所述疾病是由剪接過程的改變引起的遺傳疾病，所述疾病選自=Frasier綜合癥，與染色體17有關(guān)的額顳葉癡呆，利氏綜合癥，非典型囊性纖維化病，與Tau蛋白突變有關(guān)的阿爾茨海默病，影響活運動神經(jīng)元基因的肌萎縮，與血清素剪接的失調(diào)有關(guān)的抑郁癥，和乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌、子宮癌。
5.權(quán)利要求4的應(yīng)用，其中所述疾病是癌癥，該癌癥選自:乳腺癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肝癌、前列腺癌和子宮癌。
6.權(quán)利要求1的至少一種化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于在受試者中治療與細(xì)胞中前信使RNA的剪接過程有關(guān)的疾病，其中所述疾病與老化一起出現(xiàn)，所述疾病選自:動脈粥樣硬化、胰島素抵抗的II型糖尿病、白內(nèi)障、骨質(zhì)疏松癥和皮膚老化。
7.權(quán)利要求1的至少一種化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于在受試者中治療與細(xì)胞中前信使RNA的剪接過程有關(guān)的疾病，其中所述疾病是病毒起源的疾病。
8.權(quán)利要求1的至少一種化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于在受試者中治療與細(xì)胞中前信使RNA的剪接過程有關(guān)的疾病，其中所述疾病是AIDS。
9.權(quán)利要求1中至少一種化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于在受試者中治療與基因突變有關(guān)的疾病，該疾病可以通過外顯子跳躍進(jìn)行治療。
10.權(quán)利要求1中至少一種化合物在制備藥物中的應(yīng)用，所述藥物用于在受試者中治療與基因突變有關(guān)的疾病 ，該疾病是假肥大性肌營養(yǎng)不良。
【文檔編號】A61P25/28GK104130242SQ201410301260
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2009年1月12日 優(yōu)先權(quán)日:2008年1月10日
【發(fā)明者】J·塔澤, D·格里爾森, F·馬于托-貝茨爾, P·魯 申請人:國家科研中心, 居里研究所, 蒙彼利埃第二科學(xué)與技術(shù)大學(xué)