新喋呤佐劑及含新喋呤佐劑的疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種新喋呤佐劑及含新喋呤佐劑的疫苗，屬于免疫學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。所述含新喋呤佐劑的疫苗是每單份疫苗劑中含有0.5～1μg的新喋呤佐劑。新喋呤佐劑屬于人體的內(nèi)源性物質(zhì)，毒副作用小，在免疫劑量范圍內(nèi)使用,安全可靠，能夠有效誘導(dǎo)抗原特異性的體液免疫應(yīng)答，且所誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答效果優(yōu)于無佐劑組，近于鋁佐劑組，新喋呤佐劑原料易得，為市售產(chǎn)品，成本較低，可添加于多種傳統(tǒng)疫苗和基因工程疫苗中作為疫苗佐劑使用。
【專利說明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于免疫學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種新喋呤佐劑及含該佐劑的疫苗。 新喋呤佐劑及含新喋呤佐劑的疫苗

【背景技術(shù)】
[0002] 隨著分子生物學(xué)理論和【技術(shù)領(lǐng)域】的飛速發(fā)展，基因工程疫苗研究也隨之快速發(fā) 展，新型基因工程疫苗層出不窮，此類疫苗具有純度高、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，但由于分子較小， 免疫原性較天然抗原相對(duì)較弱，難以產(chǎn)生高效的免疫應(yīng)答。因此研究開發(fā)新型的佐劑來增 強(qiáng)新型疫苗的免疫原性是一個(gè)重要的課題。
[0003] 鋁鹽佐劑是應(yīng)用于人用疫苗歷史最久的佐劑。實(shí)踐證明鋁鹽佐劑安全有效，但由 于其可引起過敏、誘導(dǎo)退行性神經(jīng)病變等缺點(diǎn)，迫切需要開發(fā)新型疫苗佐劑以適應(yīng)疫苗產(chǎn) 業(yè)的發(fā)展。
[0004] 新碟呤（neopterin)是人體體液中最重要的一種碟陡類物質(zhì)，化學(xué)名為2-胺 基-4-羥基-6-(D-赤蘚糖基1，2, 3,-三羥基丙基）喋呤，它是三磷酸鳥苷（GTP)代謝、四 氫生物喋呤生物合成過程中的一種中間代謝產(chǎn)物。新喋呤可作為多種遞質(zhì)酶（如苯丙氨酸 酶、酪氨酸酶、色氨酸酶）羥化過程中的輔助因子，主要由單核巨噬細(xì)胞在被活化的T淋巴 細(xì)胞所產(chǎn)生的C-干擾素（C-IFN)刺激下分泌產(chǎn)生的，是C-IFN誘導(dǎo)單核巨噬細(xì)胞活性增強(qiáng) 的一個(gè)特異性標(biāo)志物，是細(xì)胞介導(dǎo)免疫激活的象征，其生物穩(wěn)定性好，可于體液中檢測(cè)到。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為解決現(xiàn)有疫苗佐劑種類少，毒副作用等問題，本發(fā)明提供一種安全、有效、穩(wěn)定、 經(jīng)濟(jì)的新喋呤佐劑，并且還提供含有新喋呤佐劑的疫苗。
[0006] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下： 本發(fā)明所述新喋呤作為制備疫苗佐劑的應(yīng)用。
[0007] 所述新碟呤為化合物neopterin，別名名稱D-erythro-Neopterin，所述新碟呤為 市購(gòu)生物產(chǎn)品，分子式為C 9HnN504，分子量為253. 20,結(jié)構(gòu)式如圖1所示。
[0008] 在人體中推薦劑量為每200 μ L疫苗液中的新喋呤用量不超過1 μ g，優(yōu)選0. 5 μ g。
[0009] 本發(fā)明提供的含有新喋呤佐劑的疫苗，所述的每單份疫苗劑中含有0. 5?1 μ g新 喋呤，所述的每單份疫苗劑為臨床使用的常規(guī)單次注射參考量。
[0010]
[0011] 本發(fā)明提供的含有新喋呤佐劑的疫苗制備方法如下： 按每單份疫苗劑加入〇. 5?1 μ g新喋呤的量，在疫苗劑中加入新喋呤，再加生理鹽水 至100?200 μ L，按常規(guī)混合均勻，即得含有新喋呤佐劑的疫苗。
[0012] 所述疫苗為常規(guī)甲肝抗原、乙肝抗原和狂犬病毒抗原中的一種。
[0013] 新喋呤佐劑能顯著增強(qiáng)抗原特異性的體液免疫反應(yīng)。
[0014] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果為：（1)新喋呤佐劑是人體的內(nèi)源性物質(zhì)，毒 副作用小，在免疫劑量范圍內(nèi)使用是安全可靠的；（2)新喋呤佐劑能夠有效的誘導(dǎo)抗原特 異性的體液免疫應(yīng)答，且其所誘導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答效果優(yōu)于無佐劑組；（3)新喋呤佐劑原 料易得，為市售產(chǎn)品，成本較低，可添加于多種傳統(tǒng)疫苗和基因工程疫苗中作為疫苗佐劑； (4)新喋呤佐劑與疫苗聯(lián)合應(yīng)用能有效增強(qiáng)疫苗體液免疫應(yīng)答，免疫效果優(yōu)于無佐劑的疫 苗。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1為本發(fā)明中新喋呤的分子結(jié)構(gòu)式。

【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限 制本發(fā)明的范圍，下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，按照常規(guī)條件或按照制造廠 商所建議的條件。文中所述的較佳條件實(shí)施方法僅作示范之用。
[0017] 實(shí)施例1 本實(shí)施例提供的新喋呤佐劑用量為〇. 5 μ g。
[0018] 本實(shí)施例提供的含有新喋呤佐劑的甲肝疫苗是：在每單份HAV抗原（即臨床使用 的單次注射劑量）中，加入〇. 5 μ g的新喋呤佐劑，再加生理鹽水至200 μ L，按常規(guī)混合均 勻，得含有新喋呤佐劑的甲肝疫苗，其中，新喋呤為市購(gòu)產(chǎn)品，購(gòu)自SIGMA公司，HAV抗原為 市購(gòu)的抗原滴度為512EU/ml的18EU HAV抗原液，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué) 生物學(xué)研究所。
[0019] 本實(shí)施例1所得含有新喋呤佐劑的甲肝疫苗的免疫試驗(yàn)和效果如下： A、 免疫 將6?8周齡、18?22g的清潔級(jí)ICR小鼠隨機(jī)分為新喋呤佐劑組、氫氧化鋁佐劑組、 無佐劑組和空白組，共四組，每組8只；所用氫氧化鋁為常用的氫氧化鋁膠體佐劑，其制法 參照《中國(guó)藥典(三部)》，（國(guó)家藥典委員會(huì).北京：人民衛(wèi)生出版社.2005:118-119)，在人 體中的劑量為1.8?2. 7mg。
[0020] 對(duì)新喋呤佐劑組：實(shí)施例1的含有新喋呤佐劑的甲肝疫苗至小鼠體內(nèi)，注射劑量 為每只小鼠200 μ L，其中疫苗中含有新喋呤0. 5 μ g，甲肝抗原18EU ; 對(duì)氫氧化鋁佐劑組：將氫氧化鋁300ug與甲肝抗原18EU混合后加生理鹽水至200ul， 經(jīng)腹腔皮下多點(diǎn)注射到小鼠體內(nèi)，注射劑量為每只小鼠200μ L ; 對(duì)無佐劑組：將甲肝抗原18EU與生理鹽水混合至200ul，再經(jīng)腹腔皮下多點(diǎn)注射到小 鼠體內(nèi)，注射劑量為每只小鼠200μ L ; 對(duì)空白組僅注射生理鹽水，注射劑量為每只小鼠200ul ; 免疫方案：在第0周經(jīng)腹腔皮下多點(diǎn)注射到小鼠體內(nèi)，免疫次數(shù)為一次； B、 ELISA檢測(cè)血清抗一 HAV IgG水平 在免疫后的第4、8、12、16周，采集小鼠尾靜脈血，分離血清，ELISA檢測(cè)血清抗一 HAV IgG水平，按KPL公司生產(chǎn)的小鼠 IgG ELISA試劑盒方法進(jìn)行檢測(cè)。
[0021] C、數(shù)據(jù)分析 對(duì)所獲得的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS16. 0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，以P < 0. 05為差異 的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表1。
[0022] 表1為使用實(shí)施例1提供的佐劑后，16周內(nèi)，各實(shí)驗(yàn)組小鼠血清抗-HAV IgG水平 (抗體效價(jià)值)。
[0023] 表 1

【權(quán)利要求】
1. 新喋呤作為制備疫苗佐劑的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的新喋呤作為制備疫苗佐劑的應(yīng)用，其特征在于所述新喋呤為 化合物neopterin，分子式為C9H nN504，分子量為253. 20。
3. -種含有如權(quán)利要求2所述的新喋呤佐劑的疫苗，其特征在于每單份疫苗劑中含有 0. 5?1 μ g新喋呤，所述的每單份疫苗劑為臨床使用的常規(guī)單次注射參考量。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的含有新喋呤佐劑的疫苗，其特征在于每200 μ L疫苗液中的新 喋呤用量為0.5 μ g。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的含有新喋呤佐劑的疫苗，其特征在于制備方法如下：按每 單份疫苗劑加入〇. 5?1 μ g新喋呤的量，在疫苗中加入新喋呤，再加生理鹽水至100? 200 μ L，按常規(guī)混合均勻，即得含有新喋呤佐劑的疫苗。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的含有新喋呤佐劑的疫苗，其特征在于所述的疫苗為常規(guī)甲肝 抗原、乙肝抗原和狂犬病毒抗原中的一種。
【文檔編號(hào)】A61P37/04GK104056266SQ201410313973
【公開日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年7月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月3日
【發(fā)明者】王海漩, 胡云章, 胡凝珠 申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所