一種金銀花提取物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金銀花提取物的制備方法，包括以下步驟：乙醇提取、減壓濃縮、調節(jié)pH值、大孔樹脂純化、濃縮和干燥等。本發(fā)明工藝簡單易操作，所用大孔樹脂可再生利用，制備成本低且環(huán)境污染??；使用乙醇溶液作為提取、洗脫溶劑，安全性高，廉價易得，生產成本低。所得的金銀花提取物與金銀花成分基本一致，含有有機酸、環(huán)烯醚萜苷、黃酮等化合物，實現(xiàn)了有效物質組的整體轉移，在有效去除無效成分的情況下，有機酸、環(huán)烯醚萜苷、黃酮等化合物均有較高回收率，大于80％，且大孔樹脂純化前后提取物指紋圖譜的相似度為達0.91以上。
【專利說明】一種金銀花提取物的制備方法

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種金銀花提取物的制備方法，屬于中藥領域。

【背景技術】
[0002]“多組分、多靶點、整體效應”是中藥的特點，其藥效依賴于一系列具有相對穩(wěn)定構成的化合物組的協(xié)同效應，但由于各成分間存在一定的理化性質差異，造成分離純化過程中各成分回收率差異較大，破壞了其固有組成，勢必影響其作用的發(fā)揮。如大孔樹脂吸附技術，目前被認為是最有前景的中藥純化技術，在中藥領域內的應用研究日益增多，但多以一個或幾個成分為指標進行純化條件優(yōu)選，由于成分性質的差異，不同性質的有效成分保留率不同，經過樹脂純化后不僅原有的組分組成發(fā)生巨大改變，破壞了物質組的整體性，而且導致有效成分的損失和資源的浪費。指紋圖譜技術是目前評價中藥多組分的有效工具，如果能夠以指紋圖譜來評價樹脂精制的效果，就能夠保持物質組的整體性，保持藥效的一致性。
[0003]金銀花為忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb.)的干燥花蕾或帶初開的花，具有清熱解毒，涼散風熱的功效。其主要活性成分包括綠原酸等有機酸、斷馬錢子苷半縮醛內酯等環(huán)烯醚萜苷和木犀草苷等黃酮等多類化合物，具有抗菌、抗病毒、抗炎、解熱等藥理作用，是臨床最常用的藥材之一。目前，針對金銀花藥效成分的分離、純化主要以單一成分做考察指標，例如中國專利CN101837039A提供了一種不含綠原酸的金銀花提取物及制備方法，具體包括醇回流提取、濾過濃縮、大孔樹脂柱分離、濃縮干燥等步驟，制備了木犀草苷含量在40%以上的金銀花提取物，該提取物不含綠原酸。中國專利CN101530449公開了一種一種應用膜過濾技術制備金銀花提取物的方法，包括先將金銀花加水煎煮提取，減壓濃縮離心，用微濾膜除去大部分雜質，再用超濾膜進一步精制，所得提取物綠原酸的轉移率達到90%，但該方法用微濾膜和超濾膜進行分離純化，沒有對綠原酸以外的藥效成分進行檢測，在除去雜質的同時也除去了其它藥效成分。劉恩荔等對大孔吸附樹脂分離純化金銀花中總有機酸工藝進行了研究，以靜態(tài)飽和吸附量和靜態(tài)洗脫率為考察指標，比較了6種大孔樹脂分離、純化金銀花總有機酸工藝，結果表明以HPD100分離純化總有機酸效果最佳；但該方法僅以有機酸作為評價指標，沒有涉及金銀花總類成分的提取、分離(劉恩荔，李青山.大孔吸附樹脂分離純化金銀花中總有機酸的研究[J].中草藥，2006，(12):1792-1796)。馬雙成等分離得到了金銀花中10種環(huán)烯醚萜苷類化合物，并采用RP — HPLC方法測定了金銀花藥材中4種環(huán)烯醚萜苷的含量，但該方法使用分別使用了石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇和氯仿作為洗脫溶劑進行分離、純化，容易造成提取物中毒性溶劑殘留，操作步驟繁多，不適合大生產，且該方法僅以以環(huán)烯醚萜苷類成分作為評價指標，無法綜合考察金銀花中其它有效成分(馬雙成，劉燕，畢培曦，等.金銀花藥材中抗呼吸道病毒感染的環(huán)烯醚萜苷類成分的定量研究[J].藥物分析雜志26(8):1039-1043)。
[0004]以上都是關于金銀花中綠原酸、木犀草苷、總有機酸或總環(huán)烯醚萜苷類成分的提取、分離工藝的研究，但有關以指紋圖譜為工具從整體上評價金銀花各有效成分提取、純化效果的文獻研究卻甚少。雖然綠原酸、木犀草苷、總有機酸或總環(huán)烯醚萜苷等是金銀花的藥效成分之一，但僅以單一成分作為指標，并不能全面體現(xiàn)金銀花提取物藥效作用。
[0005]鑒于現(xiàn)有技術的不足，有必要發(fā)明一種新的金銀花有效物質組純化工藝，使之既能簡化操作過程，在最大程度上少用或不用有害溶劑，適合工業(yè)化大生產，提高提取物中多種藥效成分的含量，又能達到藥材有效物質組的整體平衡轉移，達到與原藥保持一致的目的。


【發(fā)明內容】

[0006]本發(fā)明所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有提取、純化工藝的不足，提供一種簡單、有效的制備金銀花提取物的方法，該方法能夠保持金銀花物質組的整體性，保持藥效的一致性。
[0007]本發(fā)明的目的是通過以下方式實現(xiàn)的。
[0008]本發(fā)明金銀花提取物的制備方法包括:乙醇提取、減壓濃縮、調節(jié)pH值、大孔樹脂純化、濃縮和干燥等。
[0009]進一步，本發(fā)明所涉及的一種金銀花提取物的制備方法包括以下步驟:
[0010]I)取金銀花藥材，乙醇回流提取，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇，得濃縮液；
[0011]2)步驟I)濃縮液加水稀釋至相當于2-5倍藥材重量，過濾，濾液調節(jié)pH為2-6，加于預處理好的大孔樹脂柱上進行吸附，先以l_3BV/h的流速用2-4BV的純水洗脫，棄去，再以l-3BV/h的流速分別用2-4BV30% -50%乙醇和2_4BV60% -80%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液；
[0012]3)合并步驟2)乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得金銀花提取物。
[0013]優(yōu)選地，步驟I)所述回流提取用乙醇的百分含量為60%-80%，提取加醇量為8-12倍藥材重量，提取次數(shù)為3次，每次I小時。
[0014]優(yōu)選地，步驟2)所述濃縮液稀釋至相對于3倍藥材重量，調節(jié)pH值為3.0，上樣量相當于藥材:大孔樹脂為0.8-1.0:1。
[0015]優(yōu)選地，步驟2)所述大孔樹脂的型號為LX-17、LX-207、HPD-100, HPD-450, XDA-8和AB-8中的一種，最優(yōu)為HPD-100。
[0016]優(yōu)選地，步驟2)所述洗脫用乙醇溶液的濃度分別為50%和80%。
[0017]與現(xiàn)有技術比較，本發(fā)明金銀花提取物制備方法具有以下顯著的進步:
[0018]1、操作簡單，條件可控，具良好的可重復性，所用大孔樹脂可重復利用，制備成本低且不污染環(huán)境，適合工業(yè)化生產；
[0019]2、本方法在去除無效成分的情況下，有機酸、環(huán)烯醚萜苷、黃酮等化合物獲得了較高的回收率，均大于80%，且所用提取及洗脫溶劑為水或乙醇，廉價易得，所得提取物無有害溶劑殘留，藥物安全性高；
[0020]3、以指紋圖譜對照優(yōu)選樹脂、上樣和洗脫條件，所得金銀花提取物與金銀花成分基本一致，HPLC指紋圖譜共有峰不少于15個，大孔樹脂純化前后提取物指紋圖譜的相似度為相似度大于0.91以上；
[0021]4、與現(xiàn)有的金銀花有效成分制備方法相比較，用本發(fā)明方法制備的金銀花提取物中有機酸綠原酸、異綠原酸A、異綠原酸C之和大于30%，斷馬錢子苷半縮醛內酯含量大于1.0% ；
[0022]5、所得提取物不僅含有有機酸、環(huán)烯醚萜苷，也含有黃酮類等化合物，實現(xiàn)有效物質組的整體轉移，可最大程度保證金銀花藥材的原有功效，且降低了服用量，利于制劑及提高了患者用藥的順應性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1、對照品和樣品HPLC圖，其中:
[0024]S1.混合對照品；S2.金銀花提取液；S3.樣品I ;S4.樣品2 ；S5.樣品3 ;
[0025]1.5-0-CQA ；2.3-0-CQA ；3.4-0-CQA ；4.vogeloside ;5.Iuteoloside ;6.3, 4-DCQA ；
7.3，5-DCQA ；8.4，5-DCQA。
[0026]圖2、乙醇洗脫液HPLC圖，其中:A.20%乙醇；B.40%乙醇；C.60%乙醇；D.80%乙醇

【具體實施方式】
[0027]以下通過金銀花提取物抗甲型HlNl流感病毒試驗、指紋圖譜對照優(yōu)選洗脫條件、金銀花提取物指紋圖譜建立方法及金銀花提取物制備的【具體實施方式】對本發(fā)明作進一步說明，但這并非是對本發(fā)明的限制，本領域技術人員根據(jù)本發(fā)明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但只要不脫離本發(fā)明的基本思想，均在本發(fā)明的范圍之內。
[0028]實施例1金銀花提取物抗甲型HlNl流感病毒作用試驗
[0029]I試驗目的
[0030]采用甲型HlNl流感病毒感染小鼠肺炎模型探討金銀花提取物藥效學作用。
[0031]2試驗材料
[0032]2.1受試藥品
[0033]金銀花提取物，批號:20111927(以本發(fā)明實施例13所得的金銀花提取物)，棕黑色粉末，氣香味苦、質地干脆，溶于水和乙醇。
[0034]2.2陽性對照藥銀黃口服液:由魯南厚普制藥有限公司生產；國藥準字:Z10870001 ;生產批號=09122001 ;生產日期:091203 ;有效期至201211 ;性狀:紅棕色的澄清液體，味甜、微苦；功能主治:清熱疏風，利咽解毒。用于外感風熱、肺胃熱盛所致的咽干、咽痛、喉核腫大、口渴、發(fā)熱；急慢性扁桃體炎、急慢性咽炎、上呼吸道感染見上述證候者。
[0035]2.3動物:CD-1 (ICR)小鼠，SPF/VAF級別，體重14± lg，共30只，雌性。購自北京華阜康生物科技股份有限公司。動物許可證編號:SCXK (京)2009-0004。
[0036]2.4病毒株:甲型HlNl流感病毒鼠肺適應株(FM/1/47株)，購自中國疾病預防控制中心病毒病預防控制研究所，由本所ABSL-2試驗室傳代，_80°C保存?zhèn)溆谩?br> [0037]2.5試驗儀器:乙醚，北京試劑公司產品，批號:20090707 ；A2型生物安全柜，型號:MSC1.8，德國Thermo產品；動物體重電子天平，型號:YP/0001，上海越平科學儀器有限公司產品；動物臟器電子天平，型號:AR1140，美國Chaus產品；IVC小鼠飼養(yǎng)籠，蘇州教學籠具廠產品。
[0038]3方法及結果
[0039]3.1劑量設計:依據(jù)各藥小鼠急毒試驗所得LD50。以LD50的1/7-1/10作為中劑量，以中劑量的2倍和1/2分別作為大劑量和小劑量。
[0040]3.1.1金銀花提取物半數(shù)致死量為4.053g/kg小鼠體重，本實驗選擇LD50的1/10作為受試藥物的中劑量，試驗時采用1.0g/kg、0.5g/kg、0.25g/kg三個劑量。
[0041]3.1.2銀黃口服液:按照體表面積等效劑量轉換法，將人用量換算為小鼠劑量，小鼠的劑量是人用劑量的11倍。小鼠的等效劑量為llml/kg/d。試驗時各藥物按等容不等濃
0.2ml/10g腹腔注射給藥和灌胃給藥。
[0042]3.2試驗方法:動物按照體重隨機分為以下各組:正常對照組、模型對照組、陽性藥組(銀黃口服液組)、金銀花大劑量組(1.0g/kg)、金銀花中劑量組(0.5g/kg)、金銀花小劑量組(0.25g/kg)。各給藥組分為灌胃給藥和注射給藥，每組5只小鼠。除正常對照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個LD50流感病毒液滴鼻感染，每只35ul。感染當天開始每次按0.2ml/10g體重灌胃給藥，每天I次，連續(xù)4天，正常對照組和模型對照組在同等條件下蒸餾水灌胃。第5天稱重后解剖稱肺重，計算肺指數(shù)及肺指數(shù)抑制率。結果采用組間比較t檢驗進行統(tǒng)計學處理。結果見表1
[0043]肺指數(shù)=肺濕重(g) /體重(g)
[0044]

【權利要求】
1.一種金銀花提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 1)取金銀花藥材，乙醇回流提取，濾過，合并濾液，減壓濃縮回收乙醇，得濃縮液； 2)步驟I)濃縮液加水稀釋至相當于2-5倍藥材重量，過濾，濾液調節(jié)pH為2-6，加于預處理好的大孔樹脂柱上進行吸附，先以l_3BV/h的流速用2-4BV的純水洗脫，棄去，再以l-3BV/h的流速分別用2-4BV30% -50%乙醇和2_4BV60% -80%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液； 3)合并步驟2)乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得金銀花提取物。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)所述回流提取用乙醇百分含量為60% -80%，提取加醇量為8-12倍藥材重量，提取次數(shù)為3次，每次I小時。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述濃縮液稀釋至相對于3倍藥材重量，調節(jié)pH值為3.0，上樣量相當于藥材:大孔樹脂為0.8-1.0:1。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述大孔樹脂的型號為LX-17、LX-207、HPD-100、HPD-450、XDA-8 和 AB-8 中的一種。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述大孔樹脂的型號為HPD-100。
6.如權利要求1-5中任一項所述的方法，其特征在于，步驟2)所述洗脫用乙醇溶液的濃度分別為50%和80%。
【文檔編號】A61P31/16GK104069150SQ201410342185
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月18日 優(yōu)先權日:2014年7月18日
【發(fā)明者】趙志全, 李守信, 李蔚群 申請人:魯南制藥集團股份有限公司