一種抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的多肽和多肽復(fù)合物、其制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種多肽-人血清白蛋白(human?serum?albumin，HSA)復(fù)合物及其在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面的應(yīng)用。具體而言，本發(fā)明涉及一種利用HSA提高多肽在鹽溶液中溶解性的方法，本發(fā)明還提供了該多肽-HSA復(fù)合物的制備方法及其在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用。該復(fù)合物在鹽溶液中具有較好的溶解性，并且在較低的濃度下可以大大降低腫瘤細胞的遷移率，該多肽序列及多肽-HSA復(fù)合物可以為腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制提供可行的治療方法。
【專利說明】一種抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的多肽和多肽復(fù)合物、其制備方法及其 應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種多肽和多肽復(fù)合物、其制備方法及 其應(yīng)用，尤其是涉及一種多肽和可以提高多肽在鹽溶液中溶解性的多肽-人血清白蛋白 (human serum albumin，HSA)復(fù)合物的制備方法及其在抑制腫瘤轉(zhuǎn)移方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 血清白蛋白是血漿中最為豐富的蛋白質(zhì)，其生物學(xué)功能包括結(jié)合及運輸一系列內(nèi) 源性和外源性的物質(zhì)，維持血液正常的滲透壓等等。近年來，人血清白蛋白（HSA)作為藥物 載體受到了廣泛的關(guān)注。HSA由585個氨基酸殘基組成，分子量約為66kD，具有安全無毒、 生物相容性好等優(yōu)點。
[0003] 白蛋白的載藥方式主要有兩種：一是藥物和白蛋白間以分子鏈連接形成白蛋白藥 物，即化學(xué)偶聯(lián)白蛋白載藥；二是依靠藥物和白蛋白的相互作用實現(xiàn)包埋載藥，即物理結(jié)合 白蛋白載藥，這種結(jié)合方式可以提高藥物的溶解性和穩(wěn)定性。
[0004] 目前研究的HSA藥物載體主要針對于抗腫瘤藥物，HSA藥物的物理包埋作用是通 過HSA的物理作用例如疏水、靜電等相互作用包埋載藥，可以提高藥物的穩(wěn)定性和靶向性， 并且具有緩釋作用，因此HSA可以作為理想的藥物載體用于多肽藥物新型復(fù)合物中。
[0005] 腫瘤是嚴重危害人們身體健康的一類疾病，腫瘤分為良性腫瘤和惡性腫瘤，兩者 的主要區(qū)別是惡性腫瘤具有轉(zhuǎn)移（metastasis)和復(fù)發(fā)的特征。腫瘤轉(zhuǎn)移是預(yù)后不良的征 兆，也是導(dǎo)致腫瘤病人死亡的主要原因。
[0006] 趨化因子（chemokines)是一類單鏈小分子蛋白質(zhì)，通過與G蛋白偶聯(lián)受體的相 互作用，引起靶細胞支架重排，牢固地黏附于內(nèi)皮細胞并且定向遷移。近年來，國內(nèi)外研究 均指出，基質(zhì)細胞衍生因子（stromal cell-derived factor-1，SDF-1)，也就是趨化因子 CXCL12,及其特異性趨化因子受體CXCR4在多種腫瘤的器官特異性轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的作 用。腫瘤細胞表面高表達特異的趨化因子受體CXCR4,而趨化因子CXCL12在骨髓、淋巴結(jié)和 某些器官中高表達。
[0007] 高表達CXCR4的腫瘤細胞在CXCL12的趨化下，逆濃度梯度轉(zhuǎn)移至作為趨化 因子產(chǎn)生源的某些器官，例如肺、肝臟等，形成器官特異性轉(zhuǎn)移（Balkwill F.，Semin Immunol, 2003, 15, 49-55)。因此，使用CXCR4拮抗劑靶向抑制CXCL12/CXCL4相互作用可以 阻斷腫瘤細胞與基質(zhì)細胞黏附，增加腫瘤細胞對化療藥物的敏感性，防止腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移 和復(fù)發(fā)。
[0008] 由于多肽易于合成，在人體內(nèi)易于代謝并且不會帶來毒副作用和嚴重的免疫反 應(yīng)，因此對于抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移，發(fā)展特異性靶向CXCR4受體的多肽具有非常重要的意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種多肽和多肽復(fù)合物、其制備方法及應(yīng)用，特別是一種 水溶性好、鹽溶性差的多肽和能提高多肽在鹽溶液中溶解性的多肽-HSA復(fù)合物、其制備方 法及其在抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移方面的應(yīng)用。
[0010] 為達到此發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0011] 第一方面，本發(fā)明提供了一種可抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的多肽，所述多肽具有選自SEQ ID N0 :1?7任意一種所示的氨基酸序列，如表1所示。
[0012] 本發(fā)明的多肽可通過人工化學(xué)合成制得，具有水溶性好、鹽溶性差的特點。
[0013] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述多肽為SEQ ID N0 :2或SEQ ID N0 :3所示的氨基酸序列， 對應(yīng)表1中的名稱為E4和E5。
[0014] 第二方面，本發(fā)明還提供了一種提高上述本發(fā)明所述的多肽在鹽溶液中溶解性的 方法，所述方法包括：將所述多肽與人血清白蛋白相結(jié)合。
[0015] 優(yōu)選地，所述多肽與人血清白蛋白的結(jié)合方式為物理結(jié)合。
[0016] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述方法包括以下步驟：
[0017] 1)配制溶液：將所述多肽分子配制成l-5mg/mL溶液，將人血清白蛋白分子配制成 125-250mg/mL 溶液；
[0018] 2)混勻：將人血清白蛋白分子溶液加入到多肽分子溶液中，充分混勻即可。
[0019] 優(yōu)選地，在步驟1)中，所述多肽溶液和人血清白蛋白的溶劑均為無菌超純水。
[0020] 優(yōu)選地，在步驟2)中，所述溶液中多肽分子與人血清白蛋白分子的摩爾比為 4:1-1:4，例如可以4:1、4:2、4:3、1:1、3:4、2:4、1:4，優(yōu)選為1:1。
[0021] 第三方面，本發(fā)明還提供了一種多肽-人血清白蛋白復(fù)合物，該復(fù)合物包含上述 本發(fā)明所述的多肽和人血清白蛋白。
[0022] 優(yōu)選地，所述多肽與人血清白蛋白通過物理作用相結(jié)合。
[0023] 優(yōu)選地，所述多肽和人血清白蛋白的摩爾比為4:1-1:4,例如可以4:1、4:2、4:3、 1:1、3:4、2:4、1:4，優(yōu)選為1:1。
[0024] 第四方面，本發(fā)明還提供了上述本發(fā)明所述的多肽-人血清白蛋白復(fù)合物在制備 用于抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的藥物中的應(yīng)用。
[0025] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述多肽-人血清白蛋白復(fù)合物用于抑制腫瘤細胞的橫向遷 移和/或縱向遷移。
[0026] 第五方面，本發(fā)明還提供了上述本發(fā)明所述的多肽-人血清白蛋白復(fù)合物在制備 用于治療人腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0027] 作為優(yōu)選技術(shù)方案，所述腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)疾病為趨化因子受體CXCR4高表達相關(guān)的 腫瘤；
[0028] 優(yōu)選地，所述趨化因子受體CXCR4高表達相關(guān)的腫瘤為乳腺癌、白血病、淋巴瘤或 膀胱癌中的任意一種。
[0029] 優(yōu)選地，所述趨化因子受體CXCR4高表達相關(guān)的腫瘤為乳腺癌，其中，SK-BR-3和 MDA-MB-231作為乳腺癌細胞系；SK-BR-3細胞系孵育培養(yǎng)基含5% FBS ;MDA-MB-231細胞系 孵育培養(yǎng)基不含F(xiàn)BS。
[0030] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0031] 本發(fā)明所述的多肽-HSA復(fù)合物具有提高多肽在鹽溶液中溶解性的能力，本發(fā)明 的多肽分子在PBS溶液中Oh的粒徑均在300nm以上，而多肽-HSA分子在PBS溶液中得到 了很好的分散，Oh的粒徑均在lOOnm左右，并且在72h內(nèi)粒徑?jīng)]有發(fā)生很大的改變。同時所 得到的多肽-HSA復(fù)合物具有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的作用，該多肽序列及多肽-HSA復(fù)合物可以為 腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制提供可行的治療方法。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0032] 圖la-lg為多肽分子和多肽-HSA分子在PBS溶液中動態(tài)光散射實驗結(jié)果圖
[0033] 圖2為E4-HSA、E5-HSA分子對SK-BR-3細胞活力影響的實驗結(jié)果圖
[0034] 圖3為E4-HSA、E5-HSA分子對MDA-MB-231細胞活力影響的實驗結(jié)果圖
[0035] 圖4a-4b為E4-HSA分子、E5-HSA分子對CXCL12分子誘導(dǎo)SK-BR-3細胞橫向遷移 的抑制作用結(jié)果圖
[0036] 圖5a-5d為E4-HSA分子、E5-HSA分子對CXCL12分子誘導(dǎo)SK-BR-3細胞縱向遷移 的抑制作用結(jié)果圖
[0037] 圖6a-6b為E4-HSA分子、E5-HSA分子對CXCL12分子誘導(dǎo)MDA-MB-231細胞橫向 遷移的抑制作用結(jié)果圖
[0038] 圖7a-7d為E4-HSA分子、E5-HSA分子對CXCL12分子誘導(dǎo)MDA-MB-231細胞縱向 遷移的抑制作用結(jié)果圖
【具體實施方式】
[0039] 下面將結(jié)合實施例對本發(fā)明的實施方案進行詳細描述。實施例中未注明具體技術(shù) 或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻所描述的技術(shù)或條件，或者按照產(chǎn)品說明書進行。所用試劑 或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可通過正規(guī)渠道商購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0040] 除非特別指明，以下實施例中所用的乳腺癌細胞系SK-BR-3、MDA-MB-231均購自 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院。
[0041] 除非特別指明，以下實施例中所用水溶液的溶劑均為無菌超純水溶液。
[0042] 除非特別指明，以下實施例中所用的試劑均為分析純試劑。
[0043] 除非特別指明，以下實施例中所用的PBS溶液均為IXPBS溶液。
[0044] 實施例1 :多肽的合成
[0045] 按照表1所示的序列合成多肽（由上?？齐纳锟萍加邢薰竞铣?，純度為 98% )，實驗前配制成合適濃度的母液。
[0046] 其中，N8、E4、E5、P印11、P印12、P印15、P印16多肽的氨基酸序列分別對應(yīng)于發(fā)明 內(nèi)容中SEQ ID NO :1?7。
[0047] 生物素（Biotin)的作用是與鏈霉親和素（SA)結(jié)合，屬于常用的技術(shù)手段，對本發(fā) 明多肽的作用沒有實質(zhì)性影響。
[0048] 表 1
[0049]
【權(quán)利要求】
1. 一種抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的多肽，其特征在于， 所述多肽具有選自SEQ ID NO :1?7任意一種所示的氨基酸序列。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的多肽，其特征在于， 所述多肽為SEQ ID NO :2或SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列。
3. -種提高權(quán)利要求1或2所述多肽在鹽溶液中溶解性的方法，其特征在于，所述方法 包括：將所述多肽與人血清白蛋白相結(jié)合； 優(yōu)選地，所述多肽與人血清白蛋白的結(jié)合方式為物理結(jié)合。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： 1) 配制溶液：將所述多肽分子配制成l_5mg/mL溶液，將人血清白蛋白分子配制成 125-250mg/mL 溶液； 2) 混勻：將人血清白蛋白分子溶液加入到多肽分子溶液中，充分混勻即可。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于， 在步驟1)中，所述多肽溶液的溶劑為無菌超純水；優(yōu)選地，所述人血清白蛋白溶液的 溶劑為無菌超純水； 優(yōu)選地，在步驟2)中，所述溶液中多肽分子與人血清白蛋白分子的摩爾比為4:1-1:4， 優(yōu)選為1:1。
6. -種多肽-人血清白蛋白復(fù)合物，其特征在于，包含權(quán)利要求1或2所述的多肽和人 血清白蛋白； 優(yōu)選地，所述多肽與人血清白蛋白通過物理作用相結(jié)合； 優(yōu)選地，所述多肽和人血清白蛋白的摩爾比為4:1-1:4,優(yōu)選為1:1。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的多肽-人血清白蛋白復(fù)合物在制備用于抑制腫瘤細胞轉(zhuǎn)移的 藥物中的應(yīng)用。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多肽-人血清白蛋白復(fù)合物用于抑制 腫瘤細胞的橫向遷移和/或縱向遷移。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的多肽-人血清白蛋白復(fù)合物在制備用于治療人腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān) 疾病的藥物中的應(yīng)用。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)疾病為趨化因子受體 CXCR4高表達相關(guān)的腫瘤； 優(yōu)選地，所述CXCR4高表達相關(guān)的腫瘤為乳腺癌、白血病、淋巴瘤或膀胱癌中的任意一 種。
【文檔編號】A61P35/04GK104098652SQ201410353810
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月23日
【發(fā)明者】王琛, 段鴻洋, 楊延蓮, 謝含儀, 于越 申請人:國家納米科學(xué)中心