一種牛蒡子苷在治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用，有效解決牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用問(wèn)題，牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用，該牛蒡子苷是，將牛蒡子粉碎成粗粉，用乙醇浸泡，回流提取，濾液減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮成濃縮液，濃縮液加蒸餾水分散成分散液；分散液上大孔吸附樹(shù)脂，先用蒸餾水洗脫，棄去水液；繼用體積濃度為10%的乙醇洗脫，棄去體積濃度為10%的乙醇洗脫液；最后用體積濃度為75%的乙醇洗脫，收集體積濃度為75%的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，60℃干燥粉碎，得牛蒡子苷，本發(fā)明具有降低尿酸作用，有效用于制備痛風(fēng)藥物，實(shí)現(xiàn)牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】一種牛蒡子苷在治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種牛蒡子苷在治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 痛風(fēng)是嘌呤代謝異常致使尿酸合成增加而導(dǎo)致的代謝性疾病。腎功能異常時(shí)由于 腎臟的尿酸清除率下降也會(huì)引起尿酸水平上升。血漿中的尿酸達(dá)到飽和，導(dǎo)致尿酸單鈉結(jié) 晶沉積在遠(yuǎn)端關(guān)節(jié)周?chē)鄬?duì)缺乏血管的組織中。這種結(jié)晶的出現(xiàn)可導(dǎo)致單關(guān)節(jié)或者多關(guān)節(jié) 的急性炎性滑膜炎。痛風(fēng)在男性中較為多見(jiàn)，拇趾是最常見(jiàn)的受累區(qū)域，50%?70%初次 發(fā)病發(fā)生于此。90%的痛風(fēng)患者在其一生中的某個(gè)時(shí)期會(huì)發(fā)生第一跖趾關(guān)節(jié)受累。其他可 能受累的足部區(qū)域有足背部、足跟以及踝部。除了累及關(guān)節(jié)之外，尿酸結(jié)晶還可以沉積在皮 下，被稱作痛風(fēng)結(jié)節(jié)。
[0003] 牛蒡子為菊科二年生草本植物牛蒡（學(xué)名：Arctium lappa L.)的干燥成熟果實(shí)。 呈長(zhǎng)倒卵形，略扁，微彎曲，長(zhǎng)5?7_，寬2?3_。表面灰褐色，帶紫黑色斑點(diǎn)，有數(shù)條縱 棱，通常中間1?2條較明顯。頂端鈍圓，稍寬，頂面有圓環(huán)，中間具點(diǎn)狀花柱殘跡；基部略 窄，著生面色較淡。果皮較硬，子葉2,淡黃白色，富油性。無(wú)臭，味苦后微辛而稍麻舌。秋季 果實(shí)成熟時(shí)采收果序，曬干，打下果實(shí)，除去雜質(zhì)，再曬干。生用或炒用，用時(shí)搗碎。具有疏 散風(fēng)熱，宣肺透疹，利咽散結(jié)，解毒消腫之功效。屬于解表藥中發(fā)散風(fēng)熱藥?，F(xiàn)代研究，牛蒡 子還可用于防治糖尿病腎??；牛蒡果實(shí)含牛蒡甙經(jīng)水解生成的牛蒡甙元具有抗癌活性。
[0004] 隨著牛蒡子藥用價(jià)值的提高，越來(lái)越多的有識(shí)之士對(duì)牛蒡子進(jìn)行了多方面的研 究，但至今未見(jiàn)有從牛蒡子中提取的牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種牛蒡子苷在 治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用，可有效解決牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用問(wèn)題。
[0006] 本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用，該牛蒡子苷 是，將牛蒡子粉碎成粗粉，用乙醇浸泡，回流提取，濾液減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮成濃 縮液，濃縮液加蒸餾水分散成含生藥量〇. 5g/ml，得分散液；分散液上AB-8型大孔吸附樹(shù) 月旨，先用蒸餾水洗脫，棄去水液；繼用體積濃度為10%的乙醇洗脫，棄去體積濃度為10%的 乙醇洗脫液；最后用體積濃度為75 %的乙醇洗脫，收集體積濃度為75 %的乙醇洗脫液，減 壓回收乙醇，60°C干燥粉碎，得牛蒡子苷。
[0007] 本發(fā)明制備方法簡(jiǎn)單，原材料豐富，所制備的牛蒡子苷具有降低尿酸作用，可有效 用于制備痛風(fēng)藥物，實(shí)現(xiàn)牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用，開(kāi)拓了牛蒡子的藥用價(jià) 值和新用途。

【具體實(shí)施方式】
[0008] 以下結(jié)合具體情況，對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說(shuō)明。
[0009] 本發(fā)明在具體實(shí)施中，牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用，該牛蒡子苷是，將 牛蒡子粉碎成過(guò)20-30目篩的粗粉，用10倍牛蒡子重量的、體積濃度為80%的乙醇浸泡 2h，回流提取2次，每次1. 5h，過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮到60°C相對(duì) 密度為1. 20?1. 30的濃縮液，濃縮液加蒸餾水分散成含生藥量0. 5g/ml，得分散液；分散 液上AB-8型大孔吸附樹(shù)脂，上樣量與樹(shù)脂體積的比例為1 : 10,樹(shù)脂柱徑高比為1 : 10， 先用4倍柱體積蒸餾水洗脫，棄去水液；繼用4倍柱體積的體積濃度為10%的乙醇洗脫，棄 去體積濃度為10 %的乙醇洗脫液；最后用10倍柱體積的體積濃度為75 %的乙醇洗脫，收集 體積濃度為75%的乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，60°C干燥粉碎，得牛蒡子苷。
[0010] 本發(fā)明牛蒡子苷具有降低尿酸作用，可有效用于制備治療痛風(fēng)藥物，實(shí)現(xiàn)牛蒡子 苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用，并經(jīng)試驗(yàn)得到了有效證明，有關(guān)試驗(yàn)資料如下。
[0011] 牛蒡子苷對(duì)酵母膏合并氧嗪酸鉀鹽致小鼠高尿酸血癥模型的影響
[0012] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0013] 1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0014] 清潔級(jí)小鼠，昆明種，雄性，23_27g，由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供。合格證編 號(hào)：0017219 ;實(shí)驗(yàn)室合格證號(hào)SYXK (豫）2010-001。
[0015] 1.2實(shí)驗(yàn)藥物
[0016] 本發(fā)明牛蒡子苷；痛風(fēng)舒片，市售；別嘌醇片，市售。
[0017] 1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0018] 羧甲基纖維素鈉，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；氧嗪酸鉀鹽，美國(guó)Sigma公 司；酵母膏，北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；0.9%氯化鈉注射液，鄭州永和制藥公司； 甲醛溶液（分析純），煙臺(tái)市雙雙化工有限公司；小鼠 UC檢測(cè)試劑盒，R&D公司；小鼠 X0D檢 測(cè)試劑盒，R&D公司；小鼠 CR檢測(cè)試劑盒，R&D公司；小鼠 BUN檢測(cè)試劑盒，R&D公司；小鼠 ADA檢測(cè)試劑盒，R&D公司。
[0019] 1.4實(shí)驗(yàn)儀器
[0020] 電子稱，上海民橋醫(yī)療器械有限公司，型號(hào)JY601 ;電子分析天平，奧豪斯（上海） 公司，型號(hào)AR1140/C ;高速臺(tái)式離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠，型號(hào)TGL-168 ;電熱恒溫水浴 鍋，上海一恒科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)HWS12 ;可調(diào)式移液器，上海雷勃分析儀器有限公司； 酶標(biāo)儀，美國(guó)BI0-RAD公司，型號(hào)680 ;
[0021] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0022] 2. 1造模與給藥
[0023] 取昆明種小鼠23-27g，84只隨機(jī)分為7組，分別為：空白組，模型組，別嘌醇組，痛 風(fēng)舒片組，牛蒡子苷大、中、小劑量組。造模方法：小鼠酵母膏30gAkg*d)灌胃給藥，每天 1次，連續(xù)13d，14d給藥后再腹腔注射氧嗪酸鉀鹽300mg/kg 1次。
[0024] 給藥方法：造模后第8d開(kāi)始各用藥組每天下午灌胃給藥一次，直至14d，共給藥7 天。小、中、大劑量牛蒡子苷組給藥劑量分別為0. 01g/kg、0. 02g/kg、0. 04g/kg(給藥體積 0. lml/10g);別嘌醇片給藥劑量為0. 05g/kg(給藥體積0. lml/10g);痛風(fēng)舒片給藥劑量為 0· 8g/kg (給藥體積 0· lml/10g)。
[0025] 配藥方法：0.5% CMC配制方法：稱取羧甲基纖維素鈉4g，用蒸餾水配成800ml。 小、中、大劑量牛蒡子苷組給藥劑量分別為0. 01g/kg、0. 02g/kg、0. 04g/kg (給藥體積 0. lml/10g)。配置方法：分別稱取牛蒡子苷0. 03g、0. 06g、0. 12g，先用少量的0. 5% CMC溶 解，然后再定容到30ml，混勻，即可。別嘌醇片（50mg/kg，用0· 5% CMC配成5mg/ml):取別 嘌醇片2片，研成粉末狀，先用少量的0. 5% CMC溶解，然后再定容到40ml，混勻，即可。痛風(fēng) 舒片（0.88/1^，用0.5%01?：配成0.088/1111，相當(dāng)于臨床用量的15倍） ：取痛風(fēng)舒片8片， 研成粉末狀，先用少量的〇. 5% CMC溶解，然后再定容到30ml，混勻，即可。儲(chǔ)存方法：冷藏， 用時(shí)隔水溫?zé)帷?br> [0026] 2. 2觀察項(xiàng)目及檢測(cè)方法
[0027] 檢測(cè)指標(biāo)：每周稱小鼠體質(zhì)量一次。14d給藥后lh后，空白組腹腔注射生理鹽水， 其余各組腹腔注射氧嗪酸鉀鹽，劑量為300mg/kg。注射1小時(shí)后摘眼球取血，分離血清，取 上清用于血UA、XOD、ADA、Cr和BUN活性的測(cè)定。同時(shí)快速取其肝臟迅速與生理鹽水1 :9 混合，勻漿。勻漿液取上清測(cè)定小鼠肝臟X0D和ADA活性的測(cè)定。取小鼠腎臟組織，用10% 甲醛溶液固定，HE染色，做病理觀察。
[0028] 2. 2. 1試劑盒檢測(cè)原理
[0029] 小鼠尿酸（UC) ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免 疫吸附試驗(yàn)。往預(yù)先包被尿酸（uric acid)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP 標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化 成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿酸（uric acid)呈 正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（0D值），計(jì)算樣品濃度。
[0030] 小鼠黃嘌呤氧化酶（XOD) ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾 心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。往預(yù)先包被黃嘌呤氧化酶（X0D)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo) 本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的黃嘌 呤氧化酶（X0D)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（0D值），計(jì)算樣品濃度。
[0031] 小鼠腺苷脫氨酶（ADA) ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心 法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。往預(yù)先包被腺苷脫氨酶（ADA)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo) 準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催 化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腺苷脫氨酶 (ADA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（0D值），計(jì)算樣品濃度。
[0032] 小鼠肌酐（CR) ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免 疫吸附試驗(yàn)。往預(yù)先包被肌酐（CR)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的 檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色， 并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的肌酐（CR)呈正相關(guān)。用酶標(biāo) 儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（0D值），計(jì)算樣品濃度。
[0033] 小鼠尿素氮（BUN) ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶 聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。往預(yù)先包被尿素氮（BUN)抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP 標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化 成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿素氮（BUN)呈正相 關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（0D值），計(jì)算樣品濃度。
[0034] 2. 2. 2試劑盒測(cè)定方法
[0035] 小鼠尿酸（UC)ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定方法：從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出 所需板條，剩余板條用自封發(fā)袋密封放回4°C。設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加入不 同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μ L。樣本孔中先加入待測(cè)樣本10 μ L，再加樣本稀釋液40 μ L (即樣本稀 釋5倍）；空白孔不加。除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的 檢測(cè)抗體100 μ L，用封板膜封住反應(yīng)孔。37°C水浴鍋或恒溫箱溫育60min。棄去液體，吸水 紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置lmin。甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也 可用洗板機(jī)按說(shuō)明書(shū)操作洗板）。每孔先加入底物A、B各50yL，37°C避光孵育15min。取 出酶標(biāo)板，每孔加終止液50 μ L，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光值（0D值）。根據(jù) 標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的0D值，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。最 終濃度為實(shí)際測(cè)定濃度乘以稀釋倍數(shù)。其中，標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5)濃度依次為：0、30、60、120、 240、480ymol/L。
[0036] 小鼠黃嘌呤氧化酶（XOD) ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定方法同尿酸，其中，標(biāo)準(zhǔn)品 (S0-S5)濃度依次為：0、0· 3、0· 6、L 2、2. 4、3. 6U/L。
[0037] 小鼠腺苷脫氨酶（ADA)ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定方法同尿酸，其中，標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5) 濃度依次為：〇、2.5、5、10、20、40U/ml。
[0038] 小鼠肌酐（CR)ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定方法同尿酸，其中，標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5)濃度依次 為：0、15、30、60、120、240ymol/L。
[0039] 小鼠尿素氮（BUN)ELISA檢測(cè)試劑盒測(cè)定方法同尿酸，其中，標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5)濃度 依次為：〇、1· 5、3· 0、6· 0、12· 0、24· Ommol/L。
[0040] 2. 3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法
[0041] 數(shù)據(jù)分析用SPSS17. 0醫(yī)用統(tǒng)計(jì)包進(jìn)行數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料用平均 數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，各組間比較采用單因素方差分析，方差檢驗(yàn)齊者用LSD法，方差不 齊者用Games-Howell法檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用Ridit檢驗(yàn)。
[0042] 結(jié)果
[0043] 1對(duì)酵母膏合并氧嗪酸鉀鹽致高尿酸血癥模型小鼠血清生化指標(biāo)的影響
[0044] 實(shí)驗(yàn)各組小鼠血清尿酸、黃嘌呤氧化酶、腺苷脫氨酶、肌酐、尿素氮活性水平測(cè)試 結(jié)果，見(jiàn)表1、表2、表3。
[0045] 表1牛蒡子苷對(duì)酵母膏合并氧嗪酸鉀鹽高尿酸血癥模型小鼠尿酸水平的影響 (X土S)
[0046]

【權(quán)利要求】
1. 一種牛蒡子苷在制備治療痛風(fēng)藥物中的應(yīng)用，該牛蒡子苷是，將牛蒡子粉碎成過(guò) 20-30目篩的粗粉，用10倍牛蒡子重量的、體積濃度為80%的乙醇浸泡2h，回流提取2次， 每次1. 5h，過(guò)濾，合并濾液，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，并濃縮到60°C相對(duì)密度為1. 20?1. 30 的濃縮液，濃縮液加蒸餾水分散成含生藥量〇. 5g/ml，得分散液；分散液上AB-8型大孔吸附 樹(shù)脂，上樣量與樹(shù)脂體積的比例為1 :1〇,樹(shù)脂柱徑高比為1 :1〇,先用4倍柱體積蒸餾水洗 脫，棄去水液；繼用4倍柱體積的體積濃度為10%的乙醇洗脫，棄去體積濃度為10%的乙醇 洗脫液；最后用10倍柱體積的體積濃度為75%的乙醇洗脫，收集體積濃度為75%的乙醇洗 脫液，減壓回收乙醇，60°C干燥粉碎，得牛蒡子苷。
【文檔編號(hào)】A61K31/7048GK104138387SQ201410356214
【公開(kāi)日】2014年11月12日 申請(qǐng)日期:2014年7月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月24日
【發(fā)明者】苗明三, 白明, 苗艷艷 申請(qǐng)人:河南中醫(yī)學(xué)院