一種治療心臟自主神經(jīng)病變的中藥組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供的治療心臟自主神經(jīng)病變的中藥組合物，屬于中藥領(lǐng)域，包括下列組分的原料，按重量，主藥為：黃芪15～45g、桂枝9～27g、白芍9～27g和甘草6g；輔藥為：麥冬18～20g、葛根18g、知母20g和三七粉3g。在上述組分基礎(chǔ)上，還可進(jìn)一步包括下列原料中的任意一種或幾種的組合：黃連6～9g、川芎18g、當(dāng)歸12～20g、黨參12g、白術(shù)20g、五味子9g和酒萸肉12g。本發(fā)明中藥組合物可保護(hù)心臟神經(jīng)，同時(shí)修復(fù)受損的神經(jīng)，從而維持心臟交感—迷走神經(jīng)平衡，提高心率變異性，保護(hù)心臟神經(jīng)功能，療效明顯，易于被患者接受，原料組分少，成本低，用法簡單。
【專利說明】一種治療心臟自主神經(jīng)病變的中藥組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，涉及一種治療心臟自主神經(jīng)病變的中藥組合物。

【背景技術(shù)】
[0002] 心臟自主神經(jīng)病變是各種心臟疾病如高血壓、冠心病、心力衰竭、心律失常、心肌 炎等心臟疾病及糖尿病等全身性疾病引起的心臟神經(jīng)受損，心臟交感一迷走神經(jīng)平衡破 壞。本病嚴(yán)重影響心臟疾病的進(jìn)展及預(yù)后，影響患者的病死率。心率變異性（heart rate variability, HRV)指竇性心律在一定時(shí)間內(nèi)的微小變化，它反映了自主神經(jīng)的平衡調(diào)節(jié) 狀態(tài)。HRV是一種無創(chuàng)性檢測心臟自主神經(jīng)功能的方法，可定量分析心臟交感神經(jīng)、迷走神 經(jīng)張力大小，HRV的下降可作為心臟神經(jīng)功能紊亂的重要依據(jù)，現(xiàn)廣泛用于心臟系統(tǒng)疾病。
[0003] 目前對心臟自主神經(jīng)病變的治療方法比較局限，多從保護(hù)神經(jīng)，延緩病情進(jìn)展的 方面入手，顯得辦法不多，不能從根本上恢復(fù)或維持自主神經(jīng)的平衡，治療效果較差，不能 達(dá)到令患者滿意的治療效果。目前西醫(yī)治療心臟自主神經(jīng)病變主要通過以下幾點(diǎn)來治療： 1) α -硫辛酸，延緩自主神經(jīng)病變的進(jìn)展；2)維生素 B12的衍生物甲鈷胺，能夠刺激神經(jīng)膜 細(xì)胞的蛋白合成，改善神經(jīng)傳導(dǎo)速度；3)醛糖還原酶抑制藥物，通過延緩而不能逆轉(zhuǎn)糖尿病 性神經(jīng)病變的進(jìn)展；4)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑（ACEI)類藥物也能改善心臟自主神經(jīng)病 變，能提高心臟副交感神經(jīng)的活性。以上藥物主要通過延緩疾病進(jìn)展，保護(hù)神經(jīng)功能，但最 終不能夠維持或調(diào)節(jié)自主神經(jīng)的平衡。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的：針對現(xiàn)有技術(shù)不足，主要解決臨床心臟病患者心率變異性下降的問 題，提供一種能夠維持或調(diào)節(jié)心臟交感一迷走神經(jīng)平衡，治療心臟自主神病變的中藥組合 物。
[0005] -種治療心臟自主神經(jīng)病變的中藥組合物，包括下列組分的原料，按重量，主藥 為：黃芪15?45g、桂枝9?27g、白芍9?27g和甘草6g ;輔藥為：麥冬18?20g、葛根 18g、知母20g和三七粉3g。
[0006] 其中，主藥中桂枝與白芍重量比優(yōu)選1:1。主藥優(yōu)選原料，按重量為：黃芪30g、桂 枝9g、白巧9g和甘草6g。
[0007] 本發(fā)明中藥組合物，在上述組分基礎(chǔ)上，還可進(jìn)一步包括下列原料中的任意一種 或幾種的組合，按重量為：黃連6?9g、川芎18g、當(dāng)歸12?20g、黨參12g、白術(shù)20g、五味 子9g和酒萸肉12g。
[0008] 用法用量：水煎服，其中三七粉加入煎煮后的藥液中沖服；溫水浸泡30-50分鐘， 加水沒過原料藥約1-2厘米，原料藥煎煮2次，第一煎煮沸后約30分鐘，第二煎煮沸后約20 分鐘，合并兩次藥液共400ml。分早、晚餐后1小時(shí)溫服，每次200ml，每日一劑。
[0009] 本發(fā)明中藥組合物的主藥部分組方依據(jù)： 本發(fā)明中藥組合物，主藥組方理論依據(jù)來源于《難經(jīng)》:"損其心者，調(diào)其榮衛(wèi)"心損的治 療法則。依據(jù)本發(fā)明中藥組合物調(diào)和營衛(wèi)的作用及心臟自主神經(jīng)的病機(jī)特點(diǎn)，重新組方，調(diào) 和營衛(wèi)，益氣養(yǎng)心，用以治療不同疾病導(dǎo)致的心臟自主神經(jīng)功能受損，保護(hù)心臟神經(jīng)及調(diào)節(jié) 心臟神經(jīng)功能，維持心臟交感一迷走神經(jīng)的平衡。
[0010] (一）組方分析： 君藥：桂枝、白芍 徐彬："桂枝湯，外證得之，解肌和營衛(wèi)；內(nèi)證得之，化氣調(diào)陰陽"。桂枝辛甘，性溫，能助 心陽，通血脈。如《金貴要略胸痹心痛短氣病脈證并治第九》："胸痹心中痞氣，氣結(jié)在胸，胸 滿，脅下逆搶心，枳實(shí)薤白桂枝湯主之"?！秱摗分烁什轀泄鹬χ年?，通血脈，治療心 悸動，脈結(jié)代。白芍味酸，有養(yǎng)血斂陰之功，與桂枝同用，一陽一陰，共達(dá)調(diào)和營衛(wèi)之功，故共 為君藥。
[0011] 臣藥：黃芪 慢性心衰多由心氣虛引起，故本發(fā)明中藥組合物用黃芪治療心氣虛。黃芪味甘，性微 溫，歸脾、肺經(jīng)?！侗静輩R言》:"補(bǔ)肺健脾，實(shí)衛(wèi)斂汗，驅(qū)風(fēng)運(yùn)毒之藥也。"《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》： "能補(bǔ)氣，兼能升氣，善治胸中大氣下陷。"本發(fā)明中藥組合物用黃芪同補(bǔ)脾、肺之氣，氣充則 血充，氣血運(yùn)行流暢，并在心氣的鼓動下，周流全身，以濡養(yǎng)臟腑、肌肉、經(jīng)脈、關(guān)節(jié)。且黃芪 兼能升陽，益衛(wèi)固表。兩藥合用，不僅補(bǔ)氣，而且能升胸中下陷之氣及益衛(wèi)止汗。
[0012] 佐使藥：甘草 甘草：味甘、平，歸心、肺、脾、胃經(jīng)，能補(bǔ)益心氣，益氣復(fù)脈，同時(shí)善入中焦，補(bǔ)脾益氣， 《本草正》:"助參芪成氣虛之功"。甘草不僅能補(bǔ)心、脾之氣，同時(shí)與桂枝合用辛甘化陽，與芍 藥合用酸甘化陰，共達(dá)調(diào)和陰陽之功。
[0013] 主藥以桂枝、白芍為君，調(diào)和營衛(wèi)；以黃芪為臣，補(bǔ)益心氣，養(yǎng)心并助心行血，以甘 草調(diào)和諸藥為佐，健運(yùn)中焦，使氣血生化有源，營衛(wèi)之氣調(diào)和。全方注重調(diào)理中焦氣血陰陽， 調(diào)和營衛(wèi)，營衛(wèi)和則氣血充，心有所養(yǎng)，從而預(yù)防心臟神經(jīng)病變的發(fā)生及維持心臟自主神經(jīng) 的平衡。
[0014] (二）現(xiàn)代藥理研究 (1)桂枝 現(xiàn)代藥理研究證明，桂枝能增加冠脈血流量，改善冠脈循環(huán)，增加心脈的營養(yǎng)血流量。 桂枝的主要成分桂皮醛有中樞性及外周性血管擴(kuò)張作用，能增加血液循環(huán)。桂枝蒸餾液能 擴(kuò)張冠狀動脈，改善心肌缺血，抑制心肌細(xì)胞乳酸脫氫酶、磷酸肌酸激酶的釋放，降低過氧 化物的生成，提高超氧化物歧化酶活性，從而改善心肌細(xì)胞的缺血再灌注損傷。桂枝揮發(fā) 油能夠抑制前列腺素 E(PGE)和炎癥介質(zhì)組織胺（Histamine)的釋放，清除的自由基（LP0、 MDA)，從而對心肌細(xì)胞膜和細(xì)胞起抗氧化作用，減輕損傷。
[0015] (2)白芍 現(xiàn)在藥理研究表明，白芍水溶物可明顯改善異丙腎上腺素所致的心肌缺氧從而起保護(hù) 作用，對抗由垂體后葉素引起的心肌缺血大鼠心電圖的變化，抑制血小板聚集。白芍總苷能 使離體的兔耳血管擴(kuò)張，能增加去甲腎上腺素（NA)對兔主動脈的收縮作用，升高舒張壓，減 慢心率，同時(shí)，白芍能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫功能，抑制急性炎癥水腫及鎮(zhèn)痛、解痙作用。
[0016] (3)黃芪 現(xiàn)代藥理研究表明黃芪能夠增加心肌收縮力，增加冠脈血流量，減慢心率，從而抗心肌 缺血，黃芪皂甙（AS)有抑制血小板聚集，延長動脈血栓形成時(shí)間，從而發(fā)揮抗血栓形成的 作用，黃芪能抑制阿霉素引起的心肌線粒體丙二醛、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、血清肌酸磷酸激 酶活性增高及降低超氧化物歧化酶活性，從而保護(hù)心臟。黃芪還能能抗心律失常，擴(kuò)張冠狀 動脈和外周血管，降低血壓。促進(jìn)機(jī)體代謝、抗疲勞、有明顯的利尿作用，能調(diào)節(jié)血糖，興奮 呼吸和增強(qiáng)和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，降血脂，抗衰老等作用。
[0017] 組方中的輔藥及可選原料成分藥理研究 麥冬：麥冬提取液對內(nèi)皮細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用，對心腦缺血缺氧具有保護(hù)作用。麥冬 中含有留體皂苷、高異黃酮、多糖等多種化學(xué)成分，具有抗心肌缺血、抗缺氧、改善微循環(huán)等 功能、增加免疫活性、降低血糖、平喘和抗過敏等藥理作用。麥冬及其提取物的藥理作用主 要表現(xiàn)為對內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用，減少內(nèi)毒素對其誘導(dǎo)的凋亡作用，其有效部位，可對血管 內(nèi)皮細(xì)胞損傷進(jìn)行保護(hù)。
[0018] 葛根：葛根對血管、心肌的作用。有資料表明葛根素可以降低犬的血壓，使犬的外 周阻力降低、心率減慢，左心室的壓力和壓力上升的最大速率降低。同時(shí)能夠降低心肌耗氧 量，擴(kuò)張冠脈血管，增加冠狀動脈的血流量，增加中度缺血區(qū)域的心肌血流量，但是重度缺 血區(qū)域的心肌血流量增加不顯著。還有臨床實(shí)驗(yàn)表明，靜脈點(diǎn)滴葛根素能顯著降低血壓，并 減慢心率，同時(shí)能降低腎素活性，說明葛根素的降壓作用與抑制腎素一血管緊張素系統(tǒng)有 關(guān)。葛根素抑制腎素一血管緊張素系統(tǒng)可能是通過其對自主神經(jīng)的影響來完成的，不僅局 限于高血壓的治療，可考慮心衰治療的應(yīng)用。葛根的其他作用還有葛根素的抗心肌缺血再 灌注損傷；抗心律失常；抗血栓，抗凝血；擴(kuò)張腦血管。
[0019] 知母：知母中的化學(xué)成分以留體皂苷、雙苯吡酮類為主，尚有木脂素類、黃酮類、多 糖類、有機(jī)酸類等。對多種疾病有治療作用，現(xiàn)只列舉其在心內(nèi)科疾病中的作用：1.降脂、 抗動脈粥樣硬化；2.抗血小板聚集：知母皂苷AIII在體內(nèi)外都具有明顯的抗血栓作用，但 不影響體內(nèi)凝血時(shí)間，這說明知母皂苷AIII在抑制凝血過程中可能只是影響血小板的聚 集、粘附和活化，而對血液中的各種凝血因子和血細(xì)胞因子沒有影響；3.抗炎作用：知母 皂苷BII可以在mRNA和蛋白質(zhì)水平上減少炎性細(xì)胞因子如白介素-1β (IL-Ιβ)，腫瘤壞 死因子-α (TNF-α)和白細(xì)胞介素-6 (IL-6)的生成，且呈現(xiàn)劑量依賴性；知母皂苷ΒΙΙ 還可以抑制核因子NF κ B的活性。知母皂苷B具有抗炎作用，與知母皂苷BII -樣，也可以 阻斷細(xì)胞炎癥因子NF-κ B的生成，是通過抑制p38絲裂素活化蛋白激酶（MAPK)途徑實(shí)現(xiàn) 的；4.清除自由基及抗氧化作用：菝葜皂苷元可以提高癡呆模型小鼠腦中超氧化物歧化 酶（S0D)的活性。
[0020] 三七粉：三七總皂苷、三七黃酮苷不僅能夠促進(jìn)多功能造血干細(xì)胞的增殖，具有造 血作用，而且能夠減慢心率，保護(hù)缺氧心肌。除此以外，三七還具有降低膽固醇、甘油三酯、 β脂蛋白的功效。1.三七總皂苷（PNS)對大鼠家兔犬的心肌缺血再灌注損傷有很強(qiáng)的保 護(hù)作用，其抗脂質(zhì)過氧化作用是保護(hù)缺血性再灌注心肌的一個(gè)重要原因，三七總皂苷能抑 制中性細(xì)胞內(nèi)核因子-kB的活化，減少細(xì)胞間粘附分子表達(dá)及中性粒細(xì)胞粘附而起到心 肌的保護(hù)作用，可見三七粉對于心肌的保護(hù)作用也是通過抑制炎癥反應(yīng)來完成的。2.三七 粉的活血作用：三七皂苷Rgl可通過纖溶系統(tǒng)功能，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放N0而發(fā)揮抗栓 作用。N0作為一種新型的細(xì)胞信使分子，可激活鳥苷酸環(huán)化酶，在血管神經(jīng)免疫等系統(tǒng)中 起著重要的信息傳遞作用。N0具有擴(kuò)張血管的功能，可抗自由基損傷，減輕內(nèi)皮細(xì)胞損傷所 引起纖溶紊亂。
[0021] 黃連：黃連具有產(chǎn)生正性肌力和負(fù)性頻率作用，又有擴(kuò)張血管改善器官血流量，降 低血壓和較強(qiáng)的抗心律失常作用等。小檗堿可使衰竭的動物心肌收縮力增強(qiáng)，心臟射血分 數(shù)增加。嚴(yán)重心衰病人，靜滴小檗堿也可以使心肌收縮力增強(qiáng)，此外小檗堿可明顯降低衰竭 心肌耗氧量，對缺血心肌起到保護(hù)作用。小劑量小檗堿還可以增加冠脈血流量。
[0022] 川芎：川芎含有苯酞類、萜烯類、有機(jī)酸及其酯、生物堿、多糖等多種類型的化學(xué)成 分。川芎保護(hù)心臟的作用主要分以下幾方面：1.抗心肌缺血：川芎嗪注射液能保護(hù)心臟， 減輕心肌缺血再灌注引發(fā)的損傷，能減少心肌梗死面積，減輕心肌病變程度，其作用機(jī)制可 能與增加缺血再灌注心肌組織一氧化氮合酶、超氧化物歧化酶的活性，減少脂質(zhì)過氧化物 丙二醛的含量和血清肌酸激酶的活性有關(guān)。2.抗心肌炎與心肌肥厚：，作用機(jī)制可能與抑 制有絲分裂原激活蛋白激酶信號通路中（ERK-l)mRNA的表達(dá)有關(guān)。3.抗動脈粥樣硬化。 另外，川芎還有保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞、抗增殖作用：川芎水提液及川芎嗪均能保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì) 胞。
[0023] 當(dāng)歸：1.有效保護(hù)心肌細(xì)胞。當(dāng)歸所含有的有機(jī)酸具有抗心肌缺血作用。增加其 抗缺氧的能力有效保護(hù)心肌細(xì)胞與減輕細(xì)胞損傷程度。有效減慢心肌細(xì)胞團(tuán)搏動頻率降低 其耗氧量，以減輕心肌損傷起到保護(hù)心肌細(xì)胞缺氧性損傷的作用，其抗缺氧作用可能也會 起到保護(hù)自主神經(jīng)的作用。2.有效降血脂改善動脈粥樣硬化。當(dāng)歸成分中的阿魏酸具有 "抗氧化、自由基清除"的作用，能夠"保持動脈壁中進(jìn)入與移出的脂質(zhì)動態(tài)平衡、抑制脂質(zhì) 沉積于血管壁、阻止附壁血栓形成"，從而起到有效降血脂改善動脈粥樣硬化的作用。
[0024] 黨參：黨參提取液能提高小鼠心肌中糖原、琥珀酸脫氫酶和乳酸脫氫酶的含量，說 明黨參可以改善心肌能量代謝，提高酶的活性，增強(qiáng)心肌線粒體功能，對解除運(yùn)動性心肌疲 勞有著重要的作用。并且黨參提取液能較好地改善心肌的舒張功能，增加心肌的順應(yīng)性，使 冠狀動脈灌注阻力減少，保護(hù)心肌正性收縮功能。黨參能提高缺血一再灌注損傷心肌超氧 化物歧化酶活性，降低丙二醛含量，減少肌酸激酶的釋放，改善心肌的收縮和舒張功能，并 能促進(jìn)心輸出量、冠脈流量、每搏輸出量及心率的恢復(fù)，說明黨參能改善心臟功能。
[0025] 白術(shù)：緩解大鼠腦缺血再灌注后的各種癥狀，白術(shù)多糖能減輕局灶性腦缺血再灌 注后腦水腫的程度，減輕神經(jīng)細(xì)胞的受損，改善神經(jīng)功能缺損狀態(tài)，而起神經(jīng)保護(hù)作用。王 光偉等對此模型進(jìn)行了一系列實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)白術(shù)多糖能降低誘導(dǎo)型一氧化氮合酶、改善超氧 化物歧化酶活力、減少丙二醛含量，從而減輕局灶性腦缺血再灌注后腦水腫的程度；并且再 灌注期小劑量應(yīng)用白術(shù)多糖能明顯減少缺血區(qū)中性粒細(xì)胞浸潤及細(xì)胞間粘附分子一1的表 達(dá)，有助于改善炎癥反應(yīng)引起的再灌注損傷。
[0026] 五味子：五味子醇甲（SCH)對6-羥基多巴胺（6- 0HDA)誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞死亡 有保護(hù)作用。
[0027] 其作用機(jī)制與增強(qiáng)谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體（Glutamatetransporters, GluTs)的功能有一定 關(guān)系。SCH能增強(qiáng)PC12細(xì)胞對谷氨酸的攝取，降低胞外谷氨酸的濃度，并拮抗6-0HDA對 PC12細(xì)胞攝取谷氨酸的抑制作用和細(xì)胞毒性作用。五味子酚（schisanhenol, Sal )和 丹酚酸A( salvianolicacidA, SalA)具有抗氧化作用，對H202引起神經(jīng)細(xì)胞凋亡有保 護(hù)作用，在體外能夠保護(hù)大鼠腦線粒體和突觸體免受氧自由基損傷。北五味子水提醇沉注 射液可使在體蛙心單相動作電位頻率減慢、動作電位幅度減少、平臺期下移、平臺期縮短； 可使離體蛙心心肌收縮力減弱。
[0028] 酒萸肉：氧化應(yīng)激誘發(fā)的細(xì)胞損傷已與多種神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變相關(guān)。從山茱萸 中提取的morroniside被證實(shí)有強(qiáng)效的抗氧化能力。morroniside具有抗SH-SY 5Y細(xì)胞暴露 于H202 (300-500 microM)導(dǎo)致的細(xì)胞毒作用。morroniside減輕了 H202造成的細(xì)胞內(nèi)Ca2+ 蓄積以及線粒體膜電位的下降。morroniside可抑制使用H202孵育細(xì)胞造成的超氧化物歧 化酶S0D顯著下降。此外，H 202誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡百分率降低，該作用與morroniside的百分 率呈劑量依賴關(guān)系。這些結(jié)果提示morroniside具有抗氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的神經(jīng)損傷進(jìn)程，從 而起到保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用。
[0029] 本發(fā)明提供的一種治療心臟自主神經(jīng)病變的中藥組合物有益效果為： 1)根據(jù)心臟自主神經(jīng)病變癥狀予以中醫(yī)特色的辨證論治，保護(hù)心臟神經(jīng)，同時(shí)修復(fù)受 損的神經(jīng)，從而維持心臟交感一迷走神經(jīng)平衡，提高心率變異性，保護(hù)心臟神經(jīng)功能。
[0030] 2)治療心臟心率變異性下降的心臟疾病，有較好療效，根據(jù)本病機(jī)理，以虛為本， 以實(shí)為標(biāo)，主要以調(diào)和營衛(wèi)，補(bǔ)氣養(yǎng)心為用，以補(bǔ)虛為本，調(diào)理氣血陰陽，療效明顯，無毒副 作用，易于被患者接受，原料組分少，成本低，用法簡單。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0031] 圖1為：實(shí)施例1各組大鼠體重、血壓和心率情況 圖2為：實(shí)施例1各組大鼠 HRV的時(shí)域分析和頻域分析結(jié)果 圖3為：實(shí)施例1 Elisa法檢測室間隔和左心室中TH、CHAT和TH/CHAT 圖4為：實(shí)施例lElisa法檢測室間隔和左心室中GAP-43、NGF和CNTF。

【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面由動物試驗(yàn)和臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)對本發(fā)明中藥組合物治療效果進(jìn)行驗(yàn)證，并結(jié)合 具體實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步闡述，說明其有益效果。應(yīng)該明白的是，下述說明僅是為了 解釋本發(fā)明，并不對其內(nèi)容進(jìn)行限定。
[0033] 實(shí)施例1?3來源于動物試驗(yàn)，實(shí)施例1用于驗(yàn)證本發(fā)明中藥組合物對糖尿病大 鼠心臟自主神經(jīng)重塑的預(yù)防和治療作用，實(shí)施例2用于驗(yàn)證本發(fā)明中藥組合物對糖尿病大 鼠自主神經(jīng)損傷的治療作用，實(shí)施例3用于驗(yàn)證本發(fā)明中藥組合物不同桂芍配伍對糖尿病 心臟自主神經(jīng)病變的預(yù)防作用；實(shí)施例4和實(shí)施例5選自臨床試驗(yàn)研究，可進(jìn)一步說明本發(fā) 明中藥組合物對心臟自主神經(jīng)病變的治療及預(yù)防作用。
[0034] 動物試驗(yàn)研究 實(shí)施例1 目的：觀察在糖尿病心臟自主神經(jīng)重塑過程中心臟微環(huán)境的變化，并探索本發(fā)明中藥 組合物對自主神經(jīng)病變的預(yù)防和治療作用。
[0035] 配方 主藥比例黃苗：桂枝：白巧：甘草為10:3:3:2,輔藥比例在本發(fā)明重量配比范圍內(nèi)可 調(diào)；取原料藥材，加10倍量水回流提取兩次，第一次1. 5小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并提取液， 濾過，減壓濃縮至相對密度為1. 20?1. 25 (70?80°C)，加入糖粉和糊精制顆粒，于60°C 以下干燥，制得顆粒劑，2g生藥/ lg顆粒劑。使用時(shí)候配制水溶液，使lg生藥/ml溶液。
[0036] 本發(fā)明中藥組合物和彌可保同時(shí)進(jìn)行動物試驗(yàn)，證明其藥用效果，其方法和結(jié)果 如下： 一、實(shí)驗(yàn)材料 (一） 實(shí)驗(yàn)動物 SPF級Wistar大鼠48只，雄性，8周齡，280-300g，由濟(jì)寧魯抗實(shí)驗(yàn)動物中心提供(許 可證號：SCXk魯20080002)。本研究獲得山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)與健康科學(xué)倫理委 員會動物研究審批。實(shí)驗(yàn)過程中動物飼養(yǎng)及取材均遵守實(shí)驗(yàn)動物管理和保護(hù)的有關(guān)規(guī)定。
[0037] (二）實(shí)驗(yàn)藥物 受試藥物：本發(fā)明中藥組合物 對照藥物：彌可保，衛(wèi)材（中國）藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H20030812 ;批號：120307A (二） 評價(jià)方法 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA) :NGF測定采用ELISA試劑盒（Abeam公司，abl00757,香港)。 CNTF (測定采用 ELISA 試劑盒（P印roTech 公司，900，K65 和 gOO-KOOJLUSAXlUCHAT 和 GAP-43 采用 ELISA 試劑盒（Bioyun，10234RT，10538RT 和 10190RT，上海，中國）測定。嚴(yán) 格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作，NGF，TH，CHAT和GAP-43由四甲基聯(lián)苯胺孵育，酶標(biāo)儀測 定450nm處的吸光度。CNTF用ABTS固定，酶標(biāo)儀405nm。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算心肌中的TH、 CHAT、GAP-43、NGF、CNTF含量。所有標(biāo)本（1:5稀釋）一式三份，用平均值表示。
[0038] 免疫熒光：右心房切片7um，在室溫下按常規(guī)程序?qū)M織切片進(jìn)行染色。膽堿能神 經(jīng)纖維用CHAT兔多克隆抗體（CHAT, Abeam, ab68779，1:300)標(biāo)記。腎上腺素能神經(jīng)用 TH兔多克隆抗體（TH，Abeam, ab51199，1: 300)標(biāo)記。通過物種特異性的山羊二抗（FITC 標(biāo)記山羊抗兔 IgG, ZSGB-Bio, ZF-0311;TRITC 標(biāo)記山羊抗兔 IgG, ZSGB-Bio, ZF-0316, 中國北京）使標(biāo)記物顯現(xiàn)。陰性對照切片未滴加一抗，表現(xiàn)為熒光背景。
[0039] 二、實(shí)驗(yàn)方法 (一）分組方法 實(shí)驗(yàn)動物購買后，可自由獲取食物和水，按體重隨機(jī)分為：正常組、模型組、治療組、對 照組，每組大鼠各12只。
[0040] 正常組：正常給予飲食，給予生理鹽水。
[0041] 模型組：于造模后給予生理鹽水。
[0042] 治療組：于造模后給予本發(fā)明中藥組合物。
[0043] 對照組：于造模后給予彌可保。
[0044] (二）造模方法 動物飼養(yǎng)于12:12光照-黑暗的環(huán)境中，可自由獲取食物和水。腹腔注射STZ(50 mg/ kg; Sigma，USA)誘導(dǎo)糖尿病。STZ溶于檸檬酸緩沖液中（0· 1 mol/1檸檬酸，0· 1 mol/1 檸檬酸鈉 ；pH 4. 4)。6只正常大鼠腹腔注射等量的檸檬酸緩沖液?？崭寡?gt; 11. 1 mmol/ 1為造模成功。除去死亡和未成模大鼠，本實(shí)驗(yàn)共納入18只糖尿病大鼠和6只正常大鼠，18 只成模大鼠隨機(jī)平均分為治療組、對照組和模型組。
[0045] (三）動物給藥及療程 糖尿病大鼠成模后繼續(xù)灌胃治療6周。灌胃劑量根據(jù)文獻(xiàn)和臨床中用量。治療組大鼠 給予本發(fā)明中藥組合物4. 0g生藥/Kg/日；對照組給予彌可保0. 15mg/Kg/日；正常組大鼠 和模型組大鼠給予等量生理鹽水。每周測體重、血糖、心率和HRV。
[0046] (四）動物處理與取材 在觀察7周后，處死大鼠。3%戊巴比妥鈉（40 mg/kg，i.p.)麻醉，迅速取出心臟。剪 取右心房，立刻置于液氮中冷凍，免疫熒光待測。左心室和室間隔置于由10 mmol/1 Tris， 150 mmol/1 NaCl and 1% Triton X-100，pH 7· 4.構(gòu)成的緩沖液中。
[0047] (五）統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS 17. 0版統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以 Itj表示，除非另有說明，統(tǒng)計(jì)比較采用雙因素方差分析進(jìn)行處理，p值小于0.05認(rèn)為有統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義。
[0048] 三、研究結(jié)果 (一）STZ誘導(dǎo)糖尿病大鼠的一般狀況 注射STZ后，大鼠飲水增多，體重和心率降低，精神差，活動較少。經(jīng)治療后，治療組大 鼠體重和心率有升高趨勢，但在治療組、對照組和模型組間無差異。治療組、對照組和模型 組間血糖無差異，表明本發(fā)明中藥組合物的藥理作用不是通過降低血糖實(shí)現(xiàn)的。
[0049] 模型組與正常組比較：P〈0. 05 ;對照組和治療組與模型組比較：P〈0. 05 ;對照組與 治療組比較：P〈〇. 05。正常組大鼠體重升高，但治療組和對照組體重高于模型組。模型組、 對照組和治療組的血糖高于正常水平。模型組、治療組和對照組大鼠心率均低于正常組。
[0050] (二）HRV 改變 HRV包括時(shí)域分析和頻域分析。時(shí)域分析包括SDNN (A)，SDANN (B)，RMSSD (C) and PNN50 (D)，頻域分析包括 LF (E)，HF (F)，LF/HF (G)和 TP (Η)。
[0051] 1)時(shí)域分析 相比正常組，模型組大鼠 SDNN、RMSSD和ΡΝΝ50降低，并且在實(shí)驗(yàn)過程中一直保持較低 水平（P〈 0.05)，而SDANN在成模后3周增加（P〈 0.05)，之后降至正常水平，表明HRV 的降低是由于迷走神經(jīng)張力下降和交感神經(jīng)張力增加導(dǎo)致的。對照組SDNN、RMSSD和PNN50 高于模型組（P〈 0.05)，而且彌可保在注射STZ 1-3周可有效防止SDANN升高。治療組 SDNN，RMSSD和PNN50高于模型組和對照組（P〈 0· 05)，可見本發(fā)明中藥組合物可有效防 止SDANN在1-3周內(nèi)突然升高，SDANN在3周后出現(xiàn)緩慢降低。
[0052] 2)頻域分析 相比正常組，模型組大鼠 LF，HF和TP降低，LF/HF在2周后明顯升高（P〈 0.05)， 表明迷走神經(jīng)張力明顯降低，交感-迷走平衡被打破，心臟自主神經(jīng)調(diào)節(jié)能力降低。對照組 大鼠 LF和HF高于模型組（P〈 0.05)。在治療6周后，對照組大鼠 LF、HF和TP降低，LF/ HF仍增加。治療組LF、HF和TP高于模型組和對照組（P〈 0.05)，表明本發(fā)明中藥組合物 可抑制亢進(jìn)的交感神經(jīng)活性，緩解交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)之間的失衡。
[0053] 由HRV分析可知，模型組大鼠副交感神經(jīng)參數(shù)如SDNN (A)，RMSSD (〇，PNN50 (D) and HF (F)突然降低，而交感神經(jīng)參數(shù)SDANN (B)，LF (E)升高，LF/HF (G)升高。治 療組和對照組使得HRV在高血糖時(shí)下趨于正常?？梢?，本發(fā)明中藥組合物可有效保護(hù)心臟 迷走神經(jīng)，恢復(fù)交感神經(jīng)和迷走神經(jīng)之間的平衡，且本發(fā)明中藥組合物作用優(yōu)于彌可保。
[0054] (三）心肌勻漿中TH和CHAT含量 TH為交感神經(jīng)的標(biāo)記物。CHAT為膽堿能神經(jīng)元的標(biāo)記物，各組大鼠室間隔和左心室 ΤΗ、CHAT含量，見表1。
[0055] 表1 Elisa法檢測各組大鼠室間隔和左心室ΤΗ、CHAT含量（ng/ml，fij)

【權(quán)利要求】
1. 一種治療心臟自主神經(jīng)病變的中藥組合物，其特征在于，包括下列組分的原料，按重 量，主藥為：黃芪15?45g、桂枝9?27g、白芍9?27g和甘草6g ;輔藥為：麥冬18?20g、 葛根18g、知母20g和三七粉3g。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的主藥中桂枝與白芍重量比 為 1:1。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，所述的主藥原料，按重量為：黃芪 3〇g、桂枝9g、白巧9g和甘草6g。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥組合物，其特征在于，進(jìn)一步包括下列原料中的任意一 種或幾種的組合，按重量為：黃連6?9g、川芎18g、當(dāng)歸12?20g、黨參12g、白術(shù)20g、五 味子9g和酒萸肉12g。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物，其特征在于，包括下列組分的原料，按重量為： 黃芪45g、桂枝12g、白芍12g、麥冬20g、葛根18g、知母20g、三七粉3g、黃連9g、川芎18g、當(dāng) 歸12g和甘草6g。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物，其特征在于，包括下列組分的原料，按重量為： 黃芪45g、桂枝15g、白芍15g、麥冬20g、葛根18g、知母20g、三七粉3g、黃連6g、川彎18g、黨 參12g、白術(shù)20g和甘草6g。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物，其特征在于，包括下列組分的原料，按重量為： 黃芪30g、桂枝9g、白芍9g、麥冬20g、葛根18g、知母20g、三七粉3g、黃連6g、白術(shù)20g和甘 草6g。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物，其特征在于，包括下列組分的原料，按重量為： 黃芪45g、桂枝12g、白芍12g、麥冬18g、葛根18g、知母20g、三七粉3g、黨參12g、五味子9g、 白術(shù)20g、酒萸肉12g和甘草6g。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物，其特征在于，包括下列組分的原料，按重量為： 黃芪45g、桂枝12g、白芍12g、麥冬18g、葛根18g、知母20g、三七粉3g、黃連9g，川芎18g，當(dāng) 歸20g、黨參12g、白術(shù)20g和甘草6g。
10. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的中藥組合物，其特征在于，包括下列組分的原料，按重量為： 黃芪30g、桂枝12g、白芍12g、麥冬18g、葛根18g、知母20g、三七粉3g、黃連9g，川芎18g，當(dāng) 歸20g、白術(shù)20g和甘草6g。
【文檔編號】A61K36/8968GK104147345SQ201410359663
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年7月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月28日
【發(fā)明者】李曉, 姜萍, 楊金龍 申請人:山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院