一種中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，該方法是將中藥原液或提取液，皮下注射到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的足趾，以動(dòng)物的提足次數(shù)反應(yīng)藥物刺激所導(dǎo)致的疼痛，以腫脹度反應(yīng)藥物刺激所引導(dǎo)的炎癥，結(jié)合疼痛和炎癥，綜合評(píng)價(jià)藥物的刺激性。經(jīng)過(guò)對(duì)蟾酥、斑蝥、華蟾素注射液、得力生注射液等2種生藥和2種注射液的檢驗(yàn)，表明該方法可有效地評(píng)價(jià)藥物刺激性的強(qiáng)弱。方法具有靈敏、直觀、簡(jiǎn)便、快捷的優(yōu)勢(shì)，可廣泛用于各種中藥刺激性的評(píng)價(jià)和檢驗(yàn)。
【專利說(shuō)明】
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，具體設(shè)計(jì)一種廣泛適用于中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方 法。 一種中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法

【背景技術(shù)】
[0002] 中藥作為有效防治疾病的手段，其對(duì)疾病的治療理念順應(yīng)了二十一世紀(jì)醫(yī)藥學(xué)發(fā) 展的新趨勢(shì)，展示出了強(qiáng)大的生命力和廣闊的發(fā)展前景。中藥在當(dāng)前中西醫(yī)院臨床中的使 用也在明顯增加，特別是中藥在西醫(yī)院臨床創(chuàng)新藥物中的排名已大大提高。中藥的銷售額 近年來(lái)不斷加大，如文山市的三七，年銷售額近50億。
[0003] 但是中藥在臨床使用時(shí)經(jīng)常有不良反應(yīng)發(fā)生，具有安全隱患。不良反應(yīng)類型多樣， 最常發(fā)生的是藥物刺激性。例如，華蟾素注射液具有抗腫瘤的作用，但是對(duì)血管有刺激性； 六神丸成分較多，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生一定的刺激性。溶血反應(yīng)也是藥物刺激性反應(yīng)的一種表現(xiàn)形 式，例如魚(yú)腥草注射液中吐溫-80超標(biāo)容易引起溶血。此外，還涉及心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、 神經(jīng)系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、感覺(jué)器官、皮膚及其附件等多個(gè)系統(tǒng)的不良反應(yīng)。一定程度上限制了 中藥的用藥安全和新藥開(kāi)發(fā)。
[0004] 對(duì)于中藥刺激性，有效的檢驗(yàn)和檢測(cè)方法至關(guān)重要。近年來(lái)關(guān)于刺激性評(píng)價(jià)的動(dòng) 物模型研究較多，一般為局部刺激實(shí)驗(yàn)，如兔眼刺激試驗(yàn)等。但是這些模型缺乏明顯直觀且 可定量化的疼痛與炎癥指標(biāo)，需要發(fā)展新的藥物刺激性評(píng)價(jià)方法。本發(fā)明利用藥物刺激大 鼠足趾模型，以提足次數(shù)（疼痛）和腫脹度（炎癥）兩個(gè)指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)藥物的刺激性，建立一 種直觀、簡(jiǎn)單和實(shí)用的中藥刺激性評(píng)價(jià)方法。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 發(fā)明目的：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)不能有效檢測(cè)中藥刺激性 的不足，提供一種具有普適性，且直觀、方便、快捷的中藥刺激性評(píng)價(jià)方法。
[0006] 技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0007] -種中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，將藥物原液或?qū)⑺幬镌簼饪s富集后，皮下注 入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物足趾，計(jì)算提足次數(shù)，測(cè)量足趾腫脹度和記錄注射藥液前后的足趾體積來(lái)評(píng)價(jià) 中藥刺激性。
[0008] 作為優(yōu)選方案，以上所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，藥物原液濃縮富集的方 法包括超濾濃縮、干燥濃縮、離心濃縮。
[0009] 作為優(yōu)選方案，以上所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，藥物原液濃縮富集的倍 數(shù)為1-100倍。更加優(yōu)選將藥物原液濃縮富集10倍。
[0010] 作為優(yōu)選方案，以上所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，藥物原液的濃度為 0· l-1000mg/ml。特別優(yōu)選的藥物原液的濃度為20mg/ml。 toon] 作為優(yōu)選方案，以上所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物優(yōu)選大鼠，注入 體積為〇. 01-2ml，更加優(yōu)選的注入體積為0. lml。
[0012] 作為優(yōu)選方案，以上所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，皮下注入藥物后，記 錄提足反應(yīng)的產(chǎn)生時(shí)間，并計(jì)數(shù)產(chǎn)生提足后5min-8h的提足次數(shù)，更加優(yōu)并首次提足后 10min-30min內(nèi)的提足次數(shù)。
[0013] 作為優(yōu)選方案，以上所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，所述的藥物原液為中藥、 中成藥或中藥注射液的原液。當(dāng)然本發(fā)明也可以用于西藥的刺激性評(píng)價(jià)。
[0014] 作為優(yōu)選方案，以上所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，所述的足趾腫脹脹度可 用足趾腫脹儀來(lái)檢測(cè)。
[0015] 中藥制劑在生產(chǎn)和存放過(guò)程中可能產(chǎn)生微量的刺激性物質(zhì)，研究需要高濃度的刺 激性物質(zhì)。超濾、冷凍、離心等方法可以達(dá)到濃縮藥物的作用，而超濾是一種有效排除小分 子干擾的技術(shù)，而且3KD的超濾管可截留并富集到高濃度刺激物；冷凍干燥是一種把低濃 度水提液干燥至粉末的技術(shù)，可由粉末配制成高濃度刺激物；離心濃縮是一種揮去提取液， 直接濃縮藥液的技術(shù)。這些濃縮方法具有損耗小、效率高、操作便捷的優(yōu)點(diǎn)，使藥物刺激性 更加明顯，可增加刺激性檢測(cè)方法的靈敏性。
[0016] 有益效果：本發(fā)明提供的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu) 占·
[0017] 傳統(tǒng)的藥物刺激性評(píng)價(jià)模型為家兔眼球刺激法，該方法主觀定性觀測(cè)藥物的刺激 性，無(wú)法客觀的定量評(píng)價(jià)藥物因此的疼痛和炎癥反應(yīng)。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明創(chuàng)新性 采用了藥物刺激大鼠足趾模型，皮下注射藥物后，大鼠出現(xiàn)提足反應(yīng)，并且足趾出現(xiàn)明顯的 紅腫現(xiàn)象。以計(jì)數(shù)提足次數(shù)反應(yīng)藥物刺激的疼痛，以藥物注射前后足部體積的變化反應(yīng)藥 物誘導(dǎo)的炎癥，并總體評(píng)估藥物的刺激性，建立一種直觀、準(zhǔn)確和廣泛的中藥刺激性評(píng)價(jià)方 法。

【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明 而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià) 形式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。
[0019] 實(shí)施例1蟾酥生藥的刺激性檢測(cè)
[0020] 一、方法
[0021] 1、蟾酥生藥的提取和配制
[0022] 稱取蟾酥生藥粉末0. 3492g置于玻璃試管中，加8ml0. 5% DMS0超純水超聲提 取兩次，20min/次，過(guò)濾，合并濾液。將濾液冷凍干燥至粉末狀態(tài)，重0. 1211g，即得率為 34. 68%。取冷凍干燥后的粉末0. 0419g，溶于0. 419ml0. 5% DMS0的水中，即得濃度為 100mg/ml的母液，過(guò)濾，分別配成濃度為10mg/ml、20mg/ml、50mg/ml的溶液即可。
[0023] 2、大鼠足部刺激性試驗(yàn)
[0024] 選取雄性SD大鼠40只，隨機(jī)分成4組，即正常組（生理鹽水）、給藥組（10mg/ml、 20mg/ml、50mg/ml)，每組 10 只。
[0025] 在各組大鼠右后肢踝關(guān)節(jié)處作一標(biāo)記，用排水法測(cè)量其右后爪體積。給大鼠右后 足足墊處注射以上四組不同的藥物，每只大鼠注射〇. lml，觀察大鼠的提足反應(yīng)，記錄大鼠 開(kāi)始提足后lOmin內(nèi)的提足次數(shù)，測(cè)定藥物注射30min后大鼠右后足的體積，并計(jì)算大鼠右 后足實(shí)驗(yàn)前后的體積差，即腫脹度。
[0026] 腫脹度=注射藥物后足趾體積一注射藥物前足趾體積
[0027] 二、結(jié)果
[0028] 配制不同濃度蟾酥生藥水提液，采用上述建立的大鼠足部刺激性檢測(cè)方法檢測(cè)。
[0029] 結(jié)果表明，與生理鹽水組相比，不同濃度蟾酥水提液（10mg/ml、20mg/ml、50mg/ ml)10min內(nèi)提足次數(shù)顯著增加，分別從不提足增加至（14±5、41±9、99±8)次/10min(P < 0.01)，表明大鼠足部疼痛。
[0030] 并且蟾酥不同濃度給藥組30min后腫脹度也顯著增加，從生理鹽水組 (0.071±0.009)ml 分別增力卩至（0.702±0.093、0.788±0.096、L 027±0.11)ml(P < 0. 01)，表明大鼠足部出現(xiàn)炎癥現(xiàn)象。
[0031] 綜合提足次數(shù)（疼痛）和腫脹度（炎癥）兩個(gè)指標(biāo)，反應(yīng)了蟾酥生藥具有較明顯 的刺激性。
[0032] 表1不同濃度蟾酥水提液對(duì)大鼠刺激性的影響
[0033]

【權(quán)利要求】
1. 一種中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，其特征在于，將藥物原液或?qū)⑺幬镌簼饪s富集 后， 皮下注入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物足趾，計(jì)算提足次數(shù)和測(cè)量足趾腫脹度來(lái)評(píng)價(jià)中藥刺激性。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，其特征在于，藥物原液濃縮富 集的方法包括超濾濃縮、干燥濃縮或離心濃縮。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，其特征在于，藥物原液濃縮富 集的倍數(shù)為0.01-100倍。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，其特征在于，藥物原液濃縮富 集的倍數(shù)為10倍。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，其特征在于，藥物原液的濃度 為 0· 01-1000mg/ml。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，其特征在于，藥物原液的濃度 為 20mg/ml。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，其特征在于，實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物為大鼠，藥物注入體積為0. 〇l-2ml。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，其特征在于，皮下注入藥物后， 記錄提足反應(yīng)的產(chǎn)生時(shí)間，并計(jì)數(shù)首次提足后10min-30min內(nèi)的提足次數(shù)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的中藥刺激性評(píng)價(jià)的檢測(cè)方法，其特征在于，所述的藥物原液 為中藥、中成藥或中藥注射液的原液。
【文檔編號(hào)】A61K49/00GK104107439SQ201410363961
【公開(kāi)日】2014年10月22日 申請(qǐng)日期:2014年7月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月28日
【發(fā)明者】馬宏躍, 段金廒, 龔艷, 曹琴, 錢大瑋, 王子月 申請(qǐng)人:南京中醫(yī)藥大學(xué)