旋毛蟲Ts834蛋白基因及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于免疫學和分子生物學領域，涉及一種旋毛蟲Ts834基因及其蛋白和用途。具體地，所述旋毛蟲Ts834基因為或者包含SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：7或SEQ?ID?NO：8所示的序列。旋毛蟲Ts834基因表達蛋白免疫動物后產(chǎn)生高滴度的抗體并對攻擊感染產(chǎn)生有效的免疫保護性，具有應用于制備旋毛蟲病的免疫診斷或防治的藥物的潛力。
【專利說明】旋毛蟲Ts834蛋白基因及其應用發(fā)明領域
[0001]本發(fā)明屬于免疫學和分子生物學領域，涉及一種旋毛蟲Ts834基因及其蛋白和用途。

【背景技術】
[0002]旋毛形線蟲(Trichinella spiralis,簡稱旋毛蟲)，可感染人及150多種動物,它所引起的旋毛蟲病是一種人畜共患寄生蟲病，呈全球性分布，嚴重地威脅了人類健康并對畜牧業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失。旋毛蟲生活史簡述如下:當人或動物宿主生食或半生食含旋毛蟲囊包的肉類(豬肉、狗肉等)，囊包內(nèi)幼蟲在胃液、腸液作用下逸出并在小腸內(nèi)發(fā)育為成蟲。雌、雄蟲交配后雌蟲產(chǎn)新生幼蟲。新生幼蟲侵入腸粘膜淋巴管或靜脈，隨淋巴和血循環(huán)到達宿主橫紋肌繼續(xù)發(fā)育。旋毛蟲的致病過程分為三期:侵入期、幼蟲移行及囊包形成期，即在該蟲生活史的每個環(huán)節(jié)均可使宿主致病。
[0003]旋毛蟲病臨床表現(xiàn)復雜多樣，診斷較困難，給及時的治療造成一定難度，因此該病的免疫診斷及預防成為當務之急。由于病原體不能在體外大量傳代培養(yǎng)，限制了抗原的獲?。患又x抗原的復雜性、多樣性，造成目前尚無很好的高敏感度高特異性的抗原作為診斷或保護性疫苗的候選抗原分子。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明人經(jīng)過深入的研究和創(chuàng)造性的勞動，得到了一種旋毛蟲抗原新基因。本發(fā)明人進一步制備了該基因的基因重組蛋白及高效價免疫血清，并進行了免疫學功能的研究。本發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，制得的重組蛋白具有良好的免疫原性，并且免疫動物后對旋毛蟲攻擊感染產(chǎn)生有效的免疫保護性。具有應用于制備旋毛蟲病的免疫診斷或防治的藥物的潛力。由此提供了下述發(fā)明:
[0005]本發(fā)明的一個方面涉及一種分離的多肽，其氨基酸序列為或者包含SEQ ID NO:USEQ ID NO:2 或 SEQ ID NO:3 所示的序列。
[0006]172aa
[0007]|mhcqfilslllfslnvvff EAj aksldavddelkrctekqte i caqteckaeda i
MTDLLLEGESDITDHPDFLLYATCMQRCCARLNGAQVAPLKEEEKRRGPSKLPFQSIFEVADQKTVERCDETMCKSYRKKYENLVALTSSYKKLRSSQELKDYKQCIERCDAKLNGLQ(SEQID NO:1)
[0008]其中，上面的加框部分(SEQ ID NO:2,21aa)為信號肽序列；下劃線部分為成熟肽序列(SEQ ID NO:3，151aa)。
[0009]本發(fā)明的另一方面涉及一種分離的多核苷酸，其核苷酸序列編碼本發(fā)明任一項所述的多肽。
[0010]本發(fā)明還涉及一種分離的多核苷酸，其核苷酸序列為或者包含SEQ ID NO:4、SEQID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所示的序列或其互補序列。
[0011]700bp

【權利要求】
1.一種分離的多肽，其氨基酸序列為或者包含SEQ ID NO:U SEQ ID NO:2或SEQ IDNO: 3所示的序列。
2.一種分離的多核苷酸，其核苷酸序列編碼權利要求1所述的多肽。
3.一種分離的多核苷酸，其核苷酸序列為或者包含SEQ ID N0:4、SEQ ID NO:5、SEQ IDNO:6、SEQ ID NO:7 或 SEQ ID NO:8 所示的序列。
4.一種核酸構建體，其含有權利要求2或3所述的多核苷酸；具體地，所述核酸構建體為重組表達載體；更具體地，所述重組表達載體為重組原核表達載體或者重組真核表達載體；進一步具體地，所述重組原核表達載體為重組PET-28a(+)載體。
5.一種重組宿主細胞，其含有權利要求4所述的核酸構建體；具體地，為重組大腸桿菌細胞。
6.一種抗體，其能夠與權利要求1所述的多肽特異性結合；具體地，所述抗體為多克隆抗體或單克隆抗體。
7.一種免疫血清，其由權利要求1所述的多肽免疫哺乳動物制得；具體地，所述哺乳動物為小鼠、大鼠、兔、豬、牛、羊、人或猴。
8.一種組合物，其含有權利要求1所述的多肽、權利要求2或3所述的多核苷酸、權利要求4所述的核酸構建體、權利要求5所述的重組宿主細胞、權利要求6所述的抗體或者權利要求7所述的免疫血清；可選地，其還包含藥學上可接受的輔料；具體地，所述組合物為藥物組合物；更具體地，所述組合物為人畜旋毛蟲疾病診斷試劑或者防治人畜旋毛蟲疾病的藥物例如疫苗。
9.權利要求1所述的多肽、權利要求2或3所述的多核苷酸、權利要求4所述的核酸構建體權利要求5所述的重組宿主細胞、權利要求6所述的抗體或者權利要求7所述的免疫血清在制備如下的(I)至(4)中任一項的用途: (1)旋毛蟲或旋毛蟲感染疾病診斷試劑， (2)預防和/或治療和/或輔助治療旋毛蟲感染的藥物例如疫苗， (3)抑制旋毛蟲的藥物或者試劑，和 (4)旋毛蟲抗原或者抗原表位。
10.一種在體內(nèi)或體外檢測或者抑制旋毛蟲的方法，包括使用有效量的權利要求1所述的多肽或者權利要求2或3所述的多核苷酸的步驟。
【文檔編號】A61K39/00GK104130322SQ201410371691
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2014年7月31日 優(yōu)先權日:2014年7月31日
【發(fā)明者】諸欣平, 楊靜, 畢闊 申請人:首都醫(yī)科大學