一種可注射填充植入劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種可注射填充植入劑，所述可注射填充植入劑的有效成分為生物細胞外基質(zhì)材料，所述生物細胞外基質(zhì)材料的交聯(lián)度為50％-70％。本發(fā)明還涉及所述可注射填充植入劑的制備方法。本發(fā)明提供的制備方法，可以獲得優(yōu)于現(xiàn)有技術的可注射填充植入劑。本發(fā)明所提供的可注射填空植入劑，交聯(lián)程度高，粒徑范圍合適，體內(nèi)降解時間長，生物相容性好。
【專利說明】-種可注射填充植入劑及其制備方法

【技術領域】
[0001]本申請涉及一種可注射填充植入劑及其制備方法。

【背景技術】
[0002] -個世紀以來，軟組織充填劑被廣泛應用于美容外科手術以改善面部輪廓、修正 皺紋、填平凹陷瘢痕和填充體積（如唇部）等，現(xiàn)今對于軟組織填充劑的需求越來越大。 [0003]理想的軟組織填充劑，應該具有便宜易得、良好的生物惰性、生物相容性和穩(wěn)定 性、無毒性、無致癌性、無感染性、無急性或慢性炎癥反應、易于注射和取出、能夠維持長期 甚至永久的外觀修復效果且恢復時間短。但至今為止，仍沒有如此理想的注射式填充劑問 世。
[0004] 現(xiàn)有的美容植入產(chǎn)品均存在一定缺陷，且目前國家對于美容植入劑類產(chǎn)品要求非 常嚴格，如：要明確控制交聯(lián)程度、粒徑分布范圍、分子量大小、降解周期等，需滿足的技術 條件很聞。
[0005] 中國專利CN200510044005. 5公開了一種可注射軟組織生物填充材料的制備方 法，其采用新宰殺小豬皮為原料，經(jīng)過去皮下組織、脫脂、堿處理、剖層、酶處理、戊二醛交 聯(lián)、漂白處理以及微?；庸?，最后經(jīng)包裝及鈷60滅菌而成。該專利制備微粒的方法只是 將皮片通過物理方法切制為邊長為300?500 μ m的微粒，但微粒直徑過大，無法采用直徑 較小的針頭注射；且最終只是將微粒進行簡單包裝，無法直接注射使用。
[0006] 中國專利CN95106720. 6公開了 一種采用人胎盤為原料制備顆粒性膠原的方法， 其是先對胎盤進行輻照滅活病毒，清洗、粉碎后采用有機試劑提取胎盤中的膠原，最后經(jīng)濃 縮透析并加入利多卡因而得到的可注射膠原溶液。該專利使用原料與本專利相近，但工藝 中使用大量有機試劑提取膠原，易存在有機試劑殘留。
[0007] 中國專利CN201010117490. 5公開了一種制備注射用的透明質(zhì)酸凝膠微粒的方 法。該專利所用原料為透明質(zhì)酸干粉，將其用堿性溶液溶解后加入交聯(lián)劑交聯(lián)，制備得到透 明質(zhì)酸凝膠后再采用透析方法去除交聯(lián)劑。該方法可能無法徹底去除凝膠中的交聯(lián)劑等試 劑殘留，另外清洗效率較低，需要透析4?5天。
[0008] 中國專利CN200810007484. 7公開了一種采用人發(fā)角蛋白制備軟組織填充材料的 方法，該專利利用人發(fā)中段作為原料，經(jīng)過清洗、漂白、研磨加工、凍千、包裝、鈷60輻照處 理，將人發(fā)制備成粉體勻漿及液體人發(fā)角蛋白顆粒。該專利僅采用物理碾磨方法制備粒徑 60?80 μ m的人發(fā)角蛋白顆粒勻漿，根據(jù)發(fā)明人實驗經(jīng)驗，將不溶于水的不同固體物質(zhì)進 行物理碾磨而沒有篩分、均質(zhì)化等后續(xù)步驟，得到的粒徑分布范圍通常在100?1000 μ m， 很難得到較小粒徑范圍。
[0009] 中國專利CN02156797. 2公開了一種注射性膠原蛋白的制備方法及其產(chǎn)品和應 用，該專利通過提取動物組織中的膠原蛋白纖維來制備注射性膠原蛋白，在制備過程中會 完全破壞動物組織原有結構及其他成分，損失了天然組織中具有生物活性或生物功能的天 然成分，只能起到單純的膠原蛋白填充作用。
[0010]由上可見，目前已上市的各種美容植入產(chǎn)品及國內(nèi)同類專利公開的美容植入劑制 備方法均存在一定缺點，尤其是同類膠原植入劑產(chǎn)品除了包含膠原基質(zhì)外，并未包含生物 活性因子，因此其作用僅僅是填充，當這些填充材料被機體分解吸收后，美容修復效果會減 弱或消失，因而該類植入劑產(chǎn)品的美容效果是暫時性的。
[0011 ]羊膜，從細胞滋養(yǎng)層衍化而來，是胚胎雙層膜的內(nèi)層，由上皮細胞層，基底膜和無 血管基質(zhì)組成。羊膜中包含了多種膠原蛋白成分及活性因子，包括膠原、層粘連蛋白（LN)、 表皮生長因子（EGF)、角質(zhì)細胞生長因子（KGF)、堿性成纖維細胞生長因子（bFGF)、肝細胞 生長因子（HGF)、金屬蛋白酶組織抑制因子（TIMP)、其它蛋白酶抑制因子等。
[0012] 正是羊膜中含有以上較多的能夠抑制血管生成、抗炎癥的活性因子，能夠起到促 進眼表上皮化、減輕炎性反應、抑制纖維組織增生和新生血管形成的作用，從而在臨床上廣 泛應用于眼表各類疾病修復、皮膚燒創(chuàng)傷修復等方面。目前尚無采用羊膜為原料制備可注 射充填材料的產(chǎn)品，亦無專利及文獻報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 為了解決現(xiàn)有注射填充劑存在的問題，本發(fā)明提供一種可注射填充植入劑及其制 備方法。
[0014] 作為本發(fā)明的一個方面，涉及一種可注射填充植入劑，所述可注射填充植入劑的 有效成分為生物細胞外基質(zhì)材料，所述生物細胞外基質(zhì)材料的交聯(lián)度為50% -70%，優(yōu)選 為60% -70%，最優(yōu)選為70%。作為優(yōu)化，所述可注射填充植入劑還可含有95% -97%、 ρΗ7· 5的磷酸鹽緩沖液。作為優(yōu)選，所述生物細胞基質(zhì)材料為羊膜基質(zhì)。
[0015] 作為本發(fā)明的另一方面，還涉及一種可注射填充植入劑制備方法，包括如下步 驟：
[0016] 將消毒處理后的生物細胞材料用胰蛋白酶消化；
[0017] 胰蛋白酶消化的生物細胞材料在交聯(lián)體系中交聯(lián)，所述交聯(lián)體系為含有終濃度 0. 1 ?0· 2mol/L 的 EDC、0_ 01 ?〇· 〇5mol/L 的 NHS 和 0· 01 ?0. 2mol/L 的 MES 的水溶液。 [0018] 所述將消毒處理后的生物細胞材料用胰蛋白酶消化是指，將消毒處理后的生物細 胞材料先用純化水清洗，再用ρΗ7· 5的PBS清洗后，用0· 1?0. 5%的胰蛋白酶消化后，再采 用純化水和ρΗ7· 5的PBS清洗。
[0019] 所述胰蛋白酶消化的生物細胞材料在交聯(lián)體系中交聯(lián)是指，在所述交聯(lián)體系中重 復交聯(lián)兩次。
[0020] 所述交聯(lián)體系為含有終濃度0· 2mol/L的EDC、0. 05mol/L的NHS和〇. 2m〇l/L的 MES的水溶液。
[0021] 作為優(yōu)先，所述生物細胞材料是指羊膜。
[0022] 具體地，所述可注射填充植入劑制備方法，步驟如下：
[0023] 將凍存羊膜取出，經(jīng)PBS清洗和清水沖洗后，60?90%酒精浸泡1?2h ;
[0024] 將消毒處理后的羊膜先用純化水清洗，再用pH7. 5的PBS清洗，加入〇. 1 ^ 〇. 5% 的胰蛋白酶，勻速震蕩，室溫0· 5?4h或4°C過夜后，純化水和pH7. 5的PBS清洗；
[0025] 將胰蛋白酶消化后的羊膜在交聯(lián)體系中變性交聯(lián)兩次，用交聯(lián)體系為含有終濃度 0· 2molEDC、0. 05molNHS 和 0. 2molMES 的水溶液；
[0026]改性交聯(lián)的羊膜超高速低溫粉碎，篩分選取粒徑50?400 μ ra范圍的羊膜微粒。 [0027] 本發(fā)明至少實現(xiàn)了如下有益效果：
[0028]本發(fā)明提供的制備方法，可以獲得優(yōu)于現(xiàn)有技術的可注射填充植入劑。
[0029]本發(fā)明所提供的可注射填空植入劑，交聯(lián)程度高，粒徑范圍合適，體內(nèi)降解時間 長，生物相容性好，并可有效保留羊膜本身抑制炎癥、抑制瘢痕生成的活性特點。
[0030] 說明書附圖
[0031] 圖1為本發(fā)明所提供的清洗裝置。
[0032] 1為旋轉軸，2為固定板。

【具體實施方式】
[0033] 本發(fā)明所涉及的實驗材料均可以通過商業(yè)途徑或通過 申請人:獲取。
[0034] 本發(fā)明中所用PBS，在未經(jīng)特別說明的情況，均為pH7. 5。
[0035] 本發(fā)明的清洗過程，可以在本發(fā)明所提供的清洗裝置中進行。本發(fā)明所提供的清 洗裝置為，一個盒體內(nèi)橫貫一個旋轉軸1，在該旋轉軸1上設置若干固定板2,所述固定板2 隨著旋轉軸1的旋轉而旋轉。所述固定板上還可以設置若干貫穿孔?？梢詫⒉牧瞎潭ǖ礁?固定板上，在旋轉軸的作用下，在清洗液中運動，以實現(xiàn)清洗目的。當然，本發(fā)明的清洗過程 也可以不使用本發(fā)明所提供清洗裝置進行，只要達到清洗的目的即可。
[0036] 本發(fā)明的技術路線概述如下（以羊膜為例）：
[0037] 步驟一、前處理：將凍存羊膜取出，分別PBS清洗，清水沖洗，之后60?90%酒精 浸泡1?2h進行病毒滅活。
[0038]本步驟通過對羊膜進行消毒處理，可降低羊膜的微生物負載，同時滅活多種可能 存在的病毒，保證羊膜在后續(xù)處理時的安全性，避免羊膜上攜帶的微生物污染。
[0039] 步驟二、脫細胞處理：將步驟一消毒處理后的羊膜先用純化水清洗次，再用PH7. 5 的PBS清洗，用0· 1?〇· 5 %的胰蛋白酶消化處理，可以在加入胰蛋白酶后勻速震蕩，室溫 0· 5?4h或4°C過夜，最后再采用純化水和PBS清洗。
[0040] 本步驟通過溫和的化學及物理方法去除羊膜中的細胞成分，可降低羊膜的免疫原 性，并同時最大程度保留了羊膜的膠原及活性因子（含有I型膠原300u g/mg以上，III型膠 原38〇ug/mg以上；成纖維細胞生長因子20ug/mg以上，表皮生長因子9ug/mg以上，肝細胞 生長因子ll〇ug/mg以上，角質(zhì)細胞生長因子40ug/mg以上。），為制備保留羊膜生物活性的 植入劑提供原料。
[0041] 步驟三、改性處理：為獲得一種在體內(nèi)保留時間較長，又保留較髙生物特性的膠原 基質(zhì)結構，故將步驟二得到的羊膜用溫和的化學方法進行改性處理，改性所用交聯(lián)體系含 有終濃度0. 1?0. 2molEDC、0. 01?0. 05molNHS、0. 01?0. 2molMES的水溶液；交聯(lián)條件為 室溫下2?20h，重復交聯(lián)兩次。這種溫和的交聯(lián)方法既可以保證低交聯(lián)劑殘留，又有效保 證了交聯(lián)強度。
[0042] 對比結果如下表所示：
[0043]

【權利要求】
1· 一種可注射填充植入劑，其特征在于，所述可注射填充植入劑的有效成分為生物細 胞外基質(zhì)材料，所述生物細胞外基質(zhì)材料的交聯(lián)度為50% -70%。
2·權利要求1所述可注射填充植入劑，其特征在于，所述生物細胞外基質(zhì)材料的交聯(lián) 度為 60% -70%。
3.權利要求2所述可注射填充植入劑，其特征在于，所述可注射填充植入劑含有 95% _97%、ρΗ7· 5的磷酸鹽緩沖液。
4·權利要求3所述可注射填充植入劑，其特征在于，所述生物細胞外基質(zhì)材料的交聯(lián) 度為70%。
5·權利要求1-4任一項所述可注射填充植入劑，其特征在于，所述生物細胞外基質(zhì)材 料為羊膜基質(zhì)。
6. -種可注射填充植入劑制備方法，其特征在于，包括如下步驟： 將消毒處理后的生物細胞材料用胰蛋白酶消化； 胰蛋白酶消化的生物細胞材料在交聯(lián)體系中交聯(lián)，所述交聯(lián)體系為含有終濃度〇. 1? 〇· 2mol/L 的 EDC、0_ 01 ?〇· 05mol/L 的 NHS 和 0· 01 ?0· 2mol/L 的 MES 的水溶液。
7. 權利要求6所述可注射填充植入劑制備方法，其特征在于，所述將消毒處理后的 生物細胞材料用胰蛋白酶消化是指，將消毒處理后的生物細胞材料先用純化水清洗，再用 ?取_5的？33清洗后，用〇_1?〇.5%的胰蛋白酶消化后，再采用純化水和1^7.5的？83清 洗。
8·權利要求7所述可注射填充植入劑制備方法，其特征在于，所述胰蛋白酶消化的生 物細胞材料在交聯(lián)體系中交聯(lián)是指，在所述交聯(lián)體系中重復交聯(lián)兩次。 9_權利要求8所述可注射填充植入劑制備方法，其特征在于，所述交聯(lián)體系為含有終 濃度 0. 2mol/L 的 EDC、0. 05mol/L 的 NHS 和 〇· 2mol/L 的 MES 的水溶液。
10.權利要求6_9任意一項所述可注射填充植入劑制備方法，其特征在于，所述生物細 胞材料是指羊膜。 <
【文檔編號】A61L27/54GK104189956SQ201410427779
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月27日 優(yōu)先權日:2014年8月27日
【發(fā)明者】何越 申請人:陜西瑞盛生物科技有限公司