一種孕甾烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于天然抗菌藥物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及從頂花板凳果中提取分離得到的一種孕甾烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，所述孕甾烷生物堿類(lèi)化合物分子式為C28H46N2O2，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：。本發(fā)明的孕甾烷生物堿類(lèi)化合物DSHP對(duì)耐藥菌表現(xiàn)出全程的生長(zhǎng)抑制作用，在濃度為50μg/mL時(shí)也表現(xiàn)出良好的殺菌活性，與傳統(tǒng)抗生素相比，對(duì)感染的小鼠肝、腎、脾、肺等器官有明顯的保護(hù)作用且不易產(chǎn)生誘導(dǎo)耐藥。
【專(zhuān)利說(shuō)明】-種孕當(dāng)燒生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于天然抗菌藥物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及從頂花板凳果中提取分離得到的一 種孕留焼生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 眾所周知，由于抗生素的濫用，各種細(xì)菌的耐藥性問(wèn)題日益突出，無(wú)藥可治的細(xì)菌 感染將嚴(yán)重影響人類(lèi)的生存。特別是近二十年來(lái)，隨著新型抗菌藥物的發(fā)明和使用，各種致 病菌的新型耐藥性也伴之而來(lái)，事實(shí)表明目前新抗生素的研發(fā)速度完全跟不上細(xì)菌變異產(chǎn) 生耐藥性的速度，造成了臨床用于耐藥菌的有效抗菌藥物正日趨減少，形勢(shì)愈發(fā)嚴(yán)峻，為有 效對(duì)抗日益嚴(yán)重的耐藥細(xì)菌，尋找具有新型結(jié)構(gòu)且不易產(chǎn)生誘導(dǎo)耐藥的抗菌藥物，已經(jīng)成 為全世界高度關(guān)注的焦點(diǎn)和當(dāng)今各國(guó)相關(guān)學(xué)科研究的當(dāng)務(wù)之急。
[0003] 時(shí)至今日，在全球新上市的藥物中，直接或間接來(lái)自于天然產(chǎn)物或其衍生物的仍 占較大比重。生物堿類(lèi)化合物是人類(lèi)研究最早和最多的具有生物活性的一類(lèi)天然有機(jī)化合 物，往往是眾多天然藥物的有效成分，已有大量單體成分及其衍生物應(yīng)用于臨床。黃楊科植 物富含生物堿類(lèi)成分，由于藥理活性廣泛，該科許多植物長(zhǎng)久W來(lái)已被藥用，如細(xì)葉黃楊、 金絲矮巧巧、頂花板凳果、野扇花、東方野扇花、長(zhǎng)柄野扇花、大葉野扇花等均為較有名的藥 用植物。板凳果屬植物隸屬于黃楊科，共有H個(gè)種，美洲產(chǎn)一種，我國(guó)產(chǎn)有兩個(gè)種和兩個(gè)變 種，分別為頂花板凳果、板凳果、多毛板凳果和光葉板凳果，其中頂花板凳果的干燥全草在 陜西俗名為"捆仙走"，是秦嶺"太白走藥"之一，從該植物獲得的生物堿化合物隸屬于孕留 焼類(lèi)富貴草型生物堿，對(duì)該生物堿化合物進(jìn)行抑菌殺菌試驗(yàn)，對(duì)耐藥菌表現(xiàn)出全程的生長(zhǎng) 抑制作用及良好的殺菌活性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明涉及一種來(lái)源于頂花板凳果的孕留焼生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中 的應(yīng)用。本發(fā)明涉及的孕留焼生物堿類(lèi)化合物是從頂花板凳果中分離提取出來(lái)，用于對(duì)抗 日益嚴(yán)重的耐藥細(xì)菌，尋找具有新型結(jié)構(gòu)且不易產(chǎn)生誘導(dǎo)耐藥的抗菌藥物。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種孕留焼生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，所 述孕留焼生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，所述孕留焼生物堿類(lèi)化合物分子式為 C2sH4eN2〇2,化學(xué)名稱(chēng)為20〇-二甲胺基-3目-二甲帰丙醜胺基-16目-輕基-孕留-5化)-帰， 簡(jiǎn)稱(chēng)為DSHP，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：

【權(quán)利要求】
1?一種孕甾烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特征在于：所述孕甾烷生 物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，所述孕留烷生物堿類(lèi)化合物分子式為C28H46N 2O2, 化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種孕留烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特 征在于：所述孕留烷生物堿類(lèi)化合物的來(lái)源是從頂花板凳果千燥全草中提取獲得。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種孕留烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特 征在于：所述孕留烷生物堿類(lèi)化合物的提取方法具體步驟如下：步驟1)取頂花板凳果干燥 全草15 kg，經(jīng)剪碎后，加入2〇 L質(zhì)量百分比濃度為90%的乙醇進(jìn)行回流提取，共提取3次， 每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收溶劑，得濃縮的乙醇提取物；步驟2)將濃縮的乙醇提取 物分散于10 L水中，用質(zhì)量百分比濃度2%稀鹽酸調(diào)整pH值至2,抽濾除去不能溶解物質(zhì)得 酸性母液；步驟3)用質(zhì)量百分比濃度4%氨水調(diào)整酸性母液pH值至9,得到的堿性溶液用 等體積石油醚進(jìn)行萃取脫脂，而后堿水層再用等體積的氯仿萃取兩次，濃縮后得氯仿萃取 物即為總生物堿；步驟4)對(duì)總生物堿用氧化鋁柱層析進(jìn)行分離提純，接收流份，并用硅膠 薄層層析檢測(cè)，收集R f值在0? 25?0? 40處顯示黃色斑點(diǎn)的流份進(jìn)行ODS反相柱層析，以甲 醇-水的混合溶劑洗脫，接收流份經(jīng)薄層層析檢測(cè)，合并含該孕留烷生物堿類(lèi)化合物的第 19?26流份，減壓蒸干溶劑后得濃縮物，濃縮物用甲醇溶解，再采用S印hadex LH-20凝膠 柱層析除去大分子類(lèi)雜質(zhì)，接收流份進(jìn)行薄層層析檢測(cè)，合并含該孕留烷生物堿類(lèi)化合物 的第15?22流份，減壓蒸干溶劑后得到濃縮物，該濃縮物再采用半制備型高效液相色譜進(jìn) 行分離純化，得到該孕留烷生物堿類(lèi)化合物純品。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種孕留烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特 征在于：所述的對(duì)總生物堿用氧化鋁柱層析進(jìn)行分離提純：以氯仿-甲醇-水的混合溶劑 進(jìn)行梯度洗脫，取下層作為洗脫液，洗脫液的體積比依次為30 :1:0、20:1:0、10:1 :1、8:1:1、 9:2:1、5: 2:1、7:3:1和6.5:3:1，每個(gè)梯度洗脫液用量為2 1，按5〇〇1111為1個(gè)流份接收。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種孕留烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特 征在于：所述硅膠薄層層析檢測(cè)，展開(kāi)劑為15:4:1氯仿-甲醇-水混合溶劑的下層，顯色劑 為改良的碘化鉍鉀溶液。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種孕留烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特 征在于：所述ODS反相柱層析，以甲醇-水的混合溶劑洗脫，洗脫液的體積比依次為1:2， 1 :1，2:1，3:2和5:1，每個(gè)梯度洗脫液用量為40〇1^，按5〇1111為1個(gè)流份接收。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種孕留烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特 征在于：所述采用Sephadex LH-20凝膠柱層析除去大分子類(lèi)雜質(zhì)，甲醇為流動(dòng)相，用量為 800ml，按20 mL為1個(gè)流份接收。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種孕留烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的應(yīng)用，其特 征在于：所述半制備型高效液相色譜進(jìn)行分離純化，色譜條件為：YMC-Triart C18液相色 譜柱，柱高250 mm,柱半徑20 mm，質(zhì)量百分比濃度78%的甲醇水溶液為流動(dòng)相,其中含質(zhì)量 百分比3%的氨水，流速8 mL/min，室溫下UV-VIS檢測(cè)器225 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)，保留時(shí)間為 18 min，得到孕留烷生物堿類(lèi)化合物的純品。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的一種孕留烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物中的 應(yīng)用，其特征在于：所述孕留烷生物堿類(lèi)化合物在制備抗菌藥物時(shí)能單獨(dú)使用或與其他輔 料混合，其劑型是注射劑、散劑、丸劑、膠囊劑、片劑、膜劑、膏劑、酊劑、顆粒劑或氣霧劑。
【文檔編號(hào)】A61P31/04GK104224799SQ201410436114
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】湯海峰, 毛水龍, 王嘯洋, 薛曉燕, 趙慧, 羅曉星, 華棟, 劉楊, 曹蔚 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)