一種特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用，特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA為由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示核苷酸序列組成的雙鏈RNA；對其進(jìn)行修飾得到的修飾后RNA；體外試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的RNA可以特異高效地抑制XOR基因表達(dá)，降低脂滴和抑制甘油三酯的沉積。本發(fā)明可以應(yīng)用于非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病機(jī)制研究和非酒精性脂肪肝潛在治療。本發(fā)明具有重要價(jià)值。
【專利說明】—種特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002]RNA干擾(RNA interference，RNAi)是一種進(jìn)化上保守的抵御轉(zhuǎn)基因或外來病毒侵犯的防御機(jī)制，指內(nèi)源性或外源性與靶基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA存在同源互補(bǔ)序列的雙鏈RNA(double-stranded RNA, dsRNA)在細(xì)胞內(nèi)特異降解該mRNA,從而致使特異性的基因有效封閉的過程，是一種序列特異性的轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcript1nal genesilencing,PTGS)0 RNAi技術(shù)已成功應(yīng)用于多種生物基因功能的研究。針對目的基因構(gòu)建siRNA，利用RNAi技術(shù)關(guān)閉該基因的表達(dá)，根據(jù)表型的改變可以分析基因的功能。基因敲除技術(shù)需要較長時(shí)間永久性地關(guān)閉某個(gè)基因的表達(dá)，而RNAi技術(shù)則可在I周內(nèi)，甚至2天內(nèi)可控性地關(guān)閉10個(gè)基因，因此RNAi可以較靈活、快速得用于造模及后續(xù)的機(jī)制研究。籍此，RNAi技術(shù)已經(jīng)廣泛運(yùn)用于疾病發(fā)病機(jī)制的研究。
[0003]裸siRNA(未修飾的siRNA)容易降解，其半衰期短，難以攝取，靶向性的缺乏誘發(fā)哺乳動(dòng)物天然免疫反應(yīng)，嚴(yán)重者可導(dǎo)致細(xì)胞和試驗(yàn)動(dòng)物死亡，故應(yīng)用范圍不廣。而化學(xué)修飾的siRNA可以使其具有良好的熱力學(xué)穩(wěn)定性、細(xì)胞穿透力、靶基因沉默活性以及藥物代謝學(xué)特征，具有不可比擬的優(yōu)勢。
[0004]非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfatty liver disease, NAFLD)是指除外酒精和其他明確肝損因素所致的以肝細(xì)胞脂肪變性為主要特征的臨床病理綜合征。隨著生活水平的提高和膳食結(jié)構(gòu)的改變，NAFLD患病率近年來逐年增高，我國已達(dá)到15%左右，西方發(fā)達(dá)國家更是高達(dá)20%-30%，成為最常見的慢性肝病之一，構(gòu)成日益嚴(yán)重的社會(huì)健康問題。
[0005]NAFLD包括一系列相互聯(lián)系的病理改變，從單純性脂肪肝到脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis, NASH)、肝纖維化和肝硬化?？偟膩碚f，單純性NAFLD是一種良性疾病，而NASH卻可以逐漸向肝硬化、肝癌等終末期肝病進(jìn)展。目前NAFLD發(fā)生發(fā)展機(jī)制尚未完全明確。“二次打擊”學(xué)說認(rèn)為，胰島素抵抗引起的外周脂肪分解增加和高胰島素血癥，是導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪變性的首要因素；脂肪變性的肝細(xì)胞對內(nèi)、外源性損害因子的敏感性增加，發(fā)生線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化損傷等，進(jìn)一步導(dǎo)致炎癥、肝細(xì)胞壞死和纖維化。然而“二次打擊”學(xué)說并不能完全解釋NAFLD的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，提示還存在其他機(jī)制參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展。
[0006]肝臟是重要的代謝器官，從代謝功能變化切入或許可為認(rèn)識NAFLD發(fā)生發(fā)展提供新的線索。尿酸是機(jī)體嘌呤代謝的終末產(chǎn)物，主要在肝臟中產(chǎn)生并經(jīng)腎臟排泄。通過大樣本橫斷面研究發(fā)現(xiàn)，血清尿酸水平升高與NAFLD患病率呈正相關(guān)；這一發(fā)現(xiàn)已相繼在美國、日本、韓國等人群中得到證實(shí)[8-10]。我們繼而開展了為期3年的前瞻性研究以分析血清尿酸水平變化與NAFLD的因果聯(lián)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血清尿酸水平升高顯著增加NAFLD的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；該結(jié)果也在韓國人群中的得到證實(shí)。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，降尿酸治療顯著改善NAFLD模型沙鼠肝臟脂肪變性程度和血清膽固醇代謝。以上研究從三個(gè)不同角度提示尿酸代謝與NAFLD存在密切聯(lián)系。然而，目前尿酸代謝與NAFLD關(guān)系研究中仍有兩個(gè)重要問題尚未解決，其一是從微觀角度來看，尿酸代謝具體通過何種分子機(jī)制參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展尚不清楚；其二是從宏觀角度來看，改善尿酸代謝是否對NAFLD患者同樣具有積極作用尚有待臨床研究證實(shí)。
[0007]深入認(rèn)識尿酸代謝參與NAFLD發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制可為相關(guān)臨床研究的開展提供更多依據(jù)。從代謝通路分析，血清尿酸水平升高主要與肝臟合成增加和腎臟外排減少有關(guān)。黃嘌呤氧化還原酶(xanthine oxidoreductase,X0R)是催化黃嘌呤和次黃嘌呤生成尿酸的限速酶，其表達(dá)具有器官特異性，其中肝臟是XOR表達(dá)最豐富的器官之一。我們預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，NAFLD模型動(dòng)物(ob小鼠)肝臟XOR mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)，且XOR活性亦明顯增加。NAFLD肝臟中XOR表達(dá)及活性變化趨勢和血清尿酸水平變化一致，提示尿酸代謝與NAFLD聯(lián)系的深層機(jī)制可能與尿酸合成的限速酶XOR有關(guān)。
[0008]XOR屬于含鑰脫氫酶黃素蛋白家族，在人體中以黃嘌呤脫氫酶(XDH)和黃嘌呤氧化酶(XO)兩種可互相轉(zhuǎn)換的形式存在，兩者都是人體2號染色體P22位點(diǎn)同一基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)產(chǎn)物。對XOR功能的認(rèn)識曾一度停留在參與嘌呤代謝這一層面，但近年來越來越多的研究表明，XOR具有很多其他的生物學(xué)功能。首先，XOR催化合成尿酸的同時(shí)也產(chǎn)生活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS), XOR通過參與ROS生成而在組織氧化損傷中起重要作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明在缺血/再灌注損傷等氧化性組織損傷過程，XOR活性增強(qiáng)導(dǎo)致的ROS積聚是造成組織損傷的直接原因之一；而運(yùn)用別嘌呤醇(allopurinol)抑制XOR活性，能顯著減輕缺血/再灌注損傷。XOR還影響NADH的活性，調(diào)節(jié)ROS的生成。其次，XOR對免疫和炎癥反應(yīng)具有調(diào)節(jié)作用=Gibbings等發(fā)現(xiàn)，XOR可調(diào)節(jié)單核吞噬細(xì)胞的炎癥反應(yīng)；Ohtsubo等發(fā)現(xiàn),XOR表達(dá)升高增加尿酸的合成，并進(jìn)一步增加環(huán)氧合酶-2 (C0X-2)的表達(dá)，參與炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。新近，XOR在脂質(zhì)代謝中的調(diào)節(jié)作用開始受到關(guān)注=Cheung等觀察到脂肪細(xì)胞XOR表達(dá)和活性顯著升高，且XOR表達(dá)水平與脂肪組織大小呈正相關(guān)，而通過小干擾RNA(SiRNA)降低XOR的表達(dá)能有效抑制脂肪細(xì)胞分化；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，XOR對脂肪細(xì)胞脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用與其對過氧化物酶體增殖物激活受體Y (PPARy)表達(dá)的調(diào)節(jié)有關(guān)。
[0009]在NAFLD中XOR是否發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。我們推測，XOR可能通過以下三方面參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展，具體包括:(I)調(diào)節(jié)ROS合成參與氧化損傷:X0R的表達(dá)和活性上調(diào)，導(dǎo)致ROS生成增加，加重肝臟氧化損傷；(2)調(diào)節(jié)C0X-2表達(dá)參與炎癥反應(yīng):X0R通過調(diào)節(jié)尿酸的合成間接對C0X-2的表達(dá)具有調(diào)節(jié)作用，而C0X-2可進(jìn)一步介導(dǎo)炎癥反應(yīng)參與NAFLD的發(fā)生發(fā)展。(3)調(diào)節(jié)PPAR Y表達(dá)參與肝臟脂質(zhì)代謝:PPAR Y是脂質(zhì)代謝的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子3(?表達(dá)上調(diào)使得？?41?^表達(dá)增加，并由此導(dǎo)致肝臟脂質(zhì)蓄積，可能是XOR參與NAFLD發(fā)生發(fā)展的主要機(jī)制之一。采用RNAi技術(shù)進(jìn)行XOR在NAFLD發(fā)病中機(jī)制的研究是對NAFLD發(fā)病機(jī)制的重要補(bǔ)充


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA及其應(yīng)用。
[0011]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:一種特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA,由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示核苷酸序列組成的雙鏈RNA。
[0012]一種對siRNA進(jìn)行修飾得到的修飾后RNA，所述修飾具體為:用甲氧基修飾所述siRNA中的嘧啶核苷酸的核糖的2’羥基。
[0013]一種siRNA或修飾后RNA在抑制XOR基因表達(dá)中的應(yīng)用。
[0014]所述XOR基因序列如SEQ ID N0.3所示。
[0015]一種siRNA或修飾后RNA在非酒精性脂肪肝潛在治療的應(yīng)用。
[0016]一種siRNA或修飾后RNA在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制研究中的應(yīng)用。
[0017]一種研究降低被誘導(dǎo)成NAFLD體外模型的人肝L02細(xì)胞的脂變，其特征在于，是將權(quán)利要求1或2所述的RNA導(dǎo)入目的細(xì)胞，得到脂滴下降。
[0018]本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明提供能夠特異高效抑制XOR基因表達(dá)的siRNA及對其進(jìn)行修飾得到的修飾后RNA。體外試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的RNA可以特異高效地抑制XOR基因表達(dá)，降低脂滴和抑制甘油三酯的沉積。本發(fā)明可以應(yīng)用于非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制的研究，具有重大價(jià)值。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1為Western blotting檢測轉(zhuǎn)染siRNA后!fepG2細(xì)胞中XOR的表達(dá)水平的掃描圖。
[0020]圖2為Western blotting檢測轉(zhuǎn)染siRNA后HepG2細(xì)胞中XOR的表達(dá)水平半定量。
[0021]圖3為轉(zhuǎn)染siRNA后各組!fepG2細(xì)胞脂變情況的油紅O染色圖。
[0022]圖4為轉(zhuǎn)染siRNA后各組!fepG2細(xì)胞脂變情況的甘油三酯定量圖。

【具體實(shí)施方式】
[0023]本發(fā)明特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA，它是由SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示核苷酸序列組成的雙鏈RNA。將所述siRNA進(jìn)行修飾后得到的修飾后RNA。對合成的siRNA進(jìn)行化學(xué)修飾，能增加siRNA的穩(wěn)定性，同時(shí)有效抑制目的基因的表達(dá)。siRNA的化學(xué)修飾主要有三類:磷酸骨架修飾、核糖修飾和堿基修飾。其中，核糖修飾是siRNA化學(xué)修飾最重要的方式。為提高siRNA在體內(nèi)抵抗核酸酶水解的能力，本發(fā)明中對XOR siRNA的核苷酸序列進(jìn)行2’- O-甲基(2’_ O Me)修飾。2’- O-甲基這種修飾方式能增強(qiáng)其在血清中的穩(wěn)定性，降低免疫刺激反應(yīng)強(qiáng)度。具體如下:用甲氧基修飾所述siRNA中的嘧啶核苷酸的核糖的2’羥基，得到的修飾后RNA。
[0024]所述siRNA或所述修飾后RNA在抑制XOR基因表達(dá)中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述XOR基因序列如SEQ ID N0.3所示。
[0025]所述siRNA或所述修飾后RNA可應(yīng)用于改善脂肪肝。
[0026]所述siRNA或所述修飾后RNA可應(yīng)用于非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制研究。
[0027]以下的實(shí)施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的試驗(yàn)材料，如無特殊說明，均為自常規(guī)生化試劑商店購買得到的。
[0028]統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)分析軟件分析，各樣本均數(shù)的比較采用Studentt test分析。
[0029]人正常肝臟細(xì)胞株H印G2，購于美國模式培養(yǎng)物研究所(ATCC)。
[0030]高脂飼料和正常對照飼料購自浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。兔抗人XOR—抗、兔抗人GAPDH —抗購自ProtienTech公司?？雇肐gG 二抗、蘇木素購自北京中杉金橋公司。油紅
O購自廣州奧凱公司。甘油三酯測定試劑盒、RIPA裂解液購自普利萊公司。BCA法蛋白測定試劑盒購自Thermo。Lipofectamine ? 2000購自Invitrogen。油酸鈉和軟脂酸鈉購自sigma 公司。PBS 購自 HyClone 公司?；瘜W(xué)發(fā)光劑 Supersignal West Pico 購自 Thermo。[0031 ] 實(shí)施例1、siRNA設(shè)計(jì)合成
通過美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)數(shù)據(jù)庫中獲取人XOR mRNA的序列全長(NM_000379.3)，跟據(jù)RNAi原理，結(jié)合設(shè)計(jì)軟件，在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)合成并針對4個(gè)轉(zhuǎn)錄本篩選出有效的針對人XOR基因的一段21nt的siRNA。進(jìn)行BLAST比對檢查以保證和其他基因沒有同源性。
[0032]XOR siRNA 序列為:
5’ -CGGAAGAGUGAGGUUGACAAGUUCA-3，(正義鏈)
5’ -UGAACUUGUCAACCUCACUCUUCCG-3’(反義鏈)
由上海英濰捷基貿(mào)易有限公司(廠址:上海市東三環(huán)北路2號南銀大廈1711，郵編:200051)進(jìn)行化學(xué)合成:以NTP為原料，利用ABI3900核酸合成儀分別化學(xué)合成單鏈RNA，最后在退火緩沖液的條件下各單鏈RNA退火形成雙鏈RNA。為提高siRNA在體內(nèi)的穩(wěn)定性，在各鏈化學(xué)合成之前，利用化學(xué)反應(yīng)將各鏈合成原料中的嘧啶核苷酸的核糖進(jìn)行2’羥基的甲氧基替代修飾。
[0033]實(shí)施例2、XOR siRNA在體外對L02細(xì)胞XOR基因表達(dá)的影響一、分組轉(zhuǎn)染
將L02細(xì)胞均勻鋪在6孔板中，分為4組:
高脂實(shí)驗(yàn)組:含有10% (體積百分含量)滅活的新生牛血清、666ymol/L的油酸鈉和333 μ mo I/L的軟脂酸鈉的DMEM/F12培養(yǎng)基；轉(zhuǎn)染200pmol實(shí)施例1的XOR siRNA。
[0034]高脂對照組:含有10% (體積百分含量)滅活的新生牛血清、666 μ mol/L的油酸鈉和333 μ mol/L的軟脂酸鈉的DMEM/F12培養(yǎng)基；轉(zhuǎn)染200pmol實(shí)施例1的陰性對照siRNA。
[0035]正常實(shí)驗(yàn)組:含有10% (體積百分含量)滅活的新生牛血清、100U/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)基；轉(zhuǎn)染200pmol實(shí)施例1的XOR siRNA。
[0036]正常對照組:含有10% (體積百分含量)滅活的新生牛血清、100U/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)基；轉(zhuǎn)染200pmol實(shí)施例1的陰性對照siRNA。
[0037]四組細(xì)胞先常規(guī)培養(yǎng)48h，然后根據(jù)組別進(jìn)行轉(zhuǎn)染(按Lipofectamine ? 2000試劑說明書操作)，轉(zhuǎn)染后繼續(xù)培養(yǎng)36h后換液一次，72小時(shí)后根據(jù)組別換相應(yīng)的培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24h后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；培養(yǎng)條件:置于37°C、5% C02、飽和濕度的C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
[0038]二、Western blotting 檢測 XOR 蛋白的表達(dá)
吸棄6孔板中的培養(yǎng)基，用冷的PBS洗滌2次，每孔加120 μ I預(yù)冷的PBS和40 μ I4X Loading Buffer [1.0M Tris-HCL (PH 6.8) 2.4ml，十二烷基磺酸鈉(SDS) 0.8g，二巰基蘇糖醇(DTT) 0.6g，甘油4ml]，充分裂解后收集裂解液，于95°C加熱變性5分鐘，4°C、12000g離心5min后收集上清液，每個(gè)樣品取8 μ I上樣，行12%的SDS-PAGE電泳，蛋白充分分離后，轉(zhuǎn)移到NC膜上，于含5%脫脂奶粉TBST的封閉液中，室溫封閉lh，取出膜用TBST溶液洗滌5minX5次，將膜在合適的分子量處剪開，分別用XOR—抗(1:200稀釋)和內(nèi)參GAPDH 一抗(I:1000稀釋)室溫孵育2h，然后TBST洗膜5minX5次，與抗兔IgG 二抗(I:5000稀釋)室溫孵育lh，將膜與化學(xué)發(fā)光試劑孵育5min進(jìn)行顯色反應(yīng)，在暗室中壓X膠片曝光，洗膠片。對條帶進(jìn)行光密度掃描。檢測各組ECHSl蛋白和內(nèi)參GAPDH蛋白所對應(yīng)條帶A值，然后將AECHS1/AGAPDH的比值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析(Quantity One軟件)。
[0039]結(jié)果如圖1、圖2。與陰性對照組比較，XOR siRNA轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中XOR基因表達(dá)顯著下調(diào)(Ρ〈0.01)。
[0040]實(shí)施例3、XOR siRNA在體外對L02細(xì)胞脂變的影響一、分組轉(zhuǎn)染
將L02細(xì)胞均勻鋪在6孔板中，分為4組。具體分組同實(shí)施例2的步驟一。
[0041]二、XOR siRNA在體外對L02細(xì)胞脂變的影響分別將步驟一后的細(xì)胞進(jìn)行如下I或2的實(shí)驗(yàn)。
[0042]1、油紅染色
在6孔板中加入4%多聚甲醛在4°C固定30min，蒸餾水洗兩次后加入油紅O稀釋液(油紅O 0.5g溶于異丙醇10ml配成的飽和液與蒸懼水按3:2稀釋,靜置5_10min后過濾使用)，避光染色10-15min，水洗一次后用60%乙醇鏡下分化至間質(zhì)清晰，水洗兩次后Mayer氏蘇木素復(fù)染核8s，水洗兩次后在自來水中反藍(lán)30min。對染色后的細(xì)胞顯微照相。
[0043]油紅O能夠特異性地將脂滴染成鮮紅色，直觀得反應(yīng)細(xì)胞中脂滴形成情況。結(jié)果如圖3所示，油紅O染色顯示高脂實(shí)驗(yàn)組的脂滴明顯低于高脂對照組，有顯著性差異(P<0.05)。這表明:XOR siRNA能改善L02細(xì)胞的脂變。
[0044]2、甘油三酯測定
按照甘油三酯測定試劑盒說明書進(jìn)行操作。具體如下:將6孔板細(xì)胞用冷PBS洗滌2次，每孔加入試劑盒裂解液200 μ 1，振蕩裂解細(xì)胞30min，取50 μ I裂解液采用BCA法蛋白定量試劑盒進(jìn)行蛋白含量測定，其余50 μ I裂解液轉(zhuǎn)移到600 μ I離心管，70°C加熱30min，室溫2000g離心5min，上層清液用于酶學(xué)測定。96孔酶標(biāo)版中將標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品與工作液按說明書中列表所示體積混勻，37°C反應(yīng)1min后用酶標(biāo)儀在490nm波長下檢測，用Excel作圖分析數(shù)據(jù),結(jié)合蛋白濃度以每mg蛋白濃度校正甘油三酯含量。
[0045]甘油三酯是脂變細(xì)胞中脂滴的主要成分，測定甘油三酯能夠?qū)⒓?xì)胞的脂變情況進(jìn)一步量化。結(jié)果如圖4所示，高脂實(shí)驗(yàn)組的甘油三酯低于高脂對照組，有顯著性差異(P〈0.05)。這表明:XOR siRNA能降低L02細(xì)胞甘油三酯的沉積，與油紅O染色結(jié)果相符。
[0046]以上兩個(gè)結(jié)果共同說明在體外L02細(xì)胞中，XOR siRNA可降低脂滴和抑制甘油三酯的沉積。由此可見，XOR在體外促進(jìn)L02細(xì)胞脂肪變中的關(guān)鍵地位。
【權(quán)利要求】
1.一種特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA，其特征在于，它是由SEQ ID N0.1和SEQ IDN0.2所示核苷酸序列組成的雙鏈RNA。
2.一種對權(quán)利要求1所述siRNA進(jìn)行修飾得到的修飾后RNA，其特征在于，所述修飾具體為:用甲氧基修飾所述siRNA中的嘧啶核苷酸的核糖的2'羥基。
3.一種權(quán)利要求1所述特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA或權(quán)利要求2所述修飾后RNA在抑制XOR基因表達(dá)中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于:所述XOR基因序列如SEQID N0.3所示。
5.一種權(quán)利要求1所述特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA或權(quán)利要求2所述修飾后RNA在非酒精性脂肪肝潛在治療的應(yīng)用。
6.一種權(quán)利要求1所述特異抑制XOR基因表達(dá)的siRNA或權(quán)利要求2所述修飾后RNA在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病機(jī)制研究中的應(yīng)用。
7.一種研究降低被誘導(dǎo)成NAFLD體外模型的人肝L02細(xì)胞的脂變，其特征在于，是將權(quán)利要求I或2所述的RNA導(dǎo)入目的細(xì)胞，得到脂滴下降。
【文檔編號】A61K48/00GK104232644SQ201410444873
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月3日
【發(fā)明者】虞朝輝, 萬星勇, 徐承富, 余偉來, 厲有名 申請人:浙江大學(xué)