納米藥物透皮制劑在腫瘤中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及納米藥物透皮制劑的應(yīng)用，所述的納米藥物透皮制劑在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的納米藥物透皮制劑是由下列方法制備得到的，先將藥物制備成納米藥物，然后再將納米藥物制備成水凝膠透皮制劑、軟膏透皮制劑或微針透皮制劑。本發(fā)明選擇了合適的凝膠基質(zhì)、軟膏基質(zhì)、微針材料、促透劑等材料，制備的納米藥物透皮制劑使用方便，具有很好的生物相容性和較高的生物利用度，提高病人的適應(yīng)性；該納米藥物透皮制劑能降低病變細(xì)胞的耐藥性，治療效果好。
【專利說明】納米藥物透皮制劑在腫瘤中的應(yīng)用
[0001]本申請是納米藥物透皮制劑及其制備方法的分案申請，原申請的申請日:2013年5月31日、申請?zhí)?201310211362.0、發(fā)明創(chuàng)造名稱:納米藥物透皮制劑及其制備方法。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說，是納米藥物透皮制劑在腫瘤中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0003]制藥行業(yè)從藥物發(fā)現(xiàn)，到臨床的應(yīng)用，最后一個環(huán)節(jié)是藥物制劑。其中有一部分藥物需要長期給藥才能治愈，還有一部分需要靶向等局部給藥。要達(dá)到這些目的，原料藥必須要制備成相應(yīng)的劑型。對于體外局部病灶，需要局部體表給藥，如小孩血管瘤疾病，只需要局部給藥。
[0004]血管瘤是小孩常見的一種疾病，新生嬰兒發(fā)病率為2%?3%，0?1歲發(fā)病率為10%左右，早產(chǎn)或偏輕的新生兒發(fā)病率約為20%?30%。目前有手術(shù)治療、激光治療等，但是這些方法均有不同程度的毒副作用。2008年《新英格蘭醫(yī)學(xué)》雜志報道了口服普萘洛爾(心得安)能起到很好的療效，但是口服普萘洛爾存在潛在的心臟毒副作用。外用的擦劑、軟膏劑或凝膠劑可根據(jù)需要局部給藥，提高藥物局部濃度，延長藥物的釋放或擴(kuò)散過程，毒性低、起效快且使用方便。中國專利申請⑶201210420731.2，申請公布日2013年1月16日，公開了一種治療嬰幼兒淺表血管瘤的鹽酸普萘洛爾凝膠，由于是單個鹽酸普萘洛爾分子起治療作用，對于腫瘤來說，很容易產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致不再起作用，甚至治療失敗。
[0005]為了克服這個久攻不克的問題，需要一種新的藥物制劑，不僅能解決普萘洛爾存在的潛在心臟毒副作用的問題，還能直接殺死腫瘤細(xì)胞而不至于產(chǎn)生耐藥性。除了普萘洛爾，對于其他可透皮治療的藥物，也有必要制備成這樣的透皮制劑。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種納米藥物透皮制劑在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:
一種納米藥物透皮制劑在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的納米藥物透皮制劑是由下列方法制備得到的，所述方法步驟如下:
(1)將藥物制備成納米藥物，所述藥物在納米藥物中的重量百分比為0.1%?90%，優(yōu)選為10%?50%，所述的納米藥物的粒徑為10?5000納米，優(yōu)選為10?500納米；
(2)將步驟(1)制備的納米藥物按照1:1?1:10的重量比分散在重量百分比濃度為
0.5%?80%的水凝膠溶液中，水凝膠溶液的濃度優(yōu)選為5%?30% (^),同時加入促透劑、防腐劑和保濕劑，充分混勻后放到0?41保存，然后放到一 40?一 201預(yù)凍4?12小時，其中0?41保存和一 40?一 201預(yù)凍步驟按順序可重復(fù)1?4次，最后再置于0?41保存得到納米藥物水凝膠透皮制劑，混勻方式可選擇乳化、渦旋或超聲，混勻時間優(yōu)選為1?5分鐘；或
將步驟(1)制備的納米藥物按照1:1?1:10的重量比分散在軟膏基質(zhì)中，混合均勻后即得到納米藥物軟膏透皮制劑，分散方式可選擇乳化、渦旋或超聲，分散時間優(yōu)選為1?5分鐘，所述的軟膏基質(zhì)選自水溶性基質(zhì)、油脂性基質(zhì)或乳劑型基質(zhì)中的一種；或
將步驟(1)制備的納米藥物按照1:1?1:10的重量比黏附在微針表面或裝載在微針內(nèi)部或與微針材料充分混勻后澆制在微針模具里得到納米藥物微針透皮制劑。
[0008]步驟(1)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟:將藥物溶解在水中，然后加入多孔納米顆粒，攪拌使得藥物充分吸附在多孔納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成納米藥物。
[0009]所述的納米顆粒為有機(jī)納米顆粒或無機(jī)納米顆粒，可選自聚苯乙烯納米顆粒、交聯(lián)葡聚糖納米顆粒、二氧化娃納米顆粒、二氧化鈦納米顆粒、輕基磷灰石納米顆粒、四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵顆粒、金納米顆粒、三氧化二招納米顆粒、碳酸韓納米顆粒、磷酸鈣納米顆粒、碳酸鎂納米顆粒、氫氧化鎂納米顆?；蜚y納米顆粒中的一種或幾種。
[0010]步驟(1)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟:將藥物溶解在水中形成藥物水溶液，然后將藥物水溶液轉(zhuǎn)移到聚乙二醇水溶液中，充分混勻后于冰箱中預(yù)凍，之后凍干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并離心除去聚乙二醇得到納米藥物；或
將藥物包裹在脂質(zhì)體、聚合物納米顆粒中形成納米藥物；或
將藥物溶解在水中形成藥物水溶液，通過加入不良的溶劑使藥物以納米顆粒的形式析出而得到納米藥物；或
將藥物用超細(xì)粉粉碎儀器進(jìn)行粉碎直接制備成納米藥物。
[0011]步驟(1)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟:將藥物溶解在水中，然后與含有聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇的二氯甲烷溶液攪拌混勻，再轉(zhuǎn)移至聚乙烯醇水溶液中并進(jìn)行勻漿，形成納米藥物膠束。
[0012]步驟(2)中所述的水凝膠溶液中的凝膠基質(zhì)選自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、乙基纖維素、聚乙二醇、羧基乙烯共聚物、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚丙烯酸鈉、聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸聚合物、聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇聚合物、聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸聚合物、聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇聚合物、海藻酸鈉、淀粉、甘油、明膠中的一種或幾種。
[0013]步驟(2)中所述的促透劑選自薄荷醇、十四烷基硫酸鈉、香葉醇、茴香腦或癸基甲基亞砜中的一種，所述的防腐劑選自苯甲酸鈉、三氯叔丁醇、苯扎溴銨、山梨酸、羥苯乙酯或尼泊金丁酯中的一種，所述的保濕劑為甘油、丙二醇或二者的混合物。
[0014]步驟(2)中所述的軟膏基質(zhì)選自硬脂酸甘油酯、硬脂酸、蜂蠟、羊毛脂、凡士林、石蠟、硅酮、薄荷油、桉葉油、植物油、明膠或羧甲基纖維素鈉中的一種或幾種。
[0015]步驟(2)中所述的微針是指金屬微針、無機(jī)微針或聚合物微針，所述的無機(jī)微針是指無機(jī)硅微針。
[0016]所述的藥物包括小分子藥物和大分子藥物，所述的小分子藥物選自普萘洛爾、阿霉素、環(huán)磷酰胺、更生霉素、博萊霉素、柔紅霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡鉬、卡莫司汀、司莫司汀、順鉬、依托泊苷、喜樹堿及其衍生物、苯芥膽留醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、長春堿、長春新堿、它莫西芬、哌泊舒凡、環(huán)磷酰胺、氟他胺及其衍生物、潑尼松、雷帕霉素、環(huán)孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星或鹽酸依匹斯汀中的一種，所述的大分子藥物選自促紅細(xì)胞生成素、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子、疫苗、干擾素、生長激素、胰島素、表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、胰島素生長因子、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、血小板生長因子、內(nèi)皮生長因子、神經(jīng)生長因子、骨衍生性生長因子、骨形成蛋白、組織多肽抗原、抗體、凝血因子VII1、凝血因子IX、遺傳因子、反義核苷酸、小分子八或基因中的一種。
[0017]所述的腫瘤藥物為血管瘤藥物。
[0018]本發(fā)明優(yōu)點在于:
第一、本發(fā)明選擇了合適的凝膠基質(zhì)、軟膏基質(zhì)、微針材料、促透劑等材料以及透皮制齊啲制備方法，制備的納米藥物透皮制劑的包封率高，可以達(dá)到90%以上，克服了口服或注射等全身性給藥帶來的毒副作用，尤其是在治療小孩血管瘤疾病中，可以克服普萘洛爾全身給藥帶來的毒副作用；
第二、采用本發(fā)明方法可制備納米藥物水凝膠透皮制劑、納米藥物軟膏透皮制劑、納米藥物微針透皮制劑，這些劑型可以根據(jù)不同病情需要進(jìn)行控制，且制備過程不污染環(huán)境，透皮制劑使用方便，具有很好的生物相容性和較高的生物利用度，提高病人的適應(yīng)性；
第三、采用本發(fā)明方法制備納米藥物透皮制劑，可以使藥物在整個制備過程和治療過程中保持高活性而不失活，大大降低了藥物突釋，釋放的藥物可以局部高效被病變細(xì)胞攝取，從而減少藥物本身的毒副作用，可以應(yīng)用到各種藥物透皮制劑的制備中；
第四、本發(fā)明納米藥物透皮制劑的制備方法，可以運用到各種局部治療的藥物制劑的制備及疫苗的佐劑制備中，尤其是嬰幼兒血管瘤的局部治療，可以提高腫瘤細(xì)胞攝取藥物的效率，因為腫瘤細(xì)胞容易攝取顆粒狀的納米藥物，一旦攝取了納米藥物，會使得腫瘤細(xì)胞的⑶蛋白難于外排藥物，直接殺死腫瘤細(xì)胞，而不至于產(chǎn)生耐藥性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]附圖1是普萘洛爾納米藥物的掃描電鏡圖。
[0020]附圖2是實施例1、對比例1和對比例2所得制劑對腫瘤細(xì)胞耐藥率的影響。
[0021]附圖3是實施例1、對比例1和對比例2所得制劑對裸鼠腫瘤體積大小的影響。
[0022]附圖4是實施例1、對比例1和對比例2所得制劑對瞼血管瘤的治療情況，4圖為用藥前，8圖是對比例1組治療情況，圖是對比例2組治療情況，0圖為實施例1組治療情況。
[0023]附圖5是實施例2所得制劑對腫瘤細(xì)胞耐藥率的影響。
[0024]附圖6是實施例2所得制劑對裸鼠腫瘤體積大小的影響。
[0025]附圖7是實施例6所得制劑對腫瘤細(xì)胞耐藥率的影響。
[0026]附圖8是實施例6所得制劑對裸鼠腫瘤體積大小的影響。
[0027]附圖9是實施例8所得制劑對腫瘤細(xì)胞耐藥率的影響。
[0028]附圖10是實施例8所得制劑對裸鼠腫瘤體積大小的影響。

【具體實施方式】
[0029]下面結(jié)合附圖對本發(fā)明提供的【具體實施方式】作詳細(xì)說明。
[0030]實施例1普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑的制備(一)
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物水凝膠透皮制劑，制備過程如下:(”精確稱取。.普萘洛爾溶解在1011^水中，然后加入18多孔二氧化硅納米顆粒，攪拌過夜使得普萘洛爾充分吸附在二氧化硅顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成普萘洛爾納米藥物，納米藥物的粒徑為20?500納米；
(2)制備聚乙烯醇(分子量4萬)重量百分比為12%、聚乙二醇(分子量400)重量百分比為1%的水凝膠溶液；
(3)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物按照1:1的重量比分散在步驟(2)制備的水凝膠溶液中，同時加入終重量百分比濃度為0.5%的苯甲酸鈉、1%的薄荷醇和5%的甘油，超聲混勻2分鐘；充分混勻后放到0?41保存，然后放到一 40?一 201預(yù)凍6小時，其中0?41保存和一 40?一 201預(yù)凍步驟按順序重復(fù)2次，最后再置于0?41保存得到普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑。
[0031]對比例1普萘洛爾水凝膠透皮制劑的制備
將小分子藥物普萘洛爾直接制備成水凝膠透皮制劑，制備過程如下:
(1)制備聚乙烯醇(分子量4萬)重量百分比為12%、聚乙二醇(分子量400)重量百分比為1%的水凝膠溶液；
(2)精確稱取一定量的普萘洛爾分散在步驟(1)制備的水凝膠溶液中，確保普萘洛爾在水凝膠透皮制劑中的終濃度與實施例1中普萘洛爾的終濃度一樣，同時加入終重量百分比濃度為0.5%的苯甲酸鈉、1%的薄荷醇和5%的甘油，超聲混勻2分鐘；充分混勻后放到0?41保存，然后放到一 40?一 201預(yù)凍6小時，其中0?41保存和一 40?一 201預(yù)凍步驟按順序重復(fù)2次，最后再置于0?41保存得到普萘洛爾水凝膠透皮制劑。
[0032]對比例2普萘洛爾納米藥物普通水劑的制備
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物普通水劑，制備過程如下:
(”精確稱取。.普萘洛爾溶解在1011^水中，然后加入18多孔二氧化硅納米顆粒，攪拌過夜使得普萘洛爾充分吸附在二氧化硅顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成普萘洛爾納米藥物，納米藥物的粒徑為20?500納米；
(2)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物按照1:1的重量比分散在水中；充分混勻后放到0?41保存，然后放到一 40?一 201預(yù)凍6小時，其中0?41保存和一 40?一 201預(yù)凍步驟按順序重復(fù)2次，最后再置于0?41保存得到普萘洛爾納米藥物普通水劑。
[0033]對實施例1制備得到的普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑、對比例1制備得到的普萘洛爾水凝膠透皮制劑和對比例2制備得到的普萘洛爾納米藥物普通水劑進(jìn)行形貌表征、耐藥性和抗癌測試。圖1所示為普萘洛爾納米藥物的掃描電鏡圖，微粒形態(tài)好，納米藥物的粒徑為20?500納米。實施例1和對比例1制備的藥劑均勻性好，涂抹比較容易，對比例2制備的藥劑穩(wěn)定性較差，藥物沉淀嚴(yán)重。
[0034]腫瘤細(xì)胞耐藥率的測定:將實施例1、對比例1和對比例2制得的藥物制劑與細(xì)胞培養(yǎng)一段時間，總的細(xì)胞個數(shù)控制在〖X 105?20乂 105范圍內(nèi)，確保各組普萘洛爾的用量一致，然后用流式細(xì)胞術(shù)檢測耐藥腫瘤細(xì)胞數(shù)，耐藥率=(耐藥腫瘤細(xì)胞數(shù)/總腫瘤細(xì)胞數(shù))^ 1009^具體步驟如下:腫瘤細(xì)胞1(^27/八培養(yǎng)于含10% (^/?)小牛血清、1% (^/?)青霉素、2% (^/?)鏈霉素、1% (^/?)普萘洛爾、51^/1阿霉素的即1121640培養(yǎng)液中，在371、5% 002的條件下培養(yǎng)。當(dāng)1(^27/八細(xì)胞生長到70%?80%滿底后用胰酶消化，收獲在1此的2？管中，每個2？管中約含7父105個細(xì)胞。用？83清洗3次后，離心去上清液，細(xì)胞用…⑶11透化溶液于避光、室溫下孵育，使細(xì)胞膜更具滲透性。然后細(xì)胞液于4008下離心3111111，棄去上清懸浮物。細(xì)胞用？83清洗1次后加入100^1 18321工作液于371下孵育一定時間，再用？83剛清洗2次，棄去未結(jié)合的了8321，避免非特異性吸附，然后添加100 6^11？工作液于371孵育后，用？83剛清洗3次，以排除以11？所造成的非特異性吸附。處理后的細(xì)胞用1此？88懸浮，41放置待檢。1(562/八細(xì)胞直接收獲于1此的管中，后續(xù)處理同1(^27/八細(xì)胞。1(^27/八的對照組細(xì)胞也同上法處理，只是不添加18321抗體而用相同體積的？83剛代替。相同處理條件下的細(xì)胞均檢測2次。結(jié)果如圖2所示，從圖中可看出，相比對比例1和對比例2，實施例1制備的普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑的耐藥率最低。
[0035]對裸鼠的腫瘤進(jìn)行用藥，用棉簽蘸實施例1、對比例1和對比例2的藥物制劑局部涂擦，每天3次，間隔6?8小時，觀察腫瘤的體積變化。結(jié)果如圖3所示，實施例1組的腫瘤體積最小。同時用于臨床治療瞼血管瘤，給藥方法:用棉簽蘸藥物制劑局部涂擦，每天3次，間隔6?8小時，結(jié)果如圖4，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實施例1組的制劑治愈的最快，對比例的對照組仍然沒有治愈好。說明實施例1制備的普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑的抗腫瘤效果明顯優(yōu)于對比例1和對比例2的制劑。
[0036]結(jié)果表明，采用本發(fā)明方法先將藥物制備成納米藥物，再進(jìn)一步做成水凝膠透皮制劑可以局部給藥治療，能克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性，降低普萘洛爾全身毒副作用，抗腫瘤效果好且使用方便。
[0037]實施例2普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑的制備(二)
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物水凝膠透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取108普萘洛爾溶解在1001水中，然后加入208多孔羥基磷灰石納米顆粒，攪拌過夜使得普萘洛爾充分吸附在羥基磷灰石顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成普萘洛爾納米藥物，納米藥物的粒徑為20?700納米；
(2)制備聚乙烯醇(分子量4萬)重量百分比為4%、聚乙烯醇(分子量13.6萬)重量百分比為4%、聚乙二醇(分子量400)重量百分比為2%的水凝膠溶液；
(3)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物按照1:5的重量比分散在步驟(2)制備的水凝膠溶液中，同時加入終重量百分比濃度為0.5%的苯甲酸鈉、1%的十四烷基硫酸鈉、1.5%的甘油和3.5%的丙二醇，渦旋混勻5分鐘；充分混勻后放到0?41保存，然后放到一 40?一201預(yù)凍4小時，其中0?41保存和一 40?一 201預(yù)凍步驟按順序重復(fù)3次，最后再置于0?41保存得到普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑。
[0038]對實施例2制備得到的普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑進(jìn)行耐藥性和抗癌測試。腫瘤細(xì)胞耐藥率和抗腫瘤效果的測定方式同實施例1，圖5所示為實施例2制備的普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑的耐藥率，從圖中可看出，耐藥率較低。圖6所示為對裸鼠腫瘤體積大小的影響，結(jié)果表明抗腫瘤效果較好。采用本發(fā)明方法先將藥物制備成納米藥物，再進(jìn)一步做成水凝膠透皮制劑可以局部給藥治療，能克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性，降低普萘洛爾全身毒副作用，抗腫瘤效果好且使用方便。
[0039]實施例3普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑的制備(三)
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物水凝膠透皮制劑，制備過程如下: (1)精確稱取108普萘洛爾溶解在10011^水中，然后加入408多孔銀納米顆粒，攪拌過夜使得普萘洛爾充分吸附在銀納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成普萘洛爾納米藥物，納米藥物的粒徑為10?1000納米；
(2)制備羧甲基纖維素鈉重量百分比為8%、聚乙烯醇(分子量10萬)重量百分比為5%、聚乙二醇(分子量400)重量百分比為1.5%的水凝膠溶液；
(3)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物按照1:10的重量比分散在步驟(2)制備的水凝膠溶液中，同時加入終重量百分比濃度為0.5%的苯甲酸鈉、1%的茴香腦、2%的甘油和
1.5%的丙二醇，渦旋混勻4分鐘；充分混勻后放到0?41保存，然后放到一 40?一 201預(yù)凍10小時，其中0?41保存和一 40?一 201預(yù)凍步驟按順序重復(fù)4次，最后再置于0?41保存得到普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑。
[0040]實施例4普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑的制備(四)
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物水凝膠透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取2邑普萘洛爾溶解在1011^水中形成藥物水溶液，然后將藥物水溶液轉(zhuǎn)移到10此濃度為5% (^)的聚乙二醇(分子量8000)水溶液中，充分混勻，然后在一 801冰箱預(yù)凍12小時，之后凍干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并離心除去聚乙二醇得到納米藥物，納米藥物的粒徑為50?5000納米；
(2)制備聚乙烯醇(分子量4萬)重量百分比為12%、聚乙二醇(分子量400)重量百分比為1%的水凝膠溶液；
(3)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物按照1:8的重量比分散在步驟(2)制備的水凝膠溶液中，同時加入終重量百分比濃度為0.5%的苯甲酸鈉、1%的薄荷醇和5%的甘油，超聲混勻2分鐘；充分混勻后放到0?41保存，然后放到一 40?一 201預(yù)凍6小時，其中0?41保存和一 40?一 201預(yù)凍步驟按順序重復(fù)1次，最后再置于0?41保存得到普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑。
[0041]實施例5普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑的制備(五)
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物水凝膠透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取108普萘洛爾溶解在601水中，然后與含聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇濃度為10% (^/?)的二氯甲烷溶液攪拌混勻，再轉(zhuǎn)移至聚乙烯醇濃度為5% (^/?)的水溶液中并進(jìn)行勻漿，形成納米藥物膠束；
(2)制備聚乙烯醇(分子量4萬)重量百分比為4%、聚乙烯醇(分子量13.6萬)重量百分比為4%、聚乙二醇(分子量400)重量百分比為2%的水凝膠溶液；
(3)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物膠束按照1:4的重量比分散在步驟(2)制備的水凝膠溶液中，同時加入終重量百分比濃度為0.5%的苯甲酸鈉、1%的十四烷基硫酸鈉和5%的丙二醇，渦旋混勻5分鐘；充分混勻后放到0?41保存，然后放到一 40?一 201預(yù)凍4小時，其中0?41保存和一 40?一 201預(yù)凍步驟按順序重復(fù)3次，最后再置于0?41保存得到普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑。
[0042]對實施例3、實施例4和實施例5制備得到的普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑進(jìn)行耐藥性和抗癌測試。腫瘤細(xì)胞耐藥率和抗腫瘤效果的測定方式同實施例1，結(jié)果表明，制備的普萘洛爾納米藥物水凝膠透皮制劑的耐藥率較低，抗腫瘤效果較好。采用本發(fā)明方法先將藥物制備成納米藥物，再進(jìn)一步做成水凝膠透皮制劑可以局部給藥治療，能克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性，降低普萘洛爾全身毒副作用，抗腫瘤效果好且使用方便。
[0043]實施例6普萘洛爾納米藥物軟膏透皮制劑的制備(一)
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物軟膏透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取108普萘洛爾溶解在5011^水中，然后加入208多孔交聯(lián)葡聚糖納米顆粒，攪拌過夜使得普萘洛爾充分吸附在交聯(lián)葡聚糖顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成普萘洛爾納米藥物，納米藥物的粒徑為500?2000納米；
(2)取硬脂酸甘油酯、硬脂酸、凡士林、石蠟加熱熔化為油相，另將甘油及水加熱至901，再加入十二烷基硫酸鈉及羥苯乙酯溶解得到水相，水相緩緩倒入油相中，邊加入邊攪拌，冷凝得到軟膏基質(zhì)；
(3)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物按照1:9的重量比分散在步驟(2)制備的軟膏基質(zhì)中，充分混勻后得到普萘洛爾納米藥物軟膏透皮制劑。
[0044]對實施例6制備得到的普萘洛爾納米藥物軟膏透皮制劑進(jìn)行耐藥性和抗癌測試。腫瘤細(xì)胞耐藥率和抗腫瘤效果的測定方式同實施例1，圖7所示為實施例6制備的普萘洛爾納米藥物軟膏透皮制劑的耐藥率，從圖中可看出，耐藥率較低。圖8所示為對裸鼠腫瘤體積大小的影響，結(jié)果表明抗腫瘤效果較好。采用本發(fā)明方法先將藥物制備成納米藥物，再進(jìn)一步做成軟膏透皮制劑可以局部給藥治療，能克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性，降低普萘洛爾全身毒副作用，抗腫瘤效果好且使用方便。
[0045]實施例7普萘洛爾納米藥物軟膏透皮制劑的制備(二)
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物軟膏透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取徹普萘洛爾用超細(xì)粉粉碎儀器磨碎，得到粒徑為500?2000納米的普萘洛爾納米藥物；
(2)將樟腦、薄荷腦混合研磨使之共熔，然后與薄荷油、桉葉油混合均勻，另將凡士林、石蠟、蜂蠟加熱至1101除去水分，混合后冷至701，加入芳香油等攪拌，最后冷卻得到軟骨基質(zhì)；
(3)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物按照1:9的重量比分散在步驟(2)制備的軟膏基質(zhì)中，充分混勻后得到普萘洛爾納米藥物軟膏透皮制劑。
[0046]對實施例7制備得到的普萘洛爾納米藥物軟膏透皮制劑進(jìn)行耐藥性和抗癌測試，腫瘤細(xì)胞耐藥率和抗腫瘤效果的測定方式同實施例1，結(jié)果表明采用本發(fā)明方法先將藥物制備成納米藥物，再進(jìn)一步做成軟膏透皮制劑可以局部給藥治療，能克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性，降低普萘洛爾全身毒副作用，抗腫瘤效果好且使用方便。
[0047]實施例8普萘洛爾納米藥物微針透皮制劑的制備(一)
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物微針透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取普萘洛爾溶解在2011^水中，然后與含聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇濃度為5% (^)的二氯甲烷溶液攪拌混勻，再轉(zhuǎn)移至聚乙烯醇濃度為5% (^)的水溶液中并進(jìn)行勻漿，形成納米藥物膠束；
(2)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物膠束按照1:4的重量比分散在聚乙烯醇微針溶液中，混合均勻后澆制在微針模具里，然后放到一 801預(yù)凍10小時，再轉(zhuǎn)移至41冰箱中解凍，反復(fù)3次，最后干燥得到普萘洛爾納米藥物微針透皮制劑。
[0048]對實施例7制備得到的普萘洛爾納米藥物微針透皮制劑進(jìn)行耐藥性和抗癌測試。腫瘤細(xì)胞耐藥率和抗腫瘤效果的測定方式同實施例1，圖9所示為實施例8制備的普萘洛爾納米藥物微針透皮制劑的耐藥率，從圖中可看出，耐藥率較低。圖10所示為對裸鼠腫瘤體積大小的影響，結(jié)果表明抗腫瘤效果較好。采用本發(fā)明方法先將藥物制備成納米藥物，再進(jìn)一步做成微針透皮制劑可以局部給藥治療，能克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性，降低普萘洛爾全身毒副作用，抗腫瘤效果好且使用方便。
[0049]實施例9普萘洛爾納米藥物微針透皮制劑的制備(二)
將小分子藥物普萘洛爾制備成納米藥物微針透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取201118普萘洛爾制備成多糖普萘洛爾納米顆粒，多糖納米顆粒的制備詳見中國專利:申請?zhí)?00610029127.1，專利名稱為“低溫水相一水相乳液制備蛋白質(zhì)一多糖玻璃體緩釋微球的方法”；
(2)將步驟(1)制備的普萘洛爾納米藥物按照1:4的重量比分散在含有10%(^)空心微針、2.5% (^)甘油和0.5% (^/?)苯甲酸鈉的水溶液中，混合均勻后浸泡10個小時，然后凍干得到普萘洛爾納米藥物微針透皮制劑。
[0050]對實施例9制備得到的普萘洛爾納米藥物微針透皮制劑進(jìn)行耐藥性和抗癌測試，腫瘤細(xì)胞耐藥率和抗腫瘤效果的測定方式同實施例1，結(jié)果表明采用本發(fā)明方法先將藥物制備成納米藥物，再進(jìn)一步做成微針透皮制劑可以局部給藥治療，能克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性，降低普萘洛爾全身毒副作用，抗腫瘤效果好且使用方便。
[0051]實施例10生長素納米藥物水凝膠透皮制劑的制備
將大分子藥物生長素制備成納米藥物水凝膠透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取108生長素溶解在10011^水中，然后加入408多孔羥基磷灰石納米顆粒，攪拌過夜使得生長素充分吸附在羥基磷灰石納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成生長素納米藥物，納米藥物的粒徑為500?1000納米；
(2)制備羧甲基纖維素鈉重量百分比為8%、聚乙烯醇(分子量10萬)重量百分比為5%、聚乙二醇(分子量400)重量百分比為1.5%的水凝膠溶液；
(3)將步驟(1)制備的生長素納米藥物按照1:10的重量比分散在步驟(2)制備的水凝膠溶液中，同時加入終重量百分比濃度為0.5%的苯甲酸鈉、1%的茴香腦、2%的甘油和1.5%的丙二醇，渦旋混勻4分鐘；充分混勻后放到0?41保存，然后放到一 40?一 201預(yù)凍10小時，其中0?41保存和一 40?一 201預(yù)凍步驟按順序重復(fù)4次，最后再置于0?41保存得到生長素納米藥物水凝膠透皮制劑。
[0052]實施例11生長素納米藥物軟膏透皮制劑的制備
將大分子藥物生長素制備成納米藥物軟膏透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取108生長素溶解在50此水中，然后加入208多孔交聯(lián)葡聚糖納米顆粒，攪拌過夜使得生長素充分吸附在交聯(lián)葡聚糖顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成生長素納米藥物，納米藥物的粒徑為500?2000納米；
(2)取硬脂酸甘油酯、硬脂酸、凡士林、石蠟加熱熔化為油相，另將甘油及水加熱至901，再加入十二烷基硫酸鈉及羥苯乙酯溶解得到水相，水相緩緩倒入油相中，邊加入邊攪拌，冷凝得到軟膏基質(zhì)；
(3)將步驟(1)制備的生長素納米藥物按照1:9的重量比分散在步驟(2)制備的軟膏基質(zhì)中，充分混勻后得到生長素納米藥物軟膏透皮制劑。
[0053]實施例12生長素納米藥物微針透皮制劑的制備
將大分子藥物生長素制備成納米藥物微針透皮制劑，制備過程如下:
(1)精確稱取生長素溶解在2011^水中，然后與含聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇濃度為5% (^)的二氯甲烷溶液攪拌混勻，再轉(zhuǎn)移至聚乙烯醇濃度為5% (^)的水溶液中并進(jìn)行勻漿，形成生長素納米藥物膠束；
(2)將步驟(1)制備的生長素納米藥物膠束按照1:4的重量比分散在聚乙烯醇微針溶液中，混合均勻后澆制在微針模具里，然后放到一 801預(yù)凍10小時，再轉(zhuǎn)移至41冰箱中解凍，反復(fù)3次，最后干燥得到生長素納米藥物微針透皮制劑。
[0054]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種納米藥物透皮制劑在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述的納米藥物透皮制劑是由下列方法制備得到的，所述方法步驟如下: (1)將藥物制備成納米藥物,所述藥物在納米藥物中的重量百分比為0.1%?90%，所述的納米藥物的粒徑為10?5000納米； (2)將步驟(I)制備的納米藥物按照1:1?1:10的重量比分散在重量百分比濃度為0.5%?80%的水凝膠溶液中，同時加入促透劑、防腐劑和保濕劑，充分混勻后放到O?4°C保存，然后放到一 40?一 20°C預(yù)凍4?12小時，其中O?4°C保存和一 40?一 20°C預(yù)凍步驟按順序可重復(fù)I?4次，最后再置于O?4°C保存得到納米藥物水凝膠透皮制劑；或 將步驟(I)制備的納米藥物按照1:1?1:10的重量比分散在軟膏基質(zhì)中，混合均勻后即得到納米藥物軟膏透皮制劑，所述的軟膏基質(zhì)選自水溶性基質(zhì)、油脂性基質(zhì)或乳劑型基質(zhì)中的一種；或 將步驟(I)制備的納米藥物按照1:1?1:10的重量比黏附在微針表面或裝載在微針內(nèi)部或與微針材料充分混勻后澆制在微針模具里得到納米藥物微針透皮制劑， 步驟(2)中所述的水凝膠溶液中的凝膠基質(zhì)選自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、乙基纖維素、聚乙二醇、羧基乙烯共聚物、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)聚丙烯酸鈉、聚乳酸-聚乙二醇-聚乳酸聚合物、聚乙二醇-聚乳酸-聚乙二醇聚合物、聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸聚合物、聚乙二醇-聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇聚合物、海藻酸鈉、淀粉、甘油、明膠中的一種或幾種； 步驟(2)中所述的促透劑選自薄荷醇、十四烷基硫酸鈉、香葉醇、茴香腦或癸基甲基亞砜中的一種，所述的防腐劑選自苯甲酸鈉、三氯叔丁醇、苯扎溴銨、山梨酸、羥苯乙酯或尼泊金丁酯中的一種，所述的保濕劑為甘油、丙二醇或二者的混合物； 步驟(2)中所述的軟膏基質(zhì)選自硬脂酸甘油酯、硬脂酸、蜂蠟、羊毛脂、凡士林、石蠟、硅酮、薄荷油、桉葉油、植物油、明膠或羧甲基纖維素鈉中的一種或幾種； 步驟(2)中所述的微針是指金屬微針、無機(jī)微針或聚合物微針，所述的無機(jī)微針是指無機(jī)娃微針。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米藥物透皮制劑，其特征在于，步驟(I)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟:將藥物溶解在水中，然后加入多孔納米顆粒，攪拌使得藥物充分吸附在多孔納米顆粒里，離心去除上清液，再充分洗滌，然后凍干形成納米藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的納米藥物透皮制劑，其特征在于，所述的納米顆粒為有機(jī)納米顆?；驘o機(jī)納米顆粒,可選自聚苯乙烯納米顆粒、交聯(lián)葡聚糖納米顆粒、二氧化娃納米顆粒、二氧化鈦納米顆粒、輕基磷灰石納米顆粒、四氧化三鐵納米顆粒、三氧化二鐵顆粒、金納米顆粒、三氧化二鋁納米顆粒、碳酸鈣納米顆粒、磷酸鈣納米顆粒、碳酸鎂納米顆粒、氫氧化鎂納米顆?；蜚y納米顆粒中的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米藥物透皮制劑，其特征在于，步驟(I)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟:將藥物溶解在水中形成藥物水溶液，然后將藥物水溶液轉(zhuǎn)移到聚乙二醇水溶液中，充分混勻后于冰箱中預(yù)凍，之后凍干，再用二氯甲烷溶解聚乙二醇并離心除去聚乙二醇得到納米藥物；或 將藥物包裹在脂質(zhì)體、聚合物納米顆粒中形成納米藥物；或 將藥物溶解在水中形成藥物水溶液，通過加入不良的溶劑使藥物以納米顆粒的形式析出而得到納米藥物；或 將藥物用超細(xì)粉粉碎儀器進(jìn)行粉碎直接制備成納米藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米藥物透皮制劑，其特征在于，步驟(I)中所述的納米藥物的制備包括以下步驟:將藥物溶解在水中，然后與含有聚乳酸-羥基乙酸-聚乙二醇的二氯甲烷溶液攪拌混勻，再轉(zhuǎn)移至聚乙烯醇水溶液中并進(jìn)行勻漿，形成納米藥物膠束。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的納米藥物透皮制劑，其特征在于，所述的藥物包括小分子藥物和大分子藥物，所述的小分子藥物選自普萘洛爾、阿霉素、環(huán)磷酰胺、更生霉素、博萊霉素、柔紅霉素、表阿霉素、絲裂霉素、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶、卡鉬、卡莫司汀、司莫司汀、順鉬、依托泊苷、喜樹堿及其衍生物、苯芥膽留醇、紫杉醇及其衍生物、多西紫杉醇及其衍生物、長春堿、長春新堿、它莫西芬、哌泊舒凡、環(huán)磷酰胺、氟他胺及其衍生物、潑尼松、雷帕霉素、環(huán)孢素、左氧氟沙星、氧氟沙星或鹽酸依匹斯汀中的一種，所述的大分子藥物選自促紅細(xì)胞生成素、重組人粒細(xì)胞集落刺激因子、粒細(xì)胞一巨噬細(xì)胞集落刺激因子、疫苗、干擾素、生長激素、胰島素、表皮生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、胰島素生長因子、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子、血小板生長因子、內(nèi)皮生長因子、神經(jīng)生長因子、骨衍生性生長因子、骨形成蛋白、組織多肽抗原、抗體、凝血因子VII1、凝血因子IX、遺傳因子、反義核苷酸、小分子RNA或基因中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤藥物為血管瘤藥物。
【文檔編號】A61K9/00GK104288093SQ201410446817
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年5月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月31日
【發(fā)明者】袁偉恩, 鄭家偉, 吳飛 申請人:袁偉恩, 鄭家偉