一種疫苗組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種疫苗組合物，其中，該疫苗組合物包括免疫量的雞新城疫病毒抗原、雞傳染性支氣管炎病毒抗原以及雞滑液囊支原體抗原以及載體。本發(fā)明還提供了該疫苗組合物地制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明三聯(lián)苗免疫效果要優(yōu)于新支二聯(lián)滅活苗與雞滑液囊支原體滅活單苗疫苗聯(lián)用的免疫效果。本發(fā)明進一步提供了一種疫苗組合物，該疫苗組合物除上述三中抗原還包括雞毒支原體抗原，該疫苗組合物能有效抵抗四種病原的攻擊。CCTCC NO：V2014252014.08.19
【專利說明】一種疫苗組合物及其制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種疫苗組合物，以及其制備方法和應(yīng)用，屬于生物工程領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 雞新城疫?。∟ew Castle disease)，是由副粘病毒引起的高度接觸傳染性、致死 性疾病，又稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，常呈急性敗血癥狀。主要特征是呼吸困難、便稀、神經(jīng)紊 舌U黏膜和漿膜出血，死亡率高，對養(yǎng)雞業(yè)危害嚴(yán)重。尚無有效治療藥物，只能依靠嚴(yán)格消 毒、隔離和用滅活苗和活苗疫苗接種預(yù)防。
[0003] 雞傳染性支氣管炎病是由傳染性支氣管炎病毒引起的雞的一種急性高度接觸性 呼吸道傳染病。各種日齡的雞都易感，其臨診特征是呼吸困難、發(fā)出羅音、咳嗽、張口呼吸、 打噴嚏，本病的發(fā)病率高，雛雞的死亡率可達(dá)25%以上。產(chǎn)蛋雞感染后，產(chǎn)蛋量降低，蛋的品 質(zhì)下降。肉雞感染后，生長緩慢，且容易繼發(fā)呼吸道細(xì)菌疾病。本病廣泛流行于世界各地， 是養(yǎng)雞業(yè)的重要疫病。
[0004] 雞滑液囊支原體病是由雞滑液囊支原體（Mycoplasma Synoviae，MS)引起幼齡 雞和火雞的一種傳染病，又稱雞傳染性滑膜炎（avian onfectious synovitis)，其特征是 關(guān)節(jié)腫大、滑液囊及肌腱發(fā)炎和實質(zhì)器官的腫大。由于本病發(fā)展緩慢，病程長，一旦在雞群 中感染，根除很困難，因此在雞群中長期蔓延，導(dǎo)致飼料利用率低、生長發(fā)育遲緩、淘汰率增 高、產(chǎn)蛋量下降等。雞群如存在該病原時，易發(fā)生混合感染，加劇病情，死亡率增高，造成嚴(yán) 重的經(jīng)濟損失。
[0005] 近年來雞滑液囊支原體疾病逐年增加，病雞發(fā)育不良，抵抗力下降，從而引發(fā)雞新 城疫及傳染性支氣管炎病。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種新的雞新城疫、雞傳染性支氣管炎、雞 滑液囊支原體疫苗組合物，對現(xiàn)在流行的三種疫病達(dá)到較好的保護效果。
[0007] 本發(fā)明的主要目的在于提供一種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括免疫量 的雞新城疫病毒抗原、雞傳染性支氣管炎病毒抗原以及雞滑液囊支原體抗原以及載體。
[0008] 優(yōu)選地，所述的雞新城疫病毒抗原為活的全病毒抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的 全病毒抗原或亞單位抗原；所述的雞傳染性支氣管炎病毒抗原為活的全病毒抗原、減毒的 全病毒抗原、滅活的全病毒抗原或亞單位抗原；所述的雞滑液囊支原體抗原為活的全支原 體抗原、減毒的全支原體抗原、滅活的全支原體抗原或亞單位抗原。
[0009] 優(yōu)選地，所述的雞新城疫病毒抗原為滅活的La Sota株全病毒抗原，所述的雞傳 染性支氣管炎病毒抗原為滅活的M41株全病毒抗原，所述的雞滑液囊支原體抗原為滅活的 HNl株全支原體抗原。
[0010] 雞新城疫病毒La Sota株、雞傳染性支氣管炎病毒M41株購于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察 所。
[0011] 雞滑液囊支原體 HNl 株（Mycoplasma synoviae strain HN1)保藏號：CCTCC NO : V201425,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC);保藏地址：中國武漢?武漢大學(xué)，保藏 日期：2014年08月19日。
[0012] 本發(fā)明的組合物的成分或組分的量優(yōu)選地是治療有效量。所述治療有效量是指在 組合物施用的宿主中發(fā)揮它們的免疫學(xué)作用而不導(dǎo)致過度副作用所必需量。所用的成分 和待施用的組合物的精確的量將根據(jù)因素如治療的疾病的類型，待治療的動物的類型和年 齡，施用的方式，以及組合物中的其它成分而變化。
[0013] 優(yōu)選地，所述的雞新城疫病毒抗原含量為彡108_°EID5(i/0. 1ml，所述的雞傳染性支 氣管炎病毒抗原含量為彡106_°EID5(l/0. lml，所述的雞滑液囊支原體抗原含量為彡IO9CXU/ HlLo
[0014] 優(yōu)選地，所述的雞新城疫病毒抗原含量為108_°EID5Q/0. Iml?109_°EID5Q/0. lml，所 述的雞傳染性支氣管炎病毒抗原含量為l〇6_°EID5(l/0. Iml?107_°EID5(l/0. lml，所述的雞滑 液囊支原體抗原含量為IO9CCUAiL?KTCCU/mL。
[0015] 優(yōu)選地，所述載體包括佐劑，所述佐劑包括油佐劑，水溶性佐劑，鋁鹽佐劑，細(xì)胞因 子佐劑；進一步優(yōu)選地，所述佐劑包括白油佐劑。。
[0016] 優(yōu)選地,所述疫苗組合物進一步包括佐劑。
[0017] 術(shù)語"佐劑"指加入到本發(fā)明的組合物中以增加組合物的免疫原性的物質(zhì)。已知 的佐劑包括，但不限于：油佐劑，水溶性佐劑，鋁鹽佐劑，細(xì)胞因子佐劑。
[0018] 本發(fā)明所用術(shù)語"油佐劑"又稱"油性佐劑"或"油乳佐劑"，是由包括植物油、動 物油、礦物油中的一種或幾種組成，用于延緩免疫原在機體內(nèi)的存留時間，使之持續(xù)緩慢釋 放，增強巨噬細(xì)胞的吞噬與殺菌能力。
[0019] 本發(fā)明所用術(shù)語"水溶性佐劑"又稱"水基佐劑"或"水佐劑"，是一種聚合物水溶 性分散體，用于提高水溶性疫苗的功效和安全性，可以由高分子量聚丙烯酸類合成聚合物 組成。
[0020] 本發(fā)明所用術(shù)語"鋁鹽佐劑"，又稱"鋁膠佐劑"或"鋁佐劑"，包括氫氧化鋁佐劑和 磷酸鋁佐劑，其主要功能為緩釋，但同時具有對免疫細(xì)胞的激活作用。將抗原和氫氧化鋁或 磷酸鋁混合注射，能夠使抗原保存在注射部位，具有抗原緩釋和非特異免疫刺激作用。
[0021] 本發(fā)明所用術(shù)語"細(xì)胞因子佐劑"，包括IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、 IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、INF- γ、GM-CSF、TNF- a、TNF- β、TCA-3 等，又稱"細(xì)胞因子" 或"細(xì)胞素"，是活體宿主細(xì)胞分泌的通過擴散、細(xì)胞間接觸或血液循環(huán)到達(dá)宿主其他細(xì)胞， 在體液中以極低濃度發(fā)揮作用的一類非免疫球蛋白、局部天然蛋白或糖蛋白，也是一類由 機體活化的免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞產(chǎn)生、分泌，能調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化，與造血、炎癥反 應(yīng)、免疫應(yīng)答反應(yīng)和創(chuàng)傷愈合等密切相關(guān)的高活性多功能小分子蛋白的統(tǒng)稱，可以刺激或 抑制免疫功能，在免疫應(yīng)答中促進細(xì)胞發(fā)育分化、調(diào)節(jié)細(xì)胞生理功能和細(xì)胞間信息傳遞，在 免疫系統(tǒng)中起著非常重要的調(diào)控作用。
[0022] 適用于本發(fā)明的組合物的佐劑的量優(yōu)選地是有效量。所述"有效量"是指佐劑在 同本發(fā)明抗原聯(lián)合施用時在宿主中發(fā)揮它們的免疫學(xué)作用而言必須或足夠的而不導(dǎo)致過 度副作用所必需量。待施用的佐劑的精確的量將根據(jù)因素如所用的成分和治療的疾病的類 型，待治療的動物的類型和年齡，施用的方式，以及組合物中的其它成分而變化。
[0023] 優(yōu)選地，所述的疫苗組合物進一步包括雞毒支原體抗原，所述雞毒支原體抗原含 量為彡 109CCU/mL。
[0024] 更優(yōu)選地，所述的疫苗組合物進一步包括滅活的雞毒支原體CR全支原體抗原，所 述雞毒支原體抗原含量為10 9CCU/mL?KTCCU/mL。
[0025] 進一步優(yōu)選地，所述新城疫全病毒抗原含量為109_°EID5(l/0. 1ml，所述雞傳染性 支氣管炎全病毒抗原含量為IO7 ciEID5tlA). lml，所述雞滑液囊支原體全支原體抗原含量為 109_°(XU/mL，所述雞毒支原體全支原體抗原含量為10 9_°(XU/mL。
[0026] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種疫苗組合物的制備方法，其中，所述方法包括： (1)分別培養(yǎng)增殖雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞滑液囊支原體；（2)分別滅活 步驟（1)所述培養(yǎng)增殖的雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒和雞滑液囊支原體；以及 (3)將所述滅活的雞新城疫病毒全病毒抗原、雞傳染性支氣管炎病毒全病毒抗原和雞滑液 囊支原體全支原體抗原混合，加入佐劑。
[0027] 本專利申請通過雞胚培養(yǎng)法培養(yǎng)雞新城疫病毒和雞傳染性支氣管炎病毒，用發(fā)酵 罐制備雞滑液囊支原體（普萊柯自己分離），甲醛滅活后，制成油佐劑三聯(lián)滅活疫苗，可同 時預(yù)防這三種疾病的發(fā)生。
[0028] 本發(fā)明的再一目的在于提供一種制備所述疫苗組合物的方法，其中，所述方法包 括：（1)分別培養(yǎng)增殖雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞滑液囊支原體和雞毒支原 體；（2)分別滅活步驟（1)所述培養(yǎng)增殖的雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞滑液 囊支原體和雞毒支原體；以及（3)將所述滅活的雞新城疫病毒全病毒抗原、雞傳染性支氣 管炎病毒全病毒抗原、雞滑液囊支原體全支原體抗原和雞毒支原體全支原體抗原混合，力口 入佐劑。
[0029] 優(yōu)選地，所述佐劑為白油佐劑。
[0030] 本發(fā)明的又一目的在于提供所述疫苗組合物在制備預(yù)防和/或治療雞新城疫病 毒、雞傳染性支氣管炎病毒以及雞滑液囊支原體感染的相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0031] 本發(fā)明的還一目的在于提供所述疫苗組合物在制備預(yù)防和/或治療雞新城疫病 毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞滑液囊支原體以及雞毒支原體感染的相關(guān)疾病的藥物中的 應(yīng)用。
[0032] 本發(fā)明可以應(yīng)用的雞新城疫相關(guān)疾病的非窮舉性列表包括，如呼吸道、消化道粘 膜出血，產(chǎn)蛋量下降等。
[0033] 本發(fā)明可以應(yīng)用的雞傳染性支氣管炎相關(guān)疾病的非窮舉性列表包括，如呼吸困 難、羅音、咳嗽、張口呼吸、打噴嚏、產(chǎn)蛋量下降等。
[0034] 本發(fā)明可以應(yīng)用的雞滑液囊支原體相關(guān)疾病的非窮舉性列表包括，如關(guān)節(jié)腫大、 滑液囊及肌腱發(fā)炎、實質(zhì)器官的腫大、生長發(fā)育遲緩、產(chǎn)蛋量下降等。
[0035] 術(shù)語"預(yù)防"指通過其與雞新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒以及滑液囊支原體相 關(guān)的感染或疾病的癥狀被阻斷或延遲；術(shù)語"治療"指通過與雞新城疫病毒、傳染性支氣管 炎病毒以及滑液囊支原體相關(guān)的感染或疾病的癥狀被緩和或完全消除的過程。

【具體實施方式】
[0036] 下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述更 為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人 員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進 行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
[0037] 本發(fā)明實施例以雞新城疫毒種LaSota株、雞傳染性支氣管炎毒株為M41株、雞滑 液囊支原體HNl株、雞毒支原體CR株為例說明本發(fā)明。
[0038] 實施例1雞新城疫、傳染性支氣管炎病毒液及滑液囊支原體菌液的的制備
[0039] 1.毒株的選擇
[0040] 制造本品用新城疫毒種LaSota株，傳染性支氣管炎毒株為M41株，均購自中國獸 藥監(jiān)察所?；耗抑гw為實驗室自行分離鑒定，為HNl株。
[0041] 2.病毒液制備
[0042] 2. 1雞新城疫病毒La Sota株制苗用病毒液制備
[0043] 2. I. 1 接種
[0044] 取生產(chǎn)用毒種，用無菌生理鹽水稀釋至ΚΓ3,經(jīng)尿囊腔接種10日齡易感雞胚，每胚 0. lml，接種后封閉針孔，直36?37 C繼續(xù)鮮育，不必翻蛋。
[0045] 2. 1.2孵育與觀察
[0046] 雞胚接種后，每日照蛋1次，將48小時前死亡的雞胚棄去，此后，每8?12小時照 蛋1次，隨時取出死亡雞胚，直至120小時，無論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置于 2?8°C冷卻12?24小時。
[0047] 2. 1. 3 收獲
[0048] 將冷卻后的雞胚取出，先以碘酊，后以酒精消毒后，逐胚收獲雞胚液。每若干個雞 胚分為一組，吸取胚液放于同一滅菌容器內(nèi)，每組抽樣測定血凝價，血凝價低于1 : 128 (微 量法）者應(yīng)棄去，置-15°C以下保存，應(yīng)不超過30日。
[0049] 2. 1. 4 檢驗
[0050] 2. 1. 4. 1無菌檢驗按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄進行檢驗，抽樣的病毒液無菌生長。
[0051] 2. 2雞傳染性支氣管炎病毒M41株制苗用病毒液制備
[0052] 2. 2. 1 接種
[0053] 取生產(chǎn)用毒種，用無菌生理鹽水稀釋至ΚΓ3,經(jīng)尿囊腔接種10日齡易感雞胚，每胚 0. Iml。接種后封閉針孔，直36?37 C繼續(xù)鮮育，不必翻蛋。
[0054] 2. 2. 2孵育與觀察
[0055] 雞胚接種后，24小時前照蛋1次，棄去死胚。此后，每8?12小時照蛋1次，隨時取 出死亡雞胚，直至48小時，無論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置于2?8°C冷卻12? 24小時。
[0056] 2. 2. 3 收獲
[0057] 將冷卻后的雞胚取出，先以碘酊，后以酒精消毒后，逐胚收獲雞胚液。每若干個雞 胚分為一組，吸取胚液放于同一滅菌容器內(nèi)，置-15°C以下保存，應(yīng)不超過30日。
[0058] 2. 2. 4 檢驗
[0059] 2. 2. 4. 1無菌檢驗按現(xiàn)行《中國獸藥典》附錄進行檢驗，抽樣的病毒液無菌生長。
[0060] 3.支原體菌液的制備
[0061] 3. 1培養(yǎng)基配方
[0062] 基礎(chǔ)培養(yǎng)基成分：PPLO肉湯24. 5g、水解乳蛋白7g、酵母浸出粉6g、煙酰胺0. 3g、 質(zhì)量濃度為〇. 4%的酚紅溶液2ml去離子水800ml。
[0063] 成品培養(yǎng)基制備方法：將上述培養(yǎng)基121°C高壓滅菌15分鐘，冷卻后加入濾過除 菌的125ml豬血清和80萬單位青霉素，0. OlMNaOH調(diào)節(jié)pH至7. 6?7. 8,無菌分裝，2?8°C 保存?zhèn)溆谩?br> [0064] 3. 2菌液的增殖
[0065] 將雞滑液囊支原體按1 :10的比例接種于雞滑液囊支原體成品培養(yǎng)基中，在36? 37°C培養(yǎng)24?48h收獲作為一級種子液；以同樣方法將一級種子液按I : 10的比例再接種 傳代1次收獲作為二級種子液；純粹檢驗合格后，再以同樣的方式擴大培養(yǎng)。測定雞滑液囊 支原體菌液濃度達(dá)到10n(XU/mL。
[0066] 3. 3 滅活
[0067] 將收獲的病毒液經(jīng)0. 1%甲醛37°C滅活20小時，將雞滑液囊支原體菌液，按菌液 體積總量緩慢加入終濃度為〇. 2%的甲醛溶液（V/V)，放37°C滅活，其間每隔4小時攪拌一 次，24h后取出。
[0068] 3. 3. 1滅活檢驗
[0069] 取滅活后菌液IOml接種于IOOml液體培養(yǎng)基中37°C培養(yǎng)4?7d，再按相同比例 移植于上述培養(yǎng)基IOOml中37°C培養(yǎng)4?7d ;另外，取滅活后菌液0. 5ml接種于固體培養(yǎng) 基，37°C培養(yǎng)7?10d。上述兩種方法培養(yǎng)的結(jié)果均無菌生長。
[0070] 3. 3. 2無菌檢驗
[0071] 取滅活過的菌液，按《中華人民共和國獸藥典》附錄頁進行，結(jié)果無菌生長。
[0072] 4病毒液的濃縮
[0073] 4. 1濃縮裝置的滅菌
[0074] 預(yù)過濾柱、容器、管道等采用高壓蒸汽121°C滅菌40分鐘，超濾膜包清洗后排凈膜 包內(nèi)水分，用2%甲醛溶液循環(huán)5?10分鐘，關(guān)閉循環(huán)泵，使甲醛溶液在膜包內(nèi)保持24小時 以上，使用前放掉甲醛溶液，用無菌注射用水反復(fù)沖洗至PH值為7. 0?7. 2。
[0075] 4. 2 濃縮
[0076] 分別取實施例1中所制備的雞新城疫、雞傳染性支氣管炎病毒，然后將病毒液在 無菌條件下用滅菌的二級預(yù)過濾柱濾過，除去病毒液的殘渣和其他雜質(zhì)。再用上述超濾濃 縮裝置，將病毒液連續(xù)循環(huán)，水分不斷滲出，完成病毒濃縮過程。濃縮結(jié)束后，用蒸餾水將超 濾膜包的殘留物沖洗出來，然后用〇. 4mol/L NaOH溶液反復(fù)循環(huán)沖洗30分鐘，停止循環(huán)，使 NaOH溶液在膜包內(nèi)保持10小時以上，再用蒸餾水將NaOH洗凈，用甲醛溶液浸泡消毒。
[0077] 4. 3濃縮后病毒含量測定
[0078] 將濃縮后的雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒，分別測定EID5tl，每0. Iml雞新 城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒含量分別為10'1〇8。
[0079] 實施例2疫苗的配制
[0080] 1油相制備
[0081] 取注射用白油94份，加司本-806份混合后，加硬脂酸鋁2份，隨加隨攪拌至透明 為止，高壓滅菌后備用，即為油相。
[0082] 2水相制備
[0083] 將抗原按比例混合于無菌容器中，加入4%滅菌并冷卻后的吐溫-80,邊加邊攪 拌，使吐溫-80完全溶解為止，即為水相。
[0084] 3 乳化
[0085] 取油相3份置油相罐內(nèi)，開動電機攪拌，然后徐徐加入1份水相，加完后轉(zhuǎn)入乳 化罐中，再以2800r/min乳化40分鐘即可。在乳化終止前加入1 %硫柳汞，使其終濃度為 0.01%。疫苗的具體配方如下表。
[0086] 表1疫苗成分及含量
[0087]

【權(quán)利要求】
1. 一種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括免疫量的雞新城疫病毒抗原、雞傳染性 支氣管炎病毒抗原以及雞滑液囊支原體抗原以及載體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述的雞新城疫病毒抗原為活的全病毒 抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的全病毒抗原或亞單位抗原；所述的雞傳染性支氣管炎病毒 抗原為活的全病毒抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的全病毒抗原或亞單位抗原；所述的雞滑 液囊支原體抗原為活的全支原體抗原、減毒的全支原體抗原、滅活的全支原體抗原或亞單 位抗原。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述的雞新城疫病毒抗原為滅活的La Sota株全病毒抗原，所述的雞傳染性支氣管炎病毒抗原為滅活的M41株全病毒抗原，所述 的雞滑液囊支原體抗原為滅活的HN1株全支原體抗原。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述的雞新城疫病毒抗原含量為 彡108_ °EID5Q/0. lml，所述的雞傳染性支氣管炎病毒抗原含量為彡106_ °EID5Q/0. lml，所 述的雞滑液囊支原體抗原含量為> 109CCU/mL;優(yōu)選地，所述的雞新城疫病毒抗原含 量為108_ °EID5Q/0. lml?109_ °EID5Q/0. lml，所述的雞傳染性支氣管炎病毒抗原含量為 106_°EID5(l/0. lml?107_°EID5(l/0. lml，所述的雞滑液囊支原體抗原含量為109CCU/mL? 1010CCU/mL。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述載體包括佐劑，所述佐劑包括油佐 齊U，水溶性佐劑，鋁鹽佐劑，細(xì)胞因子佐劑；優(yōu)選地，所述佐劑包括白油佐劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述的疫苗組合物進一步包括雞毒支原 體抗原，所述雞毒支原體抗原含量為> 109CCU/mL。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的疫苗組合物，其中，所述的疫苗組合物進一步包括滅活的雞 毒支原體CR全支原體抗原，所述雞毒支原體抗原含量為10 9(XU/mL?KTCXU/mL。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的疫苗組合物，其中，所述雞新城疫全病毒抗原含量為 109_°EID5(l/0. lml，所述雞傳染性支氣管炎全病毒抗原含量為107_°EID5(l/0. lml，所述雞滑液 囊支原體全支原體抗原含量為109_°CCU/mL，所述雞毒支原體全支原體抗原含量為10 9_°CCU/ mL〇
9. 一種制備權(quán)利要求1所述疫苗組合物的方法，其中，所述方法包括： (1) 分別培養(yǎng)增殖雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞滑液囊支原體； (2) 分別滅活步驟（1)所述培養(yǎng)增殖的雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒和雞滑 液囊支原體；以及 (3) 將所述滅活的雞新城疫病毒全病毒抗原、雞傳染性支氣管炎病毒全病毒抗原和雞 滑液囊支原體全支原體抗原混合，加入佐劑。
10. -種制備權(quán)利要求6所述疫苗組合物的方法，其中，所述方法包括： (1) 分別培養(yǎng)增殖雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞滑液囊支原體和雞毒支原 體； (2) 分別滅活步驟（1)所述培養(yǎng)增殖的雞新城疫病毒、雞傳染性支氣管炎病毒、雞滑液 囊支原體和雞毒支原體；以及 (3) 將所述滅活的雞新城疫病毒全病毒抗原、雞傳染性支氣管炎病毒全病毒抗原、雞滑 液囊支原體全支原體抗原和雞毒支原體全支原體抗原混合，加入佐劑。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述疫苗組合物在制備預(yù)防和/或治療雞新城疫病毒、雞傳染性支 氣管炎病毒以及雞滑液囊支原體感染的相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
12. 根據(jù)權(quán)利要求6所述疫苗組合物在制備預(yù)防和/或治療雞新城疫病毒、雞傳染性支 氣管炎病毒、雞滑液囊支原體以及雞毒支原體感染的相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K39/395GK104258389SQ201410473510
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月17日
【發(fā)明者】張許科, 孫進忠, 李雪鋒, 李成山, 田克恭 申請人:普萊柯生物工程股份有限公司