一種陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑及制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑及制備方法和應(yīng)用。本制劑由核酸和陽離子修飾的魔芋多糖組成。具體制備過程為先通過乙二胺修飾魔芋多糖制備得到陽離子修飾的魔芋多糖，再與核酸藥物復(fù)合形成納米顆粒。該制劑中的核酸為核糖核酸或脫氧核糖核酸，該制劑具有靶向巨噬細(xì)胞的特點，可以制備成治療因巨噬細(xì)胞引發(fā)炎癥的藥物。
【專利說明】-種陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑及制備方法和應(yīng)用 一、

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑 及制備方法和應(yīng)用。 二、

【背景技術(shù)】
[0002] 巨噬細(xì)胞是一種位于組織內(nèi)的白血球，源自外周血中的單核細(xì)胞。巨噬細(xì)胞和單 核細(xì)胞皆為吞噬細(xì)胞，在脊椎動物體內(nèi)參與先天性免疫和獲得性免疫。它們的主要功能是 以固定細(xì)胞或游離細(xì)胞的形式對細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌作用（即吞噬以及消化），并 激活淋巴球或其他免疫細(xì)胞，令其對病原體作出反應(yīng)。但在病理情況下，巨噬細(xì)胞的異?；?化會產(chǎn)生大量的炎癥因子，趨化因子和自由基等，會進(jìn)一步激化炎癥反應(yīng)，對組織器官造成 損傷。針對巨噬細(xì)胞活化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的核酸藥物比如反義核酸，干擾RNA等可以有效抑 制巨噬細(xì)胞的異?；罨?，削弱炎癥反應(yīng)導(dǎo)致的組織損傷。然而作為一種生物大分子，核酸藥 物很難進(jìn)入到巨噬細(xì)胞內(nèi)，為此人們努力尋找可提高核酸藥物進(jìn)入細(xì)胞的途徑，比如使用 基因槍，電穿孔，病毒載體。
[0003] 近年來，納米技術(shù)為核酸藥物的傳輸提供了新的方式和途徑，比如脂質(zhì)體，聚乙烯 亞胺等。但是，傳統(tǒng)的納米制劑存在著制備過程復(fù)雜，制備條件要求較高，制備要求儀器較 為昂貴，從而導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高的缺點。另外，傳統(tǒng)的納米制劑還存在著包封率低，生物利 用度等缺點。本發(fā)明通過常溫下的物理復(fù)合，工藝簡單，有效解決了傳統(tǒng)納米制劑的高成 本，包封率低，生物利用度等缺點。 三、


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明需要解決的問題是公開了一種陽離子魔芋多糖（CKGM)的核酸藥物納米制 劑及其制備，具體涉及cKGM的合成方法以及核酸藥物與cKGM的有效復(fù)合。
[0005] 本發(fā)明所述陽離子魔芋多糖（cKGM)的核酸藥物納米制劑是由陽離子修飾的魔芋 多糖與核酸復(fù)合形成的納米顆粒，其中陽離子為乙二胺，核酸為核糖核酸或脫氧核糖核酸。
[0006] 本發(fā)明中cKGM的制備過程：一定量的魔芋多糖加入到無水DMSO中，加熱攪拌使其 溶解，然后恢復(fù)，然后加入Ν，Ν'-羰基二咪唑（CDI)反應(yīng)1小時活化魔芋多糖的羥基，加入 過量的乙二胺反應(yīng)過夜，透析袋雙蒸水透析，凍干即得cKGM。
[0007] 本發(fā)明核酸藥物-cKGM納米制劑的制備過程：
[0008] 1.將核酸藥物與cKGM按照質(zhì)量比為1:1，1:3,1:5,1:7復(fù)合，通過Zeta電位和粒 徑測試，獲得最佳復(fù)合比。
[0009] 2.將cKGM與不同種類的核酸按上述最佳復(fù)合比復(fù)合，震蕩混勻靜置即得本發(fā)明 制劑。
[0010] 本發(fā)明所述核酸藥物-CKGM納米制劑可以輸送核酸藥物進(jìn)入巨噬細(xì)胞。為此本發(fā) 明提取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，向其中加入熒光標(biāo)記核酸藥物-cKGM納米顆粒，共孵育24小時， 通過流式結(jié)果觀測核酸藥物進(jìn)入巨噬細(xì)胞的比例。 toon] 本發(fā)明的有益效果是有效提高了核酸藥物進(jìn)入巨噬細(xì)胞的效率。同時，本發(fā)明制 備原料易于獲取，簡單便宜，制備過程全部為常規(guī)條件下物理復(fù)合，不改變藥物的性質(zhì)，并 能有效降低成本。另外，本發(fā)明制備的核酸藥物-cKGM納米顆粒性質(zhì)穩(wěn)定，便于保存和運(yùn) 輸。本發(fā)明通過常溫下的物理復(fù)合，工藝簡單，有效解決了傳統(tǒng)納米制劑的高成本，包封率 低，生物利用度等缺點。本發(fā)明所述陽離子魔芋多糖（cKGM)核酸藥物納米制劑可以制備成 治療因巨噬細(xì)胞引發(fā)炎癥的藥物。 四、【具體實施方式】
[0012] 本發(fā)明實施過程中，本發(fā)明主要考察的是CKGM的合成，核酸和cKGM復(fù)合物的制 備，和核酸和cKGM復(fù)合的納米顆粒進(jìn)入巨噬細(xì)胞的能力，下面是具體的實施過程。
[0013] LcKGM 的制備
[0014] cKGM的合成方法：稱取500mg的魔芋多糖（購自Megazyme公司，愛爾蘭）溶于 25ml的二甲亞楓（購自Sigma公司，美國），制備得到20mg/ml的魔芋多糖的二甲亞楓溶 液，然后加入1.5g的Ν，Ν'-羰基二咪唑（⑶I，購自Sigma公司，美國）室溫攪拌1小時，再 加入2. 5ml的無水乙二胺（購自Sigma公司，美國），攪拌反應(yīng)12小時，將反應(yīng)液轉(zhuǎn)入到透 析袋中，雙蒸水透析3天，每天換水2次，凍干機(jī)凍干，得到cKGM。通過元素分析來檢測魔芋 多糖是否修飾成功。元素分析結(jié)果顯示修飾過的魔芋多糖上的氮元素的含量為7. 8%，表明 氨基已經(jīng)成功連接到魔芋多糖。
[0015] 2.脫氧核糖核酸（DNA)和cKGM復(fù)合物的制備
[0016] 稱取IOmg的cKGM和IOmg的鮭魚精DNA (生工生物有限公司，上海）分別配制成 10mg/ml的cKGM和10mg/ml的鮭魚精DNA的生理鹽水溶液，將上述兩種溶液按照體積比 I: I，1:3，1:5和1:7混合。充分振蕩，室溫靜置1小時，即得本發(fā)明制劑核糖核酸-cKGM復(fù) 合物。通過Zeta電位和粒徑測定選擇最佳復(fù)合比。
[0017] 表I :DNA_cKGM多糖復(fù)合物粒徑和Zeta電位測定
[0018]

【權(quán)利要求】
1. 一種陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑，其特征是由陽離子修飾的魔芋多糖與核酸 復(fù)合形成的納米顆粒。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑，其特征是陽離子為乙二 胺，核酸為核糖核酸或脫氧核糖核酸。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑的制備方法，其特征是陽離 子魔芋多糖的制備方法是將一定量的魔芋多糖加入到二甲亞楓中，加熱攪拌使其溶解，然 后恢復(fù)，然后加入Ν，Ν' -羰基二咪唑反應(yīng)1小時活化魔芋多糖的羥基，加入過量的乙二胺反 應(yīng)過夜，透析袋雙蒸水透析，凍干即得陽離子魔芋多糖。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑的制備方法，其特征是由以 下步驟構(gòu)成： (1) .將核酸藥物與陽離子魔芋多糖按照質(zhì)量比為1:1或1:3或1:5或1:7復(fù)合； (2) .將陽離子魔芋多糖與不同種類的核酸按上述復(fù)合比復(fù)合，震蕩混勻靜置1. 5小時 即得本發(fā)明制劑。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑在輸送核酸藥物進(jìn)入巨噬 細(xì)胞中的應(yīng)用。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述陽離子魔芋多糖核酸藥物納米制劑在制備治療因巨噬細(xì)胞引 發(fā)炎癥藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K48/00GK104225624SQ201410473531
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年9月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月16日
【發(fā)明者】董磊, 張峻峰, 黃振 申請人:南京大學(xué)