桑寄生總多糖在制備安胎藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了桑寄生總多糖在制備安胎藥物中的應(yīng)用。桑寄生總多糖能促進(jìn)動(dòng)物膜型的子宮蛻膜、卵巢的雌激素和孕激素受體的表達(dá)，提高血清E2和P水平，調(diào)節(jié)了妊娠期內(nèi)分泌，減少動(dòng)物模型的陰道出血，減少流產(chǎn)數(shù)，降低了流產(chǎn)率，從多層次、多因素保護(hù)大鼠妊娠，其安胎作用非常顯著，而且比桑寄生總提物的療效更優(yōu)。
【專利說(shuō)明】桑寄生總多糖在制備安胎藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及桑寄生有效部位的用途，尤其是桑寄生總多糖在制備安胎藥物中的應(yīng) 用。

【背景技術(shù)】
[0002] 桑寄生（Ramulus Taxilli)為桑寄生科植物桑寄生 Taxillus chinensis (DC.) Danser的干燥帶葉莖枝，別名：寄生、桑上寄生，為常綠寄生小灌木。性狀：莖枝呈圓柱形， 長(zhǎng)3?4cm，直徑0. 2?Icm ;表面紅褐色或灰色，具細(xì)縱紋，并有眾多細(xì)小皮孔，小枝有棕 紅色細(xì)毛。有時(shí)逞葉，多卷縮，完整者呈卵圓形，全緣，棕色，革質(zhì)，幼葉亦被棕紅色細(xì)毛。莖 堅(jiān)硬，斷面不整齊，皮部紅棕色，木櫚色較淺。無(wú)臭，味澀。寄生于構(gòu)、槐、榆、木棉、樸等樹 上。主產(chǎn)地為福建、臺(tái)灣、廣東、廣西、云南。冬季至次春采割，除去粗莖，切段，干燥，或蒸后 干燥。性味歸經(jīng)：苦、甘，平。歸肝、腎經(jīng)。主要作用：補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，養(yǎng)血安胎。對(duì)風(fēng)濕痹 痛、肝腎不足、腰膝酸痛最為適宜，用于肝腎虛虧、沖任不固所致胎漏下血、胎動(dòng)不安，常與 續(xù)斷、菟絲子、阿膠等配伍。
[0003] 自然流產(chǎn)是常見的妊娠病，近年發(fā)病率呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，其病因復(fù)雜，確切發(fā)病機(jī)制尚 不明確，古今中外的論述繁多。從中醫(yī)角度來(lái)看，自然流產(chǎn)的病因，大致歸納為腎虛、脾虛、 氣血不足、血熱、血瘀、外傷等，病機(jī)主要為沖任氣血不調(diào)，胎元不固。致病因素雖多，但多 數(shù)醫(yī)家認(rèn)為腎脾二臟乃病機(jī)之關(guān)鍵。因腎為先天之本，主生殖，主藏精而系胞胎。胎孕 既成，則有賴于先天生殖之精的滋養(yǎng)和腎氣的鞏固，后天水谷之精的充養(yǎng)。若腎氣不足，胎 失所系，或脾虛血少，胎失所養(yǎng)，均可致胎元不固而殞墮。故腎不系胎，脾失攝養(yǎng)為本病之關(guān) 鍵。中藥安胎作用機(jī)理可能與以下五個(gè)作用機(jī)制有關(guān)：對(duì)子宮興奮性的影響、對(duì)妊娠期內(nèi)分 泌的調(diào)節(jié)的作用、對(duì)妊娠期的免疫調(diào)節(jié)作用、改善血液流變學(xué)作用、對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的影響等。
[0004] 從現(xiàn)代病因?qū)W看，導(dǎo)致自然流產(chǎn)的病因，主要有遺傳因素、內(nèi)分泌功能異常、免疫 因素、感染因素、生活環(huán)境因素和解剖因素等。
[0005] 遺傳因素 染色體異常：包括數(shù)目異常和結(jié)構(gòu)異常，可自然發(fā)生也可由外界因素（物理、化學(xué)、生 物）和遺傳因素誘發(fā)。染色體異常以數(shù)量異常多見，常見染色體三體，其次是45, X0。多 倍體異常少見，其中以三倍體多見。在染色體結(jié)構(gòu)異常的流產(chǎn)中以平衡移位攜帶者多見，其 次是臂間倒位及性染色體異常。
[0006] 基因異常：目前原因不明的反復(fù)自然流產(chǎn)（recurrent spontaneous abortion, RSA)遺傳免疫學(xué)研究多集中于HLA位點(diǎn)，即HLA易感基因和（或）HLA易感單體，其次 是與凝血功能有關(guān)的異?；颍刂泻Ｘ氀兒献右部砂l(fā)生流產(chǎn)。HLA位于人類6號(hào)染色 體短臂（6p21，3)，全長(zhǎng)4000kh，分為I、II、III 3個(gè)區(qū)域，其主要功能是參與免疫應(yīng)答調(diào)控。 目前研究表明，II區(qū)域中的DQ亞區(qū)與免疫性疾病有關(guān)。遺傳性血栓形成傾向不僅與妊娠血 栓栓塞有關(guān)，而且也是流產(chǎn)的重要原因。凝血因子V突變和活化蛋白C抵抗是導(dǎo)致流產(chǎn)的 常見原因，同時(shí)不耐熱的亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR)基因多態(tài)性在凝血缺陷所導(dǎo)致的 流產(chǎn)中起一定的作用。
[0007] 內(nèi)分泌功能異常 最常見為黃體功能不全，由于卵泡發(fā)育不良，排卵后黃體形成不健全；或妊娠早期卵巢 對(duì)HCG反應(yīng)欠佳，孕酮分泌不足；另一方面，子宮內(nèi)膜的孕激素受體（PR)不足，對(duì)孕酮的效 應(yīng)低下，均可影響蛻膜及胎盤形成。
[0008] 有研究發(fā)現(xiàn)，反復(fù)早期自然流產(chǎn)的患者，其血清E2水平在卵泡期和黃體期均顯著 低于正常對(duì)照組，而卵泡刺激素（FSH)、促黃體生成素（LH)、催乳素（PRL)和孕酮（P)水平 則與對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。但子宮內(nèi)膜組織雌激素受體（ER)、孕激素受體（PR)含量 卻顯著低于對(duì)照組。提示子宮內(nèi)膜對(duì)激素的效應(yīng)不良是自然流產(chǎn)的重要原因。
[0009] 近年的研究還發(fā)現(xiàn)，先兆流產(chǎn)或不全流產(chǎn)的患者血漿β -內(nèi)啡肽（β -EP)水平顯 著上升，而促性腺激素釋放激素（Gn-RH)、人絨毛膜促性腺激素（HCG)和孕酮（P)水平則下 降（Ρ〈0· 01)。
[0010] 此外，甲狀腺功能異常（甲亢或甲低)、糖尿病或其它內(nèi)分泌疾患也可影響胚胎發(fā) 育而流產(chǎn)。
[0011] ⑶免疫因素 原因不明的反復(fù)自然流產(chǎn)，多數(shù)是免疫因素所致。約50%的RSA發(fā)病與免疫因素有關(guān)， 流產(chǎn)是母胎之間免疫狀態(tài)失衡，發(fā)生免疫排斥所致。免疫因素引起的RSA可分為自身免疫 型和同種免疫型兩類。
[0012] 自身免疫：通?？稍诨颊叩捏w內(nèi)檢出自身抗體，如抗磷脂抗體等。抗磷脂抗體綜合 征（the antiphospholipid syndrome, APS)是最常見的自身免疫病型疾病。另外，抗甲 狀腺抗體、抗凝血酶原抗體、抗核抗體等均與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)（recurrent miscarriage, RM)發(fā) 病密切相關(guān)。
[0013] 同種免疫：由同種免疫病型可能因?yàn)槟?胎界面的免疫耐受機(jī)制發(fā)生異常，胚胎 受到母體免疫應(yīng)答的攻擊而使胚胎遭受排斥、流產(chǎn)。主要與人類白細(xì)胞抗原（HLA)、蛻膜T 細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）、細(xì)胞因子、補(bǔ)體系統(tǒng)、凋亡因子表達(dá)異常有關(guān)。
[0014] 細(xì)胞因子：近年研究證明，Thl、Th2細(xì)胞因子平衡對(duì)妊娠結(jié)局關(guān)系密切。Th2來(lái)源 的細(xì)胞因子對(duì)妊娠有利，而Thl來(lái)源的細(xì)胞因子則不利于妊娠。對(duì)妊娠結(jié)局而言，重要的是 Thl /Th2的平衡，而不是哪一類因子的絕對(duì)值。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β (TGF-β 1)可能對(duì)維持妊 娠至關(guān)重要，但也可能是復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的一個(gè)危險(xiǎn)因子。
[0015] 補(bǔ)體系統(tǒng)異常：有學(xué)者推測(cè)，如果補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白表達(dá)發(fā)生缺陷，那么補(bǔ)體介導(dǎo)的 免疫病理作用可能導(dǎo)致流產(chǎn)。李霞等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了血清中可溶性補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白分子可 能與習(xí)慣性流產(chǎn)有關(guān)，即有習(xí)慣性流產(chǎn)史的非妊娠婦女血清抗補(bǔ)體抑制率較正常無(wú)流產(chǎn) 的經(jīng)產(chǎn)婦低。據(jù)此認(rèn)為有習(xí)慣性流產(chǎn)史的患者妊娠時(shí),可能由于血清本身的抗補(bǔ)體作用低 下，難以有效地抑制補(bǔ)體激活，從而促發(fā)免疫病理作用，導(dǎo)致習(xí)慣性流產(chǎn)。
[0016] 凋亡因子表達(dá)異常：細(xì)胞凋亡增加可能是RSA發(fā)生的一個(gè)重要病理過(guò)程。母胎界 面存在凋亡因子受體FasL和Trai-IR，二者分別與激活的淋巴細(xì)胞表面存在的凋亡因子（ Fas和Trail)結(jié)合，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，使胚胎逃避免疫打擊。研究表明，RSA患者胎盤絨毛 滋養(yǎng)細(xì)胞表面FasL表達(dá)減少，導(dǎo)致母胎間免疫耐受的破壞，引起異常的免疫反應(yīng)，從而 導(dǎo)致RSA的發(fā)生。
[0017] 感染因素 急性傳染病、高熱可引起子宮收縮而流產(chǎn)；細(xì)菌毒素或病毒(如風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、 單純皰疹病毒等)可通過(guò)胎盤進(jìn)入胎兒血循環(huán)，可導(dǎo)致胎兒發(fā)育異?；蛩劳?。TORCH感染與 自然流產(chǎn)的相關(guān)性已得到臨床醫(yī)生的廣泛關(guān)注。近年來(lái)，對(duì)流產(chǎn)婦女和正常早孕婦女常規(guī) 檢測(cè)風(fēng)疹病毒、巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒和弓形體抗體，人類微小病毒B19 (B19V)等。
[0018] 生殖道的支原體、衣原體感染與自然流產(chǎn)的相關(guān)性也是近年研究的熱點(diǎn)。研究表 明，自然流產(chǎn)患者宮頸CT、UU、MH感染率顯著高于正常妊娠組。其機(jī)理可能是炎癥細(xì)胞浸潤(rùn) 子宮內(nèi)膜，影響胚胎的生長(zhǎng)；或通過(guò)垂直傳播影響胚胎，導(dǎo)致胚胎停止發(fā)育。
[0019] 解剖因素 子宮形態(tài)異常(如雙子宮、縱隔子宮或子宮發(fā)育不良)、盆腔或?qū)m腔內(nèi)占位性病變(如子 宮肌瘤等)，影響胎兒生長(zhǎng)發(fā)育；宮頸內(nèi)口松弛或?qū)m頸重度裂傷，導(dǎo)致宮頸機(jī)能不全，可造成 晚期流產(chǎn)。
[0020] 生活環(huán)境因素 孕期接觸有害的化學(xué)物質(zhì)與物理因素，包括重金屬、苯、甲醛、放射線、噪音、高溫等以 及主動(dòng)被動(dòng)吸煙等，可直接或間接對(duì)胚胎或胎兒造成損害。
[0021] 目前，對(duì)于自然流產(chǎn)的治療，西醫(yī)多采用期待療法、激素療法和免疫療法，但是這 些方法有種種局限和副作用，并不能安全有效地防治自然流產(chǎn)。而中醫(yī)藥由于其副作用少， 安全可靠且具有遠(yuǎn)期療效，在調(diào)經(jīng)、種子、安胎方面具特色和優(yōu)勢(shì)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0022] 本發(fā)明的目的在于提供桑寄生總多糖的用途，即桑寄生總多糖在制藥中的應(yīng)用。
[0023] 實(shí)際上，本發(fā)明涉及桑寄生總多糖在制備安胎藥物中的應(yīng)用。
[0024] 本發(fā)明涉及桑寄生總多糖在制備減少流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用。
[0025] 本發(fā)明涉及桑寄生總多糖在制備提高活胎數(shù)的藥物的應(yīng)用。
[0026] 本發(fā)明涉及桑寄生總多糖在制備減少陰道出血的藥物中的應(yīng)用。
[0027] 本發(fā)明涉及桑寄生總多糖在制備調(diào)節(jié)妊娠內(nèi)分泌的藥物中的應(yīng)用。具體地，涉及 桑寄生總多糖作為制備提高妊娠期卵巢及子宮的雌激素水平藥物的應(yīng)用；涉及桑寄生總多 糖作為制備提高妊娠期卵巢及子宮的孕激素受體水平藥物的應(yīng)用；作為制備提高妊娠期卵 巢及子宮的雌激素受體水平藥物的應(yīng)用。
[0028] 作為本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，所述桑寄生總多糖的制備方法為： (1) 取干燥桑寄生粉碎后，用乙醇提取，過(guò)濾，濾液濃縮得到桑寄生醇提物； (2) 濾渣揮干溶劑后，加水進(jìn)行兩次煎煮，過(guò)濾，合并兩次濾液，濃縮成浸膏，得到桑寄 生醇提后水提物； (3) 桑寄生醇提物用水溶解后，先后用石油醚和乙酸乙酯萃取，得到水層溶液A ;桑寄 生醇提后水提物用水溶解后，上大孔樹脂柱，靜置吸附，然后依次用水和30%乙醇水洗脫， 接收水洗脫液，濃縮，為水溶液B，接收30%乙醇水洗脫液，濃縮，為溶液C ; (4) 水層溶液A和溶液C混合均勻，上大孔樹脂柱，靜置吸附，然后用水洗脫，所得洗脫 液濃縮，得到溶液E ; (5) 合并水溶液B和溶液E，混合均勻，進(jìn)行醇沉，過(guò)濾，濾渣干燥后即為桑寄生總多 糖。
[0029] 所述步驟（1)中，干燥桑寄生粉碎成20-30目粗粉，加入6?8倍95%乙醇提取兩次， 每次先浸泡2(T40min后于3(T40°C下超聲處理2(T40min，合并兩次濾液，濾液濃縮獲得桑 寄生醇提物。所述濃縮條件為：溫度5(T65°C，濃縮轉(zhuǎn)速6(T80rpm (轉(zhuǎn)/每分)，濃縮真空度 0· 05?0· 15Mpa。
[0030] 所述超聲處理的頻率是30?50ΚΗζ。
[0031] 所述步驟（2)中，濾渣室溫下?lián)]干乙醇后，加6~8倍蒸餾水煎煮兩次，每次先浸 泡2(T40min，后加熱煎煮2(T40min，水沸開始計(jì)時(shí)，過(guò)濾，合并兩次濾液，濾液減壓濃縮 成浸膏，所得浸膏即為桑寄生醇提后水提物。所述濃縮條件為：溫度5(T65°C，濃縮轉(zhuǎn)速 60?80rpm (轉(zhuǎn)/每分），濃縮真空度0· 05?0· 15Mpa。
[0032] 所述步驟（3)中，取桑寄生醇提后水提物加15~25倍水溶解后，溶液加樣于大孔樹 脂柱，靜置吸附4~6h后，依次用水、和30%乙醇水洗脫，各洗脫溶劑均為:T5L ;接收水洗脫 液，濃縮至500ml，為水溶液B ;接收30%乙醇水洗脫液，減壓濃縮至500ml，為溶液C。
[0033] 所述步驟（4)中，合并水層溶液A和溶液C，混合均勻后，加樣于大孔樹脂柱，靜置 吸附4?6h后，用:T5L水洗脫，；接收水洗脫液，減壓濃縮成500ml，為溶液E。
[0034] 所述步驟（5)中，醇沉?xí)r，溶液中乙醇含量為75%。
[0035] 所述的桑寄生總多糖的治療有效量是為個(gè)體給藥后產(chǎn)生安胎等活性作用的劑量。 而給予個(gè)體單劑或多劑量時(shí)，給藥劑量根據(jù)多種因素而不同，包括桑寄生總多糖的藥代動(dòng) 力學(xué)性質(zhì)、給藥途徑、患者情況何特性（性別、年齡、體重、健康情況、體型）、癥狀程度、并存 的治療、治療頻率和期望的效果。
[0036] 所述的桑寄生總多糖可由多種途徑進(jìn)行個(gè)體給藥，給藥途徑包括口服、靜脈注射 等。相應(yīng)地，所述的桑寄生總多糖可以與可藥用載體制備成口服制劑和注射齊?。其中，口服 制劑包括片劑、膠囊劑、微膠囊劑、軟膠囊劑、顆粒劑、滴丸、口服液和散劑。注射劑包括靜脈 注射劑和粉針劑。還可以根據(jù)劑型需要可配以不同的可藥用載體，同時(shí)可加入抗氧化劑、乳 化劑、穩(wěn)定劑和防霉劑。
[0037] 本發(fā)明研究了桑寄生總多糖的藥理作用，根據(jù)藥理學(xué)研究原則，設(shè)計(jì)了相關(guān)的實(shí) 驗(yàn)動(dòng)物模型，以流產(chǎn)率、流產(chǎn)癥狀、臟器指數(shù)、雌二醇（Ε2)、孕酮（P)、雌激素受體（ER)、孕激 素受體（PR)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)桑寄生總多糖進(jìn)行了動(dòng)物模型的流產(chǎn)療效進(jìn)行分析，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證 明：桑寄生總多糖能促進(jìn)動(dòng)物膜型的子宮蛻膜、卵巢的雌激素和孕激素受體的表達(dá)，提高血 清E2和P水平，調(diào)節(jié)了妊娠期內(nèi)分泌，減少動(dòng)物模型的陰道出血，減少流產(chǎn)數(shù)，降低了流產(chǎn) 率，從多層次、多因素保護(hù)動(dòng)物妊娠，其安胎作用非常顯著，而且比桑寄生總提物的療效更 優(yōu)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0038] 圖1是桑寄生總多糖含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線。

【具體實(shí)施方式】
[0039] 下面結(jié)合實(shí)例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)闡述桑寄生總多糖在安胎方面的 活性及療效，但是以下實(shí)施方式僅用于說(shuō)明本發(fā)明的目的，并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0040] 桑寄生總多糖對(duì)腎虛-黃體功能抑制流產(chǎn)模型大鼠安胎作用的藥效及作用機(jī)制 研究 1儀器與試藥 1. 1儀器： 中藥粉碎機(jī)：型號(hào)DFY-1000C，廣州市愷飛科學(xué)儀器有限公司；超聲提取儀：型號(hào) THC-50B，濟(jì)寧天華超聲電子公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：型號(hào)IKARV10,東南科技儀器有限公司；高 效液相色譜儀：型號(hào)Agilent 1260,安捷倫公司；紫外分光光度儀：型號(hào)UV-5200,上海元 析儀器有限公司；大孔樹脂：型號(hào)D101，廣州萬(wàn)譜儀器有限公司。色譜柱：Ecosil C18柱， 4. 6*250mm，C/N: EC182546, S/N: 0EC412-89 ;0DS 固相萃取小柱：Accu BOND II，Agilent 0DS-C18,6ml/500mg ;電子分析天平：BP211D，瑞士 Sartorius 公司。
[0041] 1.2 試藥： 桑寄生Ramulus Taxilli為桑寄生科植物桑寄生Taxillus chinensis (DC.) Danser的 干燥帶葉莖枝。
[0042] 寬絲子Semen Cuscutae為旋花科植物寬絲子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成 熟種子。
[0043] 續(xù)斷 Radix Dipsaci 為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷 Dipsacusasper asperoides C. Y. Chen et T. M. Ai 的干燥根。
[0044] 乙腈和甲醇為色譜純（國(guó)產(chǎn)）；蒸餾水為怡寶牌飲用水；乙酸乙酯、石油醚為分析 純。
[0045] 實(shí)驗(yàn)方法與步驟 2. 1桑寄生及其桑寄生多糖和減味壽胎丸的提取 2. I. 1減味壽胎丸全提物的提取 減味壽胎丸醇提物的提?。喝「稍锼幉腎lOOg (菟絲子400g，桑寄生300g，續(xù)斷300g)， 分別用中藥粉碎機(jī)粉碎成2(Γ30目粗粉，混合均勻后加95%乙醇7L浸泡30min后，于 30-40°C下超聲30min，超聲頻率40KHz，四層紗布過(guò)濾。濾渣再加95%乙醇7L浸泡30min， 30-40°C下超聲30min，超聲頻率40KHz，四層紗布過(guò)濾，留取所得濾渣作為水提物提取用。 濾液減壓濃縮成浸膏，濃縮溫度60°C，濃縮轉(zhuǎn)速70rpm (轉(zhuǎn)每分)，濃縮真空度0. 1，所得浸 膏即為壽胎方醇提物樣品。
[0046] 減味壽胎丸醇提后水提物的提?。荷鲜鰹V渣室溫下?lián)]干乙醇后，加蒸餾水7L浸泡 30min后，加熱煎煮30min，水沸開始計(jì)時(shí)，四層紗布過(guò)濾，濾漁再加蒸饋水7L浸泡30min 后，加熱煎煮30min，再用四層紗布過(guò)濾，合并兩次濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀減壓濃縮成浸 膏，濃縮溫度60°C，濃縮轉(zhuǎn)速70rpm(轉(zhuǎn)/每分)，濃縮真空度0. IMpa，所得浸膏即為減味壽 胎丸醇提后水提物樣品。
[0047] 將上述所得減味壽胎丸醇提物樣品與減味壽胎丸醇提后水提物樣品合并，即得減 味壽胎丸總提物樣品。
[0048] 2. 1. 2桑寄生全提物的提取 桑寄生醇提物的提?。喝「稍锷＜纳幉膌〇〇〇g，用中藥粉碎機(jī)粉碎成20-30目粗粉， 力口 95%乙醇7L浸泡30min后，于30-40°C下超聲30min，超聲頻率40KHz，四層紗布過(guò)濾。濾 渣再加95%乙醇7L浸泡30min，30-40°C下超聲30min，超聲頻率40KHz，四層紗布過(guò)濾，留取 濾渣作為水提物提取用。濾液減壓濃縮成浸膏，濃縮溫度60°C，濃縮轉(zhuǎn)速70rpm (轉(zhuǎn)/每 分)，濃縮真空度〇. IMpa，所得浸膏即為桑寄生醇提物樣品。
[0049] 桑寄生醇提后水提物的提?。簽V渣室溫下?lián)]干上述提取溶劑后，加蒸餾水7L浸泡 30min后，加熱煎煮30min，水沸開始計(jì)時(shí)，四層紗布過(guò)濾，濾漁再加蒸饋水7L浸泡30min 后，加熱煎煮30min，再用四層紗布過(guò)濾，合并兩次濾液，濾液減壓濃縮成浸膏，濃縮溫度 60°C，濃縮轉(zhuǎn)速70rpm (轉(zhuǎn)/每分)，濃縮真空度0. IMpa，所得浸膏即為桑寄生醇提后水提物 樣品。
[0050] 將上述所得桑寄生醇提物樣品與桑寄生醇提后水提物樣品合并，即得桑寄生總提 物樣品。
[0051] 2. L 3桑寄生多糖的提取 取上述桑寄生醇提物樣品22. 2g，加500ml蒸餾水溶解后，再加500ml石油醚，于分液漏 斗中振搖混勻，靜置30min即分層完全，取萃取后下面水層于另一分液漏斗中，并加500ml 乙酸乙酯，振搖混勻，靜置30min即分層完全，取萃取下層水層液體為溶液A。
[0052] 取桑寄生醇提后水提物樣品50g，加1000ml蒸餾水溶解后，溶液加樣于大孔樹脂 柱(凈重800g)，靜置吸附5h后，依次用水、和30%乙醇水洗脫，各洗脫溶劑均為4L。接收水 洗脫液，同法濃縮至500ml，為溶液B。接收30%乙醇水洗脫液，減壓濃縮至500ml，記為溶液 C0
[0053] 合并上述所得溶液A和溶液C，混合均勻后，加樣于大孔樹脂柱(凈重500g)，靜置 吸附5h后，用4L水洗脫。接收水洗脫液，減壓濃縮成500ml，記為溶液E。
[0054] 合并上述所得溶液B和溶液E，混合均勻后，加乙醇至溶液中乙醇含量為75%，靜置 過(guò)夜析出絮狀物沉淀，四層紗布過(guò)濾收集沉淀，濾渣干燥后即為桑寄生粗多糖樣品。
[0055] 以上減壓濃縮條件均為：濃縮溫度60°C，濃縮轉(zhuǎn)速70rpm (轉(zhuǎn)/每分)，濃縮真空度 0. IMpa0
[0056] 2.2桑寄生多糖的含量測(cè)定 多糖含量采用苯酚-硫酸法測(cè)定。
[0057] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精確稱取無(wú)水葡萄糖對(duì)照品0. 25 g，置250 ml容量瓶中，用少 量蒸餾水溶解后，稀釋至刻度。分別取l.〇、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5ml于50 ml容量瓶 中，加蒸餾水至刻度，各吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液及空白蒸餾水液2 ml，加新配制的6 %苯酚 lml，置冰浴中，加濃硫酸5 ml,振蕩混勻后放置2 min,再置沸水浴中加熱15 min,迅速冷 卻至室溫，在波長(zhǎng)492nm測(cè)定吸收度。如圖1所示，以吸光度A對(duì)濃度C繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線： A=0. 0171C+0. 0726, R=O. 9981。
[0058]

【權(quán)利要求】
1. 桑寄生總多糖在制備安胎藥物中的應(yīng)用。
2. 桑寄生總多糖在制備減少流產(chǎn)率的藥物中的應(yīng)用。
3. 桑寄生總多糖在制備提1?活胎數(shù)的藥物的應(yīng)用。
4. 桑寄生總多糖在制備減少陰道出血的藥物中的應(yīng)用。
5. 桑寄生總多糖在制備調(diào)節(jié)妊娠內(nèi)分泌的藥物中的應(yīng)用。
6. 桑寄生總多糖在制備提高妊娠期卵巢及子宮的雌激素水平藥物的應(yīng)用。
7. 桑寄生總多糖在制備提高妊娠期卵巢及子宮的孕激素受體水平藥物的應(yīng)用。
8. 桑寄生總多糖在制備提高妊娠期卵巢及子宮的雌激素受體水平藥物的應(yīng)用。
9. 一種桑寄生總多糖的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 取干燥桑寄生粉碎后，用乙醇提取，過(guò)濾，濾液濃縮得到桑寄生醇提物； (2) 濾渣揮干溶劑后，加水進(jìn)行兩次煎煮，過(guò)濾，合并兩次濾液，濃縮成浸膏，得到桑寄 生醇提后水提物； (3) 桑寄生醇提物用水溶解后，先后用石油醚和乙酸乙酯萃取，得到水層溶液A ;桑寄 生醇提后水提物用水溶解后，上大孔樹脂柱，靜置吸附，然后依次用水和30%乙醇水洗脫， 接收水洗脫液，濃縮，為水溶液B，接收30%乙醇水洗脫液，濃縮，為溶液C ; (4) 水層溶液A和溶液C混合均勻，上大孔樹脂柱，靜置吸附，然后用水洗脫，所得洗脫 液濃縮，得到溶液E ; (5) 合并水溶液B和溶液E，混合均勻，進(jìn)行醇沉，過(guò)濾，濾渣干燥后即為桑寄生總多 糖。
10. -種權(quán)利要求9所述制備方法制備的桑寄生總多糖。
【文檔編號(hào)】A61K31/715GK104288171SQ201410480326
【公開日】2015年1月21日 申請(qǐng)日期:2014年9月19日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月19日
【發(fā)明者】羅頌平, 郜潔, 黃長(zhǎng)盛, 劉新玉 申請(qǐng)人:羅頌平