包含非離子等滲劑的佐劑組合物的制作方法
【專利摘要】提供了包含在脂質(zhì)體制劑中的TLR-4激動劑和皂苷、以及非離子等滲劑的佐劑和免疫原性組合物，其中氯化鈉的濃度或離子強度小于100mM。
【專利說明】包含非離子等滲劑的佐劑組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及包含非離子等滲劑且具有低濃度的鹽，特別是具有以IOOmM或低于 IOOmM的氯化鈉濃度的水性佐劑組合物。本發(fā)明還涉及包含抗原或抗原性制劑和所述水性 佐劑組合物的免疫原性組合物。

【背景技術(shù)】
[0002] 佐劑有時用于改善對于任何給定抗原產(chǎn)生的免疫應(yīng)答。然而，佐劑包括到疫苗或 免疫原性組合物內(nèi)增加組分制備的復(fù)雜性以及疫苗組合物的分布和配制的復(fù)雜性。佐劑組 分和抗原組分各自的制備必須由配制者加以考慮。特別地，應(yīng)考慮抗原組分與佐劑組分的 相容性。這特別是其中凍干抗原或抗原性制劑預(yù)期用佐劑制劑重構(gòu)的情況。在此類情況下， 重要的是佐劑制劑的緩沖液適合于抗原或抗原性制劑，并且抗原的免疫原性或可溶性不受 佐劑影響。
[0003] 發(fā)明概述 本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)某些抗原對稱為"鹽析"的現(xiàn)象特別敏感，所述鹽析可以定義為通過用 鹽例如氯化鈉飽和從其溶液中沉淀蛋白質(zhì)。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)在低至150mM的氯化鈉濃度 時，敏感抗原可以聚集且沉淀。
[0004] 因此，本發(fā)明提供了包含在脂質(zhì)體制劑中Toll樣受體（TLR)4激動劑和皂苷，以及 非離子等滲劑的水性等滲佐劑組合物，其中所述組合物中氯化鈉的濃度小于lOOmM。
[0005] 本發(fā)明進一步提供了包含在脂質(zhì)體制劑中的TLR-4激動劑和皂苷，以及非離子等 滲劑的水性等滲佐劑組合物，其中所述組合物中的離子強度小于IOOmM。
[0006] 此外，本發(fā)明提供了可以用于更廣泛范圍的蛋白質(zhì)抗原的水性等滲佐劑組合物， 所述蛋白質(zhì)抗原包括對"鹽析"敏感的那些以及不敏感的那些。
[0007] 本發(fā)明還提供了包含抗原或抗原性制劑和水性佐劑組合物的免疫原性組合物和 用于制備所述免疫原性組合物的方法，所述水性佐劑組合物包含在脂質(zhì)體制劑中的TLR-4 激動劑和皂苷，以及非離子等滲劑，其中所述佐劑組合物中氯化鈉的濃度小于l〇〇mM。
[0008] 附圖簡述 圖I. QS21裂解活性曲線。
[0009] 圖2.在不同ASA制劑中每種3D-MPL同源物（congener)的百分率。
[0010] 圖3.用于PRAME/CpG凍干的冷凍干燥循環(huán)。
[0011] 圖4.在ASA (150mM NaCl)和ASA (山梨醇）中重構(gòu)的PRAME和NYES0-1之間的 圖示比較。
[0012] 圖5.在實驗1中用不同佐劑組合物配制的PRAME/CpG免疫接種的小鼠的體液應(yīng) 答。
[0013] 圖6.在實驗1中用不同佐劑組合物配制的PRAME/CpG免疫接種的小鼠中的腫瘤 保護。
[0014] 圖L在實驗2中用ASA (150mM NaCl)、ASA (山梨醇）或液體制劑ASA (70mM NaCl)配制的PRAME/CpG免疫接種的小鼠的體液應(yīng)答。
[0015] 圖8.在實驗2中用ASA (150mM NaCl)、ASA (山梨醇）或液體制劑ASA配制的 PRAME/CpG免疫接種的小鼠的⑶4+應(yīng)答。
[0016] 圖9.在實驗2中用ASA (150mM NaCl)、ASA (山梨醇）或液體制劑ASA配制的 PRAME/CpG免疫接種的小鼠中的腫瘤保護。
[0017] 發(fā)明詳述 本發(fā)明描述了用非離子等滲劑的替換或部分替換在水性佐劑組合物中的等滲劑，所述 等滲劑為鹽例如氯化鈉。
[0018] 眾所周知對于腸胃外施用，溶液應(yīng)是生理學(xué)等滲的（即具有藥學(xué)可接受的摩爾滲 透壓濃度）以避免細胞畸變或裂解。"等滲劑"是生理學(xué)耐受的且對制劑(例如本發(fā)明的免 疫原性組合物）賦予合適張力的化合物，以預(yù)防水跨越與制劑接觸的細胞膜的凈流動。
[0019] 包含100 mM氯化鈉或更多的水性佐劑組合物是已知的，例如在WO 2005/112991 和TO2008/142133中的佐劑系統(tǒng)A (ASA)或在W02007/068907中公開的脂質(zhì)體佐劑。如 W02008/142133中所示，此類佐劑組合物可以用作稀釋劑，以在疫苗接種前重構(gòu)包含抗原或 抗原性制劑的凍干組合物。重要的是此類重構(gòu)的組合物是等滲的，即含有與機體和血液的 細胞中發(fā)現(xiàn)的基本上相同的鹽濃度，從而使得在注射時不引起細胞皺縮或擴張。一般地，氯 化鈉用作等滲劑。本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)某些抗原對"鹽析"特別敏感，即當(dāng)在溶液中含有高濃度 的鹽時，在溶液中的蛋白質(zhì)聚集或凝固（coagulate)的過程。
[0020] 蛋白質(zhì)抗原聚集時的鹽濃度在蛋白質(zhì)之間不同。本發(fā)明人已鑒定了在相對低的鹽 濃度時，例如在約IOOmM或更少的氯化鈉時，將聚集的一組抗原。這意味著某些已知佐劑組 合物不適合于重構(gòu)包含這些抗原的組合物或與包含這些抗原的組合物一起使用，因為聚集 發(fā)生。
[0021] 本發(fā)明提供了可以與此類抗原一起使用的水性佐劑組合物，所述抗原即在低于 IOOmM氯化鈉的鹽濃度時聚集的那些抗原。本發(fā)明的水性佐劑組合物包含在脂質(zhì)體制劑 中的TLR-4激動劑和皂苷，以及非離子等滲劑，其中佐劑組合物中氯化鈉的濃度低于約 IOOmM,例如低于 90禮、8〇1111、7〇1111、6〇1111、5〇1111、4〇1111、3〇1111、2〇1111或15 1111。在一個具體實施 方案中，佐劑組合物中氯化鈉的濃度低于IOmM或在或低于5mM。在一個進一步具體實施方 案中，佐劑組合物基本上不含氯化鈉?；旧喜缓庵嘎然c的濃度在或非常接近于0 mM (即 或 3mM)。
[0022] 使用已知技術(shù)和試劑盒，技術(shù)人員可以容易地測試鈉（Na+)和氯（CO離子 的濃度。例如，鈉可以使用試劑盒例如來自Biosupply的鈉酶促測定試劑盒（目錄號： BQ011EAEL)進行測定。氯化物可以使用試劑盒例如來自Biosupply的氯化物酶促測定試劑 盒（目錄號：BQ006EAEL)進行測定。
[0023] 本發(fā)明進一步提供了包含在脂質(zhì)體制劑中的TLR-4激動劑和皂苷，以及非離子等 滲劑的水性等滲佐劑組合物，其中離子強度小于IOOmM,例如低于90mM、80mM、70mM、60mM、 50mM、40mM、30mM、20 mM或15 mM。在一個具體實施方案中，佐劑組合物中的離子強度低于 IOmM或在或低于5mM。在一個進一步具體實施方案中，佐劑組合物具有在或非常接近于0 mM的離子強度。
[0024] 本發(fā)明的佐劑或免疫原性組合物的離子強度可以使用技術(shù)人員已知的技術(shù)例如 使用電導(dǎo)儀進行測量。
[0025] 用于在與抗原組合物組合的本發(fā)明的水性佐劑組合物中使用的合適的非離子等 滲劑將需要適合于在人中使用，以及與抗原組合物內(nèi)的抗原相容且與佐劑組合物的其他組 分進一步相容。
[0026] 特別地，水性佐劑組合物必須是這樣的，使得當(dāng)與佐劑組合物組合時，抗原組合物 內(nèi)的抗原能夠保留在溶液中且保留其免疫原性。
[0027] 在本發(fā)明的一個實施方案中，合適的非離子等滲劑是多元醇、糖(特別是蔗糖、果 糖、右旋糖或葡萄糖)或氨基酸例如甘氨酸。在一個實施方案中，多元醇是糖醇特別是C3-6 糖醇。示例性糖醇包括甘油、赤蘚醇、蘇糖醇、阿拉伯糖醇、木糖醇、核糖醇、山梨醇、甘露醇、 衛(wèi)矛醇和艾杜糖醇。在這個實施方案的具體例子中，合適的非離子等滲劑是山梨醇。在本 發(fā)明的一個具體實施方案中，本發(fā)明的組合物中的非離子等滲劑是蔗糖和/或山梨醇。
[0028] 在一個實施方案中，在水性佐劑組合物內(nèi)多元醇的合適濃度是約3 -約15% (w/ v)，特別是約3 -約10% (w/v)，例如約3 -約7 % (w/v)，例如約4 -約6% (w/v)。在 這個實施方案的具體例子中，多元醇是山梨醇。
[0029] 水性佐劑組合物包含在脂質(zhì)體制劑中的Toll樣受體激動劑（TLR) 4激動劑和皂 苷。這意味著皂苷和TLR-4激動劑用脂質(zhì)體進行配制。
[0030] 術(shù)語"脂質(zhì)體"一般指封裝水性內(nèi)部的單或多層(取決于形成的脂質(zhì)膜數(shù)目，特別 是2、3、4、5、6、7、8、9或10層)脂質(zhì)結(jié)構(gòu)。脂質(zhì)體和脂質(zhì)體制劑是本領(lǐng)域眾所周知的。能夠 形成脂質(zhì)體的脂質(zhì)包括具有脂肪或脂肪樣性質(zhì)的所有物質(zhì)。可以構(gòu)成脂質(zhì)體中的脂質(zhì)的脂 質(zhì)可以選自甘油酯、甘油磷脂、甘油膦酰脂（glycerophosphinolipids)、甘油磷酸酯、硫脂、 鞘脂、磷脂、異戊二烯、類固醇、硬脂、留醇、archeolipids、合成陽離子脂質(zhì)和含碳水化合物 的脂質(zhì)。
[0031] 在一個實施方案中，脂質(zhì)體包含磷脂。合適的磷脂包括(但不限于):其為磷脂酰膽 堿合成中的中間產(chǎn)物的磷酸膽堿（PC);天然磷脂衍生物：蛋磷酸膽堿、蛋磷酸膽堿、大豆磷 酸膽堿、氫化大豆磷酸膽堿、作為天然磷脂的鞘磷脂；和合成磷脂衍生物：磷酸膽堿(二癸 酰-L- α-磷脂酰膽堿[DDPC]、二月桂酰磷脂酰膽堿[DLPC]、二肉豆蘧磷脂酰膽堿[DMPC]、 二棕櫚酰磷脂酰膽堿[DPPC]、二硬脂酰磷脂酰膽堿[DSPC]、二油酰磷脂酰膽堿[D0PC]、 1-棕櫚酰，2-油酰磷脂酰膽堿[P0PC]、二反油酰磷脂酰膽堿[DEPC])、磷酸甘油（1，2_二 肉豆蘧酰-sn-甘油-3-磷酸甘油[DMPG]、1，2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸甘油[DPPG]、 1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸甘油[DSPG]、1-棕櫚酰-2-油酰-sn-甘油-3-磷酸甘油 [P0PG])、磷脂酸（1，2-二肉豆蘧酰-sn-甘油-3-磷脂酸[DMPA]、二棕櫚酰磷脂酸[DPPA]、 二硬脂酰-磷脂酸[DSPA])、磷酸乙醇胺（1，2-二肉豆蘧酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺 [DMPE]、1，2-二棕櫚酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺[DPPE]、1，2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸 乙醇胺DSPE、1，2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺[DOPE])、磷酸絲氨酸、聚乙二醇[PEG] 磷脂(mPEG-磷脂、聚甘油-磷脂、官能化的磷脂、末端激活的磷脂)。在一個實施方案中，月旨 質(zhì)體包含1-棕櫚酰-2-油酰-甘油-3-磷酸乙醇胺。在一個實施方案中，使用高度純化的 磷脂酰膽堿，并且可以選自磷脂酰膽堿(蛋)、氫化磷脂酰膽堿(蛋)、磷脂酰膽堿(大豆)、氫化 磷脂酰膽堿(大豆)。在一個進一步的實施方案中，脂質(zhì)體包含磷脂酰乙醇胺[POPE]或其衍 生物。
[0032] 取決于磷脂組成和用于其制備的方法，脂質(zhì)體大小可以從30 nm到數(shù)Mm。在本發(fā) 明的特定實施方案中，脂質(zhì)體大小將在50 nm - 500 nm的范圍中，并且在進一步實施方案 中，50 nm - 200 nm。動態(tài)激光散射是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的用于測量脂質(zhì)體的大小 的方法。
[0033] 脂質(zhì)體適當(dāng)?shù)睾兄行灾|(zhì)，例如磷脂酰膽堿，這在室溫適當(dāng)?shù)厥欠墙Y(jié)晶的，例如 蛋黃磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿（DOPC)或二月桂酰磷脂酰膽堿。在一個特定實施方案 中，本發(fā)明的脂質(zhì)體含有D0PC。脂質(zhì)體還可以包含荷電脂質(zhì)，這增加關(guān)于由飽和脂質(zhì)組成的 脂質(zhì)體的脂質(zhì)體-皂苷結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。在這些情況下，荷電脂質(zhì)的量適當(dāng)?shù)厥荌 - 20%w/ w，優(yōu)選5 - 10%。固醇或磷脂的比值是1 - 50% (摩爾/摩爾)，適當(dāng)?shù)?0 - 25%。
[0034] 用于在本發(fā)明中使用的特別合適的皂苷是Quil A及其衍生物。Quil A是從南 美樹阜樹（必中分離的阜苷制劑，并且首先由Dalsgaard等人 在 1974 年（"Saponin adjuvants，'，Archiv. fiir die gesamte Virusforschung,第 44 卷， Springer Verlag，Berlin,第243-254頁)描述為具有佐劑活性。已通過HPLC分離Quil A 的純化片段，這保留佐劑活性而無與Quil A相關(guān)的毒性（EP 0 362 278)，例如QS7和QS21 (也稱為QA7和QA21)。QS-21是衍生自皂樹樹皮的天然皂苷，這誘導(dǎo)⑶8+細胞毒性T細胞 (CTLs)、Thl細胞和占優(yōu)勢的IgG2a抗體應(yīng)答。QS21是在本發(fā)明的背景中的優(yōu)選皂苷。
[0035] 在本發(fā)明的合適形式中，在免疫原性組合物內(nèi)的阜苷佐劑是 quil A的衍生物，優(yōu)選Quil A的免疫原性活性部分，例如QS-17或QS-21，適當(dāng)?shù)豎S-21。
[0036] 在一個具體實施方案中，QS21以其更少反應(yīng)原性（reactogenic)組合物提供，在 其中它用外源固醇例如膽固醇猝滅。存在幾個具體形式的更少反應(yīng)原性的組合物，在其中 QS21由外源膽固醇猝滅。皂苷/固醇在脂質(zhì)體制劑結(jié)構(gòu)中（W0 96/33739,實施例1)。 [0037] 合適的固醇包括谷留醇、豆留醇、麥角固醇、麥角鈣化醇和膽固醇。在一個具 體實施方案中，佐劑組合物包含膽固醇作為固醇。這些固醇是本領(lǐng)域眾所周知的，例如膽固 醇作為在動物脂肪中發(fā)現(xiàn)的天然存在的固醇公開于Merck Index，第11版，第341頁中。
[0038] 當(dāng)活性皂苷部分是QS21時，QS21 :固醇的比值一般是1:100 - l:l(w/w)數(shù)量級， 適當(dāng)?shù)?:10 - 1:1 (w/w)，且優(yōu)選1:5 - 1:1 (w/w)。存在適當(dāng)過量的固醇，QS21:固醇的 比值是至少1:2 (w/w)。在一個實施方案中，QS21:固醇的比值是1:5 (w/w)。固醇適當(dāng)?shù)?是膽固醇。
[0039] 水性佐劑組合物包含Toll樣受體（TLR) 4激動劑。"TLR激動劑"意指作為直接 配體或通過內(nèi)源或外源配體的生成間接地，能夠引起通過TLR信號途徑的信號應(yīng)答的組分 (Sabroe等人，JI 2003 pl630-5)。TLR4激動劑能夠引起通過TLR-4信號途徑的信號應(yīng)答。 TLR-4激動劑的合適例子是脂多糖，適當(dāng)?shù)刂|(zhì)A的無毒衍生物，特別是單磷酰脂質(zhì)A或更 具體而目3_脫醜單憐醜脂質(zhì)A (3D - MPL)。
[0040] 3D-MPL 在名稱 MPL 下由 GlaxoSmithKline Biologicals N.A.銷售，并且文件自 始至終稱為MPL或3D-MPL。參見例如，美國專利號4, 436, 727 ;4, 877, 611 ;4, 866, 034和 4,912,094。3D-MPL主要促進具有IFN-g (Thl)表型的CD4+ T細胞應(yīng)答。3D-MPL可以根 據(jù)GB 2 220 211 A中公開的方法產(chǎn)生。在化學(xué)上，它是具有4、5或6條?；湹?-脫酰 單磷酰脂質(zhì)A的混合物。在本發(fā)明的組合物中，小顆粒3D-MPL可以用于制備水性佐劑組合 物。小顆粒3D-MPL具有這樣的粒子大小，從而使得它可以通過0.22 μ m濾器無菌過濾。此 類制劑在WO 94/21292中描述。優(yōu)選地，粉末狀3D-MPL用于制備本發(fā)明的水性佐劑組合物。
[0041] 可以使用的其他11^-4激動劑是烷基氨基葡糖苷磷酸鹽（46?8)，例如冊98/50399 或美國專利號6, 303, 347中公開的那些(還公開了用于制備AGPs的方法)，適當(dāng)?shù)厝缑绹鴮?利號中公開的RC527或RC529或AGPs的藥學(xué)可接受的鹽。
[0042] 其他合適的TLR-4激動劑如W02003/011223和WO 2003/099195中描述的，例如在 W02003/011223的第4-5頁上或在W02003/099195的第3 - 4頁上的化合物I、化合物II和 化合物 III，且特別是在 W02003/011223 中作為 ER803022、ER803058、ER803732、ER804053、 ER804057m ER804058、ER804059、ER804442、ER804680 和 ER804764 公開的那些化合物。例 如，一種合適的TLR-4激動劑是ER804057。
[0043] 本發(fā)明的水性佐劑組合物包含皂苷和TLR-4激動劑。在一個具體實施方案中，水 性佐劑組合物包含QS21和3D-MPL。
[0044] TLR-4激動劑例如脂多糖例如3D-MPL可以以1 - 100 μ g /佐劑組合物的人劑量 的量使用。3D-MPL可以以約50yg的水平使用，例如40 - 60 yg，適當(dāng)?shù)?5 - 55 yg或 49 - 51 μ g或50 μ g。在一個進一步的實施方案中，佐劑組合物的人劑量包含以約25 μ g 的水平使用的3D-MPL，例如21 - 29 μ g或22 - 28 μ g或28 - 27 μ g或24 - 26 μ g、或 25 μ g〇
[0045] 皂苷例如QS21可以以I - IOOyg /佐劑組合物的人劑量的量使用。QS21可以 以約50yg的水平使用，例如40 - 60 yg，適當(dāng)?shù)?5 - 55 yg或49 - 51 yg或50yg。 在一個進一步的實施方案中，佐劑組合物的人劑量包含以約25 μ g的水平使用的QS21，例 如 21 - 29yg 或 22 - 28yg 或 28 - 27yg 或 24 - 26yg、或 25yg。
[0046] TLR-4激動劑和皂苷都存在于水性佐劑組合物中-TLR-4激動劑與皂苷的重量比 值適當(dāng)?shù)厥?:5 - 5:1，適當(dāng)?shù)?:1。例如，當(dāng)3D-MPL以50yg或25yg的量存在時，那么 適當(dāng)?shù)豎S21也可以分別以50 μ g或25 μ g /水性佐劑組合物的人劑量的量存在。
[0047] 當(dāng)佐劑待與液體形式的抗原組合物組合時，佐劑組合物將在人劑量適當(dāng)體積中， 這是人劑量的預(yù)期最終體積的約一半。例如，500 μ?體積的佐劑用于I ml的預(yù)期最終人劑 量，或250 μ?體積用于0.5 ml的預(yù)期最終人劑量。當(dāng)與抗原組合物組合時，佐劑組合物是 稀釋的，以提供疫苗的最終人劑量。此類劑量的最終體積當(dāng)然將取決于佐劑組合物的起始 體積和加入佐劑組合物中的抗原組合物的體積而改變。在一個可替代實施方案中，水性佐 劑用于重構(gòu)凍干的抗原組合物。在這個實施方案中，佐劑組合物的人劑量適當(dāng)體積大約等 于人劑量的最終體積。液體佐劑組合物加入含有凍干抗原組合物的小瓶中，并且用于重構(gòu) 凍干的抗原組合物。
[0048] 本發(fā)明因此提供了用于制備免疫原性組合物的方法，其包括用如本文定義的水性 佐劑組合物重構(gòu)包含如本文描述的至少一種抗原或抗原性制劑的凍干組合物的步驟。
[0049] 在本發(fā)明的一個進一步實施方案中，提供了包含（i)包含抗原或抗原性制劑的凍 干組合物和（ii)如本文描述的水性佐劑組合物的試劑盒。
[0050] 在本發(fā)明的一個特定實施方案中，提供了包含（i)如本文描述的包含抗原或抗原 性制劑的凍干組合物和（ii)如本文描述的水性佐劑組合物的試劑盒。
[0051] 在一個實施方案中，凍干組合物進一步包含例如如WO 2008/142133中所示的 TLR-9激動劑。
[0052] 在一個可替代實施方案中，提供了其中CpG不與抗原一起共凍干的試劑盒。CpG 可以與水性佐劑組合物混合，或以水性或凍干形式在分開小瓶中。相應(yīng)地，在一個可替代實 施方案中，提供了包含（i)如本文描述的包含抗原的凍干組合物；（ii)水性佐劑組合物；和 (iii) TLR9激動劑(例如免疫刺激性CpG寡核苷酸）的試劑盒。
[0053] 用于在本發(fā)明的試劑盒中使用的TLR-9激動劑是免疫刺激性寡核苷酸，特別 是含有未甲基化的CpG基序的寡核苷酸。此類寡核苷酸是眾所周知的，并且例如在TO 96/02555、W0 99/33488和US 5,865,462中描述。用于在本文描述的免疫原性組合物中使 用的合適TLR9激動劑是含有CpG的寡核苷酸，任選含有由至少3個、適當(dāng)?shù)刂辽?個或更 多個核苷酸分開的2個或更多個二核苷酸CpG基序。CpG基序是胞嘧啶核苷酸隨后為鳥嘌 呤核苷酸。
[0054] 在一個實施方案中，寡核苷酸中的核苷酸間鍵合是二硫代硫酸酯，或可能地是硫 代硫酸酯鍵合，盡管還可以使用磷酸二酯和其他核苷酸間鍵合，包括具有混合的核苷酸間 鍵的寡核苷酸。用于產(chǎn)生硫代磷酸酯寡核苷酸或二硫代硫酸酯的方法在US5, 666, 153、 US5, 278, 302和W095/26204中描述。考慮了包含不同核苷酸間鍵的寡核苷酸，例如混合的 硫代硫酸酯磷酸二酯。可以使用穩(wěn)定寡核苷酸的其他核苷酸間鍵合。
[0055] 適合于包括在本文描述的免疫原性組合物中的CpG寡核苷酸的例子具有下述序 列。在一個實施方案中，這些序列含有硫代硫酸酯修飾的核苷酸間鍵。

【權(quán)利要求】
1. 一種水性佐劑組合物，其包含：（a)在脂質(zhì)體制劑中的TLR-4激動劑和皂苷；和（b) 非離子等滲劑，其中所述佐劑組合物中氯化鈉的濃度或離子強度小于l〇〇mM。
2. 如權(quán)利要求1中要求的水性佐劑組合物，其中所述氯化鈉的濃度或離子強度小于 80mM。
3. 如權(quán)利要求2中要求的水性佐劑組合物，其中所述氯化鈉的濃度或離子強度小于 30mM〇
4. 如權(quán)利要求3中要求的水性佐劑組合物，其中所述氯化鈉的濃度或離子強度小于 10mM〇
5. 如權(quán)利要求4中要求的水性佐劑組合物，其中所述氯化鈉的濃度或離子強度小于 5mM〇
6. 如權(quán)利要求5中要求的水性佐劑組合物，其基本上不含氯化鈉。
7. 根據(jù)任一前述權(quán)利要求的水性佐劑組合物，其中所述非離子等滲劑是多元醇。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的水性佐劑組合物，其中所述多元醇是山梨醇。
9. 權(quán)利要求8的水性佐劑組合物，其中所述山梨醇的濃度是約3% -約15% (w/v)。
10. 權(quán)利要求9的水性佐劑組合物，其中所述山梨醇的濃度是約4% -約10% (w/v)。
11. 任一前述權(quán)利要求的水性佐劑組合物，其中所述TLR-4激動劑是3D-MPL。
12. 根據(jù)任一前述權(quán)利要求的水性佐劑組合物，其中所述皂苷是QuilA或其衍生物。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12的水性佐劑組合物，其中所述QuilA的衍生物是QS21。
14. 根據(jù)任一前述權(quán)利要求的水性佐劑組合物，其包含約5mM氯化鈉和5%- 6% w/v 山梨醇。
15. -種免疫原性組合物，其包含抗原或抗原性制劑和權(quán)利要求1 - 14中任一項的 水性佐劑組合物。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15的免疫原性組合物，其中所述抗原或抗原性制劑在其中所述離子 強度高于51111、1〇1111、2〇111111、3〇1111、4〇1111、5〇1111、6〇1111、7〇1111、8〇1111、9〇1111或10〇1111的鹽濃度或溶 液中是不可溶的。
17. 權(quán)利要求15或16的免疫原性組合物，其中所述抗原或抗原性制劑衍生自HIV、腦 膜炎奈瑟球菌或是腫瘤相關(guān)抗原。
18. 根據(jù)權(quán)利要求17的免疫原性組合物，其中所述抗原選自PRAME或NY-ES0-1或其片 段或衍生物。
19. 根據(jù)權(quán)利要求15 - 18中任一項的免疫原性組合物，其進一步包含CpG寡核苷酸。
20. -種用于制備權(quán)利要求15 - 19中任一項的免疫原性組合物的方法，其包括用如 權(quán)利要求1 _ 14中任一項定義的水性佐劑組合物重構(gòu)包含至少一種抗原或抗原性制劑的 凍干組合物的步驟。
21. -種試劑盒，其包含（i )包含抗原或抗原性制劑的凍干組合物，和（ii )權(quán)利要求1 -14中任一項的水性佐劑組合物。
22. 權(quán)利要求18的方法或權(quán)利要求19的試劑盒，其中所述凍干組合物進一步包含 TLR9激動劑。
23. 權(quán)利要求22的方法或試劑盒，其中所述TLR9激動劑是CpG免疫刺激性寡核苷酸。
24. 權(quán)利要求20 - 23的方法或試劑盒，其中所述抗原或抗原性制劑在其中所述離子 強度高于 1〇遍、2〇111111、3〇1111、4〇1111、5〇1111、6〇1111、7〇1111、8〇1111、9〇1111或10〇1111的鹽濃度或溶液中 是不可溶的。
【文檔編號】A61P37/04GK104367997SQ201410497386
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2010年6月8日 優(yōu)先權(quán)日:2009年6月10日
【發(fā)明者】V.亨德里克斯, D.I.勒穆瓦納 申請人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司