一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片及其制備方法,具體地,涉及一種利用干細胞、透明質(zhì)酸、表皮生長因子和維生素E等制備的抗皺祛斑精華液制備成微針透皮貼片注入到皮下組織中達到美容效果。微針貼片將抗皺祛斑的精華液通過微細管道導入到皮膚的真皮層中,活性成分有效高效地滲入皮膚中,讓皮膚細胞直接吸收抗皺祛斑精華液中的全部活性成分,吸收效果好,最終達到由內(nèi)而外地使肌膚重生,徹底改善膚質(zhì)的皺紋和色斑。本發(fā)明用于抗皺祛斑,安全有效,基本無創(chuàng)傷。
【專利說明】一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片及其制備方法,具體地,涉及一 種利用干細胞、透明質(zhì)酸、表皮生長因子和維生素 E等制備的抗皺祛斑精華液通過微針透 皮貼片注入到皮下組織中達到美容效果,屬于再生醫(yī)學技術(shù)和抗衰老美容服務(wù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 機體細胞時刻處于新生細胞替代衰老退化細胞的過程中,當細胞更新速度小于細 胞衰老速度時,產(chǎn)生更新不足,就開始出現(xiàn)衰老征象,面部皮膚的皺紋和色斑的形成是一種 重要特征和指標。機體內(nèi)能夠起到更新作用的細胞就是干細胞,也就是說皮膚衰老的源頭 就是干細胞更新能力的不足。近年來的臨床研究表明,干細胞在面部整形中得到廣泛的應(yīng) 用,如胚胎干細胞和脂肪源性干細胞等等,干細胞可以對面部起到除皺、祛斑以及治愈創(chuàng)傷 的作用。通過對衰老皮膚進行干細胞治療,使得皮膚厚度有了顯著性的增加,真皮中的膠原 含量也呈現(xiàn)出顯著性增加,從而達到對人體已經(jīng)衰老的皮膚產(chǎn)生良好的修復和美容作用。
[0003] 干細胞是一類具有自我更新、無限復制和多向分化能力的多潛能細胞,醫(yī)學界稱 為"萬用細胞"。脂肪干細胞具有極強的體外增殖能力,可向脂肪、骨、肌肉、內(nèi)皮、胰島、神經(jīng) 等細胞方向分化。與其他干細胞相比,脂肪干細胞具有生物學特性穩(wěn)定、來源充足、易獲得 和體外培養(yǎng)條件簡單等優(yōu)勢,是組織工程和再生醫(yī)學領(lǐng)域的研究熱點。關(guān)于脂肪干細胞抗 皺、祛斑的機制,主要有以下幾點:1、脂肪干細胞可以分泌細胞因子和生長因子,起到營養(yǎng)、 修復和替換機體損傷的衰老細胞的功能;2、脂肪干細胞可以提供抗氧化劑,清除氧自由基, 熱休克蛋白到局部,使局部毒性物質(zhì)被清除,促進細胞和組織修復;3、脂肪干細胞可以增加 膠原蛋白分泌,吞噬色素消除色斑,改善皮膚彈性。
[0004] 目前,藥物美容和外科美容都是一種治標不治本的臨時措施,存在高風險、并發(fā) 癥、副作用并伴有疼痛和淤青。而微創(chuàng)美容憑借高效、安全、易于操作及恢復快等優(yōu)勢日趨 流行。其中微針美容被大多數(shù)求美者青睞。皮膚特別是角質(zhì)層對藥物透皮吸收具有屏障作 用,阻礙藥物的吸收,微針能夠刺穿皮膚的角質(zhì)層屏障,產(chǎn)生微通道來增加藥物的滲入,藥 物通過微針孔隙滲入皮膚真皮層的毛細血管網(wǎng),隨血液循環(huán)直達治療靶位,能夠達到足量、 快速的給藥目的,大大減少了藥物的劑量和提高了藥物的療效。由于微針細而尖,一般的穿 刺深度僅在角質(zhì)層及真皮上層,未接觸到神經(jīng)末梢,減少了對機體組織的損傷程度,同時刺 激真皮層,通過皮膚的自愈能力,促進骨膠原增生。已有研究已經(jīng)證實了微針的安全性和無 刺激性。因此,微針透皮導入藥物方式是安全、高效和無痛給藥的最佳方式。
[0005] 本發(fā)明綜合利用干細胞移植技術(shù)和微針透皮貼片給藥技術(shù),提供一種干細胞移植 抗皺祛斑美容新方法。利用微針透皮貼片技術(shù)可以增加干細胞輸送效率,直接到達皮膚需 要美容的部位,可以定點、定層、定量的將有效成分直接輸送到所需的皮膚組織,本發(fā)明制 備的抗皺祛斑精華液中含有脂肪干細胞、透明質(zhì)酸、表皮生長因子、維生素 E,來源純天然。
[0006] 本發(fā)明中的抗皺祛斑精華液含有的透明質(zhì)酸對皮膚具有保濕、修護和營養(yǎng)作用, 它能鎖住大量水分子,使皮膚保持飽滿富有彈性,減少皺紋,還可輕微擴張毛細血管,增加 血液循環(huán),改善中間代謝,促進皮膚營養(yǎng)的吸收和廢物的排放,透明質(zhì)酸在保濕的同時又是 良好的透皮吸收促進劑。
[0007] 本發(fā)明中的抗皺祛斑精華液含有的表皮生長因子具有消除皺紋和預(yù)防色斑的作 用:1、表皮生長因子能促進細胞營養(yǎng)物質(zhì)從細胞外主動運至細胞內(nèi),增加細胞內(nèi)的營養(yǎng)。促 進真皮層細胞分泌合成膠原纖維,使真皮組織飽滿,從而減少和消除皺紋。2、表皮生長因子 對表皮細胞的增殖有較強的促進作用,并且較少色素及死亡細胞的殘留等累積,消除色斑 及色素沉著,使皮膚表現(xiàn)出嫩白無暇。
[0008] 本發(fā)明中的抗皺祛斑精華液中含有的維生素 E是最主要的抗氧化劑,可延緩皮膚 衰老,其主要作用機制為:1、可直接清除過氧化物和自由基,起到抗氧化作用。2、抑制過氧 化脂質(zhì)生成,祛除黃褐斑,抑制酪氨酸酶的活性,從而減少黑色素。3、保護皮膚免受紫外線 和污染的傷害,減少疤痕與色素的沉積。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0009] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片及其制備方法,本發(fā) 明的微針貼片可以將干細胞、透明質(zhì)酸、表皮生長因子和維生素 E等注入到皮下組織中達 到抗皺祛斑的美容效果。
[0010] 為實現(xiàn)上述技術(shù)目的,達到上述技術(shù)效果,本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn): 一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片,是由硅或金屬材料制成的微針陣列和含有具有 抗皺祛斑功能的干細胞精華液的儲液腔以及粘膠層組成,所述儲液層含有注液口,所述干 細胞精華液的主要成分以及體積百分比濃度分別是干細胞懸液80%、透明質(zhì)酸溶液5%、表 皮生長因子溶液5%、維生素 E溶液5%和生理鹽水5%。
[0011] 進一步的,所述的微針陣列是一種空心微針陣列,所述空心陣列微針直徑為 40?80 μ m〇
[0012] 進一步的,所述的儲液腔與微針陣列連為一體。
[0013] 進一步的,所述的粘膠層為醫(yī)用級,有防粘層和粘貼層組成。
[0014] 進一步的,所述的干細胞懸液由脂肪干細胞和生理鹽水組成,所述的透明質(zhì)酸溶 液濃度為0. 5%,所述的表皮生長因子溶液濃度為50-100 μ g/ml,所述的維生素 E溶液濃度 為 10mg/ml〇
[0015] 進一步的,所述脂肪干細胞濃度為IX KTl X IO7個/ mL,所述脂肪干細胞是由人 體脂肪組織中分離培養(yǎng)制備而成。
[0016] 一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片的制備方法,包括以下步驟: 1、 硅或金屬材料制成的微針陣列通過微電子制造技術(shù)或微鑄模技術(shù)制成,并滅菌備 用; 2、 分別制備由脂肪干細胞和生理鹽水組成干細胞懸液,其中含有脂肪干細胞濃度為 I X IO6?I X IO7個/ mL,濃度為0. 5%透明質(zhì)酸溶液,濃度為50-100 μ g/ml表皮生長因子 溶液,濃度為l〇mg/ml維生素 E溶液和生理鹽水; 3、 制備干細胞精華液:將上述步驟制備的溶液根據(jù)配方混勻制備成干細胞精華液,體 積百分比濃度分別是干細胞懸液80%、透明質(zhì)酸溶液5%、表皮生長因子溶液5%、維生素 E溶 液5%和生理鹽水5%,然后使用500目的細胞篩網(wǎng)過濾; 4、將過濾后的干細胞精華液用注射器注入微針陣列一體的儲液腔中;然后附上醫(yī)用級 粘膠層即制備成干細胞微針貼片。
[0017] 本發(fā)明有益技術(shù)效果是: 1、本發(fā)明公開了一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片,通過微針陣列透皮注射的方 式,可以使干細胞精華液順利的滲入人體皮膚并被血管網(wǎng)吸收,所需活性成分直接輸送到 最佳吸收位置進行抗皺祛斑;微針所造成的微小的創(chuàng)傷并不會造成疤痕,反而可以刺激皮 膚的再生,活化人表皮細胞,從而對人體皮膚的皺紋進行修復;微針貼片可以有效地避免美 容局部注射而引起的痛楚和感染,安全可靠。
[0018] 2、本發(fā)明微針貼片的含有干細胞精華液,含有的活性成分來源純天然并可以達到 抗皺祛斑的效果,具體表現(xiàn)在: a、所用的干細胞為脂肪干細胞,脂肪干細胞具有生物學特性穩(wěn)定,來源充足,取材方便 等優(yōu)點,脂肪干細胞經(jīng)微針注入皮膚,可以年輕化皮膚,改善皮膚徽循環(huán)和淋巴循環(huán),可以 達到增加皮膚彈性,改善皮膚皺紋,祛斑增白皮膚的效果,利用脂肪干細胞制備的抗皺祛斑 精華液真正做到從細胞水平上實現(xiàn)肌膚的生物美容,在抗皺祛斑應(yīng)用上更安全、更有效、穩(wěn) 定性更強。
[0019] b、透明質(zhì)酸對皮膚具有保濕、修護和營養(yǎng)作用,它能鎖住大量水分子,使皮膚保持 飽滿富有彈性,減少皺紋,還可輕微擴張毛細血管,增加血液循環(huán),改善中間代謝,促進皮膚 營養(yǎng)的吸收和廢物的排放,透明質(zhì)酸在保濕的同時又是良好的透皮吸收促進劑。
[0020] c、表皮生長因子具有消除皺紋和預(yù)防色斑的作用:表皮生長因子能促進細胞營養(yǎng) 物質(zhì)從細胞外主動運至細胞內(nèi),增加細胞內(nèi)的營養(yǎng),促進真皮層細胞分泌合成膠原纖維,使 真皮組織飽滿,從而減少和消除皺紋;表皮生長因子對表皮細胞的增殖有較強的促進作用, 并且較少色素及死亡細胞的殘留等累積,消除色斑及色素沉著,使皮膚表現(xiàn)出嫩白無暇。
[0021] d、維生素 E是最主要的抗氧化劑,可延緩皮膚衰老,其主要作用機制為:可直接清 除過氧化物和自由基,起到抗氧化作用;抑制過氧化脂質(zhì)生成,祛除黃褐斑,抑制酪氨酸酶 的活性,從而減少黑色素;保護皮膚免受紫外線和污染的傷害,減少疤痕與色素的沉積。
[0022] 上述說明僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述,為了能夠更清楚了解本發(fā)明的技術(shù)手段, 并可依照說明書的內(nèi)容予以實施,以下以本發(fā)明的較佳實施例并配合附圖詳細說明如后。 本發(fā)明的【具體實施方式】由以下實施例及其附圖詳細給出。
[0023]
【專利附圖】
【附圖說明】 此處所說明的附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解,構(gòu)成本申請的一部分,本發(fā)明的 示意性實施例及其說明用于解釋本發(fā)明,并不構(gòu)成對本發(fā)明的不當限定。在附圖中: 圖1是抗皺祛斑干細胞微針貼片給藥示意圖,空心微針穿刺皮膚釋放液體并和擴散; 圖2是脂肪干細胞生長曲線; 圖3A是脂肪干細胞成脂誘導培養(yǎng)圖,倒置顯微鏡40X拍照;圖3B是成脂誘導后油紅 〇染色圖,倒置顯微鏡100X拍照。
【具體實施方式】
[0024] 下面將參考附圖并結(jié)合實施例,來詳細說明本發(fā)明。
[0025] 實施例一干細胞微針貼片的制備 1、硅或金屬材料制成的微針陣列通過微電子制造技術(shù)或微鑄模技術(shù)制成,并滅菌備 用。
[0026] 2、制備干細胞懸液,本發(fā)明含有的干細胞為脂肪干細胞,脂肪干細胞的制備提取 步驟如下: 第一步,無菌條件下獲得人體脂肪組織,剪碎后用PBS溶液清洗去除血細胞; 第二步,采用消化液(含有〇. 1%的=V型膠原酶和2. 5%胰酶,以1:1比例混合配制而成) 消化脂肪組織,反復剪碎至糊狀后170r/min震蕩消化30分鐘; 第三步,吸取下層單個細胞的液體,移入完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清的高糖DMEM)中 終止消化,然后1500r/min離心10分鐘,去上清后重懸于完全培養(yǎng)基中,放入37°C,5% CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 第四步,第一次換液在培養(yǎng)12?24小時后,觀察細胞貼壁后可進行第一次換液,此后 每隔2?3天換液,待細胞生長至融合后進行傳代,用0. 25%胰酶(含有0. 2%EDTA)常規(guī)消 化后,1 : 3傳代接種到新的培養(yǎng)皿中持續(xù)體外擴增培養(yǎng); 第五步,分別取生長狀態(tài)良好第3代至第9代的脂肪干細胞,觀察鏡下形態(tài),待細胞融 合達到80%?90%時,收集制備成含有脂肪干細胞和生理鹽水的干細胞懸液,并使脂肪干細 胞的濃度為IX IO6?IX IO7個/ mL。
[0027] 3、分別制備濃度為0. 5%透明質(zhì)酸溶液,濃度為50?100 μ g/ml表皮生長因子溶 液,濃度為l〇mg/ml維生素 E溶液和生理鹽水。
[0028] 4、制備干細胞精華液:將上述步驟制備的溶液根據(jù)配方混勻制備成干細胞精華 液,體積百分比濃度分別是干細胞懸液80%、透明質(zhì)酸溶液5%、表皮生長因子溶液5%、維生 素 E溶液5%和生理鹽水5%,然后使用500目的細胞篩網(wǎng)過濾后得到抗皺祛斑的干細胞精華 液。
[0029] 5、將上述過濾后的干細胞精華液用注射器注入微針陣列相連為一體的儲液腔中; 然后附上醫(yī)用級粘膠層即制備成干細胞微針貼片。
[0030] 微針貼片將抗皺祛斑的精華液通過微細管道導入到皮膚的真皮層中,如圖1所 示,活性成分有效高效地滲入皮膚中,讓皮膚細胞直接吸收抗皺祛斑精華液中的全部活性 成分,吸收效果接近百分之百,最終達到由內(nèi)而外地使肌膚重生,徹底改善膚質(zhì)的皺紋和色 斑。
[0031] 實施例二脂肪干細胞的鑒定 1、生長曲線的繪制 取生長良好的P3代細胞,用0. 25%胰酶(含有0. 2%EDTA)消化后,以2 X IoVml的濃 度接種于24孔板,每孔I mL。在種植的0、24、48、72、96、120、144、16811檢測細胞00值。方 法:每孔加入MTT 20 μ L,置于37°C、5% C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4小時,將孔內(nèi)的細胞離心 收集,每孔加入150 μ L DMS0,震蕩10分鐘后,酶標儀490 nm波長下自動檢測OD值。實 驗重復三次。統(tǒng)計學分析后以培養(yǎng)時間為橫軸,OD值為縱軸繪制生長曲線,如圖2脂肪干 細胞生長曲線所示:細胞增值狀態(tài)良好,無異常。
[0032] 2、向脂肪細胞的分化及鑒定 取生長良好的P4代脂肪干細胞,用0. 25%胰酶(含有0. 2%EDTA)消化后,以2 X IO4 個/ml的濃度接接種于預(yù)置多聚賴氨酸預(yù)處理蓋玻片的6孔板內(nèi)。細胞達80%以上融合 時,加入成脂誘導液(含Ιμπιο?/L地塞米松、0.5m mol/L IBMX,10mg/L胰島素、lOOmg/L 口引 哚美辛和含體積分數(shù)10%胎牛血清),3d后換成脂維持液(含10mg/L胰島素的完全培養(yǎng)基), 24h再換成脂誘導液再次誘導共約18d,進行油紅0染色鑒定。成脂誘導后,鏡下觀察大量 的細胞由長梭形變成類圓形及多邊形,細胞漿內(nèi)有大量透亮的、折光性好的脂滴,油紅〇染 色成強陽性反應(yīng),呈現(xiàn)紅色,證明其成脂能力,如圖3所示。
[0033] 實施例三面部VISIA皮膚測試效果,采取如下方案: 實驗對象:實驗志愿者20名來自無錫,面部皮膚由于皮膚炎癥、衰老或疤痕而產(chǎn)生皺 紋及色斑。志愿者在臨床觀察期禁止食用辛辣、刺激的食品,戒煙和戒酒。志愿者從臨床前 2周開始,不使用激素類藥物和抗過敏藥物,不使用輔助化妝品。志愿者志愿參加實驗,簽訂 知情同意書。
[0034] 試驗方法:VISIA皮膚測試儀由自然光、偏振光和紫外光3種光源組成,運用 Mirror醫(yī)學成像系統(tǒng)、循環(huán)面部攝影技術(shù)和小型放大鏡工具,定量分析紋理、毛孔、斑點和 皺紋等皮膚老化指標,準確用數(shù)值顯示改善的進度。治療前、治療后患者面部進行VISIA 皮膚測試,對患者皮膚的紋理、毛孔、斑點和皺紋進行百分位評分,記錄數(shù)據(jù)。治療有效率 =(治療前評分-治療后評分)/患者治療前評分X 100%。
[0035] 干細胞微針貼片的使用:將制備好的干細胞微針貼片貼注射于鼻唇溝、抬頭紋、眉 間紋、魚尾紋處有凹陷性皺紋的部位,和(或)頰部、顳部存在斑點的部位。每位患者獲取 的細胞總數(shù)彡IX 1〇7,每兩天貼片一次,連續(xù)7次為一個療程。
[0036] 實驗結(jié)果:治療前、后比較VISIA專業(yè)皮膚圖像分析系統(tǒng)治療前后評分結(jié)果顯示, 治療前、后測量值在皺紋與色斑方面改善明顯。色斑改善組幅度為19. 30±5. 58% ;皺紋改 善幅度為18. 90±7. 26%,P < 0. 05,。說明在皺紋與色斑紋理和皺紋方面的改善幅度均有 顯著差異。
[0037] 以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已,并不用于限制本發(fā)明,對于本領(lǐng)域的技 術(shù)人員來說,本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi),所作的任何修 改、等同替換、改進等,均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片,其特征在于,是由硅或金屬材料制成的微針 陣列和含有具有抗皺祛斑功能的干細胞精華液的儲液腔以及粘膠層組成,所述儲液層含有 注液口,所述干細胞精華液的主要成分以及體積百分比濃度分別是干細胞懸液80%、透明質(zhì) 酸溶液5%、表皮生長因子溶液5%、維生素 E溶液5%和生理鹽水5%。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片,其特征在于:所述的 微針陣列是一種空心微針陣列,所述空心陣列微針直徑為40?80 μ m。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片,其特征在于:所述的 儲液腔與微針陣列連為一體。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片,其特征在于:所述的 粘膠層為醫(yī)用級,有防粘層和粘貼層組成。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片,其特征在于:所述的 干細胞懸液由脂肪干細胞和生理鹽水組成,所述的透明質(zhì)酸溶液濃度為〇. 5%,所述的表皮 生長因子溶液濃度為50-100 μ g/ml,所述的維生素 E溶液濃度為10mg/ml。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片,其特征在于:所述脂 肪干細胞濃度為IX 1〇6?IX 1〇7個/ mL,所述脂肪干細胞是由人體脂肪組織中分離培養(yǎng) 制備而成。
7. -種用于抗皺祛斑的干細胞微針貼片的制備方法,其特征在于:包括以下步驟: 步驟1)通過微電子制造技術(shù)或微鑄模技術(shù)制成硅或金屬材料制成的微針陣列,并滅菌 備用; 步驟2)分別制備由脂肪干細胞和生理鹽水組成干細胞懸液,其中含有脂肪干細胞濃度 為1 X 106?1 X 107個/ mL,濃度為0. 5%透明質(zhì)酸溶液,濃度為50-100 μ g/ml表皮生長 因子溶液,濃度為l〇mg/ml維生素 E溶液和生理鹽水; 步驟3)制備干細胞精華液:將上述步驟制備的溶液根據(jù)配方混勻制備成干細胞精華 液,體積百分比濃度分別是干細胞懸液80%、透明質(zhì)酸溶液5%、表皮生長因子溶液5%、維生 素 E溶液5%和生理鹽水5%,然后使用500目的細胞篩網(wǎng)過濾; 步驟4)將過濾后的干細胞精華液用注射器注入微針陣列一體的儲液腔中;然后附上 醫(yī)用級粘膠層即制備成干細胞微針貼片。
【文檔編號】A61P17/00GK104288129SQ201410519509
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月30日
【發(fā)明者】周萱 申請人:奧思達干細胞有限公司