一種擬缺香茶菜提取物的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種擬缺香茶菜提取物的提取方法，依次經(jīng)過乙醚提取、乙酸乙酯提取、乙醇提取和水提取；分別得到乙醚提取物、乙酸乙酯提取物、乙醇提取物和水提取物；這四種提取物對(duì)正常細(xì)胞無細(xì)胞毒作用，這將對(duì)于癌癥的藥物治療將起到重大的推動(dòng)作用，產(chǎn)生良好的社會(huì)效益。
【專利說明】一種擬缺香茶菜提取物的提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于食品醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種擬缺香茶菜提取物的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 擬缺香茶菜為雙子葉植物綱，唇形目，唇形科多年生草本，別名野紫蘇；根莖 橫走，木質(zhì)，略增粗或呈疙瘩狀，粗可達(dá)2厘米，其上密生纖維狀須根。莖直立，多數(shù)，高 (0. 3_) 0. 5-1 (-1. 5)米，四棱形，具四槽，下部變無毛，上部被短柔毛，有時(shí)上部有分枝。莖葉 對(duì)生，寬橢圓形或卵形或圓卵形，先端銳尖狀尾形，基部寬楔形或平截，驟然漸狹下延，邊緣 具不整齊的鋸齒狀牙齒，堅(jiān)紙質(zhì)，上面暗綠色，沿脈上被微柔毛，余部疏被糙伏毛小硬毛，下 面淡綠色，僅沿脈上疏被短柔毛，余部無毛，側(cè)脈約3對(duì)，在上面凹陷，下面明顯凸起，平行 細(xì)脈兩面多少明顯；葉柄長(zhǎng)1一5厘米，上部具寬翅?？偁顖A錐花序頂生或于上部莖葉腋生， 長(zhǎng)6-15厘米，由3 (-5)花的聚傘花序組成，聚傘花序具長(zhǎng)2- 5毫米的梗，花柄長(zhǎng)2- 6毫 米，與花梗、序軸均密被微柔毛；苞葉葉狀，向上漸變小，近無柄，苞片及小苞片線形，長(zhǎng)1-3 毫米；花萼鐘形，長(zhǎng)達(dá)3. 5毫米，外被短柔毛，內(nèi)面無毛，齒5,明顯3/2式二唇形，裂至中部 或以下，上唇三齒，齒三角形，具刺尖，下唇二齒，靠近，長(zhǎng)三角形，具刺尖，果時(shí)花萼明顯增 大，長(zhǎng)達(dá)7毫米，肋及邊緣脈明顯凸起，上唇三齒外反，下唇二齒平伸；花冠白、淡紅、淡紫至 紫藍(lán)色，長(zhǎng)約10毫米，外疏被短柔毛及腺點(diǎn)，內(nèi)面無毛，冠筒長(zhǎng)約6毫米，基部上方淺囊狀， 至喉部寬達(dá)3毫米，冠檐二唇形，上唇外反，長(zhǎng)約3毫米，寬達(dá)5毫米，先端具相等4圓裂，下 唇近圓形，長(zhǎng)寬約4毫米，內(nèi)凹；雄蕊4,下傾，內(nèi)藏，花絲扁平，中部以下具髯毛；花柱絲狀， 內(nèi)藏或微伸出，先端相等二淺裂；花盤環(huán)狀。成熟小堅(jiān)果近球形，徑約1. 5毫米，褐色，無毛。 花期7-9月，果期8-10月。擬缺香茶菜生長(zhǎng)分布于產(chǎn)滇東北，海拔1200- 3000米的草坡、 路邊、溝邊、荒地、疏林下。我國四川、湖北西部、河南亦有分布。擬缺香茶菜的功效分類：擬 缺香茶菜具有清熱解毒、活血化瘀、抗菌消炎及抗腫瘤等功效，性味：味辛；苦；性平；藥材 基源：為唇形科植物擬缺香茶菜的全草。主治：感冒頭痛；風(fēng)濕痹痛；跌打瘀腫；骨折；外傷 出血；毒蛇咬傷；資源分布：分布于湖北、四川、云南、河南等地。
[0003] 惡性腫瘤是威脅人類生命的惡性疾病之一，極大危害著人類的健康，并將成為新 世紀(jì)人類的第一殺手。從世界范圍來看，發(fā)展中國家面臨更大的疾病負(fù)擔(dān)，我國作為一個(gè)發(fā) 展中國家，惡性腫瘤面臨的形勢(shì)更加嚴(yán)峻。隨著人們對(duì)癌的認(rèn)識(shí)不斷深化，目前已從多個(gè)層 面進(jìn)行救治，并取得了一系列有價(jià)值的治療方法，延長(zhǎng)了患者的生命，其中利用一些化學(xué)物 質(zhì)殺死或抑制腫瘤細(xì)胞惡性增殖的方法也取得一些重要進(jìn)展。但是人們逐漸認(rèn)識(shí)到合成抗 癌藥多半對(duì)人體正常細(xì)胞產(chǎn)生很大的毒副作用，因此，研制新的具有高度選擇性的抗腫瘤 藥是有效控制惡性腫瘤的迫切需要。在這種情況下出現(xiàn)了回歸自然、使用天然藥物的潮流， 所以從天然動(dòng)植物中尋找毒性低、療效高的抗腫瘤活性成分已成為國內(nèi)外科學(xué)工作者研究 的熱點(diǎn)之一。研究并提取具有抗腫瘤作用的有效成分用于治療腫瘤是目前國家重點(diǎn)支持的 項(xiàng)目之一。
[0004] 近年來，隨著中藥研究技術(shù)的發(fā)展，人們對(duì)香茶菜屬植物的活性成分做了大量研 究，從該屬植物中分離出500多種二萜類化合物單體。香茶菜屬植物中主要富含對(duì)映貝殼 杉烷類二萜化合物，而現(xiàn)代研究表明，從香茶菜屬植物中分離得到的對(duì)映貝殼杉烷型結(jié)構(gòu) 的二萜類化合物，已被證實(shí)具有較好的抗腫瘤功效，其活性中心也已確定為環(huán)外亞甲基環(huán) 戊酮結(jié)構(gòu)，這無疑為該屬植物的化學(xué)成分研究工作提供了理論支持。擬缺香茶菜是唇形科 香茶菜屬植物，其藥理活性作用廣泛，主要有細(xì)胞毒活性、抗氧化作用、免疫調(diào)節(jié)作用、對(duì)心 血管系統(tǒng)的作用及抗菌抗病毒功效等。
[0005] 擬缺香茶菜是我國民間廣泛使用的草藥，該植物中二萜化合物結(jié)構(gòu)類型豐富，由 于其多樣的生理活性，長(zhǎng)期以來，一直吸引著廣大天然藥物化學(xué)家的興趣。丁蘭教授對(duì)甘肅 產(chǎn)的擬缺香茶菜化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，共分離鑒定了 14個(gè)化合物，其中包括甾醇、 對(duì)映貝殼杉烷二萜、三萜和黃酮化合等化合物。利用SRB法研究了對(duì)映貝殼杉烷二萜化合 物對(duì)三種腫瘤細(xì)胞（人胃腺癌細(xì)胞株SGC-7901、人肝癌細(xì)胞株BEL-7402及人卵巢癌細(xì)胞 株H0-8910)的構(gòu)效關(guān)系，研究表明：對(duì)映貝殼杉烷二萜化合物在高濃度條件下，不同濃度 藥物的持續(xù)作用對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生明顯的致死效應(yīng)，且濃度越高對(duì)細(xì)胞的殺傷力作用越明顯，具 有較好的量效和時(shí)效關(guān)系。鄭州大學(xué)李繼成教授對(duì)河南龍?jiān)钞a(chǎn)的擬缺香茶菜進(jìn)行了系統(tǒng) 的研究，分離出二十多個(gè)單體化合物，體外生物活性篩選表明具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒活性及抗 氧化活性。
[0006]目前對(duì)擬缺香茶菜這種植物的研究主要停滯在化學(xué)成分的提取分離及相應(yīng)的藥 理實(shí)驗(yàn)上，還沒有從擬缺香茶菜中找到能用到臨床上的有抗癌活性的化合物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種擬缺香茶菜提取物的提取方法，此提取方法提取出來的 擬缺香茶菜提取物對(duì)癌細(xì)胞有高度選擇性，可以預(yù)防癌癥。
[0008] 以體外培養(yǎng)條件下和荷瘤小鼠對(duì)腫瘤細(xì)胞的抗增殖作用為導(dǎo)向，擬分步分離擬缺 香茶菜乙酸乙酯提取物中的出新的抗腫瘤目標(biāo)化合物。測(cè)定其分子結(jié)構(gòu)，為下一步將其開 發(fā)為新型的具有高度選擇性的國家一類抗腫瘤藥物提供物質(zhì)基礎(chǔ)。
[0009] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，一種擬缺香茶菜提取物的提取方法，具體按照以下 步驟實(shí)施：
[0010] 步驟1、乙醚提?。翰扇M缺香茶菜原藥材的地上部分，自然陰干，用粉碎機(jī)粉粹， 用無水乙醚浸泡21天，用濾紙常溫常壓下過濾，減壓濃縮得墨綠色提取物浸膏，即為乙醚 提取物；
[0011] 步驟2、乙酸乙酯提?。阂颐烟崛『蟮臍?jiān)诔叵掳岩颐褤]發(fā)完全；在殘?jiān)屑?入乙酸乙酯浸泡并進(jìn)行加熱回流，乙酸乙酯的用量為乙酸乙酯淹沒藥材為準(zhǔn)，然后常溫常 壓下過濾，得到浸取液；將浸取液減壓濃縮得墨綠色浸膏，即為乙酸乙酯提取物；
[0012] 步驟3、乙醇提取：乙酸乙酯提取過的殘?jiān)栏蔁o乙酸乙酯味，在乙酸乙酯提取過 的殘?jiān)屑右掖既芤航莶⒓訜峄亓鳎缓蟪爻合逻^濾，得到浸取液，將浸取液進(jìn)行減 壓濃縮得墨綠色浸膏，即為乙醇提取物；
[0013] 步驟4、水提?。阂掖继崛∵^的殘?jiān)栏蔁o乙醇味，取一半殘?jiān)尤胝麴s水溶液， 進(jìn)行浸泡并加熱回流，然后常溫常壓下過濾，得到浸取液，將得到的浸取液進(jìn)行，濃縮得黃 褐色浸膏，即為水提取物。
[0014] 本發(fā)明的特點(diǎn)還在于，
[0015] 乙醚、乙酸乙酯、乙醇和水的用量為淹沒藥材為準(zhǔn)，過濾的濾紙為中速102或者快 速101的定性濾紙。
[0016] 浸泡時(shí)間為20h-28h，加熱回流時(shí)間為2h-3h。
[0017]步驟1中的減壓濃縮的條件為水溫溫度30°C -40°C，壓強(qiáng)在0. 07-0. IMPa。
[0018] 步驟1中的減壓濃縮的壓強(qiáng)為0. 09MPa。
[0019] 步驟2減壓濃縮的壓強(qiáng)為0? 07-0. IMPa;水溫溫度為60°C -70°C。
[0020] 步驟2的減壓濃縮的壓強(qiáng)為0? 09MPa。
[0021] 步驟3中的減壓濃縮的壓強(qiáng)為0. 07-0. IMPa ;所述水溫溫度為80°C -90°C。
[0022] 步驟3中乙醇溶液的濃度為95%。
[0023] 步驟4中濃縮條件為100°C下常壓濃縮。
[0024] 本發(fā)明的有益效果是：得到對(duì)癌細(xì)胞有高度選擇性的擬缺香茶菜提取物，對(duì)正常 細(xì)胞無細(xì)胞毒作用，這將對(duì)于癌癥的藥物治療將起到重大的推動(dòng)作用，產(chǎn)生良好的社會(huì)效 益。我國擬缺香茶菜資源豐富，目前尚未得到充分開發(fā)利用，一旦從中開發(fā)出預(yù)期的有高度 選擇性的抗癌新藥，其市場(chǎng)是非常廣闊的，可產(chǎn)生出巨大的經(jīng)濟(jì)效益。

【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0026] 本發(fā)明提供一種擬缺香茶菜提取物的提取方法，具體按照以下步驟實(shí)施：
[0027] 步驟1、乙醚提取：采取擬缺香茶菜原藥材（地上部分），自然陰干，取原藥材1kg， 用粉碎機(jī)粉粹，用無水乙醚浸泡21天（乙醚的用量為：乙醚要淹沒藥材為準(zhǔn)），用中速102 或者快速101 (中速和快速為本領(lǐng)域的常用術(shù)語）的定性濾紙常溫常壓下過濾，在水溫溫度 30°C -40°C，壓強(qiáng)在0. 07-0. lMPa(尤其是0. 09MPa)的條件下，減壓濃縮得墨綠色提取物浸 膏，即為乙醚提取物。
[0028] 其中，提取物中有大量的糖類化合物，濃縮以后比較黏稠，因此，選用快速101比 較好；壓強(qiáng)為〇. 07-0. IMPa這個(gè)范圍內(nèi)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀最好控制，乙醚可以快速回收。
[0029] 步驟2、乙酸乙酯提取：乙醚提取后的殘?jiān)谷敫蓛舻奶麓杀P中在常溫下把乙醚 揮發(fā)完全，直到無乙醚味為好，然后把殘?jiān)b入一個(gè)5L球形燒瓶里，加入乙酸乙酯，浸泡 20h-28h (尤其是24h)，加熱回流2h-3h，然后常溫常壓下過濾，其中，濾紙采用定性濾紙（中 速102,快速101);然后得到浸取液，減壓濃縮得墨綠色浸膏乙酸乙酯提取物，其中，減壓濃 縮的條件為水溫溫度在60°C -70°C，壓強(qiáng)0. 07-0. IMPa，最佳壓強(qiáng)0. 09MPa。
[0030] 其中，浸泡時(shí)間范圍為20-28個(gè)小時(shí)，著這個(gè)能充分把藥材浸潤(rùn)，時(shí)間太長(zhǎng)，溶劑 容易揮發(fā)且浪費(fèi)時(shí)間；加熱回流時(shí)間為2-3小時(shí)，最佳2小時(shí)，在這個(gè)時(shí)間范圍內(nèi)能完全提 出乙酸乙酯提取物的有效部位且節(jié)約能源，節(jié)省時(shí)間，且乙酸乙酯提取物的活性比較高；濾 紙采用定性濾紙（中速102,快速101)，提取物中有大量的糖類化合物和葉綠素，濃縮以后 比較黏稠，因此，選用快速101比較好；減壓濃縮的條件采用壓強(qiáng)〇. 07-0. IMPa，在這個(gè)范圍 內(nèi)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀最好控制，乙酸乙酯可以快速回收。
[0031] 步驟3、乙醇提?。阂宜嵋阴ヌ崛∵^的殘?jiān)栏蔁o乙酸乙酯味，裝入5L球形燒瓶 里，加入95 %的乙醇溶液，浸泡20h-28h，加熱回流2h-3h，然后常溫常壓下過濾，得到浸取 液，對(duì)浸取液進(jìn)行減壓濃縮得墨綠色浸膏，即為乙醇提取物，其中，過濾和減壓濃縮同乙酸 乙酯提取條件，減壓濃縮的溫度為80°C -90°C。
[0032] 步驟4、水提?。阂掖继崛∵^的殘?jiān)栏蔁o乙醇味，取一半殘?jiān)b入5L球形燒瓶 里，加入蒸餾水，浸泡20_28h，加熱回流2h_3h，然后常溫常壓下過濾，得到浸取液，將浸取 液進(jìn)行濃縮得黃褐色浸膏，即為水提取物，其中，過濾同乙酸乙酯提取條件，濃縮條件為 100°C下常壓。
[0033] 下面結(jié)合三種擬缺香茶菜提取物體外抗腫瘤活性篩選實(shí)驗(yàn)來說明本發(fā)明的有益 效果：
[0034] 1供試細(xì)胞
[0035] 人肝癌細(xì)胞系H印G2、人食管癌細(xì)胞系EC9706、人乳頭狀甲狀腺癌細(xì)胞系TPC-I均 為普通市售商品。
[0036] 2主要儀器與耗材
[0037] 生物安全柜，力康發(fā)展有限公司，HFsafe_1200TE;
[0038] CO2培養(yǎng)箱，力康發(fā)展有限公司，HF160W;
[0039] 倒置生物顯微鏡，奧林巴斯，BDS200;
[0040] 空氣浴恒溫?fù)u床，國華企業(yè)，ZD-85型；
[0041] EXL800uv 全自動(dòng)酶標(biāo)儀，Bio-Rad(美國）公司，168-1000XC;
[0042] 精密可調(diào)微量移液器，Eppendorf (德國）公司；
[0043] 96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，Corning(美國）公司；
[0044] 細(xì)胞培養(yǎng)瓶，Corning(美國）公司。
[0045] 3主要試劑
[0046] 優(yōu)級(jí)胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；
[0047] 胰蛋白酶，Gibco公司；
[0048] RPMI1640 培養(yǎng)基、DMSO 和四甲基偶氮唑藍(lán)（methylthiazolyl tetrazolium, MTT),美國 Solarbio 公司。
[0049] 4主要試劑配制
[0050] RPMI1640 培養(yǎng)液：市售；
[0051] PBS 緩沖液配制（PH7. 4) :NaC18. Og，KC10. 20g，NaHP043. 49g，KH2PO4O. 20g，溶于 1000ml三蒸水中，0. 22 ii m微孔濾器過濾后高壓滅菌，4°C保存?zhèn)溆茫?br> [0052] MTT 配制：稱取 IOmgMTT,加 2mlPBS (PH7. 4)攪拌 30min，用 0. 22 ii m 微孔濾器過濾 除菌，分裝4°C避光保存，兩周內(nèi)有效；
[0053] 胰蛋白酶消化液：用PBS溶液溶解胰酶，配置成濃度為0.25 %的胰酶溶液，調(diào)PH 值為7. 2左右，過濾除菌，分裝-20°C保存。
[0054] 5 方法
[0055] 5. 1細(xì)胞培養(yǎng)
[0056] 三種細(xì)胞株均為貼壁細(xì)胞，使用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，在37°C飽和 濕度、5% C02培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)；每2-3d換液1次，當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)90%時(shí)，進(jìn)行傳代培 養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)過程中用臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè)細(xì)胞活性。消化傳代方法：倒掉原培養(yǎng)基，加入PBS緩 沖液潤(rùn)洗兩次，向培養(yǎng)瓶加Iml胰蛋白酶，在倒置顯微鏡下觀察，至細(xì)胞變圓、有間隙時(shí)將 胰蛋白酶倒出，加入含10%胎牛血清RPMI1640培養(yǎng)基lml，反復(fù)吹打細(xì)胞使其脫壁直至散 開成單個(gè)，分裝到新培養(yǎng)瓶中，加入含10%胎牛血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0057] 5. 2MTT法體外篩選抗腫瘤藥物
[0058] 5. 2. 1 原理
[0059] MTT全稱為3_(4,5_二甲基噻唑-2)-2,5_二苯基四氮唑溴鹽，簡(jiǎn)稱噻唑藍(lán)?；罴?xì) 胞線粒體中的琥拍酸脫氧酶能夠使MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色針狀結(jié)晶甲瓚，并沉積在 細(xì)胞中，而死細(xì)胞則沒有該功能。二甲基亞砜（DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚顆粒，使細(xì)胞著 色，用酶標(biāo)儀在490mn波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度（A)，根據(jù)A值大小分析活細(xì)胞多少，A值可間接 反映活細(xì)胞數(shù)量。
[0060] 5. 2. 2實(shí)驗(yàn)方法
[0061] 收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度為7-8 X IO4Ail，96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔加入IOOy 1，每個(gè)濃度設(shè)三個(gè)復(fù)孔，細(xì)胞培養(yǎng)箱（5% C02,37°C )中孵 育24h，待細(xì)胞貼壁后，小心吸去上清，加入含有不同藥物濃度的培養(yǎng)基100 iil，并設(shè)正常 對(duì)照孔、溶劑對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔。連續(xù)培養(yǎng)48h后，每孔加入20 iUMTT溶液（5mg/ml)，繼 續(xù)培養(yǎng)4h后，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)基，每孔加入DMS0150 iil，置搖床上低速避光振蕩6min，使 結(jié)晶物充分溶解，酶標(biāo)儀（檢測(cè)波長(zhǎng)490nm參考波長(zhǎng)630nm)測(cè)定，并讀取各孔吸光度（A) 值，按下面的公式計(jì)算各藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率：
[0062] 抑制率（％ ) =(1-給藥孔A值/正常對(duì)照孔A值）X100%
[0063] 6結(jié)果
[0064] 本研究以H印G2、TPC-I和EC9706細(xì)胞株為模型，對(duì)三種擬缺香茶菜提取物的體外 抗腫瘤活性進(jìn)行篩選。從下述表格中可看出，以HepG2細(xì)胞為模型，乙醚提取物、乙酸乙酯 提取物、95%乙醇提取物的比50分別為29.8111 §/1111、56.7411§/1111、272.0011§/1111，乙醚提 取物對(duì)該腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用最強(qiáng)，即抗腫瘤活性較強(qiáng)。以TPC-I細(xì)胞為模型，乙醚提取 物和乙酸乙酯提取物的IC50分別為37. 72 ii g/ml、76. 60 ii g/ml，乙醚提取物的體外抗腫瘤 活性較強(qiáng)。以EC9706細(xì)胞株為模型，三種提取物的IC50分別為16. 06ii g/ml、18. 77ii g/ ml、113. 59y g/ml，乙醚提取物和乙酸乙酯提取物的抗腫瘤活性均較好。根據(jù)該結(jié)果可知， 擬缺香茶菜乙醚、乙酸乙酯、95%乙醇提取物均具有不同程度的體外抗腫瘤活性，以乙醚提 取物和乙酸乙酯提取物抗腫瘤活性較為突出，提示可用于制備抗腫瘤藥物。
[0065] 表1擬缺香茶菜乙醚提取物對(duì)各細(xì)胞系48h體外抑制活性結(jié)果
[0066]

【權(quán)利要求】
1. 一種擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，具體按照以下步驟實(shí)施： 步驟1、乙醚提?。翰扇M缺香茶菜原藥材的地上部分，自然陰干，用粉碎機(jī)粉粹，用無 水乙醚浸泡21天，用濾紙常溫常壓下過濾，減壓濃縮得墨綠色提取物浸膏，即為乙醚提取 物； 步驟2、乙酸乙酯提取：乙醚提取后的殘?jiān)诔叵掳岩颐褤]發(fā)完全；在殘?jiān)屑尤胍?酸乙酯浸泡并進(jìn)行加熱回流，乙酸乙酯的用量為乙酸乙酯淹沒藥材為準(zhǔn)，然后常溫常壓下 過濾；將浸取液減壓濃縮得墨綠色浸膏，即為乙酸乙酯提取物； 步驟3、乙醇提?。阂宜嵋阴ヌ崛∵^的殘?jiān)栏蔁o乙酸乙酯味，在乙酸乙酯提取過的殘 渣中加乙醇溶液浸泡并加熱回流，然后常溫常壓下過濾，將浸取液進(jìn)行減壓濃縮得墨綠色 浸膏，即為乙醇提取物； 步驟4、水提?。阂掖继崛∵^的殘?jiān)栏蔁o乙醇味，取一半殘?jiān)尤胝麴s水溶液，進(jìn)行 浸泡并加熱回流，然后常溫常壓下過濾，將得到的浸取液進(jìn)行，常壓濃縮濃縮得黃褐色浸 膏，即為水提取物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述乙醚、乙酸 乙酯、乙醇和水的用量為淹沒藥材為準(zhǔn)，過濾的濾紙為中速102或者快速101的定性濾紙。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述浸泡時(shí)間 為20h-28h，加熱回流時(shí)間為2h-3h。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步驟1中的 減壓濃縮的條件為水溫溫度30°C -40°C，壓強(qiáng)在0. 07-0. IMPa。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步驟1中的 減壓濃縮的壓強(qiáng)為0. 〇9MPa。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步驟2減壓 濃縮的壓強(qiáng)為0. 07-0. IMPa ;所述水溫溫度為60°C -70°C。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步驟2的減 壓濃縮的壓強(qiáng)為0. 〇9MPa。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步驟3中的 減壓濃縮的壓強(qiáng)為0. 07-0. IMPa ;所述水溫溫度為80°C -90°C。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步驟3中乙 醇溶液的濃度為95%。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的擬缺香茶菜提取物的提取方法，其特征在于，所述步驟4中 濃縮條件為KKTC下常壓濃縮。
【文檔編號(hào)】A61K36/53GK104306435SQ201410541067
【公開日】2015年1月28日 申請(qǐng)日期:2014年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月14日
【發(fā)明者】陳慧平, 馬方, 鄒敏, 王瑞娟, 趙志鴻, 張燕, 張壯麗, 張麗果, 王桂芳, 李繼成, 郭威 申請(qǐng)人:河南省醫(yī)藥科學(xué)研究院