一種抗惡性腫瘤的中藥提取物及其制備工藝和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗惡性腫瘤的藥物提取物及其制備工藝和應(yīng)用，該中藥提取物為白紫草花醇提物的乙酸乙酯部位。本發(fā)明涉及的中藥提取物由單一的中草藥制備而成，其不僅可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖，而且因其來源于天然植物，因此毒副作用低。
【專利說明】一種抗惡性腫瘤的中藥提取物及其制備工藝和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，涉及一種抗惡性腫瘤的中藥提取物及其制 備工藝和應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤是目前危害人類健康最為嚴(yán)重的一類疾病。通過手術(shù)、放療和化療治療 癌癥雖能延長癌癥患者的生命，但隨之而來的各種副作用（如免疫功能抑制、肝臟功能損 害等）使癌癥病人的生活質(zhì)量明顯下降，故尋找高效低毒的抗惡性腫瘤藥物是目前研究的 熱點之。目前，人們積極尋找抗惡性腫瘤新藥，一方面從天然產(chǎn)物中提取新藥，另一方面探 索改進(jìn)已有藥物，增加新功能；中藥是我國的傳統(tǒng)藥物，其在治療疑難雜癥方面具有先天優(yōu) 勢。由于新藥開發(fā)難度大，周期長，對中藥的深入研究成為新的熱點。
[0003] 白紫草為多年生草本，高20 - 80厘米，根粗壯，繩狀扭曲，外面紫紅色，折斷里面 粉紅色，直生或橫生。莖直立，單生或從基部分出幾個枝條，上部分枝較多，全株密被白色剛 毛。葉互生，披針形，長3 - 6厘米，寬0. 5 - 0. 8厘米，先端漸尖，基部微收縮圓形，邊全緣，微 向后反卷，正面暗綠色，葉脈中部一個，側(cè)脈二對有時為一對，明顯突出，正面微凹，兩面均 密被白色的剛毛?；ㄐ蚩偁睿诜种Φ捻敹?；苞葉披針形，通常比花長，密被白色剛毛， 小花著生在苞葉間，花萼5裂，裂片線形，長約4毫米，密被白色剛毛，先端鈍，果期裂片延長 宿存；花冠白色，微伸出萼外，外面被白色，花冠上部5裂，裂片長形，長4 - 5毫米，喉部有5 片短小的被短絨毛的鱗片狀物；雄蕊5個，花絲短，著生于花筒內(nèi)的中部，不伸出于外，花藥 長圓形?；ㄖ^長，不伸于外，先端不分裂。目前，尚無文獻(xiàn)報道白紫草花或其提取物具有 誘導(dǎo)抗惡性腫瘤的功效。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是在民間驗方的基礎(chǔ)上進(jìn)行深入研究和探索，從而提供一種抗惡性 腫瘤的中藥提取物及其制備工藝和應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明的第一個目的是這樣實現(xiàn)的：一種抗惡性腫瘤的中藥提取物，其中，所述的 中藥提取物為白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位。
[0006] 需要說明的是，在目前所做的試驗中，由于該中藥提取物在抗肝癌BEL-7402細(xì)胞 和H印G2細(xì)胞增殖方面有非常顯著的生物活性，因此本發(fā)明優(yōu)選該中藥提取物用于防治 肝癌。另外，白紫草花選用紫草科長蕊斑種草屬植物長蕊斑種草Antiotrema dunnianum (Diels) Hand.-Mazz.的盛開花朵，可以為鮮品，也可以為干品。
[0007] 本發(fā)明的第二個目的還在于提供了上述白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位的 制備工藝，其中該工藝包括如下步驟：取白紫草花原料，置于提取裝置中，以甲醇或乙醇加 熱回流提取，所得醇提液回收試劑并繼續(xù)濃縮成膏狀，加水混懸，以乙酸乙酯萃取，對萃取 液回收乙酸乙酯，得白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位。
[0008] 優(yōu)選地，如上所述抗惡性腫瘤的中藥提取物的制備工藝，其中：甲醇或乙醇加熱回 流提取1-3次，每次甲醇或乙醇的用量為原料的4-10倍。
[0009] 進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述抗惡性腫瘤的中藥提取物的制備工藝，其中：每次甲醇或 乙醇回流提取的時間為2_6h。
[0010] 優(yōu)選地，如上所述抗惡性腫瘤的中藥提取物的制備工藝，其中：所述的乙酸乙酯萃 取步驟為等體積萃取。
[0011] 體外試驗結(jié)果顯示，白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位對肝癌BEL-7402細(xì)胞、 Hep G2細(xì)胞的增殖有非常顯著的抑制作用，抑制率高達(dá)50%左右；白紫草花正丁醇部位對 Hep G2細(xì)胞增殖抑制率低于10%，可視為無抑制作用，對BEL-7402細(xì)胞增殖有明顯的促進(jìn) 作用。另外，白紫草花正丁醇部位和氯仿部位對BEL-7402細(xì)胞增殖有明顯的促進(jìn)作用，高 劑量下促BEL-7402細(xì)胞增殖率在100%以上，且呈量-效關(guān)系，分析可能是這兩個有效部位 中含有促進(jìn)細(xì)胞增殖的活性成分?；谝陨涎芯拷Y(jié)果，本發(fā)明的第三個目的在于提供一種 制藥用途，即上述的白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位在制備抗惡性腫瘤的藥物中的應(yīng) 用。在制藥用途中，該藥物組合物可制備為口服制劑；其中的口服制劑包括口服液、片劑、膠 囊、顆粒劑。
[0012] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明涉及的中藥提取物由單一的中草藥制備而成，其不僅可 以抑制腫瘤細(xì)胞增殖，而且因其來源于天然植物，因此毒副作用低，屬于"綠色治療藥物"的 范疇，可望被開發(fā)成抗惡性腫瘤的一線用藥。
[0013]

【具體實施方式】
[0014] 以下是本發(fā)明的具體實施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步作描述，但是本發(fā)明 的保護(hù)范圍并不限于這些實施例。凡是不背離本發(fā)明構(gòu)思的改變或等同替代均包括在本發(fā) 明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0015] 實施例1白紫草花的乙酸乙酯有效部位提取 取干燥的白紫草花1.36kg，置于設(shè)有圓底燒瓶的多功能提取裝置中，分別加甲醇約 8L，加熱回流提取2次，第一次5h，第二次3h，合并兩次甲醇提取液，濾過，回收甲醇并繼續(xù) 濃縮成膏狀，加入適量水，混懸，總體積約〇. 6L，用乙酸乙酯進(jìn)行提取，每次用量為0. 6L，均 萃取3次，經(jīng)萃取得到的3次乙酸乙酯提取液合并，然后對提取液回收乙酸乙酯并繼續(xù)濃縮 成稠膏，冷凍干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。
[0016] 實施例2白紫草花的乙酸乙酯有效部位提取 取干燥的白紫草花2. 2kg，置于設(shè)有圓底燒瓶的多功能提取裝置中，分別加甲醇約 12L，加熱回流提取2次，第一次5h，第二次3h，合并兩次甲醇提取液，濾過，回收甲醇并繼續(xù) 濃縮成膏狀，加入適量水，混懸，總體積約1L，用乙酸乙酯進(jìn)行提取，每次用量為1L，均萃取 3次，經(jīng)萃取得到的3次乙酸乙酯提取液合并，然后對提取液回收乙酸乙酯并繼續(xù)濃縮成稠 膏，冷凍干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。
[0017] 對比例1白紫草花的正丁醇有效部位提取 取干燥的白紫草花1.29kg，置于設(shè)有圓底燒瓶的多功能提取裝置中，分別加甲醇約 8L，加熱回流提取2次，第一次5h，第二次3h，合并兩次甲醇提取液，濾過，回收甲醇并繼續(xù) 濃縮成膏狀，加入適量水，混懸，總體積約〇. 6L，用正丁醇進(jìn)行提取，每次用量為0. 6L，均萃 取3次，經(jīng)萃取得到的3次正丁醇提取液合并，然后對提取液回收正丁醇并繼續(xù)濃縮成稠 膏，冷凍干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。
[0018] 對比例2白紫草花的氯仿有效部位提取 取干燥的白紫草花1.57kg，置于設(shè)有圓底燒瓶的多功能提取裝置中，分別加甲醇約 9L，加熱回流提取2次，第一次5h，第二次3h，合并兩次甲醇提取液，濾過，回收甲醇并繼續(xù) 濃縮成膏狀，加入適量水，混懸，總體積約〇. 72L，用氯仿進(jìn)行提取，每次用量為0. 72L，均萃 取3次，經(jīng)萃取得到的3次氯仿提取液合并，然后對提取液回收氯仿并繼續(xù)濃縮成稠膏，冷 凍干燥，粉碎成細(xì)粉，即得。
[0019] 實施例3白紫草花不同有效部位對BEL-7402腫瘤細(xì)胞增殖的抑制試驗研究 取對數(shù)生長期的BEL-7402細(xì)胞，用0. 25 %的胰酶消化，計數(shù)細(xì)胞密度為5 X IO4個/ mL 的細(xì)胞懸液，接種于96孔板，每孔100 μ L細(xì)胞懸液，培養(yǎng)12h貼壁后更換培養(yǎng)液并按分組 加入相應(yīng)的受試物，37°C、5% CO2濃度，最大飽和濕度培養(yǎng)48h，檢測波長為550nm，以每組 各孔吸光度（A)的平均值作為各組A值。
[0020] 試驗分為10組如下：水對照組，5-FU高、低劑量組，DMSO對照組，白紫草花正丁 醇部位高、低劑量組，白紫草花氯仿部位高、低劑量組，白紫草花乙酸乙酯部位高、低劑量 組，每組設(shè)6個重復(fù)。選用實施例1、對比例1和對比例2制備的藥粉分別作為相應(yīng)試驗 組的受試物，白紫草花正丁醇部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位藥粉分別溶于DMSO, 5-Fu溶于 雙蒸水，分別設(shè)雙蒸水和DMSO作為試劑對照。白紫草花各提取物加藥終濃度選取1. 000、 0. 250mg/mL兩個濃度點作為高、低劑量，5-Fu加藥終濃度為5. 000、0. 200mg/mL。
[0021] 根據(jù)公式：抑制率=(1-加藥組A值/對照組A值）X100%，計算各加藥組對 BEL-7402細(xì)胞的抑制率。
[0022] 通過表1的試驗結(jié)果可以看出，白紫草花乙酸乙酯部位對BEL-7402細(xì)胞的增殖有 顯著抑制作用0° < 〇. 05)。白紫草花正丁醇部位和氯仿部位對BEL-7402細(xì)胞增殖有明顯 的促進(jìn)作用。
[0023] 表1各組BEL-7402細(xì)胞增殖情況比較

【權(quán)利要求】
1. 一種抗惡性腫瘤的中藥提取物，其特征在于，所述的中藥提取物為白紫草花醇提物 的乙酸乙酯部位。
2. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述治療抗惡性腫瘤的中藥提取物的制備工藝，其特征在于該 工藝包括如下步驟：取白紫草花原料，置于提取裝置中，以甲醇或乙醇加熱回流提取，所得 醇提液回收試劑并繼續(xù)濃縮成膏狀，加水混懸，以乙酸乙酯萃取，對萃取液回收乙酸乙酯， 得白紫草花醇提物的乙酸乙酯部位。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述抗惡性腫瘤的中藥提取物的制備工藝，其特征在于：甲醇或乙 醇加熱回流提取1-3次，每次甲醇或乙醇的用量為原料的4-10倍。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述抗惡性腫瘤的中藥提取物的制備工藝，其特征在于：每次甲醇 或乙醇回流提取的時間為2-6h。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述抗惡性腫瘤的中藥提取物的制備工藝，其特征在于：所述的乙 酸乙酯萃取步驟為等體積萃取。
6. 權(quán)利要求1所述的白紫草花醇提物的乙酸乙酯部位在制備抗惡性腫瘤的藥物中的 應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK104288202SQ201410542655
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月15日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月15日
【發(fā)明者】李健 申請人:李健