磷酸肌酸二鈉鹽在制備穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了磷酸肌酸二鈉鹽在制備穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥物中的應(yīng)用，通過(guò)動(dòng)物模型試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，磷酸肌酸二鈉鹽具有顯著的降低主動(dòng)脈總體斑塊的面積、增加斑塊的穩(wěn)定性的作用，同時(shí)還可降低血脂中總膽固醇、甘油三酯以及低密度脂蛋白膽固醇的含量，可有效改善動(dòng)脈粥樣硬化的癥狀，逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣硬化趨勢(shì)。
【專利說(shuō)明】磷酸肌酸二鈉鹽在制備穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥物 中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于防治動(dòng)脈粥樣硬化的藥物及應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及磷酸肌酸二鈉鹽在制 備穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病、腦卒中和糖尿病腎病等多種血管疾病重要病理特征。動(dòng) 脈粥樣硬化（atherosclerosis, AS)是一種嚴(yán)重威脅人類健康的心血管疾病，其主要病理 特征包括早期的脂質(zhì)條紋形成及晚期粥樣斑塊的形成，動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的確切病因及發(fā) 病機(jī)制至今尚未完全明確，一般認(rèn)為其主要病變過(guò)程如下：在各種致病因素作用下，血管 內(nèi)膜受損，此時(shí)血管內(nèi)單核細(xì)胞發(fā)生聚集、黏附，并進(jìn)一步遷移至內(nèi)膜下，轉(zhuǎn)變成巨噬細(xì)胞， 血管內(nèi)膜下大量聚集的巨噬細(xì)胞和同樣增殖、遷移至內(nèi)膜下的平滑肌細(xì)胞一起大量吞噬脂 質(zhì)（包括膽固醇和脂質(zhì)過(guò)氧化物）形成泡沫細(xì)胞，而細(xì)胞內(nèi)過(guò)度堆積的脂質(zhì)將促使泡沫細(xì) 胞走向凋亡或壞死，將細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)釋放出來(lái)，最終形成條紋狀脂質(zhì)斑塊，造成血管管腔狹 窄，血流動(dòng)力學(xué)狀況發(fā)生改變，含有大量脂質(zhì)的斑塊還極不穩(wěn)定，易發(fā)生破裂。
[0003] 在此過(guò)程中，多種炎癥因子（IL-6, MCP-1，TNF-a等）參與AS的發(fā)生發(fā)展 及斑塊破裂的過(guò)程，其含量的增加提高了斑塊的易損性；基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase,主要是MMP-2及MMP-9等）的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致AS斑塊的纖維帽成分降 解，造成斑塊破裂脫落；而抗炎因子（IL-10等）可以抑制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)AS斑塊的愈合、增 加斑塊的穩(wěn)定性。
[0004] 粥樣硬化斑塊的形成、破裂是臨床心腦血管動(dòng)脈硬化性疾病（如冠心病、腦動(dòng)脈 硬化等）及其急性事件產(chǎn)生的最主要因素。
[0005] 因此，穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊可有效改善動(dòng)脈粥樣硬化的癥狀，是治療各 類心腦血管動(dòng)脈硬化性疾病的最佳方法。
[0006] 但目前臨床上并沒(méi)有有效消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的治療方法，臨床上常用的一些 調(diào)節(jié)血脂代謝的藥物如他汀類藥物僅可穩(wěn)定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊，對(duì)斑塊的消退作用并不明 顯。而且其穩(wěn)定易損斑塊的作用主要是通過(guò)降低LDL-C、提高HDL-C、降低甘油三酯，并通過(guò) 降低斑塊氧化脂蛋白水平等途徑來(lái)穩(wěn)定易損斑塊，而且因其作用靶點(diǎn)有限，且存在肝功能 受損、橫紋肌溶解等副作用也不能忽視。
[0007] 2006 年發(fā)表的 ASTEROID 研究（JAMA. 2006 Apr 5 ;295 (13) : 1556-65)是第一個(gè)為 強(qiáng)化他汀調(diào)脂治療逆轉(zhuǎn)冠狀動(dòng)脈斑塊提供確鑿證據(jù)的大規(guī)模臨床研究。507例經(jīng)冠狀動(dòng)脈 造影確診的既往未接受過(guò)他汀治療的冠心病患者給予瑞舒伐他汀40mg/天強(qiáng)化治療2年。 結(jié)果顯示，雖然 LDL-C 水平下降 53% (從 130mg/dl 降至 61mg/dl，lmg/d l = 0.0259mmol/ L)，HDL-C水平上升15% (從43mg/dl上升至50mg/dl);但與基線時(shí)相比，64%患者冠狀動(dòng) 脈斑塊出現(xiàn)消退，斑塊體積僅下降0. 79% (P〈0. 001)，病變最嚴(yán)重節(jié)段的冠狀動(dòng)脈斑塊體 積也僅下降9. 1% (P〈0. 001)。
[0008] 磷酸肌酸是人體內(nèi)自有的活性物質(zhì)，磷酸肌酸在肌肉收縮的能量代謝中發(fā)揮重要 作用。它是心肌和骨骼肌的化學(xué)能量?jī)?chǔ)備，并用于ATP的再合成。臨床上采用肌肉注射或 靜脈注射磷酸肌酸二鈉鹽來(lái)治療缺血狀態(tài)下的心肌代謝異常，以及在心臟手術(shù)時(shí)將磷酸肌 酸二鈉鹽加入心臟停搏液中保護(hù)心肌。磷酸肌酸二鈉鹽作為心肌保護(hù)劑藥品已經(jīng)在國(guó)內(nèi)外 上市應(yīng)用多年，由于其本身即為機(jī)體細(xì)胞內(nèi)源性物質(zhì)，經(jīng)臨床應(yīng)用表現(xiàn)出良好的安全性。外 源性的磷酸肌酸二鈉鹽還應(yīng)用在體育運(yùn)動(dòng)中，用于保護(hù)骨骼肌和心肌免受細(xì)胞內(nèi)損害和提 高肌肉功能恢復(fù)。磷酸肌酸二鈉鹽還有神經(jīng)保護(hù)作用，臨床顯示對(duì)大面積腦梗死患者的神 經(jīng)功能有改善作用。
[0009]目前，國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有文獻(xiàn)報(bào)道單獨(dú)應(yīng)用磷酸肌酸二鈉鹽具有穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣 硬化斑塊的藥效作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的是提供磷酸肌酸二鈉鹽在制備穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥物 中的應(yīng)用，作為藥物的新用途，磷酸肌酸二鈉鹽在短時(shí)間內(nèi)即可有效穩(wěn)定甚至消退動(dòng)脈粥 樣硬化斑塊，改善動(dòng)脈粥樣硬化的癥狀。
[0011] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0012] 磷酸肌酸二鈉鹽在制備穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥物中的應(yīng)用。
[0013] 較佳的，所述的穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥物為磷酸肌酸二鈉鹽注射劑。
[0014] 所述磷酸肌酸二鈉鹽注射劑的制備方法是：將磷酸肌酸二鈉鹽晶體或粉劑用生理 鹽水或其他注射溶媒溶解，配成相應(yīng)劑量的注射劑，所述的磷酸肌酸二鈉鹽注射劑的注射 方式為肌肉注射或靜脈注射。
[0015] 所述磷酸肌酸二鈉鹽作為穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥物的使用劑量為大于1 克/天（按60公斤體重計(jì)算，相當(dāng)于小鼠劑量為大于150毫克/公斤/天（mg/kg ? d))。
[0016] 本發(fā)明的有益效果如下：
[0017] 1.磷酸肌酸二鈉鹽可以顯著減少實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的面積，與生 理鹽水組相比斑塊面積減少約70%，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，其效果顯著優(yōu)于辛伐他汀， 中高劑量組與辛伐他汀組相比斑塊面積減少約60 %。
[0018] 2.磷酸肌酸二鈉鹽對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)脈根部斑塊的成分有明顯的影響，其中各劑量 組均可以降低斑塊的易損指數(shù)，與生理鹽水組相比易損指數(shù)下降約40%，增加了斑塊的穩(wěn) 定性。
[0019] 3.磷酸肌酸二鈉鹽可顯著降低實(shí)驗(yàn)小鼠血脂中總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋 白的水平，與生理鹽水組相比總膽固醇下降約25%，甘油三酯下降約55%，低密度脂蛋白 下降約30%。
[0020] 4.磷酸肌酸二鈉鹽可顯著降低實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)脈組織中MMP-9蛋白的表達(dá)，中高劑 量組與生理鹽水組相比MMP-9蛋白的表達(dá)降低約80 %，增加了組織中的斑塊穩(wěn)定性。
[0021] 5.磷酸肌酸二鈉鹽可顯著降低組織裂解液中炎癥因子IL-6的含量，中高劑量組 與生理鹽水組相比IL-6的含量下降約50%，降低了斑塊的易損性。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0022] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1磷酸肌酸二鈉鹽對(duì)小鼠主動(dòng)脈表面斑塊的影響；Data are mean土SEM, *p < 0? 05, **p < 0? 01, ***p < 0? 001 vs NS 組。
[0023] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例2磷酸肌酸二鈉鹽對(duì)小鼠主動(dòng)脈根部斑塊穩(wěn)定性的影響； Data are mean土SEM, *p < 0? 05, **p < 0? 01 vs NS 組。
[0024] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例4磷酸肌酸二鈉鹽對(duì)小鼠主動(dòng)脈_口-2蛋白表達(dá)的影響； Data are mean 土 SEM, **p < 0? 01 VS NS 組。
[0025] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例4磷酸肌酸二鈉鹽對(duì)小鼠主動(dòng)脈_口-9蛋白表達(dá)的影響； Data are mean 土 SEM, **p < 0? 01 VS NS 組。

【具體實(shí)施方式】
[0026] 下面通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)地描述。需要特別指出的是，這些描述 僅是示例性的描述，并不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。各種對(duì)本發(fā)明作出的顯而易見(jiàn)的修正 和改變也納入本發(fā)明的范圍內(nèi)。
[0027] 本發(fā)明的實(shí)施例中，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的給藥濃度根據(jù)小鼠給藥時(shí)液體體積與體重?fù)Q算， 根據(jù)本領(lǐng)域公知藥理實(shí)驗(yàn)中小鼠給藥時(shí)液體體積與體重比〇. lmL/10g換算，得到高、中、低 劑量組的溶液濃度分別為60mg/mL，30mg/mL和15mg/mL，但是，此濃度并不是在人體中的給 藥濃度，臨床上具體的給藥濃度根據(jù)適應(yīng)癥不同有很大變化，從8g/L到166g/L的濃度范圍 都有報(bào)道，因此在使用時(shí)需按劑量配制成適于臨床使用的濃度。
[0028] 實(shí)施例1磷酸肌酸二鈉鹽對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的面積的影響
[0029] 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0030] ApoE (-/_)小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，高脂飲食14w。
[0031] 2、材料與樣品
[0032] 磷酸肌酸二鈉鹽（CPS)，實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水溶解配成相應(yīng)濃度（低、中、高劑量組 分別配制15mg/mL、30mg/mL和60mg/mL)的溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0033] 3、實(shí)驗(yàn)方法
[0034] 給藥方法：將藥物溶解于0. 9%的生理鹽水中，尾靜脈注射給藥，每日一次，連續(xù) 給藥四周后處死小鼠取材。
[0035] 生理鹽水對(duì)照組：生理鹽水（NS);
[0036] 低劑量組（low dosage) :150mg/kg ? d ;
[0037] 中劑量組（middle dosage) :300mg/kg?d;
[0038] 高劑量組（high dosage) :6〇Omg/kg?d;
[0039] 陽(yáng)性對(duì)照組：辛伐他?。╯imvastatin)飼料喂食（50mg/kg?d)。
[0040] 取材：小鼠于處死前一天禁水禁食，灌注4%多聚甲醛固定組織，用于形態(tài)學(xué)檢 驗(yàn)。
[0041] 自主動(dòng)脈弓到腹主動(dòng)脈分叉處的血管剝?nèi)ネ饽?并沿縱軸剪開(kāi)，油紅0試劑染色 后于75%酒精中褪色至血管壁無(wú)色透明而斑塊呈紅色。將主動(dòng)脈攤平并拍照，用IPP軟件 分析并統(tǒng)計(jì)斑塊面積和血管表面積的比例。
[0042] 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0043] 由圖1可知，磷酸肌酸二鈉鹽可以顯著減少實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的 面積，與生理鹽水組相比斑塊面積減少約70%，并呈現(xiàn)一定的劑量依賴性，其效果顯著優(yōu)于 辛伐他汀，中高劑量組與辛伐他汀組相比斑塊面積減少約60%，由此可以判斷磷酸肌酸二 鈉鹽對(duì)ApoE (-/-)小鼠的早期動(dòng)脈粥樣硬化病變具有明顯的消退作用。
[0044] 實(shí)施例2磷酸肌酸二鈉鹽對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)脈根部斑塊穩(wěn)定性的影響
[0045] 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0046] ApoE (-/_)小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，高脂飲食14w。
[0047] 2、材料與樣品
[0048] 磷酸肌酸二鈉鹽（CPS)，實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水溶解配成相應(yīng)濃度（低、中、高劑量組 分別配制15mg/mL、30mg/mL和60mg/mL)的溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
[0049] 3、實(shí)驗(yàn)方法
[0050] 給藥方法：將藥物溶解于0. 9%的生理鹽水中，尾靜脈注射給藥，每日一次，連續(xù) 給藥四周后處死小鼠取材。
[0051] 生理鹽水對(duì)照組：生理鹽水（NS);
[0052]低劑量組（low dosage) :150mg/kg ? d;
[0053]中劑量組（middle dosage) :300mg/kg ? d ;
[0054]高劑量組（high dosage) :6〇Omg/kg ? d ;
[0055] 陽(yáng)性對(duì)照組：辛伐他?。╯imvastatin)飼料喂食（50mg/kg ? d)。
[0056]取材：
[0057] 小鼠于處死前一天禁水禁食，心臟與主動(dòng)脈根處于4%多聚甲醛中固定12h后0CT 包埋并切片。
[0058]主動(dòng)脈根部固定后，流水沖洗去多聚甲醛并用0CT包埋，切片（5 y m)，進(jìn)行HE染色 觀察斑塊形態(tài)與大小、油紅0(〇il red)染色觀察脂質(zhì)含量、M0MA-2染色觀察板塊中巨噬細(xì) 胞的含量、a-SMA染色觀察板塊中平滑肌細(xì)胞含量以及苦味酸-天狼猩紅（sirus red)染 色觀察膠原含量，使用IPP軟件分析并統(tǒng)計(jì)計(jì)算斑塊的易損指數(shù)。
[0059] 易損指數(shù)=(巨噬細(xì)胞+脂質(zhì)）陽(yáng)性面積百分比八平滑肌細(xì)胞+膠原）陽(yáng)性面 積百分比。
[0060] 4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0061]見(jiàn)表1，其中，n代表每組受試鼠的數(shù)目，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，見(jiàn)圖2，磷酸肌酸二鈉鹽 對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠主動(dòng)脈根部斑塊的成分有明顯的影響，其中各劑量組均可以降低斑塊的易損指 數(shù)，與生理鹽水組相比易損指數(shù)下降約40%，增加了斑塊的穩(wěn)定性。
[0062] 表1磷酸肌酸二鈉鹽對(duì)小鼠主動(dòng)脈根部斑塊成分的影響（mean土SEM)
[0063]

【權(quán)利要求】
1. 磷酸肌酸二鈉鹽在制備穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的穩(wěn)定和消退動(dòng)脈粥樣硬化斑塊藥 物為磷酸肌酸二鈉鹽注射劑。
【文檔編號(hào)】A61P9/10GK104382914SQ201410604482
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】張岫美, 孫玉, 牛榮榮, 毛杰, 毛嘉農(nóng), 潘俊芳, 陳勁松, 王嘉, 胡敏, 李念, 曾佳烽, 李若海, 韓國(guó)柱, 黃靖安 申請(qǐng)人:上海華拓醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司