谷氨酰胺治療內(nèi)毒素血癥造成腸道損傷的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及谷氨酰胺對內(nèi)毒素血癥造成腸道損傷的一種治療方法。主要用于治療由于各種原因引起的內(nèi)毒素致腸黏膜損傷。谷氨酰胺可以增加腸絨毛高度、降低腸粘膜通透性和增強(qiáng)腸免疫功能，可防止細(xì)菌移位，維持腸粘膜屏障；能有效減輕各種致病因素造成的腸損傷，具有保護(hù)腸黏膜的作用。保護(hù)腸道組織結(jié)構(gòu)、維護(hù)腸道功能，為內(nèi)毒素血癥腸道損傷后腸內(nèi)營養(yǎng)提供支持作用。
【專利說明】谷氨酰胺治療內(nèi)毒素血癥造成腸道損傷的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明公開了谷氨酰胺對內(nèi)毒素血癥造成腸道損傷的一種治療方法，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002]腸道作為一個免疫器官，起著阻隔細(xì)菌和內(nèi)毒素的屏障作用。正常情況下，胃腸道中絕大多數(shù)細(xì)菌是對人體有益的，我們稱之為“益生菌”，可幫我們消化乳糖、降解并排泄多余膽固醇；為我們的機(jī)體提供維生素B1、B2、B6、B12,以及泛酸、煙酸、維生素K等；刺激我們的免疫器官發(fā)育，并促使其功能不斷地演進(jìn)、完善，有益人體健康。益生菌與我們的胃腸道粘膜共同筑成了一道生態(tài)屏障，抵御和抗擊各種外來的病原微生物，但在某些特定的情況下，如嚴(yán)重疾病、營養(yǎng)不良、過度疲勞或外來刺激時，機(jī)體的抵抗力會下降，一些原本無害的細(xì)菌可能會乘虛而入，對機(jī)體造成傷害，引起腸粘膜屏障功能下降，尤其是休克和內(nèi)毒素血癥。腸腔內(nèi)大量細(xì)菌或內(nèi)毒素向腸腔外遷移，即可發(fā)生內(nèi)毒素和細(xì)菌移位(bacterialtranslocat1n, BT),繼而導(dǎo)致多種炎癥介質(zhì)的過度釋放，成為系統(tǒng)性炎癥反應(yīng)綜合征(system inflammatory response syndrome, SIRS)和多器官功能不全綜合征(multipleorgan dysfunct1n syndrome, MODS)。
[0003]谷氨酰胺(glutamine, Glu)對維持腸粘膜上皮功能是必不可少的,對腸粘膜上皮的生長和修復(fù)、對免疫功能的改善及抗氧化損傷的作用具有理論意義和臨床價值。在病理狀態(tài)下，腸屏障功能損傷與機(jī)體處于低Glu水平狀態(tài)有關(guān)，腸黏膜的損傷還與內(nèi)毒素血癥和腸屏障功能密切相關(guān)。Glu能有效減輕燒傷、失血性休克等各種致病因素造成的腸損傷具有保護(hù)作用。血紅素加氧酶-1 (heme oxygenase-1, HO-1)是分解血紅素的限速酶,其代謝產(chǎn)物一氧化碳、膽綠素具有較強(qiáng)的抗炎和抗凋亡作用，對腸道損傷具有重要保護(hù)作用。適當(dāng)劑量的Glu可以增加腸絨毛高度、降低腸粘膜通透性和增強(qiáng)腸免疫功能，可防止細(xì)菌移位，維持腸粘膜屏障。Glu是通過調(diào)節(jié)H0-1表達(dá)對內(nèi)毒素血癥腸道損傷而發(fā)揮保護(hù)作用，保護(hù)腸道組織結(jié)構(gòu)、維護(hù)腸道功能，為內(nèi)毒素血癥腸道損傷后腸內(nèi)營養(yǎng)提供支持作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

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[0004]本發(fā)明公開了谷氨酰胺對內(nèi)毒素血癥造成腸道損傷的一種治療方法，用于治療由于各種原因引起的內(nèi)毒素致腸道損傷。
[0005]本發(fā)明通過以下實驗證明谷氨酰胺對內(nèi)毒素血癥造成腸道損傷的一種治療方法:健康清潔級的標(biāo)準(zhǔn)雄性SD大鼠32只，體重280?320g。隨機(jī)分為正常對照組(C組)、內(nèi)毒素組(LPS組)、谷氨酰胺組(Glu組)和谷氨酰胺+血紅素加氧酶-1阻斷劑鋅原卟啉組(Glu+ZnPP組)，每組8只。C組不做任何處理；LPS組SD大鼠腹腔注射內(nèi)毒素10mg/kg ；Glu組腹腔注射LPS12小時前進(jìn)行l(wèi)g/kg谷氨酰胺灌胃；Glu+ZnPP組腹腔注射LPS12小時前進(jìn)行l(wèi)g/kg谷氨酰胺灌胃，注射內(nèi)毒素I小時前靜脈注射lOmmol/kg鋅原卟啉。所有動物均在實驗前適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境7天，環(huán)境溫度保持在22°C?25°C之間，均自由覓食和覓水。實驗結(jié)果證明谷氨酰胺能明顯增強(qiáng)內(nèi)毒素血癥大鼠腸組織的血紅素加氧酶-1 (HO-1)含量，較好的保護(hù)腸粘膜，明顯減輕腸道炎癥反應(yīng)。

【具體實施方式】
[0006]下面的實例將具體說明本發(fā)明的操作方法，但不能作為對本發(fā)明的限定。
[0007]健康清潔級的標(biāo)準(zhǔn)雄性SD大鼠32只，體重280?320g。按隨機(jī)數(shù)字表法將32只健康清潔級雄性SD大鼠分為正常對照組(C組)、內(nèi)毒素組(LPS組)、谷氨酰胺組(Glu組)和谷氨酰胺+血紅素加氧酶-1阻斷劑鋅原卟啉組(Glu+ZnPP組)，每組8只。C組不做任何處理；LPS組SD大鼠腹腔注射內(nèi)毒素10mg/kg ；Glu組腹腔注射LPS12小時前進(jìn)行Ig/kg谷氨酰胺灌胃；Glu+ZnPP組腹腔注射LPS12小時前進(jìn)行l(wèi)g/kg谷氨酰胺灌胃，注射內(nèi)毒素I小時前靜脈注射lOmmol/kg鋅原卟啉。所有動物均在實驗前適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境7天，環(huán)境溫度保持在22V?25°C之間，均自由覓食和覓水。注射內(nèi)毒素12小時后麻醉，無菌條件下打開腹腔，距回腸末端取一段8cm的小腸，其中0.5cm固定，余下的立即置于-80°C冰箱內(nèi)保存待測。
[0008]I組織形態(tài)學(xué)觀察:光鏡下觀察腸粘膜形態(tài):0分為正常；1分為絨毛頂端上皮下間隙增大；2分為上皮層和固有層中度分離；3分為絨毛兩側(cè)有大量分離伴有部分絨毛頂端破損；4分為絨毛破損伴有固有層毛細(xì)血管大量暴露；5分為固有層破壞、出血及潰瘍。Glu組與Glu+ZnPP組和LPS組比較差異均有顯著性(P〈0.01)。說明Glu組在維持腸黏膜形態(tài)方面明顯較好，腸粘膜屏障受損明顯減輕。
[0009]2免疫組化檢測腸組織中HO-1含量:C組回腸組織中無HO-1表達(dá)；LPS組表達(dá)較低；而在Glu組和Glu+ZnPP組的腸粘膜中HO-1含量明顯的增加。說明Glu可以有效誘導(dǎo)HO-1的表達(dá)；ZnPP不能阻斷HO-1表達(dá)，但作為HO-1活性抑制劑可以阻斷HO-1生物活性發(fā)揮作用，較好的保護(hù)腸粘膜，明顯減輕腸道炎癥反應(yīng)。Glu的保護(hù)作用可以被HO-1生物活性阻斷劑Znpp所取消，說明Glu的保護(hù)作用是HO-1特異性的。
[0010]3腸組織腫瘤壞死因子-α (TNF-α)和白細(xì)胞介素-10 (IL-10)的含量:結(jié)果顯示，與LPS組和Glu+ZnPP組比較，Glu組回腸組織TNF-a的含量明顯減低(P均〈0.01);而腸組織IL-10的含量卻顯著的升高(P均〈0.01)，這個結(jié)果進(jìn)一步說明在內(nèi)毒素血癥時Glu能明顯的降低腸道炎癥介質(zhì)TNF- a的分泌，促進(jìn)IL-10的分泌，從而抑制腸道的炎癥反應(yīng)，發(fā)揮抗炎效應(yīng)。
[0011]4腸組織髓過氧化物酶(MPO)活性測定:ΜΡ0主要存在于中性粒細(xì)胞中，而在單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中分布較少。MPO活性大小與中性粒細(xì)胞數(shù)量相關(guān)，可以反映組織內(nèi)中性粒細(xì)胞的數(shù)量。如表I所示，與LPS組和Glu+ZnPP組比較，Glu組的腸組織MPO活性明顯降低(P均〈0.01)。說明用Glu可以減少腸組織中中性粒細(xì)胞的浸潤，降低內(nèi)毒素血癥導(dǎo)致的中性粒細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)。Glu組TNF-a和MPO的值最低，說明內(nèi)毒素血癥誘發(fā)的腸道炎癥反應(yīng)在各組間Glu組最低。在促進(jìn)抗炎物質(zhì)釋放方面，Glu組IL-10的含量較其他三組多，有利于發(fā)揮局部抗炎作用和減少腸源性炎癥介質(zhì)的釋放。
[0012]實例一
[0013]臨床上，有多種原因造成引起腸粘膜屏障功能下降，尤其是休克和內(nèi)毒素血癥。在病理狀態(tài)下，腸屏障功能損傷與機(jī)體處于低谷氨酰胺水平狀態(tài)有關(guān)。谷氨酰胺能有效減輕各種致病因素造成的腸損傷，具有保護(hù)作用。谷氨酰胺主要用于治療由于各種原因引起的內(nèi)毒素致腸道損傷的一種方法?？诜劝滨０穕g/d。
【權(quán)利要求】
1.谷氨酰胺對內(nèi)毒素血癥造成腸道損傷的一種治療方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的谷氨酰胺對治療內(nèi)毒素血癥造成腸道損傷中的一種治療方法，其特征在于:谷氨酰胺可有效減輕各種致病因素造成的腸損傷，具有保護(hù)腸黏膜的作用，維護(hù)腸道功能。用量為18/(1 ；給藥方式為口服。
【文檔編號】A61K31/198GK104434895SQ201410621215
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月6日
【發(fā)明者】范紅斌, 龐慶豐, 陳俊良, 杜斌 申請人:江南大學(xué)