一種靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，采用單棕櫚酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基和水飛薊賓為原料，以薄膜旋蒸法制得載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體；再將載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體與超聲造影劑聲諾維微泡相偶聯(lián)，制得載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。本發(fā)明將熱敏脂質(zhì)體與微泡相結(jié)合，建立出新的遞藥系統(tǒng)，能夠利用微泡的靶向爆破和熱敏脂質(zhì)體的局部溫控效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)藥物在亞高溫場(chǎng)局部組織高效釋放，從而提高藥物的生物利用度，并且降低熱消融治療中的腫瘤殘留。
【專利說明】一種靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于靶向溫控遞藥系統(tǒng)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]水飛薊賓是近年來臨床廣泛應(yīng)用的具有抗炎抗氧化的保肝藥物，也被認(rèn)為能夠顯著的改變腫瘤炎性微環(huán)境，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。但目前水飛薊賓水溶性和脂溶性小，口服吸收差，生物利用度低，對(duì)組織滲透性較差，其吸收與利用率仍是需要解決的問題。超聲引導(dǎo)下的熱消融治療腫瘤技術(shù)，如射頻、微波及高強(qiáng)度聚焦超聲等，通過使得靶區(qū)溫度迅速上升到60°C以上，造成局部組織蛋白凝固而達(dá)到導(dǎo)致腫瘤壞死的目的。但是因?yàn)榻M織內(nèi)血供及腫瘤位置的影響，局部溫度有可能降低形成亞高溫場(chǎng)(40-60°C)，從而導(dǎo)致腫瘤殘留。如能制備新的藥物載體，利用這一亞高溫場(chǎng)而實(shí)現(xiàn)局部靶向抗腫瘤藥物釋放，將會(huì)對(duì)降低腫瘤殘留，提高消融療效有重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，制得的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)能夠利用微泡的靶向爆破和熱敏脂質(zhì)體的局部溫控效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)藥物在亞高溫場(chǎng)局部組織高效釋放，提高藥物的生物利用度，并且降低熱消融治療中的腫瘤殘留。
[0004]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為:
[0005]一種靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，包括以下步驟:
[0006]I)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的制備
[0007]按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，將20?50份單棕櫚酰磷脂酰膽堿、2?8份二棕櫚酰磷脂酰膽堿、3?8份二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG2000-Amine，上海西寶生物科技有限公司)及2?10份水飛薊賓溶于無水乙醇中，得到原料溶液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將原料溶液制備成薄膜，然后用PH值為4.7的磷酸緩沖液溶解薄膜，再依次經(jīng)超聲分散、微孔濾膜過濾、磷酸緩沖液透析后得到含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液；
[0008]2)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備
[0009]按(10?25): (2?10)的體積比將戊二醛水溶液和含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液混合，室溫下反應(yīng)5?1min,反應(yīng)完后用pH值為4.7的磷酸緩沖液進(jìn)行透析,再用纖維素濾膜過濾，得到戊二醛一脂質(zhì)體液；
[0010]向每I?5mL聲諾維(SonoVue, Italy, Bracco)微泡混懸液(按照產(chǎn)品說明書操作，將5mL 0.9%生理鹽水推入聲諾維超聲造影劑凍干粉瓶中配置而得)中加入3?7mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基，混合均勻后得到氨基化微泡混懸液；
[0011]按1: (I?3)的體積比向氨基化微泡混懸液中加入戊二醛一脂質(zhì)體液，在15?30°C下混合反應(yīng)2?5min，得到載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。
[0012]所述的步驟I)中將每2?1mg的水飛薊賓溶于5?20mL無水乙醇中。
[0013]所述的步驟I)中設(shè)置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的溫度為20?30°C ；
[0014]所述的步驟I)中將每5?20mL原料溶液制成的薄膜用20?40mL磷酸緩沖液進(jìn)行溶解。
[0015]所述的步驟I)中的超聲分散是在冰浴中進(jìn)行的，超聲功率為80?120W，超聲時(shí)間為 5 ?15min。
[0016]所述的步驟I)中的微孔濾膜過濾是用孔徑為0.2?0.8 μ m的微孔濾膜進(jìn)行多次過濾。
[0017]所述的步驟I)和步驟2)中的磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每4?1h換液一次,透析48?72h。
[0018]所述的步驟2)中戊二醛水溶液的體積濃度為I?5% ;含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液中載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的濃度為I?5mg/mL。
[0019]所述的步驟2)中的纖維素濾膜的孔徑為200?lOOOnm。
[0020]所述的步驟2)中每毫升聲諾維微泡混懸液中含40?50 μ g六氟化硫微泡。
[0021]相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為:
[0022]本發(fā)明提供的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，是針對(duì)水飛薊賓藥物在人體中生物利用度低以及熱消融治療中因?yàn)閬喐邷貓?chǎng)存在而導(dǎo)致的腫瘤殘留問題而提出的，其目的在于制備出一種靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。本發(fā)明在制備過程中采用單棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG2000-Amine)和水飛薊賓為原料，將原料制成薄膜后再溶解得到含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液；然后利用含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液得到戊二醛一脂質(zhì)體液，并將聲諾維微泡混懸液氨基化得到氨基化微泡混懸液，最后向氨基化微泡混懸液中加入戊二醛一脂質(zhì)體液，使載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體與超聲造影劑聲諾維微泡混懸液相偶聯(lián)，制得載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。熱敏脂質(zhì)體能夠在一定的溫度下釋放藥物，具有較好的溫控特性。并且超聲造影劑微泡能夠在一定場(chǎng)強(qiáng)的超聲波下爆破產(chǎn)生空化效應(yīng)，打開局部血管內(nèi)皮屏障。本發(fā)明將熱敏脂質(zhì)體與微泡相結(jié)合，建立出新的遞藥系統(tǒng)，能夠利用微泡的靶向爆破和熱敏脂質(zhì)體的局部溫控效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)藥物在亞高溫場(chǎng)局部組織高效釋放，從而提高藥物的生物利用度，并且降低熱消融治療中的腫瘤殘留。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0023]圖1是激光共聚焦顯微鏡下載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體的顯微鏡圖。

【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合附圖和本發(fā)明較佳的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0025]實(shí)施例1
[0026]I)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的制備
[0027]將30mg單棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、3mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、5mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG2000-Amine)及2mg水飛薊賓溶于5mL無水乙醇中，得到原料溶液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在25°C下將原料溶液制備成薄膜，然后用30mL pH值為4.7的磷酸緩沖液(將31.2g磷酸二氫鈉溶于100mL水中配成的)溶解薄膜，再依次經(jīng)超聲分散、微孔濾膜過濾、磷酸緩沖液透析后得到含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液；其中超聲分散是在冰浴中進(jìn)行的，超聲功率為100W，超聲時(shí)間為1min ;微孔濾膜過濾是用孔徑為0.8 μ m和0.4 μ m的微孔濾膜分別過濾3次；磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每8h換液一次，透析48h，去除游離藥物；
[0028]2)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備
[0029]將20mL戊二醛水溶液和5mL含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液混合，室溫下反應(yīng)5min,反應(yīng)完后用pH值為4.7的磷酸緩沖液進(jìn)行透析，再用孔徑為SOOnm的纖維素濾膜過濾，得到戊二醛一脂質(zhì)體液；其中戊二醛水溶液的體積濃度為1.25%;含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液中載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的濃度為2mg/mL ;磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每8h換液一次，透析48h，去除游離藥物；
[0030]按照超聲造影劑聲諾維(SonoVue)的產(chǎn)品說明書操作，將5mL 0.9%的生理鹽水推入聲諾維超聲造影劑凍干粉瓶中，配得聲諾維微泡混懸液，其中每毫升聲諾維微泡混懸液中含45 μ g六氟化硫微泡，然后向每2mL聲諾維微泡混懸液中加入4mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基，混合均勻后得到氨基化微泡混懸液；
[0031]按1:2的體積比向氨基化微泡混懸液中加入戊二醛一脂質(zhì)體液，在20°C下混合反應(yīng)5min，洗滌后得到載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。
[0032]實(shí)施例2
[0033]I)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的制備
[0034]將20mg單棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、2mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、3mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG2000-Amine)及3mg水飛薊賓溶于6mL無水乙醇中，得到原料溶液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在20°C下將原料溶液制備成薄膜，然后用20mL pH值為4.7的磷酸緩沖液(將31.2g磷酸二氫鈉溶于100mL水中配成的)溶解薄膜，再依次經(jīng)超聲分散、微孔濾膜過濾、磷酸緩沖液透析后得到含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液；其中超聲分散是在冰浴中進(jìn)行的，超聲功率為80W，超聲時(shí)間為5min ;微孔濾膜過濾是用孔徑為0.6 μ m和0.2 μ m的微孔濾膜分別過濾3次；磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每4h換液一次,透析72h,去除游離藥物；
[0035]2)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備
[0036]將1mL戊二醛水溶液和2mL含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液混合，室溫下反應(yīng)7min，反應(yīng)完后用pH值為4.7的磷酸緩沖液進(jìn)行透析，再用孔徑為200nm的纖維素濾膜過濾，得到戊二醛一脂質(zhì)體液；其中戊二醛水溶液的體積濃度為1% ;含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液中載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的濃度為lmg/mL ;磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每4h換液一次，透析72h，去除游離藥物；
[0037]按照超聲造影劑聲諾維(SonoVue)的產(chǎn)品說明書操作，將0.9%的生理鹽水推入聲諾維超聲造影劑凍干粉瓶中，配得聲諾維微泡混懸液，其中每毫升聲諾維微泡混懸液中含40 μ g六氟化硫微泡，然后向每ImL聲諾維微泡混懸液中加入3mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基，混合均勻后得到氨基化微泡混懸液；
[0038]按1:1的體積比向氨基化微泡混懸液中加入戊二醛一脂質(zhì)體液，在15°C下混合反應(yīng)2min，洗滌后得到載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。
[0039]實(shí)施例3
[0040]I)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的制備
[0041]將50mg單棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、8mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、8mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG2000-Amine)及1mg水飛薊賓溶于20mL無水乙醇中，得到原料溶液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在30°C下將原料溶液制備成薄膜，然后用40mL pH值為4.7的磷酸緩沖液(將31.2g磷酸二氫鈉溶于100mL水中配成的)溶解薄膜，再依次經(jīng)超聲分散、微孔濾膜過濾、磷酸緩沖液透析后得到含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液；其中超聲分散是在冰浴中進(jìn)行的，超聲功率為120W，超聲時(shí)間為15min ;微孔濾膜過濾是用孔徑為0.7 μ m和0.3 μ m的微孔濾膜分別過濾3次；磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每1h換液一次，透析60h，去除游離藥物；
[0042]2)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備
[0043]將25mL戊二醛水溶液和1mL含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液混合，室溫下反應(yīng)1min,反應(yīng)完后用pH值為4.7的磷酸緩沖液進(jìn)行透析,再用孔徑為100nm的纖維素濾膜過濾，得到戊二醛一脂質(zhì)體液；其中戊二醛水溶液的體積濃度為5% ;含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液中載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的濃度為5mg/mL ;磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每1h換液一次，透析60h，去除游離藥物；
[0044]按照超聲造影劑聲諾維(SonoVue)的產(chǎn)品說明書操作，將0.9%的生理鹽水推入聲諾維超聲造影劑凍干粉瓶中，配得聲諾維微泡混懸液，其中每毫升聲諾維微泡混懸液中含50 μ g六氟化硫微泡，然后向每5mL聲諾維微泡混懸液中加入7mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基，混合均勻后得到氨基化微泡混懸液；
[0045]按1:3的體積比向氨基化微泡混懸液中加入戊二醛一脂質(zhì)體液，在30°C下混合反應(yīng)4min，洗滌后得到載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。
[0046]實(shí)施例4
[0047]I)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的制備
[0048]將40mg單棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、5mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、6mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG2000-Amine)及5mg水飛薊賓溶于1mL無水乙醇中，得到原料溶液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在22°C下將原料溶液制備成薄膜，然后用25mL pH值為4.7的磷酸緩沖液(將31.2g磷酸二氫鈉溶于100mL水中配成的)溶解薄膜，再依次經(jīng)超聲分散、微孔濾膜過濾、磷酸緩沖液透析后得到含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液；其中超聲分散是在冰浴中進(jìn)行的，超聲功率為90W，超聲時(shí)間為8min ;微孔濾膜過濾是用孔徑為0.8 μ m和0.4 μ m的微孔濾膜分別過濾3次；磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每6h換液一次,透析54h,去除游離藥物；
[0049]2)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備
[0050]將15mL戊二醛水溶液和6mL含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液混合，室溫下反應(yīng)6min,反應(yīng)完后用pH值為4.7的磷酸緩沖液進(jìn)行透析，再用孔徑為400nm的纖維素濾膜過濾，得到戊二醛一脂質(zhì)體液；其中戊二醛水溶液的體積濃度為3% ;含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液中載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的濃度為3mg/mL ;磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每6h換液一次，透析54h，去除游離藥物；
[0051]按照超聲造影劑聲諾維(SonoVue)的產(chǎn)品說明書操作，將5mL 0.9%的生理鹽水推入聲諾維超聲造影劑凍干粉瓶中，配得聲諾維微泡混懸液，其中每毫升聲諾維微泡混懸液中含45 μ g六氟化硫微泡，然后向每3mL聲諾維微泡混懸液中加入5mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基，混合均勻后得到氨基化微泡混懸液；
[0052]按1: 1.5的體積比向氨基化微泡混懸液中加入戊二醛一脂質(zhì)體液，在25°C下混合反應(yīng)3min，洗滌后得到載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。
[0053]實(shí)施例5
[0054]I)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的制備
[0055]將35mg單棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、6mg 二棕櫚酰磷脂酰膽堿(MPPC)、4mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基(DSPE-PEG2000-Amine)及8mg水飛薊賓溶于15mL無水乙醇中，得到原料溶液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在28°C下將原料溶液制備成薄膜，然后用35mL pH值為4.7的磷酸緩沖液(將31.2g磷酸二氫鈉溶于100mL水中配成的)溶解薄膜，再依次經(jīng)超聲分散、微孔濾膜過濾、磷酸緩沖液透析后得到含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液；其中超聲分散是在冰浴中進(jìn)行的，超聲功率為110W，超聲時(shí)間為12min ;微孔濾膜過濾是用孔徑為0.5 μ m和0.2 μ m的微孔濾膜分別過濾3次；磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每8h換液一次，透析64h，去除游離藥物；
[0056]2)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備
[0057]將ISmL戊二醛水溶液和SmL含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液混合，室溫下反應(yīng)8min,反應(yīng)完后用pH值為4.7的磷酸緩沖液進(jìn)行透析，再用孔徑為600nm的纖維素濾膜過濾，得到戊二醛一脂質(zhì)體液；其中戊二醛水溶液的體積濃度為4% ;含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液中載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的濃度為4mg/mL ;磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每8h換液一次，透析64h，去除游離藥物；
[0058]按照超聲造影劑聲諾維(SonoVue)的產(chǎn)品說明書操作，將5mL 0.9%的生理鹽水推入聲諾維超聲造影劑凍干粉瓶中，配得聲諾維微泡混懸液，其中每毫升聲諾維微泡混懸液中含45 μ g六氟化硫微泡，然后向每4mL聲諾維微泡混懸液中加入6mg 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基，混合均勻后得到氨基化微泡混懸液；
[0059]按1:2.5的體積比向氨基化微泡混懸液中加入戊二醛一脂質(zhì)體液，在22°C下混合反應(yīng)3.5min，洗滌后得到載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。
[0060]本發(fā)明采用多種表征方法考察所制備的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的性能，發(fā)現(xiàn)其展示了良好的特征，具體如下:
[0061]1、圖1是激光共聚焦顯微鏡下載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體的顯微鏡圖，其中黃綠色熒光為超聲造影劑聲諾維微泡，紅色熒光為載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體。從圖中可看出黃綠色的聲諾維微泡周圍可見數(shù)個(gè)紅色的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體呈花環(huán)樣聚集。
[0062]2、粒徑與zeta電位
[0063]載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的平均粒徑為244.3±99.1nm,多分散性指數(shù)為0.287。Zeta電位為24mV±9mV。聲諾維微泡混懸液中微泡的平均粒徑為2236±45.3nm，載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體的平均粒徑2724±559.9nm。
[0064]3、根據(jù)紫外分光光度儀檢測(cè)結(jié)果，載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的最大吸收波長(zhǎng)為286.5nm。分別精密量取水飛薊賓對(duì)照品無水乙醇溶液0.5mL、l.0mL,2.0mL、3.0mL>4.0mL、5.0mL、6.0mL、7.0mL、8.0mL、9.0mL (濃度為 lOmg/L)于 1mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，在最大吸收波長(zhǎng)處測(cè)吸光度值，以濃度(mg/L)為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，得線性回歸方程:
[0065]y = 37.68x+0.010, r = 0.995。
[0066]4、包封率測(cè)定:精密吸取制備好的含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液lmL，用無水乙醇定容至10mL，測(cè)定吸光度值，然后由回歸方程得到溶液中全部所含藥量Al，采用透析法，將ImL制備好的含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液置入透析袋中，以pH值為4.7的磷酸緩沖液進(jìn)行透析48h，然后取透析袋中的含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液lmL，用無水乙醇稀釋至10mL，測(cè)定得到包含在載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體中的含藥量A2。參照2005年藥典制劑通則中脂質(zhì)體包封率的計(jì)算公式計(jì)算包封率:包封率=系統(tǒng)中包封的藥量(A2)/系統(tǒng)中包封與未包封的總藥量(Al) X 100%。取5批樣品，測(cè)其包封率分別為75%、78%、80%、71%、84%、平均為 77.6±4.9%?
[0067]5、載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的溫控釋藥性
[0068]取載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)5份，每份2mL，紫外分光光度儀測(cè)定總的藥物濃度(U。經(jīng)超聲輻照微泡爆破后，分別置入37°C、39°C、41°C、43°C、45°C共5組不同溫度水浴中，每組于1min后取出，平衡透析法去除游離藥物，再用紫外分光光度儀測(cè)定去除釋放游離藥物后的包封藥物濃度(Cil),計(jì)算釋放率=Ci6-CilZCi6o釋放率分別 5%,14%,85%,86%,94%0
[0069]6、載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體的偶聯(lián)效率
[0070]在激光共聚焦顯微鏡視野下，F(xiàn)ITC標(biāo)記的微泡呈明亮的黃綠色，羅丹明6G標(biāo)記的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體呈明亮的紅色，黃綠色的微泡周圍可見數(shù)個(gè)紅色的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體呈花環(huán)樣聚集，未與載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體相偶聯(lián)的微泡周圍未見有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體聚集。5批樣品中偶聯(lián)率分別91.5%、94.8%、85.2%、90.2%及97%。
【權(quán)利要求】
1.一種靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的制備 按質(zhì)量份數(shù)計(jì)，將20?50份單棕櫚酰磷脂酰膽堿、2?8份二棕櫚酰磷脂酰膽堿、3?8份二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基及2?10份水飛薊賓溶于無水乙醇中，得到原料溶液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將原料溶液制備成薄膜，然后用pH值為4.7的磷酸緩沖液溶解薄膜，再依次經(jīng)超聲分散、微孔濾膜過濾、磷酸緩沖液透析后得到含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液； 2)載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備 按(10?25): (2?10)的體積比將戊二醛水溶液和含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液混合，室溫下反應(yīng)5?lOmin,反應(yīng)完后用pH值為4.7的磷酸緩沖液進(jìn)行透析,再用纖維素濾膜過濾，得到戊二醛一脂質(zhì)體液； 向每1?5mL聲諾維微泡混懸液中加入3?7mg二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-氨基，混合均勻后得到氨基化微泡混懸液； 按1: (1?3)的體積比向氨基化微泡混懸液中加入戊二醛一脂質(zhì)體液，在15?30°C下混合反應(yīng)2?5min，得到載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于:所述的步驟1)中將每2?10mg的水飛薊賓溶于5?20mL無水乙醇中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于:所述的步驟1)中設(shè)置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀的溫度為20?30°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于:所述的步驟1)中將每5?20mL原料溶液制成的薄膜用20?40mL磷酸緩沖液進(jìn)行溶解。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于:所述的步驟1)中的超聲分散是在冰浴中進(jìn)行的，超聲功率為80?120W，超聲時(shí)間為5?15min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于:所述的步驟1)中的微孔濾膜過濾是用孔徑為0.2?0.8μπι的微孔濾膜進(jìn)行多次過濾。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于:所述的步驟1)和步驟2)中的磷酸緩沖液透析是以pH值為4.7的磷酸緩沖液為透析液，每4?10h換液一次，透析48?72h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于:所述的步驟2)中戊二醛水溶液的體積濃度為1?5%;含有載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的溶液中載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體的濃度為1?5mg/mL。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于:所述的步驟2)中的纖維素濾膜的孔徑為200?lOOOnm。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向溫控的載水飛薊賓熱敏脂質(zhì)體-微泡復(fù)合體遞藥系統(tǒng)的制備方法，其特征在于:所述的步驟2)中每毫升聲諾維微泡混懸液中含40?50 μ g六氟化硫微泡。
【文檔編號(hào)】A61K31/357GK104367546SQ201410642002
【公開日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月13日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月13日
【發(fā)明者】羅文 , 張?jiān)骑w, 張邦樂, 周曉東, 巨佳 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)