包含24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B的組合物及其在調(diào)血脂、制備HMG-CoA抑制劑上的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種由24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物，及其在調(diào)血脂和制備HMG-CoA還原酶抑制劑中的應(yīng)用。24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B 組成的組合物的重量比為1:0.5~15，優(yōu)選為1:3。此組合物比同等劑量下單一使用24-乙酰澤瀉醇A或23-乙酰澤瀉醇B或現(xiàn)有技術(shù)中披露的此兩單體的組合物具更好的調(diào)血脂作用；且24-乙酰澤瀉醇A或23-乙酰澤瀉醇B均對脂代謝關(guān)鍵酶HMG-CoA還原酶具抑制作用，本發(fā)明首次披露此兩者的組合物對該酶的抑制作用強于單體，故本發(fā)明同時提供包含此組合物的HMG-CoA還原酶抑制劑。
【專利說明】包含24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B的組合物及其 在調(diào)血脂、制備HMG-CoA抑制劑上的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥有效成分組合物，具體涉及23-乙酰澤瀉醇B和24-乙酰澤 瀉醇A組合物在調(diào)血脂及制備三羥基三甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑上的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 脂質(zhì)代謝紊亂包括膽固醇（TC)異常、富含甘油三脂（TG)的脂蛋白代謝異常、高密 度脂蛋白代謝（HDL-C)異常。研究表明，脂蛋白代謝酶生物活性的改變會引起脂質(zhì)代謝的 變化，導致脂質(zhì)代謝紊亂而引發(fā)高脂血癥（HLP)。HLP與心腦血管疾病、腎臟疾病的發(fā)病率 及死亡率之間存在著明顯的相關(guān)性。如不有效干預，高脂血癥及其相關(guān)疾病將會成為影響 人們身體健康的一個重要危險因素。
[0003] 通過調(diào)控脂代謝酶的生物活性，已成為目前調(diào)脂治療的主要手段。影響脂質(zhì)代謝 的酶類主要有HMG-CoA (三羥基三甲基戊二酰輔酶A)還原酶等。HMG-CoA還原酶是體內(nèi)催 化TC源頭合成的關(guān)鍵酶，催化HMG-CoA生成MVA (甲羥戊酸），進一步經(jīng)鯊烯生成膽固醇。 細胞內(nèi)過高的FC(游離脂肪酸）水平，激發(fā)微粒體ACAT，促進膽固醇酯化，以膽固醇酯（CE) 形式貯存，反饋性抑制HMG-CoA還原酶合成，使膽固醇合成限速酶受抑，從而降低了細胞內(nèi) 膽固醇合成。因此其活性大小直接影響體內(nèi)膽固醇含量的高低。
[0004] 目前常用的調(diào)脂西藥有他汀類藥物，為HMG-CoA還原酶抑制劑，其調(diào)脂效果良好， 但在經(jīng)肝臟代謝過程中，可引起膽汁淤積和轉(zhuǎn)氨酶升高等肝臟毒性。中藥中含有多種活性 成分作用于多個靶點經(jīng)整合而產(chǎn)生綜合療效，作用溫和而持久，且毒性相對要小。因此從傳 統(tǒng)中藥尋找低毒高效調(diào)脂藥物一直是藥學工作者長期的目標。中藥澤瀉為澤瀉科植物澤瀉 Alisma orientalis(Sam.)Juzep的干燥塊莖，具利水、清濕熱的功效。在臨床和動物實驗 中已確切證實具有良好的調(diào)脂效果，常用于治療HLP。藥材含量最高的為四環(huán)三萜及其衍 生物，即澤瀉醇類化合物。大量研究證明，其為澤瀉藥材的調(diào)脂效應(yīng)物質(zhì)，24-乙酰澤瀉醇A 和23-乙酰澤瀉醇B等為其主要成分。
[0005] 傳統(tǒng)中醫(yī)認為，中藥中所含成分往往通過多種作用機制對疾病起到治療作用，澤 瀉中具有調(diào)血脂藥理活性的成分有多種，系統(tǒng)研究澤瀉中調(diào)脂效應(yīng)物質(zhì)的不同組合物在治 療HLP的過程中產(chǎn)生的協(xié)同增效作用，尋找調(diào)脂作用顯著、質(zhì)量穩(wěn)定可控的新型藥物，具有 重大社會意義和經(jīng)濟價值。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種由23-乙酰澤瀉醇B和24-乙酰澤瀉醇A組成的組合物 及其在調(diào)血脂及其在制備HMG-CoA還原酶抑制劑中的應(yīng)用，以滿足臨床應(yīng)用的需要，具體 內(nèi)容如下：
[0007] 本發(fā)明所述的24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物，重量比為：
[0008] 24-乙酰澤瀉醇A :23-乙酰澤瀉醇B = 1: 0· 5?15 ;
[0009] 最佳的重量比為：24-乙酰澤瀉醇A :23-乙酰澤瀉醇B = 1:3 ;
[0010] 同時本發(fā)明還提供一種含有上述24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組 合物HMG-CoA還原酶抑制劑。
[0011] 本發(fā)明還涉及含有上述24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物的混 合物在調(diào)血脂中的應(yīng)用及在制備HMG-CoA還原酶抑制劑中的應(yīng)用。
[0012] 本發(fā)明還涉及一種澤瀉活性成分混合物，其中，包括上述24-乙酰澤瀉醇A和 23- 乙酰澤瀉醇B組成的組合物，其總含量大于70%，其余為除了 23-乙酰澤瀉醇B和 24- 乙酰澤瀉醇A外的其他澤瀉提取物。
[0013] 本發(fā)明提供的藥物組合物可與藥學上可接受的載體制成湯劑、口服液、沖劑、糖漿 齊IJ、片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑、丸劑、滴丸劑、膏劑等劑型的藥物。
[0014] 在制成片劑時把該藥物組合物和載體乳糖或玉米淀粉，需要時加入潤滑劑硬脂酸 鎂，混合均勻，然后壓片制成片劑。在制成膠囊劑時，把該藥物組合物和載體乳糖或玉米淀 粉，混合均勻，整理，然后裝膠囊制成膠囊劑。在制成顆粒劑時，把該藥物組合物和稀釋劑乳 糖或玉米淀粉混合均勻，整理，干燥，制成顆粒劑。
[0015] 本發(fā)明中23-乙酰澤瀉醇B和24-乙酰澤瀉醇A可從澤瀉屬植物中提取得到，本 屬植物在中國有6種，優(yōu)選為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis(Sam. )Juzep.更優(yōu)選為 澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis (Sam.) Juzep.的干燥塊莖。
[0016] 有益效果
[0017] 本發(fā)明的23-乙酰澤瀉醇B和24-乙酰澤瀉醇A組成的組合物，具顯著調(diào)理血脂 作用，且對HMG-CoA還原酶具顯著抑制作用。該組合物比同等劑量下單一使用23-乙酰澤 瀉醇B或24-乙酰澤瀉醇A調(diào)血脂作用更好，對HMG-CoA還原酶抑制作用更強。
[0018] 具體實施方法
[0019] 下面結(jié)合具體實施例進一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實施例僅用于說明本發(fā)明而 不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形 式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。
[0020] 實施例1 24-乙酰澤瀉醇A的制備
[0021] 取澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis (Sam. ) Juzep.的干燥塊莖20kg，10倍量 甲醇冷浸提取4次，低壓濃縮，得浸膏1600g。用水分散后依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃 取，得乙酸乙酯部位785g，正丁醇部位531g。取乙酸乙酯部位450g，采用100-200目硅膠 (2500g)、石油醚-乙酸乙酯體系進行粗分，得25個組分（Frl-Fr25)。Fr20(2. 9g)通過甲 醇/二氯甲烷體系重結(jié)晶得到24-乙酰澤瀉醇A 800mg，純度為95% (重量）。
[0022] 實施例2 23-乙酰澤瀉醇B的制備
[0023] 取澤瀉科植物澤瀉Alisma orientalis (Sam. ) Juzep.的干燥塊莖20kg，10倍量甲 醇冷浸提取4次，低壓濃縮，得藥材浸膏1600g。用水分散后依次采用乙酸乙酯、正丁醇萃 取，得乙酸乙酯部位785g，正丁醇部位531g。取乙酸乙酯部位450g，采用100-200目硅膠 (2500g)、石油醚-乙酸乙酯體系進行粗分，得25個組分（Frl-Fr25)。Frl2 (3g)通過C18 柱層析分離后，利用分析HPLC選擇合適條件后，經(jīng)半制備液相（95%甲醇溶液，等度洗脫） 制備得23-乙酰澤瀉醇B 770mg，純度為95% (重量）。
[0024] 實施例3 24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物的制備
[0025] 方法I :將實施例1和實施例2得到的產(chǎn)品按照1:3混合，得到24-乙酰澤瀉醇A 和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物；
[0026] 方法2 :將實施例1和實施例2得到的產(chǎn)品按照1:10混合，得到24-乙酰澤瀉醇A 和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物；
[0027] 方法3 :將實施例1和實施例2得到的產(chǎn)品按照1:1混合，得到24-乙酰澤瀉醇A 和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物；
[0028] 方法4 :將實施例1和實施例2得到的產(chǎn)品按照1:0. 5混合，得到24-乙酰澤瀉醇 A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物；
[0029] 方法5 :將實施例1和實施例2得到的產(chǎn)品按照1:5混合，得到24-乙酰澤瀉醇A 和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物；
[0030] 方法6 :將實施例1和實施例2得到的產(chǎn)品按照1:0. 05混合，得到24-乙酰澤瀉 醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物；
[0031] 方法7 :將實施例1和實施例2得到的產(chǎn)品按照1:20混合，得到24-乙酰澤瀉醇A 和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物；
[0032] 方法8 :將實施例1中的深褐色澤瀉藥材浸膏100g，上硅膠柱（500g)，以石油 醚-乙酸乙酯（5:1)洗脫，每150ml為1個流份，以HPLC檢測，收集目標流份，回收溶劑，得 到固體2克。采用面積歸一法計算含量，含24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B總重量 為78%，兩者重量比例為1:3. 3。
[0033] 實施例4含有24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物的片劑、膠囊 劑或顆粒劑的制備
[0034] 稱取實施例3的組合物20g，加淀粉20g，微晶纖維素5g，硬脂酸鈉0. 5g，混合均 勻，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法，制成片劑、膠囊劑或顆粒劑。
[0035] 實施例5比較不同組合物對高脂血癥小鼠的調(diào)血脂作用
[0036] 制備脂肪乳：取2g丙硫氧嘧啶于乳缽中研細，備用。取25g豬油于40°C水浴加熱 融化，置乳缽中，加入15g膽固醇、2g丙硫氧嘧啶、Ig糖，充分攪拌，溶解。再徐徐加入濃度 為10 %的膽酸鈉水溶液20ml，并不斷攪拌，然后加入吐溫-8010ml、丙二醇30ml，研磨乳化 均勻，最后加蒸餾水至l〇〇ml。裝入密閉容器中，冷藏，使用時先于37°C水浴融化。取176 只ICR小鼠，全部雄性，體重18?22g，依體重隨機分為16組，隨機選取1組設(shè)為正常對 照組，正常喂養(yǎng)，每天上午蒸餾水（IOmL · kg，灌胃；其余動物均用于造模，灌胃脂肪乳劑 (IOmL · kg，，連續(xù)五周，灌胃期間均自由攝取常規(guī)飼料，末次灌胃后禁食12h(不禁水）， 小鼠眶靜脈取血，分離血清，采用隨機區(qū)組法按血清甘油三酯水平將造模動物均衡分為15 組，分別為：模型組，辛伐他汀組（哈藥集團三精制藥股份有限公司），23-乙酰澤瀉醇B高、 中、低劑量組，24-乙酰澤瀉醇A高、中、低劑量組，24-乙酰澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇混合 組：1:10組，1:3組、1:1組，1:0. 5組、1:5組、1:0. 05組、1:20組?；旌衔镏苽浞椒ò磳＠?《澤瀉活性成分組合物及其在醫(yī)藥上應(yīng)用》（申請?zhí)枺?00510040387. 4)中實施例4進行。
[0037] 灌胃給藥，陽性組辛伐他汀組每天灌飼0. 64mg · kg、24-乙酰澤瀉醇A低劑量組 每天灌飼0. 64mg · kg4,中劑量組每天灌飼I. 28mg · kg4,高劑量組每天灌飼2. 56mg · kg4; 23-乙酰澤瀉醇B低劑量組每天灌飼為0. 64mg ?kg'中劑量組每天灌飼為I. 28mg Ag4，高 劑量組每天灌飼為2. 56mg 混和組：1:10組每天灌飼24-乙酰澤瀉醇A 0· 06mg *kg ' 23- 乙酰澤瀉醇13 0.5811^*1^4，1:3組每天灌飼24-乙酰澤瀉醇4 0.1511^*1^'23-乙酰澤 瀉醇B 0· 49mg .kg-1，1:1組每天灌飼24-乙酰澤瀉醇A、23-乙酰澤瀉醇B各0· 32mg .kg-1， 1:0. 5組每天灌飼24-乙酰澤瀉醇A 0· 42mg · kg'23-乙酰澤瀉醇B 0· 22mg · kg4,1:5 組每天灌飼24-乙酰澤瀉醇A 0· I Img · kg'23-乙酰澤瀉醇B 0· 53mg · kg4，1: 0· 05組每 天灌飼24-乙酰澤瀉醇A 0· 61mg · kg'23-乙酰澤瀉醇B 0· 03mg · kg4,1:20組每天灌飼 24- 乙酰澤瀉醇A 0· 03mg · kg'23-乙酰澤瀉醇B 0· 61mg · kg'
[0038] 各造模組每日上午繼續(xù)以IOmL · kg4灌胃給予脂肪乳劑，下午各給藥組給予相應(yīng) 藥物治療，連續(xù)給藥3周。末次給藥后禁食12h(不禁水），小鼠眼眶靜脈取血，靜置放置 20?30min，全血離心取血清，稱取肝臟重量，試劑盒法測定TG、HDL-C、TC。
[0039] 造模五周后檢測小鼠血清中TG，TC, HDL-C的濃度，比較模型組與空白組小鼠血脂 水平。結(jié)果見表1。
[0040] 實驗進行了空白組，陽性組，模型組，23-乙酰澤瀉醇B高、中、低劑量組，24-乙酰 澤瀉醇A高、中、低劑量組，混合物組1:10組，1:3組、1:1組，15組、1:5組、105組、 1:20組的體重、肝重比較，稱量數(shù)據(jù)見表2,結(jié)果表明，23-乙酰澤瀉醇B、24-乙酰澤瀉醇A 及兩者混合物均能降低高脂小鼠肝重。
[0041] 空白組，陽性組，模型組，23-乙酰澤瀉醇B高、中、低劑量組，24-乙酰澤瀉醇A高、 中、低劑量組，混合物組1:10組，1:3組、1:1組，1:0. 5組、1:5組、1:0. 05組、1:20組的血脂 水平比較見表3。
[0042] 表1空白組與模型組血脂水平比較（X 土 S)
[00431

【權(quán)利要求】
1. 24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物，其特征在于，重量比為：24-乙 酰澤瀉醇A :23-乙酰澤瀉醇B =1:0. 5~15。
2. 如權(quán)利要求1所述的24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物，其特征 在于，重量比為：24-乙酰澤瀉醇A :23-乙酰澤瀉醇B =1:3。
3. -種HMG-CoA還原酶抑制劑，其特征在于：含有如權(quán)利要求1或2所述的24-乙酰 澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物。
4. 含有權(quán)利要求1或2所述的24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物的 混合物在調(diào)血脂中的應(yīng)用。
5. 含有權(quán)利要求1或2所述的24-乙酰澤瀉醇A和23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物的 混合物在制備HMG-CoA還原酶抑制劑中的應(yīng)用。
6. -種澤瀉活性成分混合物，包含權(quán)利要求1或2所述的24-乙酰澤瀉醇A和23-乙 酰澤瀉醇B組成的組合物，此組合物的總質(zhì)量含量大于70%。
7. -種藥物組合物，其特征在于：含有如權(quán)利要求1或2所述的24-乙酰澤瀉醇A和 23-乙酰澤瀉醇B組成的組合物或權(quán)利要求6所述的澤瀉活性成分組合物與一種或多種 藥學上可接受的載體或賦形劑制成的臨床上任何可接受的劑型形式，包括片劑、膠囊、顆粒 齊U、滴丸劑。
【文檔編號】A61K31/58GK104434930SQ201410650790
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月14日
【發(fā)明者】徐飛, 吳啟南, 谷巍, 陳軍, 顧薇, 房方, 呂翔 申請人:南京中醫(yī)藥大學