適合玻璃體內(nèi)施用的vegf拮抗劑的制劑的制作方法
【專利摘要】提供適合玻璃體內(nèi)施用于眼睛的血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)特異性融合蛋白拮抗劑的眼用制劑。該眼用制劑包括穩(wěn)定的液體制劑和可凍干的制劑。優(yōu)選地，該蛋白質(zhì)拮抗劑具有SEQ ID NO：4中所示的氨基酸序列。
【專利說明】適合玻璃體內(nèi)施用的VEGF拮抗劑的制劑
[0001] 本申請是申請日為2007年6月14日、申請?zhí)枮?00780022555. 4、發(fā)明名稱為"適 合玻璃體內(nèi)施用的VEGF拮抗劑的制劑"的發(fā)明專利申請的分案申請。
[0002] 發(fā)明背景 發(fā)明領(lǐng)域
[0003] 本發(fā)明涉及適合玻璃體內(nèi)施用的包含能夠抑制血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)的藥劑 的藥物制劑，以及制備和使用該制劑的方法。本發(fā)明包括具有增強(qiáng)的穩(wěn)定性的液體藥物制 齊U，以及可以凍干并重新溶解用于玻璃體內(nèi)施用的制劑。
[0004] 相關(guān)技術(shù)的情況
[0005] 血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)的表達(dá)在人的癌癥中幾乎普遍存在，這與它作為腫 瘤新血管發(fā)生的關(guān)鍵介體的作用是相符的。在多個(gè)不同的異種移植模型中，通過與該分 子或它的VEGFR-2受體結(jié)合，VEGF功能的阻斷抑制了移植的腫瘤細(xì)胞的生長（參見，例 如 Gerber 等人，（2000)Cancer Res. 60:6253-6258)。已經(jīng)描述了一種可溶的 VEGF 特異 性融合蛋白拮抗劑，稱作"VEGF捕捉劑"（Kim等人，（2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99 : 11399-404 ;Holash 等人，（2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99 :11393-8)。
[0006] 眼用制劑是已知的，參見例如，U.S. 7, 033, 604和6, 777, 429。在US 6, 676, 941中 描述了一種VEGF抗體的眼用制劑。
[0007] 凍干（在控制條件下冷凍干燥）通常用于蛋白質(zhì)的長期儲藏。在冷凍干燥狀態(tài)時(shí)， 凍干的蛋白質(zhì)實(shí)質(zhì)上耐降解、聚集、氧化和其他變性過程（參見，例如U. S. 6, 436, 897)
[0008] 發(fā)明簡述
[0009] 提供了 VEGF特異性融合蛋白拮抗劑的穩(wěn)定制劑。提供了藥學(xué)可接受的制劑，其包 含VEGF "捕捉劑"拮抗劑和藥學(xué)可接受的載體。在具體的實(shí)施方案中，提供了液體和凍干 的制劑。
[0010] 在第一個(gè)方面，提供了 VEGF特異性融合蛋白拮抗劑的穩(wěn)定的液體眼用制劑，其包 含含有受體組分的融合蛋白和多聚化組分（也稱作"VEGF捕捉劑"），其中所述受體組分基 本上由第一 VEGF受體的免疫球蛋白樣（Ig)結(jié)構(gòu)域2和第二VEGF受體的Ig結(jié)構(gòu)域3組 成。在VEGF特異性融合蛋白拮抗劑的一個(gè)具體的實(shí)施方案中，第一 VEGF受體是Fltl，第二 VEGF受體是Flkl或Flt4。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，該融合蛋白具有SEQ ID NO :2或 SEQ ID NO :4的氨基酸序列。優(yōu)選地，該VEGF拮抗劑是包含SEQ ID NO :4的兩種融合蛋白 的二聚體。
[0011] 在一個(gè)方面，提供了一種穩(wěn)定的液體眼用制劑，其包含l-l〇〇mg/ml VEGF特異性融 合蛋白拮抗劑，〇. 01-5%的一種或多種有機(jī)共溶劑，30-150mM的一種或多種張度劑，5-40mM 的緩沖劑和任選地，1. 0-7. 5%的穩(wěn)定劑，pH為約5. 8-7. 0。
[0012] 在一個(gè)或多個(gè)具體的實(shí)施方案中，有機(jī)共溶劑可以是聚山梨酯例如聚山梨酯20 或聚山梨酯80,聚乙二醇（PEG)例如PEG 3350或丙二醇，或其組合；張度劑可以是，例如， 氯化鈉或氯化鉀；穩(wěn)定劑可以是蔗糖、山梨糖醇、甘油、海藻糖或甘露醇；并且緩沖劑可以 是，例如，磷酸鹽緩沖液。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，磷酸鹽緩沖液是磷酸鈉緩沖液。
[0013] 在各種實(shí)施方案中，有機(jī)共溶劑是聚山梨酯和/或PEG，穩(wěn)定劑是蔗糖，緩沖劑是 磷酸鹽緩沖液并且張度劑是氯化鈉。
[0014] 更具體地，該穩(wěn)定的液體眼用制劑包含約40-50mg/ml的VEGF拮抗劑（SEQ ID NO : 4)，約IOmM磷酸鹽緩沖液，0. 01-3 %聚山梨酯和/或PEG，40-135mM氯化鈉和任選的5. 0% 鹿糖，pH 約 6. 2-6. 3。
[0015] 在一個(gè)具體的優(yōu)選實(shí)施方案中，該穩(wěn)定的液體眼用制劑包含約50 mg/ml的VEGF 拮抗劑（SEQ ID NO :4)，IOmM磷酸鈉緩沖液，50mM氯化鈉，0.1%聚山梨酯和5%蔗糖，pH約 6· 2-6· 3〇
[0016] 在一個(gè)具體的優(yōu)選實(shí)施方案中，該穩(wěn)定的液體眼用制劑包含約50mg/ml的VEGF拮 抗劑（SEQ ID NO :4)，IOmM磷酸鈉緩沖液，50mM氯化鈉，3% PEG和5%蔗糖，pH約6. 2-6. 3。
[0017] 在一個(gè)具體的優(yōu)選實(shí)施方案中，該穩(wěn)定的液體眼用制劑包含約40mg/ml的VEGF拮 抗劑（SEQ ID NO :4)，IOmM磷酸鈉緩沖液，40mM氯化鈉，0.03%聚山梨酯和5%蔗糖，pH約 6· 2-6· 3〇
[0018] 在一個(gè)具體的優(yōu)選實(shí)施方案中，該穩(wěn)定的液體眼用制劑包含約40mg/ml的VEGF拮 抗劑（SEQ ID NO :4)，IOmM磷酸鈉緩沖液，135mM氯化鈉和0.03%聚山梨酯，pH約6. 2-6. 3。
[0019] 在另一個(gè)方面，提供了一種穩(wěn)定的液體眼用制劑，其包含l-100mg/ml的VEGF特 異性融合蛋白拮抗劑；0.01-5 %的一種或多種有機(jī)共溶劑；5-40mM的緩沖劑；和任選的 30-150mM的一種或多種張度劑和/或1. 0-7. 5%的穩(wěn)定劑；pH約5. 8-7. 0。
[0020] 在各種實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑（SEQ ID NO :4)是以約10到約80mg/ml的濃度 存在。在各種實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑（SEQ ID NO :4)是以約10,約20,約30,約40,約 50,約60,約70或約80mg/ml的濃度存在。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑（SEQ ID NO :4)是以約40mg/ml的濃度存在。
[0021] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑選自蔗糖、山梨糖醇、甘油、海藻糖和甘露醇中的一 種或多種。
[0022] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，有機(jī)共溶劑選自聚山梨酯例如聚山梨酯20或聚山梨酯80， 聚乙二醇（PEG)例如PEG 3350和丙二醇中的一種或多種。
[0023] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，緩沖劑是磷酸鹽緩沖液，例如，磷酸鈉。
[0024] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，張度劑是一種鹽，例如，氯化鈉。
[0025] 在一個(gè)實(shí)施方案中，該穩(wěn)定的液體眼用制劑包含IOmM磷酸鈉緩沖液，約0. 03到約 0. 1 %聚山梨酯和/或約3 % PEG或丙二醇，約40mM氯化鈉和約5 %蔗糖。在一個(gè)具體的實(shí) 施方案中，該穩(wěn)定的液體眼用制劑包含IOmM磷酸鈉緩沖液，約〇. 03%聚山梨酯，約40mM氯 化鈉和約5%蔗糖。在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，該制劑的pH約6. 2到約6. 3。在另一個(gè) 具體的實(shí)施方案中，通過混合磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉至期望的PH而不進(jìn)行酸/堿滴定來 達(dá)到該pH。
[0026] 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，該穩(wěn)定的液體眼用制劑基本上由40mg/ml的VEGF拮抗 劑（SEQ ID NO :4)，IOmM磷酸鈉緩沖液，0.03%的聚山梨酯，40mM的氯化鈉和5%的蔗糖組 成，pH 6. 2-6· 3。
[0027] 在另一個(gè)方面，提供了一種穩(wěn)定的液體眼用制劑，其包含約10到約80mg/ml VEGF 拮抗劑，約IOmM磷酸鈉緩沖液，約0. 03%聚山梨酯和約135mM氯化鈉，pH是6. 2到6. 3。
[0028] 在各種實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑（SEQ ID NO :4)是以約10到約80mg/ml的濃度 存在。在各種實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑（SEQ ID NO :4)是以約10,約20,約30,約40,約 50,約60,約70或約80mg/ml的濃度存在。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑（SEQ ID NO :4)是以約40mg/ml的濃度存在。
[0029] 在一個(gè)實(shí)施方案中，該穩(wěn)定的液體眼用制劑包含40mg/ml的VEGF拮抗劑（SEQ ID NO :4)，IOmM磷酸鈉緩沖液，0.03%聚山梨酯和135mM氯化鈉，pH 6. 2-6. 3。在一個(gè)具體的 實(shí)施方案中，該穩(wěn)定的液體眼用制劑基本上由40mg/ml的VEGF拮抗劑（SEQ ID NO :4)，IOmM 磷酸鈉緩沖液，〇. 03%聚山梨酯和135mM氯化鈉組成，pH 6. 2-6. 3。
[0030] 在另一個(gè)方面，提供了一種VEGF拮抗劑的可凍干制劑，其中當(dāng)凍干后重新溶解 時(shí)，獲得如本文所述的穩(wěn)定的液體眼用制劑。
[0031] 在另一個(gè)方面，提供了一種血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)特異性融合蛋白拮抗劑的 可凍干制劑，其包含5-50mg/ml的VEGF拮抗劑，5-25mM緩沖劑例如磷酸鹽緩沖液，0. 01到 0. 15%的一種或多種有機(jī)共溶劑，例如聚山梨酯、丙二醇和/或PEG和任選1-10%的穩(wěn)定劑 例如蔗糖、山梨糖醇、海藻糖、甘油或甘露醇，pH約5. 8-7. 0。在各種實(shí)施方案中，VEGF拮抗 劑（SEQ ID NO :4)是以約5,約10,約20,約30或約40mg/ml存在。在一個(gè)具體的實(shí)施方 案中，本發(fā)明的可凍干的眼用制劑包含20mg/ml的VEGF拮抗劑，IOmM磷酸鈉緩沖液，0. 03% 聚山梨酯，0. 1% PEG和2. 5%蔗糖，pH約6. 2-6. 3。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該可凍干的制 劑還包含氯化鈉。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，氯化鈉是以約20mM的濃度存在。在另一個(gè)具 體的實(shí)施方案中，氯化鈉是以約67. 5mM的濃度存在。
[0032] 在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，本發(fā)明的可凍干的眼用制劑包含20mg/ml的VEGF拮 抗劑，5mM磷酸鈉緩沖液，0. 015%聚山梨酯，20mM氯化鈉和2. 5%蔗糖，pH約6. 2-6. 3。
[0033] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，該可凍干的眼用制劑包含5mg/ml、10mg/ml或40mg/ml VEGF拮抗劑，5mM磷酸鈉緩沖液，0. 015%聚山梨酯，20mM氯化鈉和2. 5%蔗糖，pH 6. 2-6. 3。 在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，該可凍干的眼用制劑基本上由5mg/ml、10mg/ml或40mg/ml VEGF拮抗劑（SEQ ID NO :4)，5mM磷酸鈉緩沖液，0.015%聚山梨酯，20mM氯化鈉和2. 5%蔗 糖組成，pH 6. 2-6. 3。
[0034] 在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，該可凍干的眼用制劑包含20mg/ml的VEGF拮抗劑， 5mM磷酸鈉緩沖液，0. 015%聚山梨酯和67. 5mM氯化鈉，pH約6. 2-6. 3。在一個(gè)更具體的實(shí) 施方案中，該可凍干的眼用制劑基本上由20mg/ml的VEGF拮抗劑（SEQ ID N0:4)，5mM磷酸 鈉緩沖液，〇. 015%聚山梨酯和67. 5mM氯化鈉組成，pH 6. 2-6. 3。
[0035] 在另一個(gè)具體的實(shí)施方案中，該可凍干的眼用制劑包含5mg/ml、10mg/ml或40mg/ ml VEGF拮抗劑，5mM磷酸鈉緩沖液，0. 015%聚山梨酯和67. 5mM氯化鈉，pH約6. 2-6. 3。在一 個(gè)更具體的實(shí)施方案中，該可凍干的眼用制劑基本上由5mg/ml、10mg/ml或40mg/ml VEGF 拮抗劑（SEQ ID NO :4)，5mM磷酸鈉緩沖液，0.015%聚山梨酯和67. 5mM氯化鈉組成，pH約 6· 2-6· 3〇
[0036] -般地，重新溶解的制劑是凍干前制劑的濃度的約2倍，例如，20mg融合蛋白/ml 的凍干前制劑重新溶解為最終為40mg融合蛋白/ml的制劑。
[0037] -般地，用適合注射的無菌水將凍干制劑重新溶解。在一個(gè)實(shí)施方案中，重新溶解 的液體是抑菌水。
[0038] 在另一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于一種制備VEGF特異性融合蛋白拮抗劑的凍干 制劑的方法，包括將本發(fā)明的可凍干的制劑凍干，以產(chǎn)生凍干制劑?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的 用于凍干液體的任何方法來凍干該凍干制劑。
[0039] 在另一個(gè)相關(guān)的方面，本發(fā)明的特征在于一種制備VEGF拮抗劑的重新溶解的凍 干制劑的方法，包括將本發(fā)明的凍干制劑重新溶解成重新溶解的制劑。在一個(gè)實(shí)施方案中， 該重新溶解的制劑是凍干前制劑的濃度的兩倍，例如，本發(fā)明的方法包括：(a)制備VEGF特 異性融合蛋白拮抗劑的凍干前制劑，（b)將步驟（a)的凍干前制劑凍干；和（c)重新溶解步 驟（b)的凍干制劑。
[0040] 本發(fā)明的其他特征在于提供在預(yù)填充的注射器或玻璃瓶中的眼用制劑，其特別適 合玻璃體內(nèi)施用。
[0041] 從緊接著的詳述的論述中，其他目的和優(yōu)點(diǎn)將會變得顯而易見。
[0042] 發(fā)明詳述
[0043] 本發(fā)明并不限于所述的特定方法和實(shí)驗(yàn)條件，因?yàn)檫@些方法和條件是可以改變 的。同時(shí)也應(yīng)當(dāng)理解的是，本文所使用的術(shù)語僅僅是出于描述特定實(shí)施方案的目的，除非指 明其并不意欲進(jìn)行限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將僅受到所附的權(quán)利要求的限制。
[0044] 除非另有說明，本文所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語和短語都具有與本發(fā)明所屬領(lǐng) 域的普通技術(shù)人員通常所理解相同的含義。盡管在本發(fā)明的實(shí)施或測試中可以使用與本文 所述類似或等效的任何方法和材料，但是現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法和材料。
[0045] -般性描述
[0046] 包含蛋白質(zhì)的制劑的安全操作和施用代表對藥物設(shè)計(jì)者的重大挑戰(zhàn)。蛋白質(zhì)具有 獨(dú)特的化學(xué)和物理性質(zhì)，其存在著穩(wěn)定性問題：蛋白質(zhì)存在著多種降解途徑，暗示化學(xué)和 物理不穩(wěn)定性?；瘜W(xué)不穩(wěn)定性包括脫氨作用、聚集、肽主鏈的切割和蛋氨酸殘基的氧化。物 理不穩(wěn)定性包括很多現(xiàn)象，包括例如聚集和/或沉淀。
[0047] 從蛋白質(zhì)中除去水，可以促進(jìn)化學(xué)和物理穩(wěn)定性。凍干（在控制條件下冷凍干燥） 常用于蛋白質(zhì)的長期儲藏。凍干的蛋白質(zhì)在冷凍干燥狀態(tài)時(shí)是實(shí)質(zhì)上耐降解、聚集、氧化和 其他變性過程的。在施用前，可以用任選包含抑菌防腐劑（例如，苯甲醇）的水將凍干的蛋 白質(zhì)重新溶解。
[0048] 定義
[0049] 術(shù)語"載體"包括與組合物一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或載體。載體可以包 括無菌液體，例如水和油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來源的油，例如花生油、大豆油、礦物 油、芝麻油等等。
[0050] 術(shù)語"賦形劑"包括加入到藥物組合物中以提供期望的稠度或穩(wěn)定效果的非治療 齊U。適當(dāng)?shù)乃幬镔x形劑包括，例如，淀粉、葡萄糖、乳糖、鹿糖、明膠、麥芽、米、面粉、白堊、硅 膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等等。
[0051] 術(shù)語"凍干"或"冷凍干燥"包括已經(jīng)經(jīng)過干燥過程如凍干的物質(zhì)的狀態(tài)，其中已 經(jīng)除去了至少90 %的水分。
[0052] VEGF 拮抗劑
[0053] VEGF拮抗劑是一種能夠阻斷或抑制血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)的生物作用的化合 物，包括能夠捕捉VEGF的融合蛋白。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑是SEQ ID NO: 2或4的融合蛋白；更優(yōu)選地，SEQ ID NO :4。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，VEGF拮抗劑在哺 乳動(dòng)物細(xì)胞系例如CHO細(xì)胞中表達(dá)，可以經(jīng)翻譯后修飾。在一個(gè)具體的實(shí)施方案中，融合蛋 白包含SEQ ID NO :4的氨基酸27-457,并且在Asn殘基62,94,149, 222和308上被糖基化。 優(yōu)選地，VEGF拮抗劑是由SEQ ID NQ :4的兩種融合蛋白組成的二聚體。
[0054] 可以通過本領(lǐng)域已知或?qū)阎娜魏芜m當(dāng)方法來制備本發(fā)明方法和制劑的 VEGF拮抗劑。該VEGF拮抗劑在用于制備藥學(xué)可接受的制劑時(shí)優(yōu)選基本上不含蛋白質(zhì)污染 物。"基本上不含蛋白質(zhì)污染物"是指，優(yōu)選地，用于制備制劑的VEGF特異性融合蛋白拮抗 劑制劑的至少90 %重量的蛋白質(zhì)是VEGF融合蛋白質(zhì)拮抗劑蛋白，更優(yōu)選至少95 %，最優(yōu)選 至少99%。該融合蛋白優(yōu)選基本上不含聚集物。"基本上不含聚集物"是指在該融合蛋白 用于制備藥學(xué)有效的制劑時(shí)，至少90%重量的融合蛋白不存在于聚集物中。除非另有說明， 所使用的磷酸鹽是磷酸鈉，通過混合適當(dāng)量的磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉來達(dá)到期望的緩沖 pH。
[0055] 穩(wěn)定的液體眼用制劑
[0056] 在一個(gè)方面，本發(fā)明提供一種包含VEGF拮抗劑的穩(wěn)定的藥學(xué)可接受的制劑，其中 該制劑是適合在眼部使用的液體制劑。優(yōu)選地，該液體制劑包含藥學(xué)有效量的VEGF拮抗 齊U。該制劑也可以包含一種或多種藥學(xué)可接受的載體、緩沖劑、張度劑、穩(wěn)定劑和/或賦形 齊U。藥學(xué)可接受的液體制劑的一個(gè)例子包含藥學(xué)有效量的VEGF拮抗劑、緩沖劑、有機(jī)共溶 劑例如聚山梨酯、張度劑例如NaCl，和任選地，穩(wěn)定劑例如蔗糖或海藻糖。
[0057] 在特定時(shí)間點(diǎn)，可以以很多的方法來確定穩(wěn)定性，包括pH的確定，顏色和外 觀的視覺檢查，通過本領(lǐng)域已知的方法例如UV光譜法確定總蛋白質(zhì)含量，和通過例如 SDS-PAGE、分子排阻HPLC，活性的生物測定、等電子聚焦和異天冬氨酸定量來確定純度。在 用于確定VEGF拮抗劑活性的生物測定的一個(gè)例子中，使用BAF/3VEGFR1/EP0R細(xì)胞系來確 定通過本發(fā)明的VEGF拮抗劑的VEGF165結(jié)合。
[0058] 液體制劑可以儲藏在缺氧環(huán)境中?？梢酝ㄟ^將制劑儲藏在惰性氣體例如氮?dú)饣驓?氣下來產(chǎn)生缺氧環(huán)境。液體制劑優(yōu)選儲藏在約5°C下。
[0059] 眼用凍干制劑
[0060] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了包含VEGF拮抗劑的眼用可接受的制劑，其中該制劑 是一種可凍干的制劑?？蓛龈傻闹苿┛梢灾匦氯芙獬扇芤骸⒒鞈乙?、乳液或任何其他適合施 用或使用的形式。典型地，首先將可凍干的制劑制成液體，然后冷凍和凍干。在凍干前，總 的液體體積可以小于、等于或大于凍干制劑的最終重新溶解后的體積。凍干方法是本領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員公知的，典型地包括在控制條件下水從冷凍的制劑中升華。
[0061] 凍干制劑可以儲藏在寬范圍的溫度下。凍干制劑可以儲藏在25°C以下，例如在 2-8°C下或在室溫（例如約25°C)下冷卻。優(yōu)選地，凍干制劑可以儲藏在約25°C以下，更優(yōu) 選地，約4-20°C ;約4°C以下；約_20°C以下；約-40°C ;約_70°C或約_80°C?？梢杂帽绢I(lǐng)域 已知的很多方法，例如，通過該塊狀物的視覺外觀和/或通過水分含量來確定該凍干制劑 的穩(wěn)定性。
[0062] 典型地，通過加入水溶液溶解凍干制劑來用于將該凍干制劑重新溶解?？梢允褂?種類廣泛的水溶液來重新溶解凍干制劑。優(yōu)選地，用水來重新溶解凍干制劑。優(yōu)選用基本 上由水（例如，USP WFI或注射用水）或抑菌水（例如，含0.9%苯甲醇的USP WFI)組成的 溶液來重新溶解凍干制劑。但是，也可以使用包含緩沖劑和/或賦形劑和/或一種或多種 藥學(xué)可接受的載體的溶液。
[0063] 典型地，冷凍干燥或凍干制劑是由液體，也就是說，是由溶液、混懸液、乳液等等制 成的。因此，將要進(jìn)行冷凍干燥或凍干的液體優(yōu)選包含在最終重新溶解的液體制劑中期望 的所有組分。結(jié)果，當(dāng)重新溶解時(shí)，冷凍干燥或凍干制劑一旦重新溶解將會得到所期望的液 體制劑。 實(shí)施例
[0064] 在描述本發(fā)明的方法前，應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明并不限于所述的特定方法和實(shí)驗(yàn) 條件，因?yàn)檫@些方法和條件是可以改變的。同時(shí)應(yīng)當(dāng)理解的是，本文所使用的術(shù)語僅僅是 出于描述特定實(shí)施方案的目的，而并不意欲進(jìn)行限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將僅受到所附的 權(quán)利要求的限制。
[0065] 除非另有定義，本文所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語和短語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域 的普通技術(shù)人員通常所理解相同的含義。盡管在本發(fā)明的實(shí)施或測試中可以使用與本文所 述類似或等效的任何方法和材料，但是現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法和材料。
[0066] 實(shí)施例1.儲藏在5°C下3ml玻璃瓶中的50mg/ml VEGF捕捉劑液體制劑的穩(wěn)定性
[0067] 將包含 50mg/ml VEGF捕捉劑（SEQ ID NO :4)，IOmM磷酸鹽，50mM NaCl，0. 1%聚山 梨酯20, 5%蔗糖和pH 6. 25的眼用液體制劑儲藏在5°C下的3ml玻璃瓶中，在3,6,9,12,18 和24月時(shí)測定樣品。通過SE-HPLC確定穩(wěn)定性。結(jié)果如表1所示。在0D 4(l5nm下測定混池 度；并通過分子排阻HPLC確定回收的蛋白質(zhì)的百分比和純度。
[0068] 表 I. 50mg/ml VEGF 捕捉劑蛋白（VGFT-SS065)的穩(wěn)定性
[0069]
【權(quán)利要求】
1. 一種適合玻璃體內(nèi)施用的預(yù)裝藥的注射器，包含血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)拮抗劑 的穩(wěn)定的眼用制劑，其中所述穩(wěn)定的眼用制劑包含 (a) l-100mg/ml VEGF 拮抗劑； (b) 0. 01-5%的一種或多種有機(jī)共溶劑； (c) 5-40mM的緩沖液；和 (d) 任選包含1. 0-7. 5%的穩(wěn)定劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的預(yù)裝藥的注射器，其中所述注射器是具有注射器內(nèi)芯的lml的玻 璃注射器。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2的預(yù)裝藥的注射器，其中所述VEGF拮抗劑穩(wěn)定至少4個(gè)月。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3的預(yù)裝藥的注射器，其中所述VEGF拮抗劑是VEGF特異性融合蛋白。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的預(yù)裝藥的注射器，其中所述VEGF特異性融合蛋白具有SEQ ID NO: 4的氨基酸序列。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5的預(yù)裝藥的注射器，其中所述穩(wěn)定的眼用制劑包含40mg/ml的VEGF 特異性融合蛋白，1〇禮磷酸鹽，40禮似(：1，0.03%聚山梨酯20,5%蔗糖，？冊.2-6.4。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2的預(yù)裝藥的注射器，其中所述VEGF拮抗劑穩(wěn)定至少5個(gè)月。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7的預(yù)裝藥的注射器，其中所述VEGF拮抗劑是VEGF特異性融合蛋白。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8的預(yù)裝藥的注射器，其中所述VEGF特異性融合蛋白具有SEQ ID NO: 4的氨基酸序列。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9的預(yù)裝藥的注射器，其中所述穩(wěn)定的眼用制劑包含40mg/ml的 ￥￡6?特異性融合蛋白，10禮磷酸鹽，1351111恥(：1，和0.03%聚山梨酯20，？冊.2-6.4。
【文檔編號】A61K47/34GK104434770SQ201410707259
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2007年6月14日 優(yōu)先權(quán)日:2006年6月16日
【發(fā)明者】E·弗法恩, D·迪克斯, K·S·格雷厄姆, K·弗賴伊 申請人:瑞澤恩制藥公司