人參皂苷Rf的新應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體的說是涉及人參皂苷Rf的新應用，尤其是作為TRPV1的拮抗劑的應用。本發(fā)明所述人參皂苷Rf在細胞水平上，能夠顯著的抑制TRPV1蛋白表達，且在動物水平上，人參皂苷Rf能夠顯著的延長辣椒素(capsaicin，CAP)誘導的大鼠的縮爪潛伏期，降低大鼠的痛覺敏感程度。表明人參皂苷Rf可以作為TRPV1的拮抗劑用于以TRPV1為靶點的鎮(zhèn)痛，可用于制備治療與TRPV1受體相關的疾病的鎮(zhèn)痛藥物。
【專利說明】人參皂苷Rf的新應用

【技術(shù)領域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體的說是涉及人參皂苷Rf?的新應用，尤其是其作為 TRPV1拮抗劑的應用。

【背景技術(shù)】
[0002] 1994年，國際疼痛研究協(xié)會（International Association for the Study Pain， IASP)將疼痛定義為"一種與組織損傷或潛在的與損傷相關的不愉快的主觀感覺和情感體 驗"，與臨床上包括糖尿病、關節(jié)炎、癌癥以及手術(shù)后的多種疼痛過程密切相關。疼痛醫(yī)學逐 漸成為目前醫(yī)學界最為活躍的領域。據(jù)2005年中國鎮(zhèn)痛周（10月11日-17日）公布的一 組數(shù)據(jù)顯示：我國至少有1億的病人正在忍受疼痛的折磨，疼痛不僅能夠嚴重的影響人們 的身心健康外，還會造成病人家屬經(jīng)濟上的極大負擔。據(jù)調(diào)查顯示，在英國因疼痛所致生產(chǎn) 時間流失的量為4.6小時/周；而在美國，因疼痛導致生產(chǎn)時間流失而造成的經(jīng)濟損失高達 612億美元/年。鑒于疼痛給人類和社會所造成的各項損失，目前，國際上已經(jīng)將疼痛定義 為繼呼吸、脈搏、體溫、血壓四大生命體征之后的第五大生命體征。因此，作為"人類第五大 生命體征"之一的疼痛問題，因其普遍性和多發(fā)性已成為一個全球共同關注的話題。
[0003] 目前，疼痛的治療藥物主要是以阿片類和非甾體抗炎類（Non-Steroidal Anti-Inflammatory Drugs, NSAIDs)為主，代表藥物分別為嗎啡和阿司匹林，前者具有成癮 性，后者可引起機體嚴重的胃腸道反應，并且對神經(jīng)傷害性疼痛的療效欠佳，因此研究和解 決慢性難治性疼痛的發(fā)病機理和治療方案，尋找毒副作用小、成癮性低的藥物是21世紀醫(yī) 藥學上的一個重要課題。
[0004] 當機體受到外界傷害性刺激的時候，最先感知這些刺激的部位是傷害性感受器 (nociptor)。傷害性感受器是一些位于初級感覺神經(jīng)元上的離子通道，他們對某些強烈的、 可引起機體損傷的外界刺激具有特異的感知功能，這些刺激包括機械刺激、溫度刺激以及 某些化學物質(zhì)的刺激。這些離子通道又稱為傳感器，可感知和量化有害刺激，并將這些刺激 以機體自身產(chǎn)生內(nèi)向電流的形式發(fā)送信息。這一信息從初級感覺神經(jīng)元傳遞到高級神經(jīng)中 樞，促使機體做出相應的反應。
[0005] 瞬時感受器電位離子通道蛋白（Transient receptor potential ion channel protein，TRPs)是近年來發(fā)現(xiàn)的存在于胞內(nèi)細胞器膜上或細胞膜上的一類非選擇性陽離子 通道蛋白。作為果蠅的光感受器異常變異株基因一TRP基因于1989年被Montell等人首 先用于描述在黑腹果蠅上。隨后，Hardie等人發(fā)現(xiàn)，trp基因能夠編碼一種通透Ca 2+的陽 離子通道，并將這種通道命名為TRP通道。目前，TRP通道家族是治療疼痛，焦慮，瘙癢，腸 道及呼吸道病變的重要蛋白。并且，有研究表明TRP家族還是天然的相關病變治療藥物的 傳遞器，它們均可高選擇性針對靶細胞。因此，它的發(fā)現(xiàn)對于人們認識和了解感官知覺具有 突破性意義。
[0006] TRP家族是感受體系中的門控分子，是外部環(huán)境與內(nèi)部神經(jīng)系統(tǒng)之間的中介，其 可將機械性刺激、熱刺激、化學刺激轉(zhuǎn)換為內(nèi)向電流，以信息的形式傳遞給機體的中樞神經(jīng) 系統(tǒng)。目前，TRP家族分為7個亞族，根據(jù)其序列同源性分為兩大類，分別是跨膜結(jié)構(gòu)域具 有序列同源性的 TRPs 類，其中包括 TRPV(vanilloid)、TRPA(ANKTMl)、TRPM(melastatin， long-TRP)、TRPN(NOMPC)和TRPC(canonical TRP)，他們不僅具有序列同源性還在第6個跨 膜域均含有一個C短23-25氨基酸的"TRPs結(jié)構(gòu)域";和與第一類TRPs有較少的序列同源性 并且在其第1和第2跨膜域之間存在一個胞外環(huán)的TRPML(mucolipin)、TRPP(polycystin)。 機體就是通過這些感受器全面的感知外界環(huán)境對機體所造成的各種傷害性刺激，發(fā)出預 警，使機體做出相關反應。
[0007] 1997年Caterina及其同事成功克隆了一種能被辣椒素（capsaicin)激活的受體， 即香草酸瞬時受體亞型 1 (Transient receptor potential cation channel，subfamily V， member 1，TRPV1)。TRPV1是最初發(fā)現(xiàn)的對傷害性熱敏感的疼痛靶點，也是目前研究較多的 一種非選擇性陽離子通道。它屬于香草酸受體（transient receptor potential, TRP)家 族，該通道在介導神經(jīng)性痛、深部組織痛、炎性痛、術(shù)后痛等多種疼痛中均起到重要的作用。 它可被多種化學物理刺激興奮，其中包括辣椒素（capsaicin)、熱刺激43°C )、酸和多種 天然成分。TRPV1的成功克隆開啟了研究疼痛的新時代。在此之后，研究者們又相繼發(fā)現(xiàn)了 多個能夠感知外界傷害性刺激，并參與其所引起的疼痛發(fā)生和發(fā)展的受體通道。
[0008] TRPV1是一種配體門控的非選擇性陽離子通道，當其與配體結(jié)合后離子通道開 放，Ca 2+、Na+等陽離子從胞外進入胞內(nèi)，尤其是對Ca2+的通透性較大，進而會引發(fā)機體的一 系列生物學反應。該受體編碼蛋白由838個氨基酸組成，是一個四聚體膜蛋白伴有四個相 同或不同的亞單位，每個亞單位都含有TRP家族所共有的6個跨膜結(jié)構(gòu)域，在第5個和第 6個跨膜區(qū)域之間有1個短的孔環(huán)樣的疏水結(jié)構(gòu)，此結(jié)構(gòu)參與并調(diào)控了辣椒素激活TRPV1 引起鈣離子內(nèi)流的過程，而與氫離子和溫度的關系不大，在疏水端富含氨基酸的區(qū)域可參 與PH相關的刺激。TRPV1的C端和N端也均在胞內(nèi)，N端有3個錨蛋白結(jié)構(gòu)域，該區(qū)域介 導溶質(zhì)蛋白間的相互作用并將共同片段暴露給蛋白激酶。而C端攜帶磷酸肌醇、鈣調(diào)蛋 白（CAM)結(jié)合域以及磷酸化位點。TRPV1受二磷酸磷脂酰基醇（Phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate，PIP2)調(diào)節(jié)的影響，PIP2既可以參與TRPV1的脫敏環(huán)節(jié)，又是炎性因子 增敏TRPV1途徑中不可或缺的重要環(huán)節(jié)。
[0009] TRPV1廣泛的分布在傷害性感受器（nociceptor)上，它參與急性炎癥痛敏的 形成。疼痛形成的大致過程是：首先是傷害感受器的痛覺傳感（transduction),其次是 一級傳入纖維、脊髓背角、脊髓_丘腦束等上行束的痛覺傳遞（transmission)，再次是皮 層和邊緣系統(tǒng)的痛覺整合（interpretation)，最后是下行控制和神經(jīng)介質(zhì)的痛覺控制 (modulation)。神經(jīng)生理學家曾做了單個神經(jīng)纖維的傳入放電試驗，他們發(fā)現(xiàn)有相當數(shù)量 的傳入神經(jīng)纖維在只有給予皮膚傷害性刺激的時候才會發(fā)生放電反應，說明這些發(fā)生反應 的傳入神經(jīng)纖維外周末端所形成的感受器是專一的痛覺感受器，并發(fā)現(xiàn)這些傳遞痛覺的神 經(jīng)纖維一般是較細的神經(jīng)纖維，包括AS纖維和C纖維，AS纖維傳導快痛，C纖維傳導慢 痛。
[0010] TRPV1主要介導炎性痛，神經(jīng)病理性痛，機械性，化學性和溫度等傷害性刺激，引起 傷害性信號向中樞神經(jīng)系統(tǒng)傳遞并最終產(chǎn)生痛覺。在TRPV1缺乏的小鼠上，由炎癥介導的 熱痛敏會明顯減少，說明其在介導炎性痛熱痛覺過敏中起著重要的作用。在糖尿病神經(jīng)病 理性疼痛模型中，利用DNA干擾技術(shù)抑制單側(cè)坐骨神經(jīng)結(jié)扎大鼠模型的TRPV1的表達，可 明顯緩解模型中冷刺激誘導的疼痛，說明TRPV1在神經(jīng)病理性疼痛方面也發(fā)揮著重要的作 用。利用TRPV1的拮抗劑預處理，也可減輕肌肉注射TRPV1激動劑導致的急性傷害性感受 和后期的機械性痛覺過敏，Christoph等人發(fā)現(xiàn)，TRPV1缺失的關節(jié)炎小鼠機械痛覺過敏減 弱，說明TRPV1在機械痛覺過敏中起重要作用。TRPV1是治療疼痛的重要靶點。
[0011]人參皂苷 Rf，英文名為 Ginsenoside Rf，又名（3 P，6 a，12 P ) -3, 12, 20-Trihydr oxydammar-24-en-6-yl 2_0_3 -D-glucopyranosyl-3 -D-glucopyranoside,分子式為 C42H72014，分子量為801. 01，結(jié)構(gòu)式為

【權(quán)利要求】
1. 人參皂苷Rf作為TRPV1的拮抗劑的應用。
2. 人參皂苷Rf在制備治療與TRPV1受體相關的疾病的藥物中的應用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應用，其中所述與TRPV1受體相關的疾病包括傷害感受性疼 痛、神經(jīng)原性疼痛、癌性疼痛、頭痛、膀胱功能障礙、炎癥。
4. 一種藥物組合物，包括治療有效量的人參皂苷Rf。
5. -種藥物制劑，包括治療有效量的人參皂苷Rf和藥學上可接受的輔料。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物制劑，其為口服制劑、注射制劑或外用制劑。
【文檔編號】A61P25/00GK104382920SQ201410709529
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月27日
【發(fā)明者】張文生, 劉曉麗, 王勝蘭, 辛文鋒 申請人:北京師范大學, 北京師大科技園科技發(fā)展有限責任公司