金耳子實(shí)體皂甙提取物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種金耳子實(shí)體皂甙提取物及其制備方法和用途，所述皂甙提取物以人參皂甙Rb1計(jì)算，含有20-60％總皂甙，并且該提取物是由如下方法制備得到的，低極性有機(jī)溶劑提取去除金耳子實(shí)體中的脂溶性物質(zhì)；水提取去除水溶性物質(zhì)；30-70％乙醇溶液提取、濃縮；甲醇復(fù)溶，沉淀得到金耳子實(shí)體皂甙提取物；本發(fā)明提供的皂甙提取物具有降低血糖、調(diào)節(jié)血脂、增強(qiáng)機(jī)體免疫等功效，其不僅為深度開發(fā)利用金耳打開了一條嶄新的途徑，而且為降低血糖，調(diào)節(jié)血脂和增強(qiáng)機(jī)體免疫提供理想的藥物。
【專利說明】金耳子實(shí)體皂甙提取物及其制備方法和用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種提取物，特別涉及一種金耳子實(shí)體皂甙提取物及其制備方法和用 途。

【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病、高血脂癥是目前中老年人的常見病和多發(fā)病，由糖尿病、高血脂引起的并 發(fā)癥嚴(yán)重危及人們的生命健康?，F(xiàn)有西藥類降糖藥物難免有副作用，而天然中藥類降糖藥 物備受人們青睞。
[0003] 金耳，因其子實(shí)體呈金黃色而得名，又名黃金銀耳、黃木耳、金木耳、黃耳、腦耳、膠 耳，該菌在分類學(xué)上，屬于真菌門，擔(dān)子菌綱（Basidiomycetes)，銀耳目（Tremellales)，銀 耳科（Tremellaceae)，銀耳屬（Tremella)，學(xué)名 Tremella aurantialbavb;主要分布于我 國(guó)云貴高原，是一種名貴的食藥用真菌，其子實(shí)體質(zhì)地細(xì)膩，潤(rùn)滑可口，味香色美。
[0004] 民間對(duì)金耳的認(rèn)識(shí)和藥用有著非常悠久的歷史，早在明朝時(shí)期，著名的藥物學(xué)家 李時(shí)珍在他的《本草綱目》中詳細(xì)記載金耳。如"其金色者（當(dāng)指金耳）治癖飲積聚，服痛 金蒼"。另外，《中國(guó)藥用真菌》、《中國(guó)中藥大典宗旨》、《云南食用菌》對(duì)金耳的藥用價(jià)值均有 詳細(xì)介紹。金耳性溫寒，味甘，能化痰，止咳，定喘，調(diào)氣，平陰陽；臨床上治神經(jīng)衰弱，肺熱， 哮喘，慢性支氣管炎，高血壓，肝炎等疾病。
[0005] 近年來國(guó)內(nèi)對(duì)金耳的研究主要集中于它的馴化栽培、營(yíng)養(yǎng)成分分析以及多糖及藥 效等方面；國(guó)外有關(guān)金耳的研究主要集中在子實(shí)體多糖的藥理學(xué)上。
[0006] 對(duì)于金耳多糖的降血糖降血脂功能，華東師范大學(xué)瞿偉菁等（上海農(nóng)業(yè)學(xué) 報(bào).1998, 14, 58-62)研究發(fā)現(xiàn)，用金耳子實(shí)體浸液連續(xù)灌胃四氧嘧啶致高血糖大鼠21d，可 以顯著降低大鼠血糖。日本 Kiho T 等（Biosci.Biotechnol.Biochem, 2000, 64, 417-419; Biological&Pharmaceutical Bulletin, 2001，24, 1400-1403)發(fā)現(xiàn)，腹腔注射酸性金耳子 實(shí)體多糖TAP能夠顯著增加正常和糖尿病小鼠肝中葡萄糖激酶、己糖激酶和葡萄糖-6-磷 酸脫氫酶活性，降低葡萄糖-6-磷酸酶活性，同時(shí)減少肝糖原含量；非胰島素依賴型糖尿病 小鼠連續(xù)口服金耳酸性多糖TAP及其降解產(chǎn)物TAP-H 10周，可以抑制血糖的增加。
[0007]目前金耳子實(shí)體的生物活性研究主要集中于多糖，研究表明金耳多糖在提高機(jī)體 免疫、抗腫瘤、降血糖、抗氧化作用、化學(xué)性肝損傷保護(hù)、改善記憶、改善營(yíng)養(yǎng)性貧血、抗輻 射、改善胃腸道功能等方面具有良好的保護(hù)作用，但未見有關(guān)金耳子實(shí)體其它活性成分的 報(bào)道。
[0008] 皂甙又稱皂素、皂甙。它是由皂甙元和糖、糖醛酸或其他有機(jī)酸組成，結(jié)構(gòu)復(fù)雜、極 性大，大多可溶于水，振搖后易起持久性的肥皂樣泡沫，因而得名。皂甙廣泛存在于高等植 物和某些海洋生物中的一種特殊苷類。皂甙是一類具有多種生理功能的活性物質(zhì)，但目前 關(guān)于金耳子實(shí)體中還未見含有皂甙成份文獻(xiàn)或?qū)＠麍?bào)到。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明以金耳子實(shí)體作為研究對(duì)象，分析其成分組成，并對(duì)其有效成分皂甙進(jìn)行 提取和分離；對(duì)得到的皂甙提取物進(jìn)行了生理功能的研究，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過本方法提取的皂甙提 取物具有降低血糖、調(diào)節(jié)血脂和增強(qiáng)機(jī)體免疫等功效。
[0010] 本發(fā)明具體技術(shù)方案如下：
[0011] 本發(fā)明提供一種金耳子實(shí)體皂甙提取物，以人參皂甙Rbl計(jì)算，該皂甙提取物中含 有20-60%總皂式，其中皂甙提取物是由如下方法制備得到的：
[0012] a.低極性有機(jī)溶劑提取去除金耳子實(shí)體中的脂溶性物質(zhì)；
[0013] b.水提取去除水溶性物質(zhì)；
[0014] c. 30-70%乙醇溶液提取、濃縮；
[0015] d.甲醇復(fù)溶，沉淀得到金耳子實(shí)體皂甙提取物；
[0016] 所述低極性有機(jī)溶劑選自石油醚、環(huán)己烷或乙醚中的一種或多種。
[0017] 本發(fā)明提供的金耳子實(shí)體皂甙提取物中總皂甙含量的測(cè)定是依據(jù)PanShu-yi方 法并加以修改而得到的。
[0018] 測(cè)定方法如下：精密稱取干燥至恒重的人參皂甙Rbl75mg，加無水乙醇定容至 25mL，得到3mg/mL人參皂甙R bl標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密量取上述人參皂甙Rbl標(biāo)準(zhǔn)溶液0. 2、0. 4、 0. 6、0. 8、1. OmL，分別置于25mL刻度試管中，分別加無水乙醇定容至lmL，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)5% 的香草醛-冰乙酸溶液0. 2mL和0. 8mL高氯酸，于60°C水浴15min，流動(dòng)水冷卻至室溫，再 加入3mL冰乙酸，搖勻后置于室溫，用乙醇代替人參皂甙R bl標(biāo)準(zhǔn)溶液重復(fù)上述操作用作空 白，在570nm處測(cè)定吸光度值，以濃度-吸光度值做標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總皂甙含 量。
[0019] 本發(fā)明所述金耳子實(shí)體優(yōu)選為山西、云南或西藏中的任意一種金耳子實(shí)體。
[0020] 本發(fā)明另一方面提供一種金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法，該方法包括如下步 驟：
[0021] (a)低極性有機(jī)溶劑提取去除金耳子實(shí)體中的脂溶性物質(zhì)；
[0022] (b)水提取去除水溶性物質(zhì)；
[0023] (c) 30-70%乙醇溶液提取、濃縮；
[0024] (d)甲醇復(fù)溶，沉淀得到金耳子實(shí)體皂甙提取物；
[0025] 所述低極性有機(jī)溶劑選自石油醚、環(huán)己烷或乙醚中的一種或多種。
[0026] 發(fā)明提供的制備方法簡(jiǎn)單，能夠有效地提取金耳子實(shí)體中的總皂甙；其采用石油 醚等低極性有機(jī)溶劑去除金耳子實(shí)體中的脂溶性物質(zhì)，通過水提取去除水溶性物質(zhì)，再乙 醇溶液提取并沉淀，甲醇復(fù)溶，沉淀等步驟得到金耳子實(shí)體皂甙提取物。
[0027] 進(jìn)一步改進(jìn)的方案中，所述金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法，包括以下步驟：
[0028] (1)將金耳子實(shí)體粉碎，備用；
[0029] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體用石油醚提取，收集石油醚提取后殘?jiān)?br> [0030] (3)將石油醚提取后殘?jiān)盟崛?，收集水提后殘?jiān)?br> [0031] (4)將水提后殘?jiān)?0-70%乙醇溶液提取，收集濾液，將濾液濃縮，獲得漿狀物；
[0032] (5)向漿狀物中加入乙醇，靜置，收集沉淀；
[0033] (6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，靜置，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子實(shí)體皂甙提取物。
[0034] 優(yōu)選地，所述制備方法包括如下步驟：
[0035] (1)將金耳子實(shí)體粉碎，過20-40目篩，備用；
[0036] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體按固液比為1:10-80加入石油醚，在溫度為50-80°C下 提取2-5次，每次5_8h;靜置，除去石油醚，收集石油醚提取后殘?jiān)L(fēng)干；
[0037] (3)向石油醚提取后殘?jiān)屑尤牍桃罕葹?:20-80的水，在70-KKTC下提取2-5 次，每次2-5h，合并提取液，抽濾，將濾餅烘干，收集水提后殘?jiān)?br> [0038] (4)將水提后殘?jiān)垂桃罕葹?:10-80加入30-70%乙醇，在溫度為60-KKTC下提 取3次，每次0. 5-8h，合并提取液，抽濾，收集濾液，將濾液在50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至漿狀，獲得漿 狀物；
[0039] (5)向步驟（4)制備的漿狀物中加入5-20倍體積的乙醇，靜置，收集沉淀；
[0040] (6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，于-20°c下，靜置15-40h，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳 子實(shí)體皂甙提取物。
[0041] 本發(fā)明所指的固液比為重量和體積的比。
[0042] 本發(fā)明通過對(duì)各步驟中的參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，通過對(duì)上述制備方法中的參數(shù)進(jìn)行限 定，使得制備的皂甙提取物中含總皂甙的量顯著提高。
[0043] 另一方面，本發(fā)明提供一種由皂甙提取物和藥用輔料制成的制劑，其中，所述皂甙 提取物和藥用輔料的重量份數(shù)比為8-9:1-2。本發(fā)明的制劑可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制 備，該制劑可以是液體或固定形式的；優(yōu)選為口服制劑，例如片劑、膠囊、含片、口服液等。
[0044] 本發(fā)明提供的制劑中，該制劑優(yōu)選為片劑，所述藥用輔料是重量份數(shù)比為3:1:1 的微晶纖維素、膠態(tài)二氧化硅和硬脂酸鎂的混合物。本發(fā)明通過將微晶纖維素、膠態(tài)二氧化 硅和硬脂酸鎂及皂甙提取物制成片劑后，使得制備的片劑具有很好的穩(wěn)定性、崩解時(shí)限和 脆碎度。
[0045] 本發(fā)明的又一目的是提供了包括金耳子實(shí)體皂甙提取物的藥物組合物，該藥物組 合物由皂甙提取物和其他活性成分組成，所述藥物組合物中含有10-40 %總皂甙。
[0046] 優(yōu)選地，所述其他活性成分由下列重量份數(shù)的各組分制備而成：
[0047] 紫草15-30南瓜20-40蒼耳子15-30
[0048] 虎杖10-20菟絲子5-10枇杷葉5-10。
[0049] 本發(fā)明通過將金耳子實(shí)體皂甙提取物和其他活性成分組成藥物組合物，顯著提高 了對(duì)糖尿病、高血脂癥和增強(qiáng)肌體免疫力的療效。
[0050] 本發(fā)明的又一目的是提供了金耳子實(shí)體皂甙提取物、包括金耳子實(shí)體皂甙提取物 的制劑和藥物組合物的用途，其均具有降低血糖、調(diào)節(jié)血脂和增強(qiáng)肌體免疫力的作用，可用 于生產(chǎn)治療或預(yù)防糖尿病、高血脂癥和增強(qiáng)肌體免疫力的藥物。
[0051] 本發(fā)明提供了一種金耳子實(shí)體皂甙提取物及其制備方法，該皂甙提取物具有顯著 的降低血糖、調(diào)節(jié)血脂和增強(qiáng)機(jī)體免疫的功效，并且其療效高于金耳子實(shí)體多糖，其制備方 法簡(jiǎn)單，能夠有效地提取皂甙提取物，并且為金耳子實(shí)體皂甙提取物提供了一種新用途，為 進(jìn)一步開發(fā)金耳奠定了基礎(chǔ)。
[0052] 采用苯酚硫酸法檢測(cè)對(duì)本發(fā)明提供的金耳子實(shí)體皂甙提取物中的多糖進(jìn)行檢測(cè)， 檢測(cè)方法如下：
[0053] 金耳子實(shí)體皂甙提取物1克完全溶于100mL20 %的乙醇溶液制成1 %的皂甙提取 物溶液。
[0054] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：配制lmg/mL的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液，分別吸取0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1、 1. 2、1. 4mL定容至2mL，再加入5%苯酚lmL，然后加入5mL濃硫酸，搖勻靜止5min后，放置 于沸水浴15min，流動(dòng)水冷卻至室溫，并以蒸餾水做空白對(duì)照，最后在490nm處測(cè)定吸光度 A，以吸光度作為自變量，葡萄糖濃度作為變量繪制糖濃度-吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0055] 樣品中多糖含量測(cè)定：吸取皂甙提取物溶液20iiL，加蒸餾水定容至體積為2mL， 再加入5%苯酚lmL，然后加入5mL濃硫酸，搖勻靜止5min后，放置于沸水浴15min，流動(dòng)水 冷卻至室溫，并以蒸餾水做空白對(duì)照，最后在490nm處測(cè)定吸光度A，根據(jù)上述標(biāo)準(zhǔn)曲線，以 A計(jì)算樣品溶液中多糖含量。
[0056] 結(jié)果顯示，金耳子實(shí)體皂甙提取物中未檢測(cè)出多糖。
[0057] 本發(fā)明的方法所制備的金耳子實(shí)體皂甙的降低血糖的功能，可通過下面的實(shí)驗(yàn)證 明：
[0058] 將購(gòu)進(jìn)的小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)5天后，禁食24小時(shí)，以檸檬酸緩沖液（pH= 4.6)滅 菌后配制4%的四氧嘧啶（alloxan)注射液，按體重160mg/kg劑量一次性腹腔注射造型，5 天后尾部靜脈采血，測(cè)定血糖值。選擇血糖值大于10mm 〇l/L的小鼠隨機(jī)分為5組，每組10 只，組間差異小于0. 5mmol/L，設(shè)未注射四氧嘧啶的正常鼠為正常對(duì)照組（I)，未給予任何 藥物的模型鼠為模型對(duì)照組（II)，正常組和模型對(duì)照組給予生理鹽水；藥物對(duì)照組按劑量 120mg/kg體重給予二甲雙胍；金耳子實(shí)體皂甙提取物按低、中、高三種劑量組（分別為III、 IV、V組），分別以20、40、80mg/kg體重灌胃。上述試驗(yàn)給藥30天后，金耳子實(shí)體皂甙組與 對(duì)照組相比，血糖和果糖胺均極顯著降低（pH〈0.01)，可見金耳皂甙30d即能顯著降低高血 糖小鼠血糖。
[0059] 本發(fā)明的方法所制備的金耳子實(shí)體皂甙的調(diào)節(jié)血脂的功能，可通過下面的藥劑實(shí) 驗(yàn)證明：
[0060] 大鼠購(gòu)進(jìn)后詞喂含有2%膽固醇、10 %豬油、0. 2%甲基硫氧啼陡和88%基礎(chǔ)詞料 組成的高脂飼料3個(gè)月，誘導(dǎo)高血脂癥模型鼠。3個(gè)月后禁食12h后眼球采血，測(cè)定甘油三 酯，總膽固醇選取甘油三酯和總膽固醇含量分別高于l〇mmol/L和7mmol/L的高血脂大鼠按 照甘油三酯、總膽固醇值和體重隨機(jī)均衡分為空白對(duì)照組，模型對(duì)照組，血脂康對(duì)照組和金 耳子實(shí)體皂甙高、中、低劑量組。共6組，每組10只。空白對(duì)照組給予普通飼料，余5組給 予高脂飼料造模，同時(shí)空白對(duì)照組、模型組給予生理鹽水，其他給藥組給予對(duì)應(yīng)受試藥物共 30d。最后1次給藥，禁食12h后，腹主動(dòng)脈采血4ml，測(cè)定甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋 白和低密度脂蛋白。
[0061] 本發(fā)明經(jīng)過上述試驗(yàn)研究顯示應(yīng)用本發(fā)明的生產(chǎn)的金耳子實(shí)體皂甙提取物經(jīng)口 服途徑給予高血糖、高血脂和正常小鼠可顯著降低其血糖和果糖胺，甘油三酯、總膽固醇和 低密度脂蛋白含量，顯著升高了小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力，促進(jìn)了小鼠淋巴細(xì) 胞的轉(zhuǎn)化，增加了 NK細(xì)胞活性，因此證實(shí)了金耳子實(shí)體皂甙提取物具有降低血糖、調(diào)節(jié)血 脂和增強(qiáng)肌體免疫力的功能。從而為糖尿病和高血脂患者提供了理想的藥物，并為金耳的 應(yīng)用開創(chuàng)了廣闊的前景。

【具體實(shí)施方式】
[0062] 為了進(jìn)一步闡述本發(fā)明的技術(shù)方案所涉及的材料及工藝，給出了下述的實(shí)施例。 但這些實(shí)施例不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0063] 實(shí)施例1金耳子實(shí)體皂甙提取物
[0064] 金耳子實(shí)體皂甙提取物，以人參皂甙Rbl計(jì)算，該皂甙提取物中含有60 %總皂甙， 該皂甙提取物是由如下方法制備得到的：
[0065] (1)將金耳子實(shí)體粉碎，過40目篩，備用；
[0066] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體按固液比為1:80加入石油醚，在溫度為80°C下提取5 次，每次6h;靜置，除去石油醚，收集石油醚提取后殘?jiān)L(fēng)干；
[0067] (3)向石油醚提取后殘?jiān)屑尤牍桃罕葹?:80的水，在100°C下提取5次，每次 4h，合并提取液，抽濾，將濾餅烘干，收集水提后殘?jiān)?br> [0068] (4)將水提后殘?jiān)垂桃罕葹?:80加入30%乙醇，在溫度為100°C下提取3次，每 次0. 5h，合并提取液，抽濾，收集濾液，將濾液在50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至漿狀，獲得漿狀物；
[0069] (5)向步驟（4)制備的漿狀物中加入20倍體積的乙醇，靜置，收集沉淀；
[0070] (6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，于-20°C下，靜置40h，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子 實(shí)體皂甙提取物。
[0071] 實(shí)施例2金耳子實(shí)體皂甙提取物
[0072] 金耳子實(shí)體皂甙提取物，以人參皂甙Rbl計(jì)算，該皂甙提取物中含有53 %總皂甙， 該皂甙提取物是由如下方法制備得到的：
[0073] (1)將金耳子實(shí)體粉碎，過20目篩，備用；
[0074] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體按固液比為1:60加入石油醚，在溫度為75°C下提取5 次，每次8h;靜置，除去石油醚，收集石油醚提取后殘?jiān)?，風(fēng)干；
[0075] (3)向石油醚提取后殘?jiān)屑尤牍桃罕葹?:60的水，在90°C下提取2次，每次5h， 合并提取液，抽濾，將濾餅烘干，收集水提后殘?jiān)?br> [0076] (4)將水提后殘?jiān)垂桃罕葹?:60加入50%乙醇，在溫度為90°C下提取3次，每 次6h，合并提取液，抽濾，收集濾液，將濾液在50°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至漿狀，獲得漿狀物；
[0077] (5)向步驟（4)制備的漿狀物中加入15倍體積的乙醇，靜置，收集沉淀；
[0078] (6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，于-20°C下，靜置30h，抽濾，收集沉淀，
[0079] 烘干，制得金耳子實(shí)體皂甙提取物。
[0080] 實(shí)施例3金耳子實(shí)體皂甙提取物
[0081] 金耳子實(shí)體皂甙提取物，以人參皂甙Rbl計(jì)算，該皂甙提取物中含有48%總皂甙， 該皂甙提取物是由如下方法制備得到的：
[0082] (1)將金耳子實(shí)體粉碎，過30目篩，備用；
[0083] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體按固液比為1:40加入石油醚，在溫度為70°C下提取3 次，每次5h;靜置，除去石油醚，收集石油醚提取后殘?jiān)L(fēng)干；
[0084] (3)向石油醚提取后殘?jiān)屑尤牍桃罕葹?:40的水，在70°C下提取4次，每次2h， 合并提取液，抽濾，將濾餅烘干，收集水提后殘?jiān)?br> [0085] (4)將水提后殘?jiān)垂桃罕葹?:40加入40%乙醇，在溫度為70°C下提取3次，每 次3h，合并提取液，抽濾，收集濾液，將濾液在50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至漿狀，獲得漿狀物；
[0086] (5)向步驟⑷制備的漿狀物中加入10倍體積的乙醇，靜置，收集沉淀；
[0087] (6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，于-20°C下，靜置20h，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子 實(shí)體皂甙提取物。
[0088] 實(shí)施例4金耳子實(shí)體皂甙提取物
[0089] 金耳子實(shí)體皂甙提取物，以人參皂甙Rbl計(jì)算，該皂甙提取物中含有21%總皂甙， 該皂甙提取物是由如下方法制備得到的：
[0090] a.環(huán)己烷提取去除金耳子實(shí)體中的脂溶性物質(zhì)；
[0091] b.水提取去除水溶性物質(zhì)；
[0092] c. 30%乙醇溶液提取、濃縮；
[0093] d.甲醇復(fù)溶，沉淀得到金耳子實(shí)體皂甙提取物。
[0094] 實(shí)施例5金耳子實(shí)體皂甙提取物
[0095] 金耳子實(shí)體皂甙提取物，以人參皂甙Rbl計(jì)算，該皂甙提取物中含有30 %總皂甙， 該皂甙提取物是由如下方法制備得到的：
[0096] (1)將金耳子實(shí)體粉碎，備用；
[0097] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體用石油醚提取，收集石油醚提取后殘?jiān)?br> [0098] (3)將石油醚提取后殘?jiān)盟崛?，收集水提后殘?jiān)?br> [0099] (4)將水提后殘?jiān)?0%乙醇溶液提取，收集濾液，將濾液濃縮，獲得漿狀物；
[0100] (5)向漿狀物中加入乙醇，靜置，收集沉淀；
[0101] (6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，靜置，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子實(shí)體皂甙提取物。
[0102] 實(shí)施例6金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法
[0103] 該方法包括如下步驟：
[0104] (a)乙醚提取去除金耳子實(shí)體中的脂溶性物質(zhì)；
[0105] (b)水提取去除水溶性物質(zhì)；
[0106] (c) 70%乙醇溶液提取、濃縮；
[0107](d)甲醇復(fù)溶，沉淀得到金耳子實(shí)體皂甙提取物。
[0108] 實(shí)施例7金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法
[0109] 該方法包括如下步驟：
[0110] (1)將金耳子實(shí)體粉碎，備用；
[0111] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體用石油醚提取，收集石油醚提取后殘?jiān)?br> [0112] (3)將石油醚提取后殘?jiān)盟崛?，收集水提后殘?jiān)?br> [0113] (4)將水提后殘?jiān)?0%乙醇溶液提取，收集濾液，將濾液濃縮，獲得漿狀物；
[0114] (5)向漿狀物中加入乙醇，靜置，收集沉淀；
[0115](6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，靜置，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子實(shí)體皂甙提取物。
[0116] 實(shí)施例8金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法
[0117] 該方法包括如下步驟：
[0118](1)將金耳子實(shí)體粉碎，過20目篩，備用；
[0119] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體按固液比為1:80加入石油醚，在溫度為80°C下提取2 次，每次6h;靜置，除去石油醚，收集石油醚提取后殘?jiān)?，風(fēng)干；
[0120] (3)向石油醚提取后殘?jiān)屑尤牍桃罕葹?:20的水，在70°C下提取5次，每次4h， 合并提取液，抽濾，將濾餅烘干，收集水提后殘?jiān)?br> [0121] ⑷將水提后殘?jiān)垂桃罕葹?:80加入30%乙醇，在溫度為100°C下提取3次，每 次0. 5h，合并提取液，抽濾，收集濾液，將濾液在50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至漿狀，獲得漿狀物；
[0122] (5)向步驟（4)制備的漿狀物中加入5倍體積的乙醇，靜置，收集沉淀；
[0123] (6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，于-20°C下，靜置40h，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子 實(shí)體皂甙提取物。
[0124] 實(shí)施例9金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法
[0125] 該方法包括如下步驟：
[0126] (1)將金耳子實(shí)體粉碎，過30目篩，備用；
[0127] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體按固液比為1:50加入石油醚，在溫度為65°C下提取4 次，每次6h;靜置，除去石油醚，收集石油醚提取后殘?jiān)L(fēng)干；
[0128] (3)向石油醚提取后殘?jiān)屑尤牍桃罕葹?:50的水，在85°C下提取3次，每次4h， 合并提取液，抽濾，將濾餅烘干，收集水提后殘?jiān)?br> [0129] (4)將水提后殘?jiān)垂桃罕葹?:50加入50%乙醇，在溫度為80°C下提取3次，每 次0. 5h，合并提取液，抽濾，收集濾液，將濾液在50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至漿狀，獲得漿狀物；
[0130] (5)向步驟（4)制備的漿狀物中加入13倍體積的乙醇，靜置，收集沉淀；
[0131] (6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，于-20°C下，靜置24h，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子 實(shí)體皂甙提取物。
[0132] 實(shí)施例10金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法
[0133]該方法包括如下步驟：
[0134] (1)將金耳子實(shí)體粉碎，過40目篩，備用；
[0135] (2)將粉碎后的金耳子實(shí)體按固液比為1:10加入石油醚，在溫度為50°C下提取5 次，每次6h;靜置，除去石油醚，收集石油醚提取后殘?jiān)L(fēng)干；
[0136] (3)向石油醚提取后殘?jiān)屑尤牍桃罕葹?:80的水，在100°C下提取2次，每次 4h，合并提取液，抽濾，將濾餅烘干，收集水提后殘?jiān)?br> [0137] (4)將水提后殘?jiān)垂桃罕葹?:10加入70%乙醇，在溫度為60°C下提取3次，每 次8h，合并提取液，抽濾，收集濾液，將濾液在50°C下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至漿狀，獲得漿狀物；
[0138] (5)向步驟（4)制備的漿狀物中加入20倍體積的乙醇，靜置，收集沉淀；
[0139] (6)將沉淀用甲醇復(fù)溶，于-20°C下，靜置15h，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子 實(shí)體皂甙提取物。
[0140]實(shí)施例11含金耳子實(shí)體皂甙提取物的片劑
[0141] 實(shí)施例1的皂甙提取物90g微晶纖維素6g
[0142] 膠體二氧化硅2g 硬脂酸鎂2g
[0143] 制備方法：
[0144] a.將實(shí)施例1的皂甙提取物與微晶纖維素和1. 5g的膠體二氧化硅混合均勻，制得 混合物；
[0145] b.將步驟a制得的混合物造粒，加入剩下的膠態(tài)二氧化硅和硬脂酸鎂混合均勻， 整粒，壓片。
[0146] 實(shí)施例12含金耳子實(shí)體皂甙提取物的膠囊劑
[0147] 將實(shí)施例1的金耳子實(shí)體皂甙提取物裝入每粒200mg的膠囊中。該膠囊作為保健 品食用；每天服用兩?；蛎刻煸缤砀鞣靡涣?。
[0148] 實(shí)施例13含有金耳子實(shí)體皂甙提取物的藥物組合物
[0149] 該藥物組合物由下列成分組成：
[0150] 實(shí)施例1的皂甙提取物10g、其他活性成分10g
[0151] 其他活性成分由下列重量份數(shù)的各組分制備而成：
[0152] 紫草15g南瓜20g蒼耳子15g
[0153] 虎杖10g寬絲子5g枇杷葉5g
[0154] 其中該藥物組合物中總皂甙的含量為30%。
[0155] 實(shí)施例14含有金耳子實(shí)體皂甙提取物的藥物組合物
[0156] 實(shí)施例1的皂甙提取物4g、其他活性成分20g
[0157] 其他活性成分由下列重量份數(shù)的各組分制備而成：
[0158] 紫草30g南瓜40g蒼耳子30g
[0159] 虎杖20g菟絲子10g枇杷葉10g
[0160] 其中該藥物組合物中總皂甙的含量為10%。
[0161] 實(shí)施例15含有金耳子實(shí)體皂甙提取物的藥物組合物
[0162] 實(shí)施例1的皂甙提取物30g、其他活性成分15g
[0163] 其他活性成分由下列重量份數(shù)的各組分制備而成：
[0164] 紫草20g南瓜30g蒼耳子20g
[0165] 虎杖15g寬絲子7. 7g枇杷葉7. 5g。
[0166] 其中該藥物組合物中總皂甙的含量為40%。
[0167] 實(shí)施例16石油醚提取過程中各參數(shù)的考察
[0168] 將石油醚提取過程中的溫度設(shè)計(jì)成401：、501：、651：、801：和901：5個(gè)水平，其余 步驟按照實(shí)施例1的方法制備，檢測(cè)皂甙提取物中總皂苷的含量，考察結(jié)果見表1 ;
[0169] 將石油醚提取過程中的固液比設(shè)計(jì)成1:5、1:10、1 :50、1:80和1:90,5個(gè)水平，其 余步驟按照實(shí)施例1的方法制備，檢測(cè)皂甙提取物中總皂苷的含量，考察結(jié)果見表1 ;
[0170] 表1石油醚提取過程中各參數(shù)的考察結(jié)果

【權(quán)利要求】
1. 一種金耳子實(shí)體皂甙提取物，其特征在于，以人參皂甙Rbl計(jì)算，所述皂甙提取物中 含有20-60%總皂甙，所述皂甙提取物是由如下方法制備得到的： a. 低極性有機(jī)溶劑提取去除金耳子實(shí)體中的脂溶性物質(zhì)； b. 水提取去除水溶性物質(zhì)； c. 30-70%乙醇溶液提取、濃縮； d. 甲醇復(fù)溶，沉淀得到金耳子實(shí)體皂甙提取物； 所述低極性有機(jī)溶劑選自石油醚、環(huán)己烷或乙醚中的一種或多種。
2. 如權(quán)利要求1所述的金耳子實(shí)體皂甙提取物，其特征在于，所述金耳子實(shí)體為山西、 云南或西藏中的任意一種金耳子實(shí)體。
3. -種權(quán)利要求1所述的金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法，其特征在于，所述方法 包括如下步驟： (a) 低極性有機(jī)溶劑提取去除金耳子實(shí)體中的脂溶性物質(zhì)； (b) 水提取去除水溶性物質(zhì)； (c) 30-70%乙醇溶液提取、濃縮； (d) 甲醇復(fù)溶，沉淀得到金耳子實(shí)體皂甙提取物； 所述低極性有機(jī)溶劑選自石油醚、環(huán)己烷或乙醚中的一種或多種。
4. 如權(quán)利要求3所述的金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法，其特征在于，所述低極性 有機(jī)溶劑為石油醚，所述方法包括如下步驟： (1) 將金耳子實(shí)體粉碎，備用； (2) 將粉碎后的金耳子實(shí)體用石油醚提取，收集石油醚提取后殘?jiān)? (3) 將石油醚提取后殘?jiān)盟崛?，收集水提后殘?jiān)? (4) 將水提后殘?jiān)?0-70%乙醇溶液提取，收集濾液，將濾液濃縮，獲得漿狀物； (5) 向漿狀物中加入乙醇，靜置，收集沉淀； (6) 將沉淀用甲醇復(fù)溶，靜置，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子實(shí)體皂甙提取物。
5. 如權(quán)利要求4所述的金耳子實(shí)體皂甙提取物的制備方法，其特征在于，所述方法包 括以下步驟： (1) 將金耳子實(shí)體粉碎，過20-40目篩，備用； (2) 將粉碎后的金耳子實(shí)體按固液比為1:10-80加入石油醚，在溫度為50-80°C下提取 2-5次，每次5-8h ;靜置，除去石油醚，收集石油醚提取后殘?jiān)?，風(fēng)干； ⑶向石油醚提取后殘?jiān)屑尤牍桃罕葹?:20-80的水，在70-KKTC下提取2-5次，每 次2-5h，合并提取液，抽濾，將濾餅烘干，收集水提后殘?jiān)? (4) 將水提后殘?jiān)垂桃罕葹?:10-80加入30-70%乙醇，在溫度為60-KKTC下提取 3次，每次0. 5-8h，合并提取液，抽濾，收集濾液，將濾液在50°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至漿狀，獲得漿狀 物； (5) 向步驟（4)制備的漿狀物中加入5-20倍體積的乙醇，靜置，收集沉淀； (6) 將沉淀用甲醇復(fù)溶，于_20°C下，靜置15-40h，抽濾，收集沉淀，烘干，制得金耳子實(shí) 體皂甙提取物。
6. 由權(quán)利要求1所述的金耳子實(shí)體皂甙提取物和藥用輔料制成的制劑，其特征在于， 所述皂苷提取物和藥用輔料的重量份數(shù)比為8-9:1-2 ;優(yōu)選地，所述藥用輔料是重量份數(shù) 比為3:1:1的微晶纖維素、膠態(tài)二氧化硅和硬脂酸鎂的混合物。
7. 包括權(quán)利要求1所述的金耳子實(shí)體皂甙提取物的藥物組合物，其特征在于，所述藥 物組合物由皂甙提取物和其他活性成分組成，所述藥物組合物中含有10-40 %總皂甙。
8. 如權(quán)利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，所述其他活性成分由下列重量份數(shù) 的各組分制備而成： 紫草15-30南瓜20-40 蒼耳子15-30 虎杖10-20菟絲子5-10 枇杷葉5-10。
9. 如權(quán)利要求1所述的金耳子實(shí)體皂甙提取物，其特征在于，所述皂甙提取物在制備 用于預(yù)防或治療糖尿病、高血脂和增強(qiáng)機(jī)體免疫的藥物中的應(yīng)用。
10. 如權(quán)利要求7-8任一所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物在制備用于 預(yù)防或治療糖尿病、高血脂和增強(qiáng)機(jī)體免疫的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P3/06GK104382956SQ201410720317
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年12月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月1日
【發(fā)明者】王永生 申請(qǐng)人:北京綠科天成生物科技有限公司