消癌平制劑在制備防治老年癡呆及其并發(fā)癥藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了消癌平制劑在制備預防或治療老年性癡呆及其并發(fā)癥的藥物中的應用，所述消癌平制劑由烏骨藤及輔料制備而成，其能有效預防或治療老年性癡呆，可改善記憶，延緩患者的智能衰退，療效顯著，具有良好的應用前景。
【專利說明】}肖癌平制劑在制備防治老年癡呆及其并發(fā)癥藥物中的應用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及消癌平制劑的新用途，具體涉及消癌平制劑在準備預防或治療老年性 癡呆及其并發(fā)癥的藥物中的應用。

【背景技術(shù)】
[0002] 阿爾茨海默?。ˋlzheimer' s disease, AD)又稱老年性癡呆，是一種進行性神 經(jīng)退行性疾病，以隱匿起病，記憶力逐漸減退，認知障礙、行為異常和社會障礙等為主要 臨床表現(xiàn)。以細胞外出現(xiàn)β-淀粉樣肽（β-Amyloid protein, Αβ)聚集形成的老年斑 (senile plaque, SP)、細胞內(nèi)tau蛋白異常磷酸化形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangles, NFTs)及神經(jīng)細胞和突觸數(shù)量減少等為主要病理特征。據(jù)統(tǒng)計，全球老年癡呆患 者已超過1700萬，我國有500多萬，占全世界的四分之一，65歲以上老年人癡呆患病率高達 10. 1%，死亡率僅次于心腦血管疾病和癌癥，且發(fā)病率隨年齡的增長而增加。近年來，隨著老 齡化人口的不斷增加，對老年性癡呆的研究也越來越受到更多的關(guān)注。因此，對AD治療藥 物的深入研究具有十分重要的意義并成為國內(nèi)外的一個研究熱點。研究證實，老年性癡呆 的發(fā)生與患者大腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)--乙酰膽堿的缺失密切相關(guān)，膽堿酯酶會催化乙酰膽堿的 裂解反應，導致乙酰膽堿的缺失，神經(jīng)信號傳遞失敗，目前對老年癡呆的藥物治療主要是通 過抑制膽堿酯酶來提高患者體內(nèi)的乙酰膽堿水平。
[0003] 消癌平制劑由烏骨藤及輔料制備而成，具有抗癌，消炎，平喘的作用。臨床用于食 道癌、胃癌、肺癌、肝癌。對惡性淋巴癌、大腸癌、宮頸癌、白血病等惡性腫瘤亦有療效。并可 配合放療、化療和手術(shù)后治療。并用于慢性氣管炎、支氣管哮喘。發(fā)明人在臨床研究中發(fā)現(xiàn)， 消癌平制劑還具有一定的治療老年性癡呆及其并發(fā)癥的作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供消癌平制劑在制備預防或治療老年性癡呆的藥物中的應 用。
[0005] 本發(fā)明所述并發(fā)癥包括改善記憶或延緩患者的智能衰退。
[0006] 本發(fā)明所述消癌平制劑由烏骨藤及輔料制備而成。
[0007] 本發(fā)明所述消癌平制劑這樣制備：取烏骨藤，提取或粉碎后，加入一種或多種藥學 上可以接受的輔料，再按照藥學領(lǐng)域的常規(guī)方法，制備成醫(yī)藥領(lǐng)域中可接受的劑型。
[0008] 本發(fā)明所述劑型包括口服制劑、注射制劑或外用制劑。
[0009] 具體地說，所述口服制劑包括糖漿劑、口服液、膠囊劑、丸劑、顆粒劑或片劑。
[0010] 具體地說，所述糖漿劑這樣制備：取烏骨藤l〇〇〇g，浸泡12小時，加水煎煮三次， 第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，合并煎液，濾過，冷藏12小時，取上清液， 濃縮至250ml ;另取蔗糖650g，加水煮沸制成糖漿，與上述濃縮液混勻，煮沸，放冷，按照常 規(guī)劑量加入防腐劑與香精，加水至1000ml，攪勻，即得。
[0011] 具體地說，所述顆粒劑這樣制備：取烏骨藤lOOOg，浸泡12小時，加水煎煮三次， 第一次2小時，第二次I. 5小時，第三次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至80°C相對密度 為1. 15?1. 25的浸膏，加入浸膏重量1倍量的糊精和1倍量的蔗糖混勻，制成顆粒，干燥， 制得顆粒1200g，即得顆粒劑。
[0012] 具體地說，所述丸劑這樣制備：取烏骨藤lOOOg，用乙醇回流提取兩次，第一次1 小時，第二次0. 5小時，提取液過濾，回收乙醇并濃縮至80°C相對密度為1. 15?1. 25的浸 膏，在60°C，0. 07Mpa?0. 08 Mpa環(huán)境下干燥，干燥完成后粉碎成細粉，與藥物制成量20% 的淀粉混勻，制丸，干燥，包糖衣，即得丸劑，制成1000丸。
[0013] 具體地說，所述片劑這樣制備：取烏骨藤lOOOg，用乙醇回流提取兩次，第一次1 小時，第二次0. 5小時，提取液過濾，回收乙醇并濃縮至80°C相對密度為1. 15?1. 25的浸 膏，在60°C，0. 07Mpa?0. 08 Mpa環(huán)境下干燥，粉碎成細粉，與藥物制成量3%的硬脂酸鎂混 勻，壓片，包薄膜衣，制得片子600片，即得片劑。
[0014] 上述藥物的給藥途徑為口服給藥、皮下、靜脈或肌肉注射。
[0015] 為了使本領(lǐng)域普通技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明，以下通過實驗及實施例來進一步 闡述本發(fā)明的用途： 實驗例1.藥理實驗研究 一、消癌平浸膏抗AD大鼠作用機制研究 1實驗材料 1. 1實驗動物 健康SPF級SD雄性大鼠，體重（200±10) g，由中國軍事科學院實驗動物中心提供，許可 證號：SCXK-(軍)2007-004。飼料、墊料均由動物中心提供，自由攝食和飲水，自然晝夜節(jié)律 光照，室內(nèi)溫度控制在25°C左右，相對濕度為60-70%。
[0016] 1.2實驗藥物 消癌平浸膏：取烏骨藤浸泡12小時，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1. 5小時， 第三次1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至80°C相對密度為1. 15?1. 25的浸膏，即得。
[0017] 鹽酸多奈哌齊片（商品名：安理申）：5mg/片，衛(wèi)材(北京）藥業(yè)有限公司，批號： 091223A。
[0018] 1.3實驗試劑 D-半乳糖（D-gal，批號：100508)，上海博奧森生物科技有限公司；亞硝酸鈉（NaNO2，批 號：100901)，西隴化工股份有限公司。
[0019] 1.4主要儀器 電子精密天平（Libror AEL-200型），日本Shimadzu生產(chǎn)；TGL-16G臺式離心機，上海 安亭科學儀器廠生產(chǎn)；酶標儀（biorad680)，美國biorad伯樂生產(chǎn)。
[0020] 2方法與結(jié)果 2. 1實驗方法 2. I. 1藥物配制 2. I. I. 1消癌平浸膏的配制 將消癌平浸膏溶入蒸餾水中，分別配制高、中、低劑量，4°C保存，備用。
[0021] 2. 1. 1.2陽性藥物配制 取鹽酸多奈哌齊片，放入研缽內(nèi)研成粉末，溶入蒸餾水中，4°C保存，備用。
[0022] 2. I. I. 3 其他藥物 取D-gal、NaNO2溶入生理鹽水中，D-gal (D-半乳糖）按85mg · kg 4腹腔注射，NaNO 2 (亞硝酸鈉）按45mg · kgl復腔注射。
[0023] 2. 1. 2動物分組、造模及給藥 2. 1. 2. 1動物分組 在用木板構(gòu)成的自制曠場分析箱（ImX ImX 40cm，底部劃分為25個方格20cmX 20cm) 中，通過觀察每只大鼠在5min內(nèi)跨格次數(shù)、抬爪次數(shù)、排便粒數(shù)，篩選出符合條件的大鼠， 適應性喂養(yǎng)一周后進行排序，然后采用隨機數(shù)字表法將其分為正常對照組（10只）、模型組 (10只），陽性對照組（10只），消癌平(高、中、低劑量組，每組10只）。
[0024] 2. 1. 2. 2 動物造模 除正常對照組給予同計量生理鹽水腹腔注射外，其余大鼠每日腹腔注射D-gal和 NaNO2，持續(xù)60天。
[0025] 2. L 2. 3給藥方式與劑量 按照動物實驗方法學的方法根據(jù)人臨床用藥劑量換算大鼠的用藥量，換算公式如下： 每只大鼠的用藥量=(人用劑量X人與鼠的換算系數(shù)）/大鼠重量。在具體實施過程中，實 際體重在標準體重的±20%范圍內(nèi)均采用此方法進行給藥。
[0026] 從造模第21天開始，同時進行灌胃給藥干預。空白組、模型組均以同劑量生理鹽 水灌胃，以排除灌胃刺激與損傷的差異性，連續(xù)40天。
[0027] 2. L 3行為學檢測 采用Morris水迷宮對大鼠的定位航行與空間探索學習記憶能力進行檢測，并從行為 學方面探討消癌平糖漿對大鼠學習記憶能力的影響。
[0028] 2. I. 3. 1定位航行學習記憶實驗 Morris水迷宮主要由圓形水池、自動攝像及分析系統(tǒng)組成，圖像自動采集和處理系統(tǒng) 主要由攝像機、計算機、圖像監(jiān)視器組成，動物入水后啟動監(jiān)測裝置，記錄動物運動軌跡，試 驗完畢自動分析報告相關(guān)參數(shù)。圓形水池由不銹鋼制成，直徑120cm，高50cm，水池中有一 圓形站臺，直徑l〇cm，高28cm。沿水迷宮中心原點劃分為四個象限，將站臺設(shè)置在第一象限 內(nèi)，即目標象限，其中站臺的圓心距池壁20cm，在水池里注入自來水，水溫為23-25°C，水面 高出站臺2cm。水池上空通過一攝像機和計算機連接，當設(shè)定的訓練時間已到或大鼠己爬到 平臺，計算機停止跟蹤并記錄大鼠游泳軌跡、時間等。訓練期間環(huán)境保持相對安靜，把大鼠 放入水池后即離開。定位航行學習記憶實驗：從同一池壁入水點將實驗大鼠面向池壁放入 水池，自動記錄大鼠找到站臺的時間，作為大鼠逃避潛伏期。大鼠爬上站臺后，讓大鼠在站 臺上站立IOs ;若大鼠在120s內(nèi)未找到水池中的站臺或未能爬上站臺，則將大鼠輕輕拖動， 引至站臺上站立l〇s。將大鼠從站臺上取下，連續(xù)測試4d，作為訓練大鼠學習記憶能力。第 5d記錄大鼠逃避潛伏期，檢測大鼠定位航行記憶能力。
[0029] 2. 1. 3. 2空間探索學習記憶實驗 定位航行實驗后，將站臺移出水池，并按定位航行實驗的方法，計算機跟蹤并記錄大鼠 120s內(nèi)游泳探索站臺的軌跡，并記錄大鼠自入水后在120s內(nèi)游過原站臺所在位置區(qū)域的 次數(shù)，作為穿臺次數(shù)。
[0030] 2. 1. 4血清及腦組織的制備 行為學檢測后，進行血清及腦組織的制備，實驗前12h大鼠禁食不禁水。
[0031] 2. 1.4.1 血清制備 稱取實驗大鼠體重，用左手固定鼠，盡量捏緊頭部皮膚，使頭固定，并輕輕向下壓迫頸 部兩側(cè)，引起頭部靜脈血液回流困難，使眼球充分外突（示眼眶后靜脈叢充血），右手持彎 鉗，沿內(nèi)眥眼眶后壁向喉頭方向插入旋轉(zhuǎn)取血，取出的血液2500r · HiirT1離心lOmin，取血 清，放入-20°C冰箱，備用。
[0032] 2. 1. 4. 2腦組織勻漿制備 取血后，快速斷頭，打開顱腔，在冰臺上迅速取出全腦，用冷生理鹽水沖洗血液，濾紙 吸干沖洗液后，放入勻漿器中，加入約9倍量濃度為0. 9%的生理鹽水，研磨成腦組織勻漿， 2500r .miiT1離心lOmin，取上清夜，置EP管中，放入-20°C冰箱，備用。
[0033] 2. 1. 4. 3腦組織灌注固定 按體重量表抽取等量的3. 5%的水合氯醛腹腔注射麻醉，仰臥固定于鼠解剖臺上，用剪 刀剪開胸腔，并用彎鉗夾住胸腔骨外翻，充分暴露胸腔。把輸液器內(nèi)充滿生理鹽水，并使特 異磨鈍的20ml注射器的針頭滴出生理鹽水，用中號無齒鑷子夾住心臟，使針頭從心尖處迅 速穿進，并進入主動脈脈管內(nèi)，用無齒鉗子固定，剪開大鼠的右心耳，快速打開輸液器的閥 閘，速度先快后慢，直到紅色的肝臟變成蒼白時，快速換成4%多聚甲醛溶液灌注。把灌好的 大鼠放在斷頭架上立即斷頭，用剪刀剪開頭皮，再用碎骨鉗斷開頭顱骨，暴露腦組織，用小 號的鑷子夾出腦組織，投入4%的多聚甲醛溶液，備用。
[0034] 2. 1. 5生化指標的檢測 生化指標的檢測均采用ELISA法對大鼠腦組織中所選指標A β、Tau蛋白、AchE、ChAT、 GSK-3i3及血清中iNOS、IL-I的含量進行了生化檢測，用定量的方法得到各生化指標的變 化，從而為我們提供數(shù)據(jù)支持。
[0035] 2. 1. 5. 1 Αβ !_42 2. L 5. L 1 原理 采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA)測定樣品中大鼠 Ai^_42的水平。向 預先包被了 Αβ i_42單克隆抗體的酶標孔中加入Αβ H2，溫育后，加入生物素標記的抗Αβ ^ 抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復合物，再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶， 然后加入底物A、Β，產(chǎn)生藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中 A β H2的濃度呈正相關(guān)。
[0036] 2. I. 5. 1. 2 操作步驟 稀釋標準品：將標準品稀釋液加入原倍標準品中倍比稀釋為1200pg*mL' 600pg · mL \300pg · mL \ 150pg · mL \75pg · mL S 加樣：空白孔：空白對照孔不加樣品，生物素標記的抗Aβ 1-42抗體，鏈霉親和素-HRP， 只加顯色劑A&B和終止液，其余各步操作相同； 標準品孔：加入標準品50 μ L，鏈霉素-HRP50 μ L ; 待測樣品孔：加入樣本40 μ L，然后各加入抗A β 1-42抗體10 μ L、鏈酶親和 素-HRP50 μ L，蓋上封板膜，輕輕振蕩混勻，37°C溫育60分鐘； 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用； 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復 5次，拍干； 顯色：每孔先加入顯色劑A50 μ L，再加入顯色劑B50 μ L，輕輕震蕩混勻，37°C避光顯色 IOmin ； 終止：每孔加終止液50 μ L，終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）； 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度； 計算：根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品 的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。
[0037] 2. 1.5. 2 Tau 蛋白 2. L 5. 2. 1 原理：同 2. L 5. L 1 項。
[0038] 2. 1. 5. 2. 2 操作步驟 稀釋標準品：將標準品稀釋液加入原倍標準品中倍比稀釋為640pg ?mL'SZOpg 160pg · mL'80pg · mL'40pg · mL' 按 2. I. 5. I. 2 項下方法操作即得。
[0039] 2. 1. 5. 3 AChE 2. L 5. 3. 1 原理：同 2. L 5. L 1 項。
[0040] 2. 1. 5. 3. 2 操作步驟 稀釋標準品：將標準品稀釋液加入原倍標準品中倍比稀釋為80U · L'40U · L' 20U · L'lOU · L'5U · L'按2. I. 5. L 2項下方法操作即得。
[0041] 2. 1. 5. 4 IL-I 2. L 5. 4. 1 原理：同 2. L 5. I. 1 項。
[0042] 2. 1. 5. 4. 2 操作步驟 稀釋標準品：將標準品稀釋液加入原倍標準品中倍比稀釋為400ng · L'200ng · L' IOOng · L'50ng · L'25ng · I71。按 2. I. 5. I. 2 項下方法操作即得。
[0043] 2. I. 5· 5 GSK-3 3 2· I. 5· 5· 1 原理：同 2· I. 5· I. 1 項。
[0044] 2· 1. 5· 5· 2 操作步驟 稀釋標準品：將標準品稀釋液加入原倍標準品中倍比稀釋為150pmol ·Ι^， IOOpmol · L \ 50pmol · L \ 25pmol · L \ 12. 5pmol · L L 按 2. I. 5. I. 2 項下方法操作即得。
[0045] 2. 1. 5. 6 iNOS 2. L 5. 6. 1 原理：同 2. L 5. I. 1 項。
[0046] 2. 1. 5. 6. 2 操作步驟 稀釋標準品：將標準品稀釋液加入原倍標準品中倍比稀釋為50nmol 25nmol · mL \ 12. 5nmol · mL \6. 25nmol · mL \3. 12nmol ^mL10 按 2. L 5. L 2 項下方法操 作即得。
[0047] 2. 1. 6統(tǒng)計方法 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS17. 0統(tǒng)計軟件進行處理，數(shù)據(jù)采用均數(shù)土標準差（ ^ 土S)表示，當各樣本不滿足方差分析條件即不滿足正態(tài)性時采用Friedman秩和檢驗，當 各樣本均服從正態(tài)分布時則采用One-Way ANOVA (單因素方差分析)檢驗，并用Dunnett T3 分析。
[0048] 2· 2 結(jié)果 2. 2. 1行為學檢測結(jié)果 由表1可以看出：與空白組比較，模型組大鼠逃避潛伏期延長，差異具有統(tǒng)計學意 義（P〈0. 05);與模型組比較，消癌平三個組大鼠逃避潛伏期縮短，差異具有統(tǒng)計學意義 (P〈0. 05);與陽性組比較，供試藥組大鼠逃避潛伏期均無明顯差異（p>0. 05)。與空白組比 較，模型組大鼠穿臺次數(shù)減少，差異具有統(tǒng)計學意義（P〈〇. 05);與模型組比較，消癌平低 組大鼠穿臺次數(shù)無明顯差異（P>〇. 05);其他給藥組與模型組比較穿臺次數(shù)增多，差異有 統(tǒng)計學意義（P〈〇. 05);與陽性組比較，消癌平低組大鼠穿臺次數(shù)較少，差異有統(tǒng)計學意義 (P〈0. 05)，其他供試藥組大鼠穿臺次數(shù)均無明顯差異（p>0. 05)。

【權(quán)利要求】
1. 消癌平制劑在制備預防或治療老年性癡呆及其并發(fā)癥的藥物中的應用。
2. 如權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于：所述并發(fā)癥包括改善記憶或延緩患者的智 會泛衰退。
3. 如權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于：所述消癌平制劑由烏骨藤及輔料制備而成。
4. 如權(quán)利要求3所述的應用，其特征在于：所述消癌平制劑這樣制備：取烏骨藤，提取 或粉碎后，加入一種或多種藥學上可以接受的輔料，再按照藥學領(lǐng)域的常規(guī)方法，制備成醫(yī) 藥領(lǐng)域中可接受的劑型。
5. 如權(quán)利要求4所述的應用，其特征在于：所述劑型包括口服制劑、注射制劑或外用制 劑。
6. 如權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于：所述口服制劑包括糖漿劑、口服液、膠囊劑、 丸劑、顆粒劑或片劑。
7. 如權(quán)利要求6所述的應用，其特征在于：所述糖漿劑這樣制備：取烏骨藤lOOOg，浸 泡12小時，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，合并煎液，濾 過，冷藏12小時，取上清液，濃縮至250ml ;另取蔗糖650g，加水煮沸制成糖漿，與上述濃 縮液混勻，煮沸，放冷，按照常規(guī)劑量加入防腐劑與香精，加水至l〇〇〇ml，攪勻，即得。
8. 如權(quán)利要求6所述的應用，其特征在于：所述顆粒劑這樣制備：取烏骨藤1000g，浸 泡12小時，加水煎煮三次，第一次2小時，第二次1.5小時，第三次1小時，合并煎液，濾 過，濾液濃縮至80°C相對密度為1. 15?1. 25的浸膏，加入浸膏重量1倍量的糊精和1倍量 的蔗糖混勻，制成顆粒，干燥，制得顆粒1200g，即得顆粒劑。
9. 如權(quán)利要求6所述的應用，其特征在于：所述丸劑這樣制備：取烏骨藤1000g，用乙 醇回流提取兩次，第一次1小時，第二次〇. 5小時，提取液過濾，回收乙醇并濃縮至80°C相 對密度為1. 15?1.25的浸膏，在60°C，0. 07Mpa?0. 08 Mpa環(huán)境下干燥，干燥完成后粉碎 成細粉，與藥物制成量20%的淀粉混勻，制丸，干燥，包糖衣，即得丸劑，制成1000丸。
10. 如權(quán)利要求6所述的應用，其特征在于：所述片劑的制備方法為：取烏骨藤1000g， 用乙醇回流提取兩次，第一次1小時，第二次0.5小時，提取液過濾，回收乙醇并濃縮至 80°C相對密度為1. 15?1.25的浸膏，在60°C，0. 07Mpa?0. 08 Mpa環(huán)境下干燥，粉碎成細 粉，與藥物制成量3%的硬脂酸鎂混勻，壓片，包薄膜衣，制得片子600片，即得片劑。
【文檔編號】A61P25/28GK104490949SQ201410722625
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月3日
【發(fā)明者】黃文榮, 馬靜, 周菲婭, 武小赟 申請人:百花醫(yī)藥集團股份有限公司