葉酸靶向水飛薊素固體脂質納米粒制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明是以葉酸為靶頭制備葉酸靶向水飛薊素固體脂質納米粒。
【背景技術】
[0002]目前，肺癌已成為全世界死亡率最高的癌癥，治療肺癌的藥物雖然較多，但都不能靶向給藥，現(xiàn)國內無水飛薊素葉酸靶向制劑，使藥物直達病灶，在治療時毒副作用大，即殺死了癌細胞，也殺死了正常細胞，患者治療痛苦，體力下降，免疫功能低下，治療效果差，患者所花醫(yī)療費用高，而且癌癥不能達到治愈。
【發(fā)明內容】
[0003]本發(fā)明的目的在于克服上述缺點，提供一種葉酸靶向水飛薊素固體脂質納米粒制備方法，它是以葉酸為靶頭，將水飛薊素制成固體脂質納米粒并連接靶頭，采用靜脈注射途徑給藥，使該制劑具有肺腫瘤的靶向性，本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的，
將水飛薊素制成固體脂質納米粒并連接靶頭葉酸，制成葉酸靶向的水飛薊賓固體脂質納米粒，
第一步、FA-PEG3350-DSPE (葉酸-聚乙二醇3350-腦磷脂)的合成合成步驟如下:①分別稱取65.8mgFA (葉酸)、350mgH2N-PEG3350_NH2 (二氨基-聚乙二醇3350)、30mgNHS (羥基琥珀酸酰亞胺)、60mgDCC (N，Nr - 二環(huán)己基碳二亞胺)溶解于ImLDMSO (二甲基亞砜)中，依次加入，加入100 μ L TEA (三乙胺)，N2 (氮氣)保護、避光反應24h后50°C (500r - min1)反應6h，加入45mL冷氯仿混勻，旋轉蒸發(fā)去除氯仿，殘留少許液體，真空干燥得淡黃色固體FA-PEG3350-NH2 (氨基-葉酸-聚乙二醇3350)，②50mgDSPE(腦磷脂)溶于2.5mLCHCl3 (三氯甲烷)，15mgSUC (琥珀酸酐)溶于0.5mlDMS0 (二甲基亞砜)，轉入前一體系①中，逐漸加入50 μ L TEA (三乙胺)，500 r.π?η 1室溫反應24h，殘留少許液體，加入45mL無水冷丙酮沉淀，離心(12000 r *min / 1min),反復清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE (琥珀酸腦磷脂)，③將SUC-DSPE (琥珀酸腦磷脂)溶解在1mLCHCl3 (三氯甲烷)中后轉入前一體系②中，加入30mgDCC(N，N' - 二環(huán)己基碳二亞胺)室溫反應4h活化羧基，稱取200mgFA-PEG3350-NH2 (氨基-葉酸-聚乙二醇3350)溶解在1mL的CHCl3 (三氯甲烷)中，加入40 μ L TEA，室溫反應24h，冷丙酮沉淀并清洗產物，得產物FA-PEG3350-DSPE(葉酸-聚乙二醇3350-腦磷脂)；
第二步、葉酸修飾的水飛薊素固體脂質體納米粒制備
2.0%單硬脂酸甘油酯加入少量無水乙醇助融，1mg水飛薊賓，水浴加熱70°C熔融，作為油相，油相中加入3%膜材(溶于氯仿)，稱取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸餾水超聲溶解，稱取0.8%腦磷脂，加入少量無水乙醇超聲溶解后加入泊洛沙姆188中，作為水相，將水相加熱至同溫度后以1ml.min 1的速度滴加至油相中，乳化1min后超聲破碎(600w，8min, 3s間隔)，置于4°C水浴中固化，0.22 μ m濾膜過濾即得葉酸修飾水飛薊賓固體脂質納米粒(FA-SIL-SLN)。本發(fā)明將水飛薊素制成固體脂質納米粒并連接革El頭葉酸，納米粒靜脈注射后具有靶向肺部的作用，葉酸修飾可使藥物靶向腫瘤細胞，因此產生肺部腫瘤靶向作用，提高抗腫瘤藥物的生物利用度，減少細胞毒副作用，治療效果好，使患者能夠減少痛苦，早日康復。固體脂質納米粒，是一種以室溫下為固態(tài)的天然或合成的脂質或類脂為基質，將藥物包裹于類脂核中制成粒徑約為50-1000nm的固體脂質粒子給藥體系，是一種很有發(fā)展前景的新型載藥系統(tǒng)。隨著對腫瘤分子水平研究的不斷深入，在腫瘤細胞表面發(fā)現(xiàn)了一系列受體，它們與腫瘤生長增殖密切相關并在腫瘤組織過度表達，它們與特異性抗體或配體結合可誘導細胞內化，這種腫瘤特異性的受體為腫瘤治療提供了靶點，使傳統(tǒng)的化療藥物和新發(fā)現(xiàn)的腫瘤特異性的配體或抗體結合，增強了藥物的腫瘤選擇性并減少藥物的毒副作用，葉酸受體(folate receptor, FR)是一種可以介導細胞內化，將葉酸攝取入真核細胞胞漿的一種高親和力受體，在正常組織中極少表達，而在上皮組織來源的惡性腫瘤如肺癌、卵巢癌、宮頸癌、乳腺癌、結腸癌等組織中高度表達。本發(fā)明是以葉酸為靶頭，將水飛薊素制成固體脂質納米粒并連接靶頭，采用靜脈注射途徑給藥，使該制劑具有肺腫瘤的靶向性，對水飛薊素治療藥物研究與開發(fā)具有積極的意義，本發(fā)明制備方法簡便，對環(huán)境無污染，成本低，有利于推廣應用。
[0004]下面是本發(fā)明的具體實施例:
將水飛薊素制成固體脂質納米粒并連接靶頭葉酸，制成葉酸靶向的水飛薊賓固體脂質納米粒，
第一步、FA-PEG3350-DSPE (葉酸-聚乙二醇3350-腦磷脂)的合成
合成步驟如下:①分別稱取65.8mgFA(葉酸)、350mgH2N-PEG3350-NH2(二氨基-聚乙二醇3350)、3011^順3(羥基琥珀酸酰亞胺)、6011^0(1:(1& - 二環(huán)己基碳二亞胺)溶解于ImLDMSO(二甲基亞砜)中，依次加入，加入10yL TEA(三乙胺)，N2(氮氣)保護、避光反應24h后50°C(500r *min 3反應6h，加入45mL冷氯仿混勾，旋轉蒸發(fā)去除氯仿，殘留少許液體，真空干燥得淡黃色固體FA-PEG3350-NH2 (氨基-葉酸-聚乙二醇3350)，②50mgDSPE (腦磷脂)溶于
2.5mLCHCl3 (三氯甲烷)，15mgSUC (琥珀酸酐)溶于0.5mlDMS0 (二甲基亞砜)，轉入前一體系①中，逐漸加入50yL TEA (三乙胺)，500 r.min 1室溫反應24h，殘留少許液體，加入45mL無水冷丙酮沉淀，離心(12000 r.min / 1min),反復清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE(琥珀酸腦磷脂)，③將SUC-DSPE (琥珀酸腦磷脂)溶解在1mLCHCl3 (三氯甲烷)中，加入30mgDCC (N, Nr - 二環(huán)己基碳二亞胺)室溫反應4h活化羧基，稱取200mgFA-PEG3350_NH2(氨基-葉酸-聚乙二醇3350)溶解在1mL的CHCl3 (三氯甲烷)中后轉入前一體系②中，加Λ 40 μ L TEA，室溫反應24h，冷丙酮沉淀并清洗產物，得產物FA-PEG3350-DSPE (葉酸-聚乙二醇3350-腦磷脂)；
第二步、葉酸修飾的水飛薊素固體脂質體納米粒制備
2.0%單硬脂酸甘油酯加入少量無水乙醇助融，1mg水飛薊賓，水浴加熱70°C熔融，作為油相，油相中加入3%膜材(溶于氯仿)，稱取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸餾水超聲溶解，稱取0.8%腦磷脂，加入少量無水乙醇超聲溶解后加入泊洛沙姆188中，作為水相，將水相加熱至同溫度后以1ml.min 1的速度滴加至油相中，乳化1min后超聲破碎(600w，8min, 3s間隔)，置于4°C水浴中固化，0.22 μ m濾膜過濾即得葉酸修飾水飛薊賓固體脂質納米粒(FA-SIL-SLN)。
[0005]本藥所含成分分析及配伍禁忌: 本制劑以水飛薊素為指標成分，采用HPLC方法檢測。水飛薊素為中藥水飛薊種子提取的黃酮類物質，無配伍禁忌。
【主權項】
1.一種葉酸靶向水飛薊素固體脂質納米粒制備方法，其特征在于:將水飛薊素制成固體脂質納米粒并連接革G頭葉酸，制成葉酸革El向的水飛薊賓固體脂質納米粒， 第一步、FA-PEG3350-DSPE (葉酸-聚乙二醇3350-腦磷脂)的合成合成步驟如下:①分別稱取65.8mgFA(葉酸)、350mgH2N-PEG3350-NH2(二氨基-聚乙二醇.3350)、3011^順3(羥基琥珀酸酰亞胺)、6011^0(1:(1& - 二環(huán)己基碳二亞胺)溶解于ImLDMSO(二甲基亞砜)中，依次加入，加入10yL TEA(三乙胺)，N2(氮氣)保護、避光反應24h后50°C(500r *min 3反應6h，加入45mL冷氯仿混勾，旋轉蒸發(fā)去除氯仿，殘留少許液體，真空干燥得淡黃色固體FA-PEG3350-NH2 (氨基-葉酸-聚乙二醇3350)，②50mgDSPE (腦磷脂)溶于.2.5mLCHCl3 (三氯甲烷)，15mgSUC (琥珀酸酐)溶于0.5mlDMS0 (二甲基亞砜)，轉入前一體系①中，逐漸加入50yL TEA (三乙胺)，500 r.min 1室溫反應24h，殘留少許液體，加入45mL無水冷丙酮沉淀，離心(12000 r.min / 1min),反復清洗沉淀3次，真空干燥得SUC-DSPE(琥珀酸腦磷脂)，③將SUC-DSPE (琥珀酸腦磷脂)溶解在1mLCHCl3 (三氯甲烷)中，加入.30mgDCC (N, Nr - 二環(huán)己基碳二亞胺)室溫反應4h活化羧基，稱取200mgFA-PEG3350_NH2(氨基-葉酸-聚乙二醇3350)溶解在1mL的CHCl3 (三氯甲烷)中后轉入前一體系②中，加Λ 40 μ L TEA，室溫反應24h，冷丙酮沉淀并清洗產物，得產物FA-PEG3350-DSPE (葉酸-聚乙二醇3350-腦磷脂)； 第二步、葉酸修飾的水飛薊素固體脂質體納米粒制備 . 2.0%單硬脂酸甘油酯加入少量無水乙醇助融，1mg水飛薊賓，水浴加熱70°C熔融，作為油相，油相中加入3%膜材(溶于氯仿)，稱取2.4%泊洛沙姆188，加入20mL蒸餾水超聲溶解，稱取0.8%腦磷脂，加入少量無水乙醇超聲溶解后加入泊洛沙姆188中，作為水相，將水相加熱至同溫度后以1ml.min 1的速度滴加至油相中，乳化1min后超聲破碎(600w，.8min, 3s間隔)，置于4°C水浴中固化，0.22 μ m濾膜過濾即得葉酸修飾水飛薊賓固體脂質納米粒(FA-SIL-SLN)。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種葉酸靶向水飛薊素固體脂質納米粒制備方法，它是首先將葉酸-聚乙二醇3350-腦磷脂進行合成，再將葉酸修飾的水飛薊素固體脂質體納米粒進行制備。該發(fā)明將水飛薊素制成固體脂質納米粒并連接靶頭葉酸，納米粒靜脈注射后具有靶向肺部的作用，葉酸修飾可使藥物靶向腫瘤細胞，因此產生肺部腫瘤靶向作用，提高抗腫瘤藥物的生物利用度，減少細胞毒副作用，治療效果好，使患者能夠減少痛苦，早日康復，本發(fā)明制備方法簡便，對環(huán)境無污染，成本低，有利于推廣應用。
【IPC分類】A61K47/34, A61K9/14, A61P35/00, A61K31/357
【公開號】CN105708803
【申請?zhí)枴緾N201410725936
【發(fā)明人】于蓮, 田麗華, 趙巖, 楊春榮, 蘇瑾, 孫維彤, 杜研, 周彤
【申請人】佳木斯大學