一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液及其制備方法。其配方在于，包括以下按照體積比計(jì)算的原料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0.2-0.3、甲醛0.2-0.3、硫柳汞0.01-0.02；還包括800-1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。制備時(shí)采用高免蛋全蛋得到澄清卵黃抗體口服液。這種方法制備的卵黃抗體口服液不僅使生產(chǎn)過(guò)程中損失少、免疫活性物質(zhì)強(qiáng)多、生物活性高、無(wú)臨床副作用，同時(shí)，含有蛋清中大量的各種蛋白質(zhì)，可以減少口服時(shí)對(duì)抗體的不良影響。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于禽類(lèi)用生物制品【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液及 其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 鴨病毒性肝炎病是養(yǎng)鴨業(yè)中常見(jiàn)的疾病，容易大范圍內(nèi)爆發(fā)，二者有時(shí)會(huì)混合感 染，給治療增加了難度。防治方法很多，其中蛋黃抗體是最有效的治療鴨發(fā)生病毒病的方 法。
[0003] 鴨病毒性肝炎簡(jiǎn)稱(chēng)鴨肝炎，主要危害20日齡以?xún)?nèi)的雛鴨，雛鴨日齡越小，死亡率 越高，最高死亡率可達(dá)90%_95%，并且所有的抗菌素對(duì)本病無(wú)效。我國(guó)在1958年發(fā)現(xiàn)本病， 20世紀(jì)80年代初期起本病在我國(guó)再次流行，此后，各地疫情此起彼伏，疫情能夠被鴨病毒 性肝炎I型弱毒疫苗的免疫所控制；1997年后，本病在某些地區(qū)出現(xiàn)較嚴(yán)重的流行，其疫情 不能被標(biāo)準(zhǔn)鴨病毒性肝炎I型弱毒疫苗完全地控制，懷疑有I型鴨病毒性肝炎病毒變異株 出現(xiàn)。
[0004] 卵黃抗體IgY是的一種免疫球蛋白Ig，IgY在功能上相當(dāng)于哺乳動(dòng)物IgG，但結(jié)構(gòu) 上有所不同，具有典型的的免疫球蛋白的空間構(gòu)象。卵黃抗體具有很多優(yōu)越性。（1)由于鳥(niǎo) 類(lèi)與哺乳類(lèi)動(dòng)物種系發(fā)生學(xué)的差距，鳥(niǎo)類(lèi)更適于生產(chǎn)抗哺乳動(dòng)物抗原的特異性抗體。卵黃 抗體不會(huì)激發(fā)補(bǔ)體系統(tǒng)，不與抗哺乳動(dòng)物抗原的抗體發(fā)生反應(yīng)，不與哺乳動(dòng)物和細(xì)菌的Fc 受體結(jié)合，這在免疫診斷中具有重要意義。（2)卵黃抗體作為一種具有生物活性的免疫球蛋 白，在貯存、生產(chǎn)、加工、攝食及消化過(guò)程中保證其穩(wěn)定性是非常關(guān)鍵的。多項(xiàng)試驗(yàn)表明，IgY 具有較好的穩(wěn)定性，耐酸、耐堿、耐熱。卵黃抗體較易保存，4°C條件下存放5年或室溫條件 下存放6個(gè)月對(duì)抗體活性無(wú)明顯影響。（3)卵黃抗體量大，成本低，便于規(guī)?；a(chǎn)。卵黃 中抗體濃度能長(zhǎng)期維持在相當(dāng)于甚至超過(guò)血清抗體濃度的水平上?？偟膩?lái)講，卵黃抗體對(duì) 動(dòng)物沒(méi)有毒副作用，用卵黃抗體治療動(dòng)物疾病不但避免了血清價(jià)格昂貴、產(chǎn)量低的缺點(diǎn)，而 且可以避免血清在治療過(guò)程中引起的副作用，是一種很有前途的新型免疫球蛋白制劑。因 此，卵黃抗體在禽畜疾病診斷、治療和預(yù)防的應(yīng)用越來(lái)越多。目前卵黃抗體的制備及生產(chǎn)工 藝已經(jīng)成熟，可以保質(zhì)保量的生產(chǎn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液及其制備方法，解決注射用的鴨病 毒性肝炎卵黃抗體使用不方便的問(wèn)題。
[0006] 本發(fā)明目的是通過(guò)以下形式實(shí)現(xiàn)的： 一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液，包括以下按照體積比計(jì)算的原料：含卵黃抗體的 全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還包括800-1000單位 /暈升口服液的青鏈霉素。
[0007] 制備步驟是： 1) 采用鴨病毒性肝炎病毒滅活疫苗對(duì)雞只進(jìn)行強(qiáng)化免疫：采用三次免疫程序，每次間 隔10天，每只雞每次疫苗用量為2ml，當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到1 : (128-256)時(shí)，進(jìn)行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對(duì)高免蛋進(jìn)行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進(jìn)行乳化，乳化時(shí)間7-10min，然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍,混勻后，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時(shí)； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-32°C，加入辛酸，攪拌l_2h，然后靜置10-12h，過(guò)濾； 其中辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的體積 比為（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青鏈霉素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液； 6) 分裝，保存。
[0008]步驟4)過(guò)濾時(shí)依次通過(guò)1. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾。
[0009] 本發(fā)明通過(guò)對(duì)高免蛋全蛋提取、低溫酸化處理、辛酸處理后得到澄清卵黃抗體口 服液。本發(fā)明將全蛋使用到卵黃抗體的提取中，可以直接在臨床上進(jìn)行口服使用，蛋清中含 有大量的各類(lèi)蛋白質(zhì)，可充分利用高免蛋的價(jià)值，提高動(dòng)物機(jī)體的免疫力和應(yīng)激能力，生物 利用度高，具有生物活性不受影響的優(yōu)點(diǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1 : 一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液的配方包括以下原料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95L、辛酸0. 2L、甲醛0. 3L、硫柳汞0. 02L，以及1000單位/毫升口服液的青鏈霉素。
[0011] 其制備方法包括以下步驟： 1)采用市售的鴨病毒性肝炎病毒滅活疫苗進(jìn)行強(qiáng)化免疫，每只雞每次疫苗用量為2ml， 每次間隔10天，進(jìn)行三次免疫程序，當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到1 :256時(shí)，開(kāi)始收集高免蛋。
[0012] 2)將收集高免蛋整理，0. 2%新潔爾滅消毒，備用。
[0013] 3)水稀釋法酸化處理：將2)步高免蛋全蛋打入巴氏罐體內(nèi)進(jìn)行充分乳化，乳化時(shí) 間7min，然后將乳化后的全蛋液加入pH為4. 2、溫度為4°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水加入 量為全蛋液體積的6倍，混勻，放置4°C環(huán)境中18小時(shí)靜置沉淀，取上清液；鹽酸酸化水是 在水中加入鹽酸使其PH值達(dá)到4. 2。
[0014] 4)辛酸處理；將步驟3)的上清液，即含卵黃抗體的全蛋水溶液進(jìn)行稱(chēng)量，升溫到 25°C，加入辛酸，充分混勻lh，然后靜置10h;其中，按體積比，上層清液：辛酸=95 :0. 2 ; 5) 對(duì)步驟4)所得澄清液依次用1. 0_、0. 45mm、0. 22mm的濾膜過(guò)濾，留取濾液； 6) 向步驟5)所得濾液加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素；按體積比，含卵黃抗體的全蛋全蛋 水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞=95 :0. 2 :0. 3 :0. 02 ;青鏈霉素在該口服液中的含量為1000單 位/暈升； 7) 分裝，保存。
[0015] 為確定卵黃抗體口服液在常溫下的放置有效期，做了以下試驗(yàn)：將本品保存在 37°C培養(yǎng)箱中，保存24個(gè)月，分別1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月 后，用瓊脂擴(kuò)散(AGP)法，測(cè)定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取樣品的卵黃抗體效價(jià)變化，結(jié)果見(jiàn)表1。
[0016]表1.常溫放置口服液不同時(shí)間段效價(jià)的變化

【權(quán)利要求】
1. 一種鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液，其特征在于：包括以下按照體積比計(jì)算的原 料：含卵黃抗體的全蛋水溶液95-105、辛酸0. 2-0. 3、甲醛0. 2-0. 3、硫柳汞0. 01-0. 02 ;還 包括800-1000單位/暈升口服液的青鏈霉素。
2. -種如權(quán)利要求1所述鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于具體 步驟是： 1) 采用鴨病毒性肝炎病毒滅活疫苗對(duì)雞只進(jìn)行強(qiáng)化免疫：采用三次免疫程序，每次間 隔10天，每只雞每次疫苗用量為2ml，當(dāng)抗體效價(jià)達(dá)到1 : (128-256)時(shí)，進(jìn)行高免蛋收集； 2) 使用0. 1-0. 2%新潔爾滅對(duì)高免蛋進(jìn)行消毒； 3) 將2)中高免蛋的全蛋液進(jìn)行乳化，乳化時(shí)間7-10min，然后加入pH為4. 2-4. 3的、 溫度為4-6°C的鹽酸酸化水，鹽酸酸化水的加入量為全蛋液體積的5. 5-6. 5倍,混勻后，降 溫至3-5°C，靜置18-24小時(shí)； 4) 取3)中的上層清液，升溫到25-32°C，加入辛酸，攪拌l_2h，然后靜置10-12h，過(guò)濾； 其中辛酸體積量：上層清液體積量為（〇. 2-0. 3) : (95-105); 5) 加入甲醛、硫柳汞、青鏈霉素，使卵黃抗體的全蛋水溶液：辛酸：甲醛：硫柳汞的體積 比為（95-105) : (0? 2-0. 3) : (0? 2-0. 3) : (0? 01-0. 02)，青鏈霉素的含量為 800-1000 單位 / 暈升口服液； 6) 分裝，保存。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的鴨病毒性肝炎卵黃抗體口服液的制備方法，其特征在于：步 驟4)過(guò)濾時(shí)依次通過(guò)1. 0mm、0. 45mm、0. 22mm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾。
【文檔編號(hào)】A61K9/08GK104383536SQ201410762607
【公開(kāi)日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年12月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月14日
【發(fā)明者】郭俊清, 李建正, 劉應(yīng)鵬 申請(qǐng)人:鄭州后羿制藥有限公司