一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，步驟是：在恩拉霉素發(fā)酵培養(yǎng)結束之后，對發(fā)酵液進行高溫滅活，滅活后降溫，分別按殼聚糖溶液和聚丙烯酸鈉溶液進行預處理。處理好的發(fā)酵液進行板框過濾、噴霧干燥，從而制備成預混劑成品。本發(fā)明相比現(xiàn)在的恩拉霉素生產(chǎn)技術來說，通過對發(fā)酵液進行預處理同時調整了干燥方式，從而改變恩拉霉素成品的品質。本發(fā)明可操作性強，成本低，與不進行預處理或者其他方式進行預處理得到的成品相比，通過此種方式處理得到的恩拉霉素預混劑成品基本不降解，其成品儲存過程穩(wěn)定性增加。本發(fā)明解決了恩拉霉素預混劑成品在運輸、存儲、使用過程的穩(wěn)定性問題。
【專利說明】一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，屬于工業(yè)生物技術，發(fā) 酵工程領域。

【背景技術】
[0002] 恩拉霉素（Enramycin)又稱安來霉素、持久霉素、恩霉素等，是一種由13種不 同種類的17個氨基酸分子和脂肪酸分子所組成的多肽類抗生素，主要組分有恩拉霉素A (C ltl7H138C12N26O31)和恩拉霉素B (Cltl8H14ciC12N26O31)兩種，以其鹽酸鹽形式應用。該產(chǎn)品早在 1966年，由日本武田藥品工業(yè)株式會社研發(fā)，1974年在日本正式注冊，其后在許多國家被 注冊并廣泛使用。我國在1993年批準注冊恩拉霉素預混劑，用做藥物飼料添加劑。2005年 國內企業(yè)浙江海正藥業(yè)股份有限公司和美國先靈葆雅動物保健品公司開始合作生產(chǎn)恩拉 霉素預混劑，2009年武漢興鼎生物科技有限公司獲得國內企業(yè)唯一的生產(chǎn)許可文號。由于 只需要添加微量的恩拉霉素就可以呈現(xiàn)出優(yōu)良的促生長和改善飼料利用率的作用，并且其 具有很高的低毒性、低的藥物殘留性，且對革蘭氏陽性菌有很強的抑制作用，特別是對腸道 有害的梭菌有較強的抑制作用，長期使用后不產(chǎn)生耐藥性，印象被世界上很多國家推薦作 為動物促生長劑，是一種很好的飼料添加劑。
[0003] 雖然恩拉霉素在國內有很好的發(fā)展前景，但是恩拉霉素預混劑成品容易降解，其 不穩(wěn)定性影響了恩拉霉素在存儲、運輸及應用過程中品質，進而影響了其銷售和使用。


【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明提供一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，該方法簡單易行、生產(chǎn) 成本低，得到的恩拉霉素預混劑品質穩(wěn)定，基本不降解。
[0005] -種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌 接入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度 27-30°C，罐壓0. 03-0. 06MPa，通氣比1: 1，周期24-36h，轉速IOO-HOrpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件 為：溫度 27-30°C，罐壓 0. 03-0. 06MPa，通氣比 v/v =1:0. 8-1，發(fā)酵周期 168-216h，轉速 IOO-HOrpm ； (2) 發(fā)酵液滅活：發(fā)酵液進行升溫滅活30min，滅活后發(fā)酵液降溫至40-45°C，升溫滅活 溫度為 50°C、70°C或 90°C ; (3) 預處理方法：降溫后的發(fā)酵液先添加質量濃度為0. 5%的殼聚糖溶液，添加量為 0.5kg /m3發(fā)酵液或1.0 kg /m3發(fā)酵液，混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酸鈉或者聚丙烯酰 胺，添加量為〇. 05-0. 08kg/m3發(fā)酵液，聚丙烯酸鈉或聚丙烯酰胺為質量濃度為0. 1%的水溶 液； (4) 預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加載 體制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為〇. 5-0. 7MPa，壓濾時間為l-2h ;噴霧干燥進風溫 度 130-138°C、140-148°C 或 150-158°C，出風溫度 65-75°C、75-85°C 或 85-95°C ;氣流量為 8-9m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
[0006] 步驟（1)中，種子培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基包括以下成分：玉米粉30g/L，玉米漿25g/ L， 玉米蛋白粉5g/ L，硫酸銨2.5g/ L，磷酸二氫鉀I g/ L，硫酸亞鐵0.2 g/L，碳酸鈣10 g/L。
[0007] 步驟（1)中，發(fā)酵所用的培養(yǎng)基包括以下成分：玉米粉100g/L，玉米蛋白粉30g/L， 玉米楽l〇g/L，葡萄糖10g/L，硫酸銨3g/L，氯化鈉lg/L，豆油lg/L，輕質碳酸興5g/L，水余 量。
[0008] 殺真菌鏈霉菌是在北京北納創(chuàng)聯(lián)生物技術研究院購買的，信息來自于http:// www. mum800. com/p_86/p_6386. html。
[0009] 具體信息如下： 平臺資源號：1511C0001ACCC40880 菌株保藏編號：40880 中文名稱：殺真菌鏈霉菌 屬名：Streptomyces 種名加詞：fungicidicus 來源歷史：一湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心 原始編號：IEDA 00652, C5 原產(chǎn)國：中國 資源歸類編碼：15131517101 模式菌株：非模式菌株 主要用途：研究、生產(chǎn) 特征特性：孢子絲松環(huán)螺旋；不產(chǎn)H2S ;不產(chǎn)類黑色素；明膠液化；纖維素上生長；牛 奶凝固且輕微胨化；淀粉水解；利用葡萄糖、D-果糖、D-木糖、肌醇，對L-阿拉伯糖、蔗糖、 鼠李糖、棉子糖利用可疑；細胞壁含有DL-2. 6二氨基庚二酸、甘氨酸、葡萄糖、乳糖。
[0010] 具體用途：產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性 本發(fā)明相比較現(xiàn)在的恩拉霉素生產(chǎn)技術來說，主要是對發(fā)酵液進行滅活處理，滅活后 發(fā)酵液預處理添加殼聚糖溶液，同時配合噴霧干燥的溫度變化從而改變恩拉霉素預混劑的 成品品質。本發(fā)明簡單易行、生產(chǎn)成本低，與不進行滅活預處理或者其他方式預處理得到的 成品相比，此種滅活后預處理得到的恩拉霉素預混劑品質更穩(wěn)定，使得恩拉霉素預混劑成 品在存儲、運輸及應用過程中更加方便、穩(wěn)定。
[0011]

【具體實施方式】： 實施例1 : 一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌（Streptomyces fungicidicus)，接 入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度27°C， 罐壓0. 05MPa，通氣比v/v =1: 1，周期29h，轉速120rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度27°C，罐壓 0· 03MPa，通氣比 v/v =1: 0· 8,發(fā)酵周期 168h，轉速 IOOrpm ; (2) 發(fā)酵液滅活：發(fā)酵液進行升溫滅活30min，滅活后發(fā)酵液降溫至40-45°C，升溫滅活 溫度為50°C ; (3) 預處理方法：降溫后的發(fā)酵液先添加質量濃度為0. 5%的殼聚糖溶液，添加量為 0.5kg /m3發(fā)酵液，混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酸鈉，添加量為0.05kg/m3發(fā)酵液，聚丙 烯酸鈉為質量濃度為〇. 1%的水溶液； (4) 預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加 載體制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為〇. 5MPa，壓濾時間為Ih ;噴霧干燥進風溫度 130-138°C，出風溫度65-75°C ;氣流量為8m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
[0012] 步驟（1)中，種子培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基包括以下成分：玉米粉30g/L，玉米漿25g/ L， 玉米蛋白粉5g/ L，硫酸銨2.5g/ L，磷酸二氫鉀I g/ L，硫酸亞鐵0.2 g/L，碳酸鈣10 g/L。
[0013] 步驟（1)中，發(fā)酵所用的培養(yǎng)基包括以下成分：玉米粉l〇〇g/L，玉米蛋白粉30g/L， 玉米楽l〇g/L，葡萄糖10g/L，硫酸銨3g/L，氯化鈉lg/L，豆油lg/L，輕質碳酸興5g/L，水余 量。
[0014] 實施例2 : 一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌（Streptomyces fungicidicus)，接 入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度28°C， 罐壓0. 05MPa，通氣比v/v =1: 1，周期28h，轉速120rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度28°C，罐壓 0· 05MPa，通氣比 v/v =1:0. 90,發(fā)酵周期 192h，轉速 120rpm ; (2) 發(fā)酵液滅活：發(fā)酵液進行升溫滅活30min，滅活后發(fā)酵液降溫至42°C，升溫滅活溫 度為70°C ; (3) 預處理方法：降溫后的發(fā)酵液先添加質量濃度為0. 5%的殼聚糖溶液，添加量為I. 0 kg /m3發(fā)酵液，混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酸鈉，添加量為0.07kg/m3發(fā)酵液，聚丙烯酸 鈉為質量濃度為〇. 1%的水溶液； (4) 預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加載體 制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為0. 5-0. 7MPa，壓濾時間為l-2h ;噴霧干燥進風溫度 140-148°C，出風溫度75-85°C ;氣流量為9m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
[0015] 其余同實施例1。
[0016] 實施例3: 一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌（Streptomyces fungicidicus)，接 入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度28°C， 罐壓0. 05MPa，通氣比v/v =1: 1，周期28h，轉速120rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度30°C，罐壓 0· 06MPa，通氣比 v/v =1:1，發(fā)酵周期 216h，轉速 140rpm ; (2) 發(fā)酵液滅活：發(fā)酵液進行升溫滅活30min，滅活后發(fā)酵液降溫至40-45°C，升溫滅活 溫度為90V ; (3) 預處理方法：降溫后的發(fā)酵液先添加質量濃度為0. 5%的殼聚糖溶液，添加量為1. 0 kg /m3發(fā)酵液，混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酰胺，添加量為0.08kg/m3發(fā)酵液； (4) 預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加 載體制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為〇. 7MPa，壓濾時間為2h ;噴霧干燥進風溫度 150-158°C，出風溫度85-95°C ;氣流量為9m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
[0017] 其余同實施例1。
[0018] 實施例4: 一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌（Streptomyces fungicidicus)，接 入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度28°C， 罐壓0. 05MPa，通氣比v/v =1: 1，周期28h，轉速120rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度26°C，罐壓 0. 07MPa，通氣比 v/v =1:0. 7,發(fā)酵周期 150h，轉速 150rpm ; (2) 發(fā)酵液滅活：發(fā)酵液進行升溫滅活30min，滅活后發(fā)酵液降溫至35°C，升溫滅活溫 度為50°C ; (3) 預處理方法：降溫后的發(fā)酵液先添加質量濃度為0. 5%的殼聚糖溶液，添加量為 0.5kg /m3發(fā)酵液，混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酰胺，添加量為0.09kg/m3發(fā)酵液； (4) 預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加 載體制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為〇. 8MPa，壓濾時間為3h ;噴霧干燥進風溫度 130-138°C，出風溫度65-75°C ;氣流量為7m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
[0019] 其余同實施例1。
[0020] 實施例5 : 一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌（Streptomyces fungicidicus)，接 入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度28°C， 罐壓0. 05MPa，通氣比v/v =1: 1，周期28h，轉速120rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度29°C，罐壓 0· 04MPa，通氣比 v/v =1:0. 8,發(fā)酵周期 180h，轉速 IlOrpm ; (2) 發(fā)酵液滅活：發(fā)酵液進行升溫滅活30min，滅活后發(fā)酵液降溫至41°C，升溫滅活溫 度為70°C ; (3) 預處理方法：降溫后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酸鈉，添加量為 0. 07kg/m3發(fā)酵液，聚丙烯酸鈉為質量濃度為0. 1%的水溶液； (4) 預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加 載體制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為〇. 5MPa，壓濾時間為Ih ;噴霧干燥進風溫度 140-148°C，出風溫度75-85°C ;氣流量為8m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
[0021] 其余同實施例1。
[0022] 實施例6 : 一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌（Streptomyces fungicidicus)，接 入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度28°C， 罐壓0. 05MPa，通氣比v/v =1: 1，周期28h，轉速120rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度28°C，罐壓 0· 04MPa，通氣比 v/v =1:0. 8,發(fā)酵周期 190h，轉速 130rpm ; (2) 發(fā)酵液滅活：發(fā)酵液進行升溫滅活30min，滅活后發(fā)酵液降溫至42°C，升溫滅活溫 度為90°C ; (3) 預處理方法：降溫后的發(fā)酵液先添加質量濃度為0. 5%的殼聚糖溶液，添加量為 0.5kg /m3發(fā)酵液，混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酰胺，添加量為0.05kg/m3發(fā)酵液； (4)預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加 載體制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為〇. 6MPa，壓濾時間為Ih ;噴霧干燥進風溫度 140-150°C，出風溫度70-80°C ;氣流量為8m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
[0023] 其余同實施例1。
[0024] 實施例7 : 一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌（Streptomyces fungicidicus)，接 入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度28°C， 罐壓0. 05MPa，通氣比v/v =1: 1，周期28h，轉速120rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度30°C，罐壓 0. 06MPa，通氣比 v/v =1:1，發(fā)酵周期 200h，轉速 130rpm ; (2) 預處理方法：發(fā)酵液先添加質量濃度為0. 5%的殼聚糖溶液，添加量為0. 5kg /m3發(fā) 酵液,混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酸鈉,添加量為0. 07kg/m3發(fā)酵液，聚丙烯酸鈉為質量 濃度為〇. 1%的水溶液； (4)預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加 載體制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為〇. 7MPa，壓濾時間為2h ;噴霧干燥進風溫度 150-158°C，出風溫度85-95°C ;氣流量為9m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
[0025] 其余同實施例1。
[0026] 各個實施例制得的恩拉霉素預混劑質量指標如下表所示：

【權利要求】
1. 一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，其特征為： 是通過以下措施實現(xiàn)的： (1)發(fā)酵液制備；（2)發(fā)酵液滅活；（3)預處理方法；（4)預混劑制備。
2. -種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，其特征為： 是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌，接入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子 液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度27-30°C，罐壓0. 03-0. 06MPa，通氣比v/v =1:1，周期24-36h，轉速100-140rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度27-30°C，罐壓0. 03-0. 06MPa， 通氣比 v/v =1:0. 8-1，發(fā)酵周期 168-216h，轉速 100-140rpm ; (2) 發(fā)酵液滅活：發(fā)酵液進行升溫滅活30min，滅活后發(fā)酵液降溫至40-45°C，升溫滅活 溫度為 50°C、70°C或 90°C ; (3) 預處理方法：降溫后的發(fā)酵液先添加質量濃度為0. 5%的殼聚糖溶液，添加量為 0.5kg /m3發(fā)酵液或1.0 kg /m3發(fā)酵液，混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酸鈉或者聚丙烯酰 胺，添加量為〇. 05-0. 08kg/m3發(fā)酵液，聚丙烯酸鈉為質量濃度為0. 1%的水溶液； (4) 預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加載 體制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為〇. 5-0. 7MPa，壓濾時間為l-2h ;噴霧干燥進風溫 度 130-138°C、140-148°C 或 150-158°C，出風溫度 65-75°C、75-85°C 或 85-95°C ;氣流量為 8-9m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
3. 如權利要求2所述的一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，其特征為： 是通過以下措施實現(xiàn)的： (1) 發(fā)酵液制備：將恩拉霉素產(chǎn)生菌殺真菌鏈霉菌，接入種子罐進行種子培養(yǎng)，把種子 液按10%接種量接到發(fā)酵罐，種子培養(yǎng)條件為溫度28°C，罐壓0. 05MPa，通氣比v/v =1:1，周 期28h，轉速120rpm ;發(fā)酵培養(yǎng)條件為：溫度28°C，罐壓0. 05MPa，通氣比v/v =1:0. 90,發(fā)酵 周期192h，轉速120rpm ; (2) 發(fā)酵液滅活：發(fā)酵液進行升溫滅活30min，滅活后發(fā)酵液降溫至42°C，升溫滅活溫 度為70V ; (3) 預處理方法：降溫后的發(fā)酵液先添加質量濃度為0. 5%的殼聚糖溶液，添加量為1. 0 kg /m3發(fā)酵液，混合攪拌均勻后再加入聚丙烯酸鈉，添加量為0.07kg/m3發(fā)酵液，聚丙烯酸 鈉為質量濃度為〇. 1%的水溶液； (4) 預混劑制備：預處理后的發(fā)酵液混合攪拌均勻后，經(jīng)板框過濾、噴霧干燥、添加載體 制得恩拉霉素預混劑，板框過濾壓力為0. 5-0. 7MPa，壓濾時間為l-2h ;噴霧干燥進風溫度 140-148°C，出風溫度75-85°C ;氣流量為9m3/min ;添加的載體為稻殼粉。
4. 如權利要求2或3所述的一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，其特征為： 步驟（1)中，種子培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基包括以下成分：玉米粉30g/L，玉米漿25g/ L，玉米蛋白 粉5g/ L，硫酸銨2.5g/ L，磷酸二氫鉀1 g/ L，硫酸亞鐵0.2 g/L，碳酸鈣10 g/L。
5. 如權利要求2或3所述的一種提高恩拉霉素預混劑成品穩(wěn)定性的方法，其特征為： 步驟（1)中，發(fā)酵所用的培養(yǎng)基包括以下成分：玉米粉l〇〇g/L，玉米蛋白粉30g/L，玉米漿 l〇g/L，葡萄糖10g/L，硫酸銨3g/L，氯化鈉 lg/L，豆油lg/L，輕質碳酸興5g/L，水余量。
【文檔編號】A61K9/00GK104434777SQ201410828410
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月29日 優(yōu)先權日:2014年12月29日
【發(fā)明者】李國棟, 鄒君彪, 杜春榮, 趙明憲, 鄧健, 劉伯雅 申請人:江西興鼎科技有限公司