本發(fā)明涉及一種治療腫瘤的藥物組合，能夠逆轉(zhuǎn)順鉑耐藥。
技術(shù)背景
目前全世界的肺癌發(fā)病率與死亡率均高居惡性腫瘤首位。在肺癌的綜合治療中，化療占有重要的地位，盡管新的化療藥物不斷問(wèn)世，化療方案日趨完善，但腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性(mdr)嚴(yán)重限制化學(xué)藥物的治療效果。據(jù)統(tǒng)計(jì)，90％以上接受化療的腫瘤患者，其死亡與耐藥有關(guān)，因此對(duì)mdr的產(chǎn)生機(jī)制、檢測(cè)方法、逆轉(zhuǎn)方法的研究一直是腫瘤治療領(lǐng)域的焦點(diǎn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種治療腫瘤順鉑耐藥的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。
本發(fā)明提供了一種治療腫瘤順鉑耐藥的藥物組合物，該藥物組合物包含作為活性成分的黃芪和白花蛇舌草。
該組合物中，以黃芪為君藥，黃芪健脾補(bǔ)氣，亦又補(bǔ)腎，《本草綱目》云：芪者，長(zhǎng)也，黃芪色黃，為補(bǔ)藥之長(zhǎng)，故名。所以自古至今，黃芪均以補(bǔ)藥之長(zhǎng)率先，尤以補(bǔ)脾腎為重，此其第一要藥，用量當(dāng)重，生用者，取其益氣固表之功，固表者，益衛(wèi)氣而防外邪也。以白花蛇舌草為臣藥，其藥味苦、淡,性寒。主要功效是清熱解毒、消痛散結(jié)、利尿除濕。兩藥合用共奏“益氣解毒”之功效。因此對(duì)于本虛邪實(shí)的腫瘤有治療作用。
現(xiàn)代藥理表明：黃芪具有增強(qiáng)肌體的免疫功能，強(qiáng)心、降壓、降血糖、利尿、抗衰老、抗腫瘤、抗疲勞、抗病毒、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等作用。白花蛇舌草具有清熱解毒、消痛散結(jié)、利尿除濕。尤善治療各種類型炎癥。這些藥理研究為本品用于治療腫瘤疾病提供了科學(xué)依據(jù)。
在本發(fā)明提供的藥物組合物中，所述黃芪和白花蛇舌草的原料藥材的重量份配比可以為：黃芪9～30份，白花蛇舌草3～10份；優(yōu)選為黃芪12～20份，白花蛇舌草5～8份；更優(yōu)選為黃芪15份，白花蛇舌草6份。
在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，所述藥物組合物包含作為活性成分的黃芪和白花蛇舌草水提浸膏。
在本發(fā)明提供的藥物組合物中，還可以含有藥劑學(xué)可接受的輔料。其中，所述藥劑學(xué)可接受的輔料可以包括：乳糖、糊精、淀粉、可壓性淀粉、微晶纖維素、甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、微粉硅膠和木糖醇中的一種或多種。
根據(jù)本發(fā)明提供的藥物組合物，其中，所述藥物組合物可以為口服劑型，優(yōu)選為口服液、顆粒劑、片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、煎膏劑和糖漿劑。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例：觀察對(duì)耐順鉑人肺腺癌a549/ddp細(xì)胞多藥耐藥基因調(diào)控作用的研究
1材料與方法
1.1藥物:由黃芪15g、白花蛇舌草6g二味中藥組成，水煎濃縮相當(dāng)于原生藥材1.5g/ml的藥液，冷卻裝入滅菌藥瓶，置4℃冰箱備用。
1.2動(dòng)物與分組:spf級(jí)健康balb/c雄性裸鼠，60只，4～6周齡，體質(zhì)量18～20g，由中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)scxk-(軍)2014-0004。
1.3細(xì)胞系:人肺腺癌細(xì)胞系a549，耐順鉑(ddp)肺腺癌細(xì)胞系。
1.4a549裸鼠皮下移植瘤模型的建立:體外復(fù)蘇、培養(yǎng)a549細(xì)胞，在細(xì)胞的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期收集細(xì)胞。1000r/min離心5min，pbs溶液洗滌兩次，離心棄上清，離心管外周以冰袋維持溫度在4℃左右，以此保持瘤細(xì)胞的活性。用生理鹽水稀釋，調(diào)整細(xì)胞濃度到5×106cell/ml。小鼠隨機(jī)分為樣品高、低劑量組和對(duì)照組，每組20只。在各組中每只小鼠右前腋下皮下接種0.2ml。待所有裸小鼠的皮下腫瘤的平均直徑達(dá)到約5mm時(shí)開始ig給藥，每次給藥間隔24h。小鼠給藥劑量分別為40、20g/kg，對(duì)照組給予等容量生理鹽水。10d后眼眶取血法采血。
1.4含藥血清的制備:末次給藥1h后，小鼠稱質(zhì)量，眼眶取血法采血，8000r/min離心15min，取淡藍(lán)色血清于2mlep管中，標(biāo)識(shí)組別；14000r/min高速離心5min，重復(fù)2次。分別提取上清，分裝，56℃水浴滅活30min，用0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌，-20℃保存。
1.5細(xì)胞傳代與培養(yǎng):常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法
1.6對(duì)a549/ddp細(xì)胞耐藥基因p-gp表達(dá)的影響:組織樣品加適量預(yù)冷的蛋白裂解液ripa，勻漿，14000r/min離心15min，上清轉(zhuǎn)入新管。bca法測(cè)定蛋白含量。用pbs調(diào)至等濃度，加6×sds上樣緩沖液，沸水浴5min備用。取100μg處理好的樣品，按《分子克隆》方法進(jìn)行sds-page電泳，積層膠6％，分離膠8％，膠厚0.75mm。膠于轉(zhuǎn)移液(含甲醇15％)中平衡10min；從下至上分別放置濾紙、膠、pvdf膜(0.45μm)、濾紙，夾子夾好放入倒好轉(zhuǎn)移液的轉(zhuǎn)移槽中，250ma轉(zhuǎn)膜90min。將膜取出，放入含5％脫脂奶粉的pbst，室溫封閉2h。取出膜，對(duì)應(yīng)一抗按照抗體說(shuō)明書稀釋，室溫結(jié)合2h；pbst洗3次，每次10min；二抗1:10000稀釋，室溫結(jié)合1h；分別用pbst和pbs各洗3次，每次10min。等比例混合顯色基質(zhì)a液和b液，均勻滴加膜上，靜置1min，放入暗箱成像。
1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:使用spss11.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。計(jì)量資料比較采用單因素方差分析，數(shù)據(jù)以x±s表示。
2結(jié)果:a549/ddp細(xì)胞經(jīng)不同濃度含藥血清作用72h后收集細(xì)胞提取總蛋白，westernblot檢測(cè)p-gp蛋白表達(dá)量的變化，結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，隨著樣品含藥血清藥物濃度的增加，p-gp蛋白表達(dá)逐漸減弱(p＜0.05)，說(shuō)明樣品能夠抑制多藥耐藥蛋白的表達(dá)，且隨著藥物濃度的增加，蛋白表達(dá)抑制的越明顯，且與劑量呈負(fù)相關(guān)。
表1樣品對(duì)a549/ddp細(xì)胞p-gp蛋白表達(dá)的影響(x±s，n＝20)
與對(duì)照組比較：*p＜0.05
結(jié)論：該組合物可逆轉(zhuǎn)肺癌耐藥，可能機(jī)制為通過(guò)抑制細(xì)胞膜上p-gp阻止細(xì)胞對(duì)順鉑的輸出，從而聚集細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度達(dá)到有效逆轉(zhuǎn)肺癌耐藥的效果。