本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及原人參三醇(PPT)在抑制血管新生方面的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

新生血管是從一般血管新伸出的螺旋狀毛細(xì)血管。在正常的生理過程中，人體在懷孕、創(chuàng)傷等特定條件下，才會(huì)出現(xiàn)新生的血管，除此之外如果有新生血管出現(xiàn)，則很可能會(huì)引發(fā)某些疾病，這些疾病總稱為血管新生疾病，如腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病變等。

新生血管與一般血管的生理功能相似，其主要作用是通過血液將氧氣與養(yǎng)分輸送到全身各處的組織細(xì)胞，如果腫瘤周圍有大量的新生血管，它就會(huì)將腫瘤細(xì)胞誤認(rèn)為正常細(xì)胞，不斷輸送氧氣與養(yǎng)分，使腫瘤細(xì)胞不斷增殖體積增大以至于到人體免疫系統(tǒng)無法控制的階段。此外，新生血管也成為腫瘤細(xì)胞尤其是惡性腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的途徑。慢性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎或者退行性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病與新生血管也有密切的關(guān)系，原來應(yīng)該沒有血管存在的關(guān)節(jié)軟骨由于未知原因而異常變化，形成新生血管，使得軟骨受到侵蝕，造成關(guān)節(jié)變形或疼痛。

新生血管引起的疾病已經(jīng)受到了越來越多的科研人員和醫(yī)務(wù)工作者的重視，因此，具有抑制血管新生作用的藥物分子的研發(fā)成為熱點(diǎn)工作。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種新的用于治療或預(yù)防血管新生疾病的藥物組合物。本發(fā)明的其他目的在于提供原人參三醇(PPT)在制備用于治療或預(yù)防血管新生疾病或抑制血管新生的藥物中的用途。此外，本發(fā)明還提供原人參三醇(PPT)在制備抗腫瘤藥物中的用途。

本發(fā)明人經(jīng)過深入研究發(fā)現(xiàn)，原人參三醇(PPT)具有強(qiáng)的血管新生抑制作用，且其血管新生抑制作用明顯強(qiáng)于公認(rèn)的血管新生抑制物質(zhì)人參皂苷Rg3，從而完成了本發(fā)明。

即，本發(fā)明包括：

1.一種用于治療或預(yù)防血管新生疾病、或者用于抑制血管新生的藥物組合物，其包括：作為活性成分的原人參三醇(PPT)，以及藥學(xué)可接受的載體。

2.根據(jù)項(xiàng)1所述的藥物組合物，其中，所述原人參三醇(PPT)作為唯一活性成分。

3.根據(jù)項(xiàng)1或2所述的藥物組合物，其中，所述血管新生疾病是惡性實(shí)體腫瘤。

4.根據(jù)項(xiàng)1～3中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，該藥物組合物用于抑制血管新生。

5.根據(jù)項(xiàng)1～4中任一項(xiàng)所述的藥物組合物，其中，該藥物組合物中，原人參三醇(PPT)的含量為0.1重量％以上。

6.原人參三醇(PPT)在制備用于治療或預(yù)防血管新生疾病的藥物中的用途。

7.根據(jù)項(xiàng)6所述的用途，其中，原人參三醇(PPT)作為所述藥物的唯一活性成分。

8.根據(jù)項(xiàng)6或7所述的用途，其中，所述藥物用于抑制血管新生。

9.根據(jù)項(xiàng)6～8中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述原人參三醇(PPT)在所述藥物中的含量為0.1重量％以上。

10.根據(jù)項(xiàng)6～9中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述血管新生疾病為惡性實(shí)體腫瘤。

11.原人參三醇(PPT)在制備用于抑制血管新生的藥物中的用途。

12.根據(jù)項(xiàng)11所述的用途，其中，原人參三醇(PPT)作為所述藥物的唯一活性成分。

13.根據(jù)項(xiàng)11或12所述的用途，其中，所述原人參三醇(PPT)在所述藥物中的含量為0.1重量％以上。

14.原人參三醇(PPT)在制備抗腫瘤藥物中的用途。

15.根據(jù)項(xiàng)14所述的用途，其中，原人參三醇(PPT)作為所述藥物的唯一活性成分。

16.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的用途，其中，所述腫瘤是肺癌、結(jié)腸癌、肝癌、乳腺癌或胃癌。

17.根據(jù)項(xiàng)14～16中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述原人參三醇(PPT)在所述藥物中的含量為0.1重量％以上。

18.根據(jù)項(xiàng)14～17中任一項(xiàng)所述的用途，其中，所述腫瘤為惡性實(shí)體腫瘤。

根據(jù)本發(fā)明，能夠提供顯著抑制血管新生的用于治療或預(yù)防血管新生疾病的藥物組合物，以及原人參三醇(PPT)在制備用于治療或預(yù)防血管新生疾病、或者用于抑制血管新生的的藥物中的用途。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。在無沖突的情況下，本說明書中的科學(xué)術(shù)語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員通常理解的含義，如有沖突應(yīng)以本說明書中的定義為準(zhǔn)。

首先，在一個(gè)方面中，本發(fā)明一種藥物組合物(本發(fā)明的藥物組合物)，其包括：作為活性成分的原人參三醇(PPT)，以及藥學(xué)可接受的載體。上述本發(fā)明的藥物組合物可用于治療或預(yù)防血管新生疾病、和/或用于抑制血管新生、和/或抗腫瘤。

在本說明書中，原人參三醇(PPT)是指下述化學(xué)式1所述的化合物。

【化學(xué)式1】

上述原人參三醇(PPT)是已知化合物，可以采用本技術(shù)領(lǐng)域已知的方法來制備，例如可以通過酶解人參皂苷Re來制備原人參三醇(PPT)。

本發(fā)明的藥物組合物可以包含原人參三醇(PPT)作為唯一活性成分，也可以包含其他活性成分。

作為所述的藥學(xué)可接受的載體，可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)劑型的需要等常規(guī)地進(jìn)行選擇。例如，在制備口服液體制劑(液體藥物組合物)時(shí)，可以將活性成分溶解或懸浮于適當(dāng)?shù)囊后w(例如水)中。在制備口服固體制劑(固體藥物組合物)時(shí)，可以在向活性成分中加入賦形劑以及視需要的粘合劑、崩解劑、滑潤劑、著色劑、矯味劑等后，按照常規(guī)方法制成片劑、包衣片劑、顆粒劑、細(xì)粒劑、散劑、膠囊劑或丸劑等。作為賦形劑，可使用例如乳糖、玉米淀粉、白糖、葡萄糖、山梨糖醇、結(jié)晶纖維素、二氧化硅等；作為粘合劑，可使用例如聚乙烯醇、乙基纖維素、甲基纖維素、阿拉伯膠、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素等；作為滑潤劑，可使用例如硬脂酸鎂、滑石、二氧化硅等；作為著色劑，可使用允許在醫(yī)藥品中添加的著色劑；作為矯味劑，可使用可可末、薄荷腦、芳香酸、薄荷油、龍腦、桂皮粉等。當(dāng)然，也可以在上述片劑、顆粒劑上包覆糖衣、明膠衣、以及其它的必要外衣。

新生血管是從一般血管新伸出的螺旋狀毛細(xì)血管。在正常的生理過程中，人體在懷孕、創(chuàng)傷等特定條件下，才會(huì)出現(xiàn)新生的血管，除此之外如果有新生血管出現(xiàn)，則很可能會(huì)引發(fā)某些疾病，這些疾病總稱為血管新生疾病，如腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、糖尿病性視網(wǎng)膜病變等。

本說明書中，“抗腫瘤”包括殺滅腫瘤細(xì)胞、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤生長、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移、抑制毛細(xì)血管增生、改善腫瘤預(yù)后或防止腫瘤復(fù)發(fā)等。

在本說明書，作為惡性實(shí)體腫瘤，可列舉例如胰癌、胃癌、大腸癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、腎癌、腦腫瘤、頭頸部癌、食道癌、皮膚癌、肝癌、子宮癌、子宮頸癌、膀胱癌、甲狀腺癌、精巢腫瘤、絨毛癌、骨肉瘤、軟組織肉瘤和卵巢癌等。

本發(fā)明的口服藥物組合物可用于腫瘤(特別是惡性實(shí)體腫瘤)的治療和/或腫瘤(特別是惡性實(shí)體腫瘤)轉(zhuǎn)移的治療，特別是本發(fā)明的藥物組合物可用于轉(zhuǎn)移性腫瘤的治療。在該用途中，原人參三醇(PPT)優(yōu)選作為唯一活性成分。

在本說明書中，“腫瘤的治療”是指：對原位腫瘤的治療。“腫瘤轉(zhuǎn)移的治療”是指對轉(zhuǎn)移瘤以及轉(zhuǎn)移過程的治療，例如抑制腫瘤轉(zhuǎn)移?！稗D(zhuǎn)移性腫瘤”是指：腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位侵入淋巴管，血管或其他途經(jīng)被帶到其它組織、器官處繼續(xù)生長，形成與原發(fā)部位腫瘤具有相同類型的腫瘤或異質(zhì)瘤，該過程稱為轉(zhuǎn)移，所形成的同質(zhì)或異質(zhì)腫瘤稱為轉(zhuǎn)移瘤或轉(zhuǎn)移癌，在該過程中，由于轉(zhuǎn)移瘤處于初期，急需大量的新生血管以供應(yīng)其迅速生長所需的營養(yǎng)等，我們把該過程及其過程中新形成的腫瘤統(tǒng)稱為轉(zhuǎn)移性腫瘤。

在本發(fā)明的藥物組合物中，原人參三醇(PPT)的含量可以為0.1重量％以上，優(yōu)選為0.2重量％以上，更優(yōu)選為0.5重量％以上，更優(yōu)選為1重量％以上，更優(yōu)選為2重量％以上，更優(yōu)選為5重量％以上，更優(yōu)選為10重量％以上。

在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供原人參三醇(PPT)在制備用于治療或預(yù)防血管新生疾病、或者用于抑制血管新生的藥物、或者抗腫瘤(例如本發(fā)明的藥物組合物)中的用途(本發(fā)明的用途)。

此外，在另一方面中，本發(fā)明還提供一種治療對象中的血管新生疾病的方法、或抑制對象中的血管新生的方法、或者治療對象中的腫瘤的方法，其包括給所述對象施用本發(fā)明的藥物組合物的步驟。

這里，所述對象可以是哺乳動(dòng)物，例如可以是人、大鼠、兔、羊、豬、牛、貓、狗、猴等，優(yōu)選為人。

本發(fā)明的藥物組合物，可以口服或非口服施用。施用量因癥狀程度、患者年齡、性別、體重、敏感性差異、施用方法、施用時(shí)期、施用間隔、藥物制劑的性質(zhì)、有效成分的種類等而異，無特殊限制，但通常成人(體重60Kg)每日1～3000mg、優(yōu)選10～1000mg、更優(yōu)選100～500mg，上述施用量通常可每日分1～3次施用。較好的劑量是每日300mg左右。

實(shí)施例

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的說明。下面給出的實(shí)施例，是為了便于理解本發(fā)明而非對本發(fā)明的限定。

實(shí)施例1原人參三醇(PPT)對堿燒傷角膜血管新生的抑制作用

本實(shí)驗(yàn)參考青島大學(xué)碩士學(xué)位論文《雷帕霉素脂質(zhì)體滴眼液對大鼠角膜新生血管抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究》(2007，作者：張振華)，略作修改。

1.模型制作方法

1)麻醉方法采用10％的水合氯醛(3mg/kg)對大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉，0.4％鹽酸奧布卡因滴眼做局部麻醉。

2)堿燒傷步驟將大鼠麻醉后用棉簽拭去過多水分，將統(tǒng)一規(guī)格直徑3mm的單層濾紙浸入氫氧化鈉溶液中1min，使其達(dá)飽和狀態(tài)，吸水紙吸除多余液體，將濾紙片置于大鼠角膜中央1min后取下，用生理鹽水沖洗結(jié)膜囊1min。用氯霉素滴眼液點(diǎn)眼，此時(shí)在角膜中央可見圓形灰白色角膜燒傷區(qū)。術(shù)后氯霉素滴眼液每天滴眼四次，預(yù)防感染。

2.動(dòng)物分組及給藥

健康成年清潔型wistar大鼠48只，裂隙燈顯微鏡下檢查無眼前節(jié)病變。堿燒傷空白對照組16只。堿燒傷后氯霉素滴眼液滴眼每天四次。按角膜堿燒傷后1d、4d、7d、14d隨機(jī)分成4組，每組4只(8只眼)。

堿燒傷原人參三醇(PPT)治療組16只。堿燒傷后使用原人參三醇(PPT)溶液(50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)每天滴眼三次，間隔氯霉素滴眼液每天滴眼四次。按角膜堿燒傷后1d、4d、7d、14d隨機(jī)分成4組，每組4只(8只眼)。

堿燒傷人參皂苷Rg3(R型)治療組16只。堿燒傷后使用人參皂苷Rg3(R型)溶液(50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL)每天滴眼三次，間隔氯霉素滴眼液每天滴眼四次。按角膜堿燒傷后1d、4d、7d、14d隨機(jī)分成4組，每組4只(8只眼)。

48只大鼠均于堿燒傷后1d，每日行裂隙燈顯微鏡檢查，用YDY-91A眼科多功能圖像處理系統(tǒng)攝影，并按照公式1計(jì)算CNV(角膜新生血管)生長面積。C為CNV網(wǎng)的跨圓周鐘點(diǎn)數(shù)，I為CNV從角膜緣深入角膜的長度，r為大鼠角膜半徑(r＝3mm)。

公式1：C/12×3.1416×[r²-(r-I)²]

3.結(jié)果評(píng)價(jià)

按照公式1計(jì)算不同實(shí)驗(yàn)組、不同觀察天數(shù)大鼠CNV面積如表1所示：

表1:堿燒傷后各組大鼠CNV面積的比較

P值均滿足P<0.01

由表1可知，治療組在整個(gè)觀察期僅有少量新生血管生長且與給藥濃度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)；燒傷空白組燒傷1d后，見損傷區(qū)角膜上皮水腫，增厚，角膜邊緣血管充血，4d時(shí)，角膜上皮缺失，角鞏膜邊緣處有CNV呈現(xiàn)細(xì)絲狀伸入角膜區(qū)域，7d時(shí)CNV顯著變長，面積增加，血管分支生長，隨后CNV面積增長減慢，14d時(shí)，基質(zhì)層脫落，腫脹程度減緩，CNV交織成網(wǎng)狀，生長區(qū)域穩(wěn)定。堿燒傷人參皂苷Rg3(R型)治療組燒傷1d后，角膜上皮輕微水腫，基質(zhì)略腫脹增厚，角膜邊緣血管充血，第4d時(shí)，角膜上皮缺失，角鞏膜邊緣處有CNV呈現(xiàn)細(xì)絲狀伸入角膜區(qū)域，比燒傷空白組稀疏，7d時(shí)，CNV顯著變長，面積增加，血管開始分支生長，但新生血管比燒傷空白組血管細(xì)、數(shù)量少，14d時(shí)，少量新生血管達(dá)到堿燒傷區(qū)域，隨后CNV退化。堿燒傷原人參三醇(原人參三醇(PPT))治療組燒傷1d后，角膜上皮輕微水腫，基質(zhì)略腫脹增厚，角膜緣血管充血，第4d時(shí)，角膜上皮缺失，角鞏膜邊緣處有少量CNV呈現(xiàn)細(xì)絲狀伸入角膜區(qū)域，且比堿燒傷人參皂苷Rg3(R型)治療組血管稀疏，覆蓋面積小，7d時(shí)，CNV變長，面積增加，血管開始分支生長，但明顯比人參皂苷Rg3(R型)治療組新生血管生長緩慢，14d時(shí)，僅少量新生血管達(dá)到堿燒傷區(qū)域，其后CNV退化程度比人參皂苷Rg3(R型)治療組更明顯。

上述結(jié)果表明治療組的大鼠眼睛滴入原人參三醇(PPT)溶液，CNV面積相比空白對照組以及人參皂苷Rg3(R型)治療組明顯減小，血管的數(shù)量少，血管細(xì)，并且隨著原人參三醇(PPT)給藥濃度的增加，CNV面積減小，對新生血管生長抑制作用增強(qiáng)，P<0.01，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明原人參三醇(PPT)能顯著抑制角膜新生血管的生長，且抑制效果明顯強(qiáng)于Rg3(R型)。

實(shí)施例2原人參三醇(PPT)對角膜微囊袋法建立鼠角膜血管形成的抑制作用

本實(shí)驗(yàn)參考中南大學(xué)博士學(xué)位論文《靶向VEGFR-1脫氧核酶抑制血管生成及腫瘤生長的實(shí)驗(yàn)研究》(2014，作者：周琴)，略作修改。

1.模型制作方法

1)選取7周齡左右大的雄性大鼠42只，隨機(jī)分為7組，每組6只。

2)提前準(zhǔn)備含30μM的VEGF的溶液中浸泡的硝化纖維濾膜顆粒。濾膜置于管內(nèi)，種植前在冰上放置2小時(shí)。建立角膜血管新生模型。

3)模型的建立：用顯微剪在大鼠角膜中央剪一個(gè)局部的板層口。

4)顯微鑷子在切口的下層鈍性分離并延伸至下方角膜緣。

5)形成一個(gè)角膜基質(zhì)微囊袋將準(zhǔn)備好的硝化纖維濾膜植入微囊袋中，使其距離角膜緣新生血管可在幾天后通過顯微鏡和電腦圖像分析直接觀察。

2.動(dòng)物模型給藥

1)在放置顯微濾膜顆粒的當(dāng)天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)分為4組：

實(shí)驗(yàn)組1經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射50μg原人參三醇(PPT)溶(原人參三醇(PPT)-50)；

實(shí)驗(yàn)組2經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射50μg人參皂苷Rg3(R型)溶液(人參皂苷Rg3(R型)-50)；

實(shí)驗(yàn)組3經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射100μg原人參三醇(PPT)溶液(原人參三醇(PPT)-100)；

實(shí)驗(yàn)組4經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射100μg人參皂苷Rg3(R型)溶液(人參皂苷Rg3(R型)-100)；

實(shí)驗(yàn)組5經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射200μg原人參三醇(PPT)溶液(原人參三醇(PPT)-200)；

實(shí)驗(yàn)組6經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射200μg人參皂苷Rg3(R型)溶液(人參皂苷Rg3(R型)-200)；

對照組經(jīng)微囊內(nèi)緊靠濾膜旁注射等量生理鹽水(Saline)；

2)5d后，分離角膜并通過光學(xué)顯微鏡分析血管的生長面積及血管的數(shù)目評(píng)價(jià)原人參三醇(PPT)以及人參皂苷Rg3(R型)的生物學(xué)活性。新生血管最多的面積被確定后，200×的視野下進(jìn)行計(jì)數(shù)(是否血管形成的數(shù)量和面積不同)

3.結(jié)果分析

表2:原人參三醇(PPT)對大鼠角膜新生血管面積的影響

注：表中數(shù)值的誤差類型為標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表3:原人參三醇(PPT)對角膜新生血管數(shù)量的影響

注：表中數(shù)值的誤差類型為標(biāo)準(zhǔn)偏差。

表2和表3展示了新生血管的區(qū)域和數(shù)量的變化趨勢。圖中可以看出：相對于生理鹽水組，和Rg3(R型)實(shí)驗(yàn)組。原人參三醇(PPT)實(shí)驗(yàn)組減少了新生血管面積和血管數(shù)量，各實(shí)驗(yàn)組與生理鹽水組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；且新生血管抑制率隨給藥濃度增加而增加，但100μg、200μg給藥劑量的血管面積及血管數(shù)量差異不顯著(P>0.05)，說明給藥劑量已至上限。綜上，通過角膜微囊袋法成功構(gòu)建角膜血管形成模型，顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)原人參三醇(PPT)顯著抑制了角膜新生血管形成的面積和數(shù)量(P<0.05)。

還需要說明的是，在可實(shí)施且不明顯違背本發(fā)明的主旨的前提下，在本說明書中作為某一技術(shù)方案的構(gòu)成部分所描述的任一技術(shù)特征或技術(shù)特征的組合同樣也可以適用于其它技術(shù)方案；并且，在可實(shí)施且不明顯違背本發(fā)明的主旨的前提下，作為不同技術(shù)方案的構(gòu)成部分所描述的技術(shù)特征之間也可以以任意方式進(jìn)行組合，來構(gòu)成其它技術(shù)方案。本發(fā)明也包含在上述情況下通過組合而得到的技術(shù)方案，并且這些技術(shù)方案相當(dāng)于記載在本說明書中。

以上通過具體實(shí)施方式和實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了說明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，這些并非意圖對本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定，本發(fā)明的范圍應(yīng)由權(quán)利要求書確定。

工業(yè)實(shí)用性

本發(fā)明的藥物組合物能夠顯著抑制血管新生，因而其作為用于治療或預(yù)防血管新生疾病的藥物是有用的。