本發(fā)明是基于申請日為2013年2月28日，申請?zhí)枮椤?01380022489.6”(國際申請?zhí)枮閜ct/us2013/028456)，發(fā)明名稱為“抗基質(zhì)金屬蛋白酶9的抗體”的專利申請的分案申請。相關(guān)申請案的交叉參考本申請案主張2012年2月29日申請的美國臨時申請案61/605,181、2013年1月22日申請的美國臨時申請案61/755,444及2012年2月29日申請的pct申請案第pct/us2012/027160號的優(yōu)先權(quán)。這些文獻(xiàn)的內(nèi)容以全文引用的方式并入本文中。有關(guān)依據(jù)聯(lián)邦政府資助的研究作出的發(fā)明的權(quán)利的聲明不適用。本發(fā)明屬于細(xì)胞外酶、細(xì)胞外基質(zhì)酶、蛋白酶及免疫學(xué)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)屬于涉及到細(xì)胞外基質(zhì)形成和重塑的細(xì)胞外酶家族。這些酶含有一個保守的催化結(jié)構(gòu)域，其中鋅原子經(jīng)三個組氨酸殘基配位。已知這一家族的超過20個成員，組織成包括膠原酶類、明膠酶類、基質(zhì)溶解素類、基質(zhì)溶素類、釉質(zhì)溶解素類及膜mmp類在內(nèi)的多個群組。mmp2和mmp9屬于基質(zhì)金屬蛋白酶的明膠酶群組。除含有大多數(shù)mmp共有的信號肽、前肽、催化結(jié)構(gòu)域、鋅結(jié)合結(jié)構(gòu)域及血紅素結(jié)合蛋白樣結(jié)構(gòu)域外，明膠酶還含有多個纖連蛋白樣結(jié)構(gòu)域和一個o-糖基化結(jié)構(gòu)域。mmp涉及到多種疾病。mmp抑制劑部分由于特異性和功效而并不完全令人滿意。因此，需要具有特異性并且有效的mmp抑制劑。癌癥以及炎癥性疾病和自體免疫性疾病，例如結(jié)腸直腸癌、ibd(包括克羅恩氏病(crohn'sdisease，cd)、潰瘍性結(jié)腸炎(uc)及未定型結(jié)腸炎)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(ra)等的治療并不完全令人滿意。因此，需要有效用于這些疾病，特別是用于可用治療劑無效的個體的治療。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供涉及結(jié)合到基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mmp9)蛋白(又稱為明膠酶-b)的結(jié)合蛋白(例如抗體和其抗原結(jié)合片段)的組合物和使用方法。所述結(jié)合蛋白通常為抗體或其片段(例如，抗原結(jié)合片段)并且通常含有免疫球蛋白(ig)重鏈(或其功能片段)和ig輕鏈(或其功能片段)。重鏈通常為igg，例如igg1或igg4，或其經(jīng)修飾型式。輕鏈通常為κ鏈。mmp9結(jié)合蛋白(例如抗體)為特異性結(jié)合到mmp9并且不結(jié)合其它相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶的結(jié)合蛋白。這些mmp9結(jié)合蛋白可用于需要或希望獲得對mmp9的特異性調(diào)節(jié)(例如，抑制)，例如而不直接地影響其它基質(zhì)金屬蛋白酶的活性的應(yīng)用中。因此，在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，抗mmp9抗體或其片段是mmp9活性的特異性抑制劑。在一些方面中，本文所揭示的mmp9結(jié)合蛋白將可用于抑制mmp9，同時允許其它相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶的正常功能。所述抗體和片段可參照其氨基酸序列或其部分，和/或各種功能(例如與mmp9或其特定表位的結(jié)合特異性，或與特定抗體競爭結(jié)合的能力)和/或活性(例如抑制mmp9的能力，例如非競爭性抑制)進(jìn)行描述。所述抗體和片段可作為一種醫(yī)藥組合物的一部分，其中結(jié)合到基質(zhì)金屬蛋白酶9的抗體和其片段包含具有氨基酸序列為seqidno:15的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)的重鏈可變(vh)區(qū)，及醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑。所述vh區(qū)可另外包含氨基酸序列為seqidno:13和/或14的cdr。vh區(qū)也可包含如seqidno:3、5、6、7或8中所陳述的氨基酸序列。vh區(qū)也可包含與如seqidno:3、5、6、7或8中所陳述的氨基酸序列具有95％序列一致性的氨基酸序列。在另一個實(shí)施例中，包含結(jié)合到基質(zhì)金屬蛋白酶9的抗體和其抗原結(jié)合片段的所揭示的醫(yī)藥組合物包含具有氨基酸序列為seqidno:18的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)的輕鏈可變(vl)區(qū)，及醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑。所述vl區(qū)可另外包含氨基酸序列為seqidno:16和/或17的cdr。vl區(qū)也可包含如seqidno:4、9、10、11或12中所陳述的氨基酸序列。vl區(qū)也可包含與如seqidno:4、9、10、11或12中所陳述的氨基酸序列具有95％序列一致性的氨基酸序列。在一個實(shí)施例中，vh區(qū)具有seqidno:7中所陳述的氨基酸序列并且vl區(qū)具有seqidno:12中所陳述的氨基酸序列。在另一個實(shí)施例中，mmp9結(jié)合蛋白包含vh區(qū)，其包含具有選自由seqidno:13、14、15、34、35、36及47組成的群組的氨基酸序列的cdr；及vl區(qū)，其具有含選自由seqidno:16、17、18、37、38、39、42、43、44及48組成的群組的氨基酸序列的cdr。另外，mmp9結(jié)合蛋白可包含vh區(qū)，其具有選自由seqidno:1、3、5、6、7、8、34、35、36及46組成的群組的氨基酸序列；及vl區(qū)，其具有選自由seqidno:2、4、9、10、11、12、37、38、39、42、43、44及45組成的群組的氨基酸序列。此外，mmp9結(jié)合蛋白可包含與選自由seqidno:30、32、46及47組成的群組的氨基酸序列具有95％序列一致性的vh區(qū)；及與選自由seqidno:31、33、41、45及48組成的群組的氨基酸序列具有95％序列一致性的vl區(qū)。此外，mmp9結(jié)合蛋白可包含具有選自由seqidno:30、32、46及47組成的群組的氨基酸序列的vh區(qū)；及具有選自由seqidno:31、33、41、45及48組成的群組的氨基酸序列的vl區(qū)。本發(fā)明的另一實(shí)施例涉及一種醫(yī)藥組合物，其包含特異性結(jié)合到mmp9的表位的分離的抗體或其片段，其中所述表位包含在mmp9的區(qū)域內(nèi)的氨基酸殘基，所述區(qū)域由seqidno:27的殘基104-119、殘基159-166或殘基191-202組成；及醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑。在一個方面中，所述表位包含seqidno:27的e111、d113、r162或i198。在另一個實(shí)施例中，所揭示的醫(yī)藥組合物另外包含一或多種選自由以下組成的群組的治療劑：消炎劑、免疫治療劑、化學(xué)治療劑、抗癌劑、抗纖維化藥劑或其組合。治療劑的實(shí)例包括(但不限于)白蛋白結(jié)合型紫杉醇(nab-paclitaxel)、mfolfox6、folfiri、卡鉑(carboplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、培美曲塞(pemetrexed)、貝伐單抗(bevacizumab)、抗賴氨酰氧化酶樣蛋白2(loxl2)抗體、抗盤狀結(jié)構(gòu)域受體1(ddr1)抗體或其組合。還提供了例如使用非競爭性抑制mmp9的藥劑抑制個體中的mmp9活性和/或治療個體的疾病或病況的方法，及用于這些方法中的藥劑(例如上述抗mmp9抗體和其它mmp9結(jié)合蛋白中的任一種)。所述方法一般是通過向個體投予例如有效量的mmp9結(jié)合蛋白，例如，如本文所提供的mmp9結(jié)合抗體或其片段，例如上述結(jié)合蛋白或片段中的任一種來進(jìn)行。所述抗體或片段一般特異性結(jié)合到并且非競爭性抑制mmp9，通常由此使個體中的mmp9活性得到抑制。在一些情形中，所述抗體或片段為結(jié)合在催化結(jié)構(gòu)域外部的mmp9，例如結(jié)合于上述表位之一中的抗體或片段。在一些情形中，所述抗體或片段實(shí)質(zhì)上不結(jié)合到除mmp9外的mmp蛋白和/或?qū)嵸|(zhì)上不結(jié)合到mmp2。另外提供了檢測或監(jiān)測mmp9活性的方法，所述方法包含使樣品與mmp9結(jié)合蛋白接觸，及評估m(xù)mp9結(jié)合蛋白-mmp9復(fù)合物的存在或不存在；其中不存在所述mmp9結(jié)合蛋白-mmp9復(fù)合物指示所述樣品不具有所述mmp9活性，并且存在所述mmp9結(jié)合蛋白-mmp9復(fù)合物指示所述樣品具有所述mmp9活性。mmp9活性可通過使用本文所揭示的mmp9結(jié)合蛋白中的任一種來檢測。還提供了此處所揭示的醫(yī)藥組合物的方法和用途，其中向患有mmp-9相關(guān)性疾病或病況的有需要的個體投予有效抑制所述個體中的mmp9活性的有效量的所揭示的抗體或其片段，或包含所揭示的抗體或其片段的醫(yī)藥組合物。mmp9相關(guān)性疾病或病況的實(shí)例包括(但不限于)癌癥、自體免疫性、炎癥性或纖維化疾病或病況。mmp9相關(guān)性癌癥的實(shí)例包括(但不限于)胰臟癌、食管胃腺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、肺腺癌、胃腺癌、結(jié)腸直腸癌瘤、胰臟腺癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌瘤、結(jié)腸直腸癌、結(jié)腸直腸腺癌或肝細(xì)胞癌瘤。mmp9相關(guān)性自體免疫性或炎癥性疾病或病況的實(shí)例為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病(ibd)、敗血病、多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良、狼瘡、過敏癥或哮喘。ibd的實(shí)例包括(但不限于)潰瘍性結(jié)腸炎(uc)、克羅恩氏病(cd)或未定型結(jié)腸炎。在一些實(shí)例中，所述抗體或其醫(yī)藥組合物是以約1mg/kg到約28mg/kg的劑量投予。在一些實(shí)例中，所述抗體或其醫(yī)藥組合物是以介于100mg/kg體重或約100mg/kg與1800mg/kg或約1800mg/kg之間的劑量投予。在一些實(shí)例中，所述抗體或其醫(yī)藥組合物是以100、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700或1800mg/kg體重或約100、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700或1800mg/kg的劑量投予。在一些實(shí)例中，所述抗體是以一周、兩周或三周的間隔，或每一周、兩周或三周一次投予。在一些實(shí)例中，所述抗體或其片段是靜脈內(nèi)或皮下投予的。在一些實(shí)施例中，所述抗體或其醫(yī)藥組合物是作為單藥療法單獨(dú)投予。在其它實(shí)施例中，所述抗體或其醫(yī)藥組合物是作為與一或多種其它治療劑的組合療法的一部分投予的。所述治療劑包括(但不限于)消炎劑、免疫治療劑、化學(xué)治療劑、抗癌劑、抗纖維化藥劑或其組合。所述一或多種其它治療劑可與所述抗體或其片段同時或依序投予。附圖說明圖1示出了小鼠單克隆抗mmp9抗體(ab0041)的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列，以及重鏈的人類化變體(vh1-vh4)的氨基酸序列，其經(jīng)比對以顯示由人類化引起的構(gòu)架氨基酸序列的差異。cdr是以斜體顯示，并且人類化變體中與親本小鼠單克隆抗體不同的氨基酸加下劃線。圖2示出了小鼠單克隆抗mmp9抗體(ab0041)的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列，以及這一輕鏈的人類化變體(vh1-vh4)的氨基酸序列，其經(jīng)比對以顯示由人類化引起的構(gòu)架氨基酸序列的差異。cdr是以斜體顯示，并且人類化變體中與親本小鼠單克隆抗體不同的氨基酸加下劃線。圖3示出了mmp9蛋白的示意圖。圖4示出了指定為ab0041、m4及m12的抗體的重鏈和輕鏈的氨基酸序列之間的比較。圖5示出了如實(shí)例4中所述，對來自媒劑治療的小鼠(a)和ab0046治療的小鼠(b)的結(jié)腸的冷凍連續(xù)切片進(jìn)行的免疫組織化學(xué)(ihc)分析的結(jié)果，突出顯示了在dss誘發(fā)的結(jié)腸炎中所觀察到的炎癥和組織破壞。在浸潤中性粒細(xì)胞(由mpo信號指示)和巨噬細(xì)胞中觀察到mmp9的表達(dá)并且其與基底膜膠原蛋白iv(在圖中標(biāo)為“coliv”)和mmp9底物共定位?；疾〉慕Y(jié)腸(a)展現(xiàn)粘膜上皮細(xì)胞和粘膜下隱窩的破壞及穩(wěn)固的炎性細(xì)胞浸潤。在患病組織(a)中觀察到極少mmp2表達(dá)的跡象。圖6示出了如實(shí)例4中所述，對福爾馬林固定、石蠟包埋(ffpe)的從結(jié)腸取得的切片進(jìn)行的mmp9免疫組織化學(xué)(ihc)分析的代表性圖像。如所示，上皮細(xì)胞mmp9表達(dá)(箭頭)在正常結(jié)腸(-dss)中極少且在投予dss之后得到高度誘導(dǎo)(+dss)。圖7a-7b示出了在實(shí)例4中所述研究中，在研究第10天和第14天(終止日)對所有動物組進(jìn)行的內(nèi)窺鏡檢查評價的結(jié)果。圖a示出了在第6-14天的平均內(nèi)窺鏡檢查評分(+/-sem)，其中箭頭指示投予ab0046(或其它治療)的天數(shù)。圖b示出了在第14天每個組的平均內(nèi)窺鏡檢查評分(+/-sem)，其中星號指示疾病的顯著減輕(這在第14天對于ab0046和治療組觀察到)。內(nèi)窺鏡檢查評分反映了所觀察到的每只動物的最嚴(yán)重病變。圖8示出了對于在實(shí)例4中所述的研究終止時所切除的結(jié)腸進(jìn)行的組織病理學(xué)分析的結(jié)果。對炎癥、浮腫及壞死的程度進(jìn)行評估并且通過加上每只動物的每個所評估參數(shù)的平均結(jié)腸評分來計算總評分?？筸mp9(ab0046)治療使組織病理學(xué)疾病顯著減輕到與類似的程度。圖9示出了對來自實(shí)例4中所述研究的ffpe結(jié)腸切片進(jìn)行的mmp9ihc的代表性圖像。mmp9表達(dá)在正常結(jié)腸(無dss)中極少并且在投予dss之后得到高度誘導(dǎo)(媒劑)。ab0046和治療組中mmp9的表達(dá)減少與總體疾病的減輕相關(guān)。圖10a-10b示出了實(shí)例4中所述研究的體重和腹瀉結(jié)果。有關(guān)體重變化和腹瀉發(fā)生率的曲線下面積(auc)是通過梯形規(guī)則法計算。用抗mmp9抗體(ab0046)進(jìn)行的治療防止由dss誘發(fā)的結(jié)腸炎引起的體重減輕并且與治療的作用相當(dāng)。腹瀉發(fā)生率與ab0046和治療類似地降低。圖11a1，11a2，11b1，11b2，11b3，11b4示出了如實(shí)例4中所述，在用抗mmp9抗體(ab0046)和其它治療進(jìn)行治療之后，對dss結(jié)腸炎模型中終末血清樣品進(jìn)行的多分析物elisa分析的結(jié)果。這些結(jié)果披露，用ab0046治療使疾病誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子和生長因子廣泛全身下調(diào)。圖11b1-11b4示出了從同一研究獲得的另外的血清標(biāo)記物數(shù)據(jù)。圖12a示出了在實(shí)例4中所述的研究中，在dss結(jié)腸炎模型中通過抗mmp9抗體(ab0047)治療使內(nèi)窺鏡檢查疾病減輕。圖12b示出了在實(shí)例4中所述的研究中，在dss結(jié)腸炎模型中通過抗mmp9抗體(ab0047)治療使組織學(xué)疾病減輕。圖13a，13b示出了在實(shí)例5中所述的預(yù)防性治療研究中，在指定日對所有動物組進(jìn)行的內(nèi)窺鏡檢查評價的結(jié)果。圖a示出了在第6-14天的平均內(nèi)窺鏡檢查評分(+/-sem)，其中箭頭指示投予ab0046(或其它治療)的天數(shù)。圖b示出了在第10天每個組的平均內(nèi)窺鏡檢查評分(+/-sem)，其中星號指示疾病的顯著減輕(這在第14天對于ab0046和治療組觀察到)。內(nèi)窺鏡檢查評分反映了所觀察到的每只動物的最嚴(yán)重病變。圖14示出了對于在實(shí)例5中所述的研究終止時所切除的結(jié)腸進(jìn)行的組織病理學(xué)分析的結(jié)果。對炎癥、浮腫及壞死的程度進(jìn)行評估并且通過加上每只動物的每個所評估參數(shù)的平均結(jié)腸評分來計算總評分。圖15示出了實(shí)例5中所述研究的體重和腹瀉結(jié)果。有關(guān)體重變化和腹瀉發(fā)生率的曲線下面積(auc)是通過梯形規(guī)則法計算。用抗mmp9抗體(ab0046)進(jìn)行的預(yù)防性治療防止腹瀉的發(fā)生。圖16示出了在實(shí)例6中所述的研究中，在確立的結(jié)腸直腸腫瘤發(fā)生模型(hct116)中原發(fā)腫瘤生長的減少。左圖示出了腫瘤體積的較小變化；右圖示出了在起始治療之后第32天時最終腫瘤重量減小(其中p值由曼-惠特尼測試(mann-whitneytest)得出并且柱形表示組平均值±sem)。圖17a1，17a2示出了由實(shí)例7中所述的研究得到的臨床評分和腿評分結(jié)果，顯示了在小鼠和大鼠cia類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中鼠類代用抗mmp9抗體(ab0046)和抗人類mmp9抗體(ab0041)的功效。圖17b示出了由同一研究得到的抗mmp9抗體的滴度。mtx＝甲氨蝶呤；nondis.＝無疾病。圖18a示出了在實(shí)例7中所述的大鼠cia研究中炎性細(xì)胞因子的研究結(jié)束時血清水平；圖18b示出了在實(shí)例7中所述的小鼠cia研究中血清炎性細(xì)胞因子的研究結(jié)束時水平。mtx＝甲氨蝶呤；nondis.＝無疾病。圖19a1-19a7示出了在實(shí)例7中所述的大鼠cia研究中的另外的血清標(biāo)記物；圖19b1-19b5示出了在實(shí)例7中所述的小鼠cia研究中的另外的血清標(biāo)記物。mtx＝甲氨蝶呤；nondis.＝無疾病。圖20示出了在如實(shí)例8中所述的lps敗血病大鼠模型中，在投予抗mmp9之后防止死亡和體溫降低。每個圖的下部線表示ac-1治療組并且兩條上部線表示未接受lps的組(左圖中的菱形；右圖中的圓形)及抗mmp9治療組(左圖中的正方形及右圖中的三角形)。圖21示出了ab0041治療的大鼠、馬立馬司他(marimastat)治療的大鼠及對照物治療的大鼠的平均日肌肉骨骼綜合癥(mss)評分±標(biāo)準(zhǔn)偏差。圖22示出了在第1、7、10、14、17、21、24及28天時在ab0041治療的大鼠中如通過elisa測量的ab0041血清水平(血清滴度)。數(shù)據(jù)表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。圖23a-23f示出了在指定治療之后小鼠結(jié)腸直腸癌異種移植模型中腫瘤體積(圖23a、23c、23e)和體重(圖23b、23d、23f)的變化。圖24a-24b示出了在指定治療之后小鼠結(jié)腸直腸癌異種移植模型中腫瘤體積(圖24a)和體重(圖24b)的變化。圖25a-25d示出了在對照物和抗mmp9治療之后小鼠結(jié)腸直腸癌異種移植模型中的血清蛋白質(zhì)水平。圖26示出了在指定治療之后，在大鼠cia類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中爪厚度、踝直徑及體重的變化。圖27示出了在大鼠cia類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中進(jìn)行指定治療之后如通過免疫組織化學(xué)分析所測量的tnf-α和cd68評分。圖28-1至28-4示出了在大鼠cia研究中炎性細(xì)胞因子的研究結(jié)束時血清水平。圖29示出了在指定治療之后，在小鼠cia類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中爪厚度、踝直徑及體重的變化。圖30示出了由腫瘤上皮細(xì)胞相關(guān)性mmp9蛋白的ihc分析得到的結(jié)果。圖31示出了由腫瘤上皮細(xì)胞相關(guān)性mmp9mrna的cish分析得到的結(jié)果。具體實(shí)施方式除非另作指示，否則本發(fā)明的實(shí)踐采用了細(xì)胞生物學(xué)、毒理學(xué)、分子生物學(xué)、生物化學(xué)、細(xì)胞培養(yǎng)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、重組dna領(lǐng)域及相關(guān)領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)方法和常規(guī)技術(shù)，其在所屬領(lǐng)域的技術(shù)范圍內(nèi)。這些技術(shù)描述于文獻(xiàn)中并由此是所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可用的。參見例如，艾伯特b.(alberts,b.)等人,“細(xì)胞分子生物學(xué)(molecularbiologyofthecell),”第5版,加蘭德科技出版社(garlandscience),紐約州紐約(newyork,ny),2008；沃特d.(voet,d.)等人,“基礎(chǔ)生物化學(xué)：在分子水平上的生命(fundamentalsofbiochemistry:lifeatthemolecularlevel),”第3版,約翰威立出版公司(johnwiley&sons),新澤西州霍博肯(hoboken,nj),2008；薩姆布魯克j.(sambrook,j.)等人,“分子克隆實(shí)驗指南(molecularcloning:alaboratorymanual),”第3版,冷泉港實(shí)驗室出版社(coldspringharborlaboratorypress),2001；奧蘇貝爾f.(ausubel,f.)等人,“現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗技術(shù)(currentprotocolsinmolecularbiology),”約翰威立出版公司(johnwiley&sons),紐約(newyork),1987及定期更新；弗雷謝尼r.i.(freshney,r.i.),“動物細(xì)胞培養(yǎng)：基本技術(shù)指南(cultureofanimalcells:amanualofbasictechnique),”第4版,約翰威立出版公司,新澤西州桑莫塞縣(somerset,nj),2000；及叢書“酶學(xué)方法(methodsinenzymology),”學(xué)術(shù)出版社(academicpress),加利福尼亞州圣地亞哥(sandiego,ca)。還參見例如，“現(xiàn)代免疫學(xué)實(shí)驗技術(shù)(currentprotocolsinimmunology),”(r.凱克(r.coico),叢書編輯),威立公司(wiley),2010年8月最新更新。某些mmp的異?；钚栽谀[瘤生長、轉(zhuǎn)移、炎癥、自體免疫性及血管疾病中起到作用。參見例如，胡(hu)等人(2007)自然評述：藥物發(fā)現(xiàn)(naturereviews:drugdiscovery)6:480-498。mmp9的一個值得注意的來源是腫瘤相關(guān)性巨噬細(xì)胞(tam)，其經(jīng)由與原發(fā)腫瘤細(xì)胞的旁分泌相互作用來支持復(fù)雜共活化環(huán)中的轉(zhuǎn)移和侵入。這種生理屏障蛋白水解分解導(dǎo)致細(xì)胞侵入加上使生長和血管生成活化的因子的釋放的組合為腫瘤擴(kuò)增開辟了道路，并且伴隨著支持腫瘤長出的新血管形成的發(fā)生。mmp9是例如ras/raf、pi3k/akt/nfkb、及wnt/β-連鎖蛋白等致癌信號傳導(dǎo)路徑的一個目標(biāo)，并且經(jīng)由調(diào)節(jié)整合素和受體酪氨酸激酶功能而起到這些路徑的上游調(diào)控劑的作用。mmp9在多種腫瘤類型中增多，并且mmp9水平與包括胃癌、肺癌及結(jié)腸直腸癌在內(nèi)的許多癌癥的預(yù)后不良相關(guān)。mmp9還牽涉到化學(xué)抗性并且在若干腫瘤抑制蛋白缺失時上調(diào)。mmp9在許多不同腫瘤類型中上調(diào)并且可以促進(jìn)癌細(xì)胞的原發(fā)生長和遠(yuǎn)端侵襲。在某些治療環(huán)境中可能需要抑制一或多種mmp的活性。然而，某些其它mmp(例如mmp2)的活性通常是正常功能所需的和/或防止疾病。由于大多數(shù)mmp抑制劑靶向保守性催化結(jié)構(gòu)域，并因此抑制多種不同的mmp，故使用可用的mmp抑制劑因抑制必需的非致病相關(guān)性mmp而引起副作用。與開發(fā)對一種特定mmp或多種所選mmp具特異性的抑制劑相關(guān)的挑戰(zhàn)涉及以下事實(shí)：酶活性的抑制一般需要使所述抑制劑靶向催化結(jié)構(gòu)域。mmp催化結(jié)構(gòu)域的同源性可使抑制劑與超過一種mmp反應(yīng)。所提供的實(shí)施例為特異性抑制單一mmp或多種所選mmp(例如mmp9)的催化活性并且不與某些其它mmp或任何其它mmp反應(yīng)或者抑制某些其它mmp或任何其它mmp的藥劑，包括治療劑，例如抗體和其抗原結(jié)合片段。所提供的實(shí)施例還有其用于治療包括癌癥以及自體免疫性疾病和炎癥性疾病在內(nèi)的各種疾病的方法及用途。mmp9結(jié)合蛋白mmp9使基底膜膠原蛋白和其它細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)組分降解。凱森波克k(kessenbrockk)等人,“基質(zhì)金屬蛋白酶：腫瘤微環(huán)境的調(diào)節(jié)劑(matrixmetalloproteinases:regulatorsofthetumormicroenvironment).”細(xì)胞(cell)2010；141(1):52-67。基質(zhì)降解有助于包括關(guān)節(jié)炎、癌癥及潰瘍性結(jié)腸炎在內(nèi)的多種疾病的發(fā)病。羅伊r(royr)等人,“作為人類癌癥中的新穎標(biāo)記物和潛在治療目標(biāo)的基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinasesasnovelbiomarkersandpotentialtherapeutictargetsinhumancancer).”臨床腫瘤學(xué)雜志(jclinoncol)2009；27(31):5287-97。廣譜基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(例如馬立馬司他)在動物炎癥和癌癥模型中有效(沃特森sa(watsonsa)等人,“在人類胃癌異種移植模型中通過馬立馬司他抑制腫瘤生長：與循環(huán)cea水平的關(guān)系(inhibitionoftumourgrowthbymarimastatinahumanxenograftmodelofgastriccancer:relationshipwithlevelsofcirculatingcea).”英國癌癥雜志(brjcancer)1999；81(1):19-23；賽克ap(sykesap)等人,“基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑對三硝基苯磺酸大鼠炎癥性腸病模型中結(jié)腸炎癥的影響(theeffectofaninhibitorofmatrixmetalloproteinasesoncolonicinflammationinatrinitrobenzenesulphonicacidratmodelofinflammatoryboweldisease).”營養(yǎng)藥理學(xué)與治療學(xué)(alimentpharmacolther)1999；13(11):1535-42)。然而，這些泛抑制劑在人類中通常可在馬立馬司他的有效劑量水平或接近其有效劑量水平下引起肌肉骨骼副作用，包括關(guān)節(jié)僵硬、炎癥，及手、臂和肩疼痛，統(tǒng)稱為肌肉骨骼綜合癥(mss)。皮特森jt(petersonjt.)“在基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑的開發(fā)中估計治療指數(shù)的重要性(theimportanceofestimatingthetherapeuticindexinthedevelopmentofmatrixmetalloproteinaseinhibitors.)”心血管研究(cardiovascres)2006；69(3):677-87；蒂爾尼gm(tierneygm)等人,“有關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑馬立馬司他在胃癌中的安全性和作用的初步研究(apilotstudyofthesafetyandeffectsofthematrixmetalloproteinaseinhibitormarimastatingastriccancer).”歐洲癌癥雜志(eurjcancer)1999；35(4):563-8；沃托維茲-普拉嘉s(wojtowicz-pragas)等人,“經(jīng)口投予晚期肺癌患者一種新穎基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑馬立馬司他的i期試驗(phaseitrialofmarimastat,anovelmatrixmetalloproteinaseinhibitor,administeredorallytopatientswithadvancedlungcancer).”臨床腫瘤學(xué)雜志(jclinoncol)1998；16(6):2150-6。這些癥狀是劑量和時間依賴性的，并且在停止用泛mmp抑制劑進(jìn)行治療之后不久即復(fù)發(fā)。沃托維茲-普拉嘉s,1998；尼姆提斯j(nemunaitisj)等人,“有關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑馬立馬司他對晚期癌癥中血清腫瘤標(biāo)記物的影響的研究的組合分析：用于長期研究的生物活性并且可耐受劑量的選擇(combinedanalysisofstudiesoftheeffectsofthematrixmetalloproteinaseinhibitormarimastatonserumtumormarkersinadvancedcancer:selectionofabiologicallyactiveandtolerabledoseforlonger-termstudies).”臨床癌癥研究(clincancerres)1998；4(5):1101-9；哈欽森jw(hutchinsonjw)等人,“通過用基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑治療誘發(fā)的迪皮特朗氏病和凍肩癥(dupuytren'sdiseaseandfrozenshoulderinducedbytreatmentwithamatrixmetalloproteinaseinhibitor).”骨與關(guān)節(jié)外科雜志(thejournalofboneandjointsurgery).英國卷(britishvolume)1998；80(5):907-8。馬立馬司他和相同類別的其它泛mmp抑制劑是鋅螯合劑。皮特森jt,2006。純合mmp9基因敲除小鼠未展示mss樣癥狀或mss樣組織改變。吳th(vuth)等人,“mmp-9/明膠酶b為生長板血管生成和肥大軟骨細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵調(diào)控劑(mmp-9/gelatinasebisakeyregulatorofgrowthplateangiogenesisandapoptosisofhypertrophicchondrocytes).”細(xì)胞,1998；93(3):411-22。本發(fā)明提供了結(jié)合到基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mmp9)蛋白(mmp9又稱為明膠酶-b)，例如人類mmp9，例如具有seqidno:27或seqidno:28中所陳述的氨基酸序列的人類mmp9的結(jié)合蛋白，例如抗體和其片段(例如抗原結(jié)合片段)。本發(fā)明的結(jié)合蛋白一般包含免疫球蛋白(ig)重鏈(或其功能片段)和ig輕鏈(或其功能片段)。本發(fā)明還提供了特異性結(jié)合到mmp9并且不結(jié)合例如mmp1、mmp2、mmp3、mmp7、mmp9、mmp10、mmp12及mmp13等其它基質(zhì)金屬蛋白酶的mmp9結(jié)合蛋白。因此，此類特異性mmp9結(jié)合蛋白一般不與非mmp9基質(zhì)金屬蛋白酶顯著地或可檢測地交叉反應(yīng)。特異性結(jié)合mmp9的mmp9結(jié)合蛋白可用于需要或希望獲得對mmp9的特異性調(diào)節(jié)(例如，抑制)，例如而不直接地影響其它基質(zhì)金屬蛋白酶的活性的應(yīng)用中。在本發(fā)明的某些實(shí)施例中，抗mmp9抗體為mmp9活性的一種抑制劑并且可為特異性mmp9抑制劑。確切地說，本文所揭示的mmp9結(jié)合蛋白將可用于抑制mmp9，同時允許其它相關(guān)基質(zhì)金屬蛋白酶的正常功能?！癿mp抑制劑”或“mmp9活性的抑制劑”可為直接或間接抑制mmp9活性，包括(但不限于)酶加工、抑制mmp9對其底物的作用(例如，通過抑制底物結(jié)合、底物裂解等)等的抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實(shí)施例中，如本文的實(shí)例中所證實(shí)的，用泛mmp抑制劑(例如小分子泛抑制劑，例如馬立馬司他)進(jìn)行治療引起肌肉骨骼疾病的癥狀，例如肌肉骨骼綜合癥(mss)，包括對步態(tài)、姿勢及移動意愿的顯著影響，而特異性抑制mmp9，例如本申請案中的抗體或其抗原結(jié)合片段，不會引起這些癥狀并且不會誘發(fā)mss。本發(fā)明還提供了特異性結(jié)合到非小鼠mmp9(例如人類mmp9、食蟹猴mmp9及大鼠mmp9)的mmp9結(jié)合蛋白。本發(fā)明還提供了充當(dāng)非競爭性抑制劑的mmp9結(jié)合蛋白(例如抗mmp9抗體和其功能片段)。“非競爭性抑制劑”是指結(jié)合于遠(yuǎn)離酶的底物結(jié)合位點(diǎn)的位點(diǎn)，并因此可結(jié)合所述酶并且影響抑制活性，而不管所述酶是否結(jié)合到其底物的一種抑制劑。此類非競爭性抑制劑可例如提供一定水平的抑制作用，所述抑制作用可與底物濃度實(shí)質(zhì)上無關(guān)。本發(fā)明的mmp9結(jié)合蛋白(例如抗體和其功能片段)包括結(jié)合mmp9，特別是人類mmp9，并且具有與本文所揭示的重鏈多肽具有至少約80％、85％、90％、95％或更高氨基酸序列一致性的重鏈多肽(或其功能片段)的結(jié)合蛋白。在一些實(shí)例中，本發(fā)明的mmp9結(jié)合蛋白(例如抗體和其功能片段)包括結(jié)合mmp9，特別是人類mmp9，并且具有與本文所揭示的重鏈多肽具有至少約90％、95％、97％、98％、99％或更高氨基酸序列一致性的重鏈多肽(或其功能片段)的結(jié)合蛋白。本發(fā)明的mmp9結(jié)合蛋白(例如抗體和其功能片段)包括結(jié)合mmp9，特別是人類mmp9，并且具有與本文所揭示的重鏈多肽具有至少約80％、85％、90％、95％或更高氨基酸序列一致性的輕鏈多肽(或其功能片段)的結(jié)合蛋白。本發(fā)明的mmp9結(jié)合蛋白(例如抗體和其功能片段)包括結(jié)合mmp9，特別是人類mmp9，并且具有如本文所揭示的重鏈多肽的互補(bǔ)決定區(qū)(“cdr”)的重鏈多肽(或其功能片段)以及輕鏈多肽(或其功能片段)的cdr的結(jié)合蛋白。如本文所使用，“同源性”或“一致性”或“相似性”在核酸和多肽的情形中是指分別基于氨基酸序列或核酸序列比對，兩個多肽或兩個核酸分子之間的關(guān)系。同源性和一致性可各自通過比較出于比較的目的對準(zhǔn)的每個序列的位置來測定。當(dāng)所比較的序列中的相同位置被相同堿基或氨基酸占據(jù)時，則這些分子在所述位置相同；當(dāng)相同位點(diǎn)被相同或相似的氨基酸殘基(例如空間性和/或電子性質(zhì)類似)占據(jù)時，則這些分子可稱為在所述位置同源(相似)。以同源性/相似性或一致性百分比表示是指在多個位置處所比較的序列共有的一致或相似氨基酸的數(shù)量的函數(shù)。在比較兩個序列時，殘基(氨基酸或核酸)的不存在或額外殘基的存在也會降低一致性和同源性/相似性。如本文所使用，“一致性”意謂當(dāng)將兩個或兩個以上序列對準(zhǔn)以使序列匹配達(dá)到最大(即，考慮空位和插入)時，在這些序列中相應(yīng)位置處一致核苷酸或氨基酸殘基的百分比。序列一般在指定區(qū)域內(nèi)，例如至少約20、25、30、35、40、45、50、55、60、65或更多個氨基酸或核苷酸長的區(qū)域內(nèi)對準(zhǔn)以達(dá)到最大對應(yīng)，并且可長達(dá)參考氨基酸或核苷酸的全長。為進(jìn)行序列比較，通常一個序列充當(dāng)參考序列，以與測試序列相比較。當(dāng)使用序列比較算法時，將測試序列和參考序列輸入計算機(jī)程序中，必要時，指定子序列座標(biāo)，并且指定序列算法的程序參數(shù)。隨后序列比較算法基于指定的程序參數(shù)計算測試序列相對于參考序列的序列一致性百分比。適用于測定序列一致性百分比的算法的實(shí)例為blast和blast2.0算法，其分別描述于奧茲楚爾(altschul)等人(1990)分子生物學(xué)雜志(j.mol.biol.)215:403-410及奧茲楚爾等人(1977)核酸研究(nucleicacidsres.)25:3389-3402中。執(zhí)行blast分析的軟件可經(jīng)由國家生物技術(shù)資訊中心(nationalcenterforbiotechnologyinformation；www.ncbi.nlm.nih.gov)公開獲得。其它示例性算法包括clustalw(海金思d.(higginsd.)等人(1994)核酸研究(nucleicacidsres)22:4673-4680)，在www.ebi.ac.uk/tools/clustalw/index.html上可得。不一致的殘基位置可因保守氨基酸取代而不同。保守氨基酸取代是指具有類似側(cè)鏈的殘基的可互換性。舉例來說，一組具有脂肪族側(cè)鏈的氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；一組具有脂肪族羥基側(cè)鏈的氨基酸為絲氨酸和蘇氨酸；一組具有含酰胺的側(cè)鏈的氨基酸為天冬酰胺和谷氨酰胺；一組具有芳香族側(cè)鏈的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸；一組具有堿性側(cè)鏈的氨基酸為賴氨酸、精氨酸和組氨酸；并且一組具有含硫側(cè)鏈的氨基酸為半胱氨酸和甲硫氨酸。兩個核酸之間的序列一致性也可以關(guān)于兩個分子彼此在嚴(yán)格條件下的雜交來描述。雜交條件是遵循所屬領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)方法選擇(參見例如，薩姆布魯克(sambrook)等人,分子克隆實(shí)驗指南,第二版,(1989)紐約冷泉港(coldspringharbor,n.y.))。嚴(yán)格雜交條件的一個實(shí)例是在50℃或更高溫度及0.1×ssc(15mm氯化鈉/1.5mm檸檬酸鈉)下雜交。嚴(yán)格雜交條件的另一個實(shí)例為在42℃下于以下溶液中過夜培育：50％甲酰胺、5×ssc(150mmnacl、15mm檸檬酸三鈉)、50mm磷酸鈉(ph7.6)、5×丹哈特氏溶液(denhardt'ssolution)、10％硫酸葡聚糖及20mg/ml變性剪切的鮭魚精dna；隨后在約65℃下于0.1×ssc中洗滌過濾器。嚴(yán)格雜交條件是至少與上述代表性條件同樣嚴(yán)格的雜交條件，其中如果這些條件與上述特定嚴(yán)格條件至少約80％同樣嚴(yán)格，通常至少90％同樣嚴(yán)格，就認(rèn)為其為至少同樣嚴(yán)格的。因此，本發(fā)明提供了例如這樣一些抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含與本文所述的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列(例如seqidno:1或5-8)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高氨基酸序列一致性的重鏈可變區(qū)多肽，及與如本文所陳述的輕鏈多肽的氨基酸序列(例如seqidno:2或9-12)具有至少80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高氨基酸序列一致性的可變輕鏈多肽。本發(fā)明的抗mmp9抗體的實(shí)例將于以下更詳細(xì)地描述。抗體mmp9結(jié)合蛋白包括抗體和其功能片段，例如特異性結(jié)合到mmp9的那些。如本文所使用，術(shù)語“抗體”意謂包含特異性結(jié)合抗原表位的肽序列(例如可變區(qū)序列)的分離的或重組多肽結(jié)合劑。所述術(shù)語是以其最廣泛意義使用并且特別涵蓋單克隆抗體(包括全長單克隆抗體)、多克隆抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、納米抗體、雙功能抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，及抗體片段，包括(但不限于)fv、scfv、fab、fab'、f(ab')2及fab2，只要其展現(xiàn)所需的生物活性即可。術(shù)語“人類抗體”是指除可能的非人類cdr區(qū)外，含有人類來源的序列的抗體，并且并非暗指存在免疫球蛋白分子的完整結(jié)構(gòu)，只是指所述抗體在人體中具有極少免疫原性作用(即，不會誘導(dǎo)產(chǎn)生針對其自身的抗體)。“抗體片段”包含全長抗體的一部分，例如全長抗體的抗原結(jié)合區(qū)或可變區(qū)。此類抗體片段也可以在本文中稱為“功能片段”或“抗原結(jié)合片段”?？贵w片段的實(shí)例包括fab、fab'、f(ab')2及fv片段；雙功能抗體；線性抗體(扎帕塔(zapata)等人(1995)蛋白質(zhì)工程(proteineng.)8(10):1057-1062)；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個相同的抗原結(jié)合片段，稱為“fab”片段，其各自具有單個抗原結(jié)合位點(diǎn)；及一個殘留的“fc”片段，其名稱反映了易于結(jié)晶的能力。胃蛋白酶處理得到f(ab')2片段，其具有兩個抗原組合位點(diǎn)并且仍能夠交聯(lián)抗原?！癴v”是含有完整抗原識別和結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。這一區(qū)域是由緊密非共價締合的一個重鏈可變結(jié)構(gòu)域和一個輕鏈可變結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的二聚物組成。在這種構(gòu)型中，每個可變結(jié)構(gòu)域的三個互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)相互作用以在vh-vl二聚物的表面上界定抗原結(jié)合位點(diǎn)。六個cdr共同地賦予抗體抗原結(jié)合特異性。然而，每個單一可變結(jié)構(gòu)域(或僅包含對于抗原具特異性的六個cdr中的三個的分離的vh或vl區(qū))能夠識別并結(jié)合抗原，不過親和力一般低于完整fv片段?！癴ab”片段除重鏈和輕鏈可變區(qū)外，還含有輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域和重鏈的第一恒定結(jié)構(gòu)域(ch1)。fab片段最初是在木瓜蛋白酶消化抗體之后觀察到。fab'片段與fab片段的不同之處在于，f(ab')片段在重鏈ch1結(jié)構(gòu)域的羧基末端處含有若干其它殘基，包括抗體鉸鏈區(qū)中的一或多個半胱氨酸。f(ab')2片段含有在鉸鏈區(qū)附近通過二硫鍵接合的兩個fab片段，并且最初是在胃蛋白酶消化抗體之后觀察到。fab'-sh在本文中指定為fab'片段，其中恒定結(jié)構(gòu)域的半胱氨酸殘基帶有游離硫醇基?？贵w片段的其它化學(xué)偶合也是已知的。來自任何脊椎動物物種的抗體(免疫球蛋白)的“輕鏈”基于其恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列可以被分配到兩種明顯相異的類型之一中，稱為κ和λ。取決于重鏈恒定結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列，可將免疫球蛋白分為五個主要類別：iga、igd、ige、igg及igm，并且這些類別中的若干類別可進(jìn)一步細(xì)分成子類(同型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1及iga2?！皢捂渇v”或“sfv”或“scfv”抗體片段包含抗體的vh和vl結(jié)構(gòu)域，其中這些結(jié)構(gòu)域存在于單一多肽鏈中。在一些實(shí)施例中，fv多肽進(jìn)一步包含在vh與vl結(jié)構(gòu)域之間的多肽連接子，所述連接子使sfv能夠形成抗原結(jié)合所需的結(jié)構(gòu)。關(guān)于sfv的評述，參見普魯可敦(pluckthun),單克隆抗體藥理學(xué)(thepharmacologyofmonoclonalantibodies),第113卷(羅森博格(rosenburg)和摩爾(moore)編)斯普林格-維拉格出版社(springer-verlag),紐約(newyork),第269-315頁(1994)。術(shù)語“雙功能抗體”是指具有兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)的小抗體片段，這些片段包含連接到同一多肽鏈(vh-vl)中的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)。通過使用太短而無法使同一鏈中的兩個結(jié)構(gòu)域之間配對的連接子，迫使這些結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對，由此產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)。雙功能抗體另外描述于例如ep404,097；wo93/11161；及霍林格(hollinger)等人(1993)美國國家科學(xué)院院刊(proc.natl.acad.sci.usa)90:6444-6448中?！胺蛛x的”抗體為從自然環(huán)境的組分鑒別并且分離和/或回收的抗體。其自然環(huán)境的組分可包括酶、激素及其它蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。在一些實(shí)施例中，分離的抗體被純化(1)達(dá)到如通過勞里法(lowrymethod)所測定的超過95重量％，例如超過99重量％的抗體；(2)達(dá)到例如通過使用旋杯式順序分析儀足以獲得n末端或內(nèi)部氨基酸序列的至少15個殘基的程度；或(3)達(dá)到通過在還原或非還原條件下進(jìn)行凝膠電泳(例如sds-page)并且通過考馬斯藍(lán)(coomassieblue)或銀染色檢測的均質(zhì)性。術(shù)語“分離的抗體”包括一種在重組細(xì)胞內(nèi)原位的抗體，因為所述抗體的自然環(huán)境的至少一種組分將不存在。在某些實(shí)施例中，分離的抗體是通過至少一個純化步驟制備。如本文所使用，“免疫反應(yīng)性”是指對氨基酸殘基的序列(“結(jié)合位點(diǎn)”或“表位”)具有特異性，但又與其它肽/蛋白質(zhì)交叉反應(yīng)，在將其調(diào)配用于投予人類使用的水平下無毒的抗體或其片段?！氨砦弧笔侵缚乖心軌蚺c抗體或其抗原結(jié)合片段形成結(jié)合相互作用的部分。表位可為線性肽序列(即，“連續(xù)的”)或可由非鄰接的氨基酸序列(即，“構(gòu)象”或“不連續(xù)”)構(gòu)成。術(shù)語“優(yōu)先結(jié)合”意謂結(jié)合劑結(jié)合到結(jié)合位點(diǎn)的親和力高于其結(jié)合不相關(guān)氨基酸序列的親和力?？筸mp9抗體可關(guān)于重鏈和輕鏈的cdr進(jìn)行描述。如本文所使用，術(shù)語“cdr”或“互補(bǔ)決定區(qū)”打算意謂在重鏈多肽與輕鏈多肽的可變區(qū)內(nèi)發(fā)現(xiàn)的非鄰接抗原組合位點(diǎn)。這些特定區(qū)域已描述于卡貝特(kabat)等人,生物化學(xué)雜志(j.biol.chem.)252:6609-6616(1977)；卡貝特等人,美國衛(wèi)生和公眾服務(wù)部(u.s.dept.ofhealthandhumanservices),“免疫相關(guān)蛋白質(zhì)的序列(sequencesofproteinsofimmunologicalinterest)”(1991)；查賽(chothia)等人,分子生物學(xué)雜志(j.mol.biol.)196:901-917(1987)；及麥克卡倫(maccallum)等人,分子生物學(xué)雜志,262:732-745(1996)中，其中當(dāng)彼此相比較時，這些定義包括氨基酸殘基的重疊或亞組。盡管如此，用以指抗體或移植抗體或其變體的cdr的任一定義的應(yīng)用打算在如本文所定義和使用的術(shù)語的范圍內(nèi)。涵蓋如以上引用的每一參考文獻(xiàn)所定義的cdr的氨基酸殘基陳述于下表1a中供比較。表1a：cdr定義1殘基編號遵循卡貝特等人(同上文)的命名法2殘基編號遵循查賽等人(同上文)的命名法3殘基編號遵循麥克卡倫等人(同上文)的命名法如本文所使用，當(dāng)提及抗體可變區(qū)時使用的術(shù)語“構(gòu)架”打算意謂在抗體可變區(qū)內(nèi)的除cdr區(qū)外的所有氨基酸殘基?？勺儏^(qū)構(gòu)架一般是長度在約100-120個氨基酸之間的不連續(xù)氨基酸序列，但打算僅提到除cdr外的氨基酸。如本文所使用，術(shù)語“構(gòu)架區(qū)”打算意謂所述構(gòu)架被cdr分開的每個結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施例中，抗體是人類化抗體或人類抗體。人類化抗體包括來自受體互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)的殘基被來自具有所需特異性、親和力和容量的非人類物種(供體抗體；例如小鼠、大鼠或兔)的cdr的殘基置換的人類免疫球蛋白(受體抗體)。因此，非人類(例如，鼠類)抗體的人類化形式為含有源自于非人類免疫球蛋白的最小序列的嵌合免疫球蛋白。非人類序列主要位于可變區(qū)中，特別是互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)中。在一些實(shí)施例中，人類免疫球蛋白的fv構(gòu)架殘基被相應(yīng)非人類殘基置換。人類化抗體也可包含在受體抗體和引入的cdr或構(gòu)架序列中都未發(fā)現(xiàn)的殘基。在某些實(shí)施例中，人類化抗體包含實(shí)質(zhì)上所有的至少一個并且通常兩個可變結(jié)構(gòu)域，其中所有或?qū)嵸|(zhì)上所有的cdr都與非人類免疫球蛋白的cdr對應(yīng)并且所有或?qū)嵸|(zhì)上所有的構(gòu)架區(qū)都為人類免疫球蛋白共同序列的構(gòu)架區(qū)。出于本發(fā)明的目的，人類化抗體也可包括免疫球蛋白片段，例如fv、fab、fab'、f(ab')2或抗體的其它抗原結(jié)合子序列。人類化抗體還可包含免疫球蛋白恒定區(qū)(fc)的至少一部分，通常為人類免疫球蛋白恒定區(qū)的至少一部分。參見例如，瓊斯(jones)等人(1986)自然(nature)321:522-525；瑞奇曼(riechmann)等人(1988)自然332:323-329；及普雷斯塔(presta)(1992)結(jié)構(gòu)生物學(xué)新觀點(diǎn)(curr.op.struct.biol.)2:593-596。用于使非人類抗體人類化的方法是所屬領(lǐng)域中已知的。一般來說，人類化抗體在其中引入了一或多個來自非人類來源的氨基酸殘基。這些非人類氨基酸殘基通常稱為“輸入”或“供體”殘基，這些殘基通常是從“輸入”或“供體”可變結(jié)構(gòu)域獲得。舉例來說，人類化可基本上根據(jù)維特(winter)和其同事的方法，通過用嚙齒動物cdr或cdr序列取代人類抗體的相應(yīng)序列來進(jìn)行。參見例如，瓊斯等人,同上文；瑞奇曼等人,同上文；維霍恩(verhoeyen)等人(1988)科學(xué)(science)239:1534-1536。因此，此類“人類化”抗體包括嵌合抗體(美國專利第4,816,567號)，其中實(shí)質(zhì)上少于完整人類可變結(jié)構(gòu)域被來自非人類物種的相應(yīng)序列取代。在某些實(shí)施例中，人類化抗體是一些cdr殘基和任選地一些構(gòu)架區(qū)殘基被來自嚙齒動物抗體(例如鼠類單克隆抗體)中類似位點(diǎn)的殘基取代的人類抗體。人類抗體也可例如通過使用噬菌體展示文庫來產(chǎn)生。霍格波姆(hoogenboom)等人(1991)分子生物學(xué)雜志(j.mol.biol),227:381；馬克斯(marks)等人(1991)分子生物學(xué)雜志,222:581。用于制備人類單克隆抗體的其它方法描述于科勒(cole)等人(1985)“單克隆抗體和癌癥療法(monoclonalantibodiesandcancertherapy),”艾倫r.利斯(alanr.liss),第77頁；及博納(boerner)等人(1991)免疫學(xué)雜志(j.immunol.)147:86-95中。還可以通過將人類免疫球蛋白基因座引入轉(zhuǎn)基因動物(例如小鼠)中來制備人類抗體，在這些轉(zhuǎn)基因動物中，已經(jīng)使內(nèi)源免疫球蛋白基因部分地或完全地失活。在免疫激發(fā)之后，觀察到人類抗體的產(chǎn)生，其在所有方面都緊密地類似于在人類所見，包括基因重排、組裝及抗體譜系。這一方法描述于例如美國專利第5,545,807號、第5,545,806號、第5,569,825號、第5,625,126號、第5,633,425號、第5,661,016號，以及以下科技出版物中：馬克斯(marks)等人(1992)生物技術(shù)(bio/technology)10:779-783(1992)；朗伯格(lonberg)等人(1994)自然,368:856-859；莫里森(morrison)(1994)自然,368:812-813；費(fèi)西沃德(fishwald)等人(1996)自然-生物技術(shù)(naturebiotechnology)14:845-851；紐伯格(neuberger)(1996)自然-生物技術(shù),14:826；及朗伯格等人(1995)國際免疫學(xué)評論(intern.rev.immunol.)13:65-93?？贵w可使用如以上所描述的已知的選擇和/或誘變方法進(jìn)行親和力成熟。在一些實(shí)施例中，親和力成熟的抗體的親和力是用于制備所述成熟抗體的起始抗體(一般為鼠類、兔、雞、人類化或人類抗體)的親和力的五倍或更高、十倍或更高、二十倍或更高，或三十倍或更高?？贵w還可以為雙特異性抗體。雙特異性抗體是單克隆的，并且可為對至少兩種不同抗原具有結(jié)合特異性的人類或人類化抗體。在本情形中，所述兩種不同結(jié)合特異性可針對兩種不同的mmp，或針對單一mmp(例如mmp9)上的兩個不同表位。如本文所揭示的抗體還可以是免疫偶聯(lián)物。所述免疫偶聯(lián)物包含與第二分子(例如報導(dǎo)子)偶聯(lián)的抗體(例如針對mmp9的抗體)。免疫偶聯(lián)物還可包含與細(xì)胞毒性劑(例如化學(xué)治療劑)、毒素(例如，細(xì)菌、真菌、植物或動物起源的酶活性毒素，或其片段)或放射性同位素(即，放射性偶聯(lián)物)偶聯(lián)的抗體?！疤禺愋越Y(jié)合到”特定多肽或表位，或?qū)μ囟ǘ嚯幕虮砦弧熬咛禺愋浴钡目贵w是指所述抗體選擇性結(jié)合到目標(biāo)抗原或表位；這些術(shù)語及用于確定特異性結(jié)合的方法是所屬領(lǐng)域中眾所周知的。如果抗體結(jié)合特定目標(biāo)抗原或表位的親和力、親合力、容易性和/或持續(xù)時間高于其與其它物質(zhì)的結(jié)合，那么其展現(xiàn)對所述目標(biāo)抗原或表位的“特異性結(jié)合”。在一些實(shí)施例中，特異性結(jié)合到多肽或表位的抗體是結(jié)合到所述特定多肽或表位，而不實(shí)質(zhì)上結(jié)合到任何其它多肽或多肽表位的抗體。在一些實(shí)施例中，如在約4℃、25℃、37℃或42℃溫度下所測量，所提供的抗體以單克隆抗體、scfv、fab形式或其它抗體形式以等于或小于100nm，任選地小于10nm，任選地小于1nm，任選地小于0.5nm，任選地小于0.1nm，任選地小于0.01nm或任選地小于0.005nm，在某些實(shí)例中介于0.1與0.2nm之間，或介于0.1與10pm之間，例如介于0.4與9pm之間，例如介于0.4與8.8pm之間的解離常數(shù)(kd)特異性結(jié)合到人類mmp9。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明的抗體結(jié)合到mmp9中的一或多個加工位點(diǎn)(例如，蛋白水解裂解位點(diǎn))，由此有效地阻斷酶原或前酶原加工成催化活性酶，并且因此降低mmp9的蛋白水解活性。在某些實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的抗體結(jié)合到mmp9的親和力是其對另一mmp的結(jié)合親和力的至少2倍、至少5倍、至少10倍、至少25倍、至少50倍、至少100倍、至少500倍或至少1000倍。結(jié)合親和力可通過所屬領(lǐng)域中已知的任何方法測量并且可以例如締合速率、解離速率、解離常數(shù)(kd)、平衡常數(shù)(keq)或所屬領(lǐng)域中的任何術(shù)語表示。在某些實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的抗體是抑制mmp9的酶活性(即，催化活性)的抗體，例如mmp9催化活性的非競爭性抑制劑。在某些實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的抗體在mmp9的催化結(jié)構(gòu)域內(nèi)結(jié)合。在其它實(shí)施例中，根據(jù)本發(fā)明的抗體在mmp9的催化結(jié)構(gòu)域外部結(jié)合。還提供了與本文描述的一或多種抗mmp9抗體或其抗原結(jié)合片段競爭結(jié)合到mmp9的抗體或其抗原結(jié)合片段。因此，本發(fā)明涵蓋與例如具有seqidno:1或5-8中任一種的重鏈多肽、seqidno:2或9-12的輕鏈多肽或其組合的抗體競爭結(jié)合的抗mmp9抗體及其功能片段。在一個實(shí)施例中，抗mmp9抗體或其功能片段與本文描述為ab0041的抗體競爭結(jié)合到人類mmp9。還提供了結(jié)合到與任一種或多種本文所述的抗體相同的表位(例如mmp9表位)的抗體和其片段。還提供了特異性結(jié)合到mmp9表位的抗體和片段，其中所述表位包括在mmp9的一個特定區(qū)域或mmp9的多個區(qū)域內(nèi)的氨基酸殘基。這些區(qū)域可包括例如mmp9的結(jié)構(gòu)環(huán)和/或其它結(jié)構(gòu)性結(jié)構(gòu)域，例如經(jīng)顯示對結(jié)合到本文所述的示例性抗體很重要的那些結(jié)構(gòu)域。通常，這些區(qū)域是根據(jù)氨基酸殘基在全長mmp9序列(例如seqidno:27)上的位置界定。在一些實(shí)例中，所述表位含有seqidno:27的氨基酸殘基104-202。在一個實(shí)例中，所述表位含有在seqidno:27的殘基104-119、殘基159-166或殘基191-202的區(qū)域內(nèi)的氨基酸殘基(即，一或多個氨基酸殘基)。在一些方面中，所述表位包括在作為seqidno:27的殘基104-119的mmp9區(qū)域內(nèi)的氨基酸殘基(即，一或多個氨基酸殘基)、在作為seqidno:27的殘基159-166的mmp9區(qū)域內(nèi)的氨基酸殘基，及在作為seqidno:27的殘基191-202的mmp9區(qū)域內(nèi)的氨基酸殘基。在一些情形中，所述表位包括seqidno:27的e111、d113、r162或i198。在一些情形中，其包括seqidno:27的r162。在一些情形中，其包括seqidno:27的e111、d113、r162及i198。mmp9序列人類mmp9蛋白的氨基酸序列如下：蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域示意性顯示于圖3中并且指示于下：成熟全長人類mmp9的氨基酸序列(其為不含信號肽的具有seqidno:27的前肽的氨基酸序列)為：aprqrqstlvlfpgdlrtnltdrqlaeeylyrygytrvaemrgeskslgpallllqkqlslpetgeldsatlkamrtprcgvpdlgrfqtfegdlkwhhhnitywiqnysedlpraviddafarafalwsavtpltftrvysrdadiviqfgvaehgdgypfdgkdgllahafppgpgiqgdahfdddelwslgkgvvvptrfgnadgaachfpfifegrsysacttdgrsdglpwcsttanydtddrfgfcpserlytrdgnadgkpcqfpfifqgqsysacttdgrsdgyrwcattanydrdklfgfcptradstvmggnsagelcvfpftflgkeystctsegrgdgrlwcattsnfdsdkkwgfcpdqgyslflvaahefghalgldhssvpealmypmyrftegpplhkddvngirhlygprpepeprppttttpqptapptvcptgpptvhpserptagptgppsagptgpptagpstattvplspvddacnvnifdaiaeignqlylfkdgkywrfsegrgsrpqgpfliadkwpalprkldsvfeeplskklfffsgrqvwvytgasvlgprrldklglgadvaqvtgalrsgrgkmllfsgrrlwrfdvkaqmvdprsasevdrmfpgvpldthdvfqyrekayfcqdrfywrvssrselnqvdqvgyvtydilqcped(seqidno:28)。信號肽的氨基酸序列為mslwqplvlvllvlgccfa(seqidno:29)。還提供了mmp9多肽，包括突變體mmp9多肽。這些肽可用于例如產(chǎn)生并選擇如本文所提供的抗體和片段。示例性多肽包括具有含seqidno:27的殘基111-198的氨基酸序列的多肽，及具有含seqidno:27的殘基111-198的氨基酸序列并且在seqidno:27的殘基111、113、162或198處具有氨基酸取代或在所有這些殘基處具有氨基酸取代的多肽。這些多肽可用于例如選擇結(jié)合到含這些殘基的表位和/或mmp9的這些殘基對于結(jié)合很重要的抗體，例如本文所述的抗體。本發(fā)明涵蓋結(jié)合mmp9(例如人類mmp9)的任何部分的mmp9結(jié)合蛋白，其中相對于其它mmp，優(yōu)先結(jié)合mmp9的mmp9結(jié)合蛋白是特別值得關(guān)注的。抗mmp9抗體和其功能片段可根據(jù)所屬領(lǐng)域中眾所周知的方法產(chǎn)生。示例性抗mmp9抗體提供于下。小鼠單克隆抗mmp9抗體針對人類mmp9的小鼠單克隆抗體如下獲得。這一抗體含有小鼠igg2b重鏈和小鼠κ輕鏈，并且稱為ab0041。ab0041重鏈的氨基酸序列如下：信號序列加下劃線，并且igg2b恒定區(qū)的序列以斜體表示。ab0041輕鏈的氨基酸序列如下：信號序列加下劃線，并且κ恒定區(qū)的序列以斜體表示。以下氨基酸序列包含ab0041的igg2b重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)和互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)(其中cdr加下劃線)：qvqlkesgpglvapsqslsitctvsgfsllsygvhwvrqppgkglewlgviwtggttnynsalmsrlsiskddsksqvflkmnslqtddtaiyycaryyygmdywgqgtsvtvss(seqidno:3)。以下氨基酸序列包含ab0041的κ輕鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)和互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)(其中cdr加下劃線)：divmtqshkfmstsvgdrvsitckasqdvrntvawyqqktgqspklliysssyrntgvpdrftgsgsgtdftftissvqaedlavyfcqqhyitpytfgggtkleik(seqidno:4)。其它示例性小鼠抗人類mmp9抗體(例如m4和m12)描述于本文中。示例性抗小鼠mmp9抗體(ab0046)描述于本文中。在一些實(shí)施例中，提供了這些抗小鼠抗體作為代用抗體用于測試并評估如本文所提供的mmp9抑制方法(例如治療方法)的用途。重鏈變體通過改變ab0041重鏈和輕鏈可變區(qū)中的構(gòu)架區(qū)序列來單獨(dú)地修飾所述重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列。這些序列改變的影響是使人類t細(xì)胞表位的抗體耗盡，從而減少或消除其在人體中的免疫原性(安提托普公司(antitope),英國巴布拉漢(babraham,uk)。在含有使鉸鏈結(jié)構(gòu)域穩(wěn)定的s241p氨基酸改變的人類igg4重鏈背景下構(gòu)建四個重鏈變體(安格(angal)等人(1993)分子免疫學(xué)(molec.immunol.)30:105-108)，并且稱為vh1、vh2、vh3及vh4。其構(gòu)架區(qū)和cdr的氨基酸序列如下：vh1qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsllsygvhwvrqppgkglewlgviwtggttnynsalmsrltiskddskstvylkmnslktedtaiyycaryyygmdywgqgtsvtvss(seqidno:5)vh2qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsllsygvhwvrqppgkglewlgviwtggttnynsalmsrltiskddskntvylkmnslktedtaiyycaryyygmdywgqgtlvtvss(seqidno:6)vh3qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsllsygvhwvrqppgkglewlgviwtggttnynsalmsrftiskddskntvylkmnslktedtaiyycaryyygmdywgqgtlvtvss(seqidno:7)vh4qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsllsygvhwvrqppgkglewlgviwtggttnynsalmsrftiskddskntlylkmnslktedtaiyycaryyygmdywgqgtlvtvss(seqidno:8)圖1示出了人類化重鏈可變區(qū)的氨基酸序列的比對并且指示這四個變體的構(gòu)架區(qū)中的氨基酸序列存在差異。輕鏈變體在人類κ鏈背景下構(gòu)建四個輕鏈變體，并且稱為vk1、vk2、vk3及vk4。其構(gòu)架區(qū)和cdr的氨基酸序列如下：vk1divmtqspsflsasvgdrvtitckasqdvrntvawyqqktgkapklliysssyrntgvpdrftgsgsgtdftltisslqaedvavyfcqqhyitpytfgggtkveik(seqidno:9)vk2divmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvrntvawyqqkpgkapklliysssyrntgvpdrftgsgsgtdftltisslqaedvavyfcqqhyitpytfgggtkveik(seqidno:10)vk3diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvrntvawyqqkpgkapklliysssyrntgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyfcqqhyitpytfgggtkveik(seqidno:11)vk4diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvrntvawyqqkpgkapklliysssyrntgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqhyitpytfgggtkveik(seqidno:12)圖2示出了人類化輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列的比對并且指示這四個變體的構(gòu)架區(qū)中的氨基酸序列存在差異。人類化重鏈和輕鏈以所有可能的逐對組合方式組合以產(chǎn)生多種功能性人類化抗mmp9抗體。舉例來說，提供了含具有seqidno:3、5、6、7及8中的任一個中所陳述的氨基酸序列的重鏈可變(vh)區(qū)的抗體；含具有seqidno:4、9、10、11及12中的任一個中所陳述的氨基酸序列的輕鏈可變(vl)區(qū)的抗體；及含具有seqidno:3、5、6、7及8中的任一個中所陳述的氨基酸序列的重鏈可變(vh)區(qū)及具有seqidno:4、9、10、11及12中的任一個中所陳述的氨基酸序列的輕鏈可變(vl)區(qū)的抗體，以及與這些抗體競爭結(jié)合到mmp9的抗體和與這些抗體具有至少或約75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性的抗體。在一個實(shí)例中，所述抗體具有vh區(qū)，所述vh區(qū)的氨基酸序列與seqidno:7具有至少或約75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列一致性；及vl區(qū)，所述vl區(qū)的氨基酸序列與seqidno:12具有至少或約75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性；或具有seqidno:7的vh區(qū)和seqidno:12的vl區(qū)。還提供了與本文所揭示的重鏈可變區(qū)序列具有75％或更高，80％或更高，90％或更高，95％或更高，或99％或更高同源性的其它重鏈可變區(qū)氨基酸序列。此外，還提供了與本文所揭示的輕鏈可變區(qū)序列具有75％或更高，80％或更高，90％或更高，95％或更高，或99％或更高同源性的其它輕鏈可變區(qū)氨基酸序列。還提供了與本文所揭示的重鏈可變區(qū)序列具有75％或更高，80％或更高，90％或更高，95％或更高，或99％或更高序列一致性的其它重鏈可變區(qū)氨基酸序列。此外，還提供了與本文所揭示的輕鏈可變區(qū)序列具有75％或更高，80％或更高，90％或更高，95％或更高，或99％或更高序列一致性的其它輕鏈可變區(qū)氨基酸序列?；パa(bǔ)決定區(qū)(cdr)在一些實(shí)施例中，如本文所揭示的示例性提供的抗mmp9抗體的重鏈cdr具有以下氨基酸序列：cdr1:gfsllsygvh(seqidno:13)cdr2:viwtggttnynsalms(seqidno:14)cdr3:yyygmdy(seqidno:15)。因此，所提供的抗mmp9抗體為具有含如seqidno:13中所陳述的氨基酸序列的重鏈cdr1區(qū)的抗體、具有含如seqidno:14中所陳述的氨基酸序列的重鏈cdr2區(qū)的抗體，及具有含如seqidno:15中所陳述的氨基酸序列的重鏈cdr3區(qū)的抗體，以及與這些抗體競爭結(jié)合或結(jié)合到mmp9上與這些抗體相同的表位的抗體。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:15中所陳述的序列的vhcdr。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:13和14中所陳述的序列的vhcdr。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:13和15中所陳述的序列的vhcdr。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:14和15中所陳述的序列的vhcdr。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:13、14及15中所陳述的序列的vhcdr。在一些實(shí)施例中，如本文所揭示的示例性抗mmp9抗體的輕鏈cdr具有以下氨基酸序列：cdr1:kasqdvrntva(seqidno:16)cdr2:sssyrnt(seqidno:17)cdr3:qqhyitpyt(seqidno:18)。因此，所提供的抗mmp9抗體為具有含如seqidno:16中所陳述的氨基酸序列的輕鏈cdr1區(qū)的抗體、具有含如seqidno:17中所陳述的氨基酸序列的輕鏈cdr2區(qū)的抗體，及具有含如seqidno:18中所陳述的氨基酸序列的輕鏈cdr3區(qū)的抗體，以及與這些抗體競爭結(jié)合或結(jié)合到mmp9上與這些抗體相同的表位的抗體。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:18中所陳述的序列的vlcdr。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:16和17中所陳述的序列的vlcdr。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:16和18中所陳述的序列的vlcdr。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:17和18中所陳述的序列的vlcdr。在一些情形中，所述抗體含有具seqidno:16、17及18中所陳述的序列的vlcdr。示例性人類化變體抗mmp9抗體ab0045(人類化的經(jīng)修飾igg4(s241p))含有人類化ab0041重鏈變體vh3(具有seqidno:7(qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsgfsllsygvhwvrqppgkglewlgviwtggttnynsalmsrftiskddskntvylkmnslktedtaiyycaryyygmdywgqgtlvtvss)中所陳述的序列)和人類化ab0041輕鏈變體vh4(具有vk4(具有seqidno:12(diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvrntvawyqqkpgkapklliysssyrntgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqhyitpytfgggtkveik)中所陳述的序列)中所陳述的輕鏈序列)。ab0045抗體含有1312個氨基酸的長度，由兩個重鏈和兩個輕鏈構(gòu)成并且具有約7.90的理論pi值、對于1g/l在280nm下約1.50au/cm的消光系數(shù)、約144kda的分子量及在調(diào)配緩沖液中約1g/ml的密度(50-100mg/ml產(chǎn)物濃度)。ab0045抗體的重鏈具有seqidno:49(信號序列加下劃線；恒定區(qū)序列以斜體呈現(xiàn)))中所陳述的序列；ab0045抗體的輕鏈具有seqidno:50(信號序列加下劃線；恒定區(qū)序列以斜體呈現(xiàn))中所陳述的序列。所述抗體另外包括通過稱為m4的雜交瘤所產(chǎn)生的抗體，即，含有以下重鏈(igg2b)序列：(信號肽以加下劃線文字陳述，可變區(qū)以無格式文字陳述，并且恒定區(qū)以斜體陳述)，及以下輕鏈(κ)序列：(信號肽以加下劃線文字陳述，可變區(qū)以無格式文字陳述，并且恒定區(qū)以斜體陳述)(seqidno:31)的抗體。m4抗體具有含以下氨基酸序列的可變重鏈：qvqlkesgpglvapsqslsitctvsgfsllsygvhwvrqppgkglewlgviwtggstnynsalmsrlsiskddsksqvflkmnslqtddtamyycaryyyamdywgqgtsvtvss(cdr1、2及3(分別為seqidno:34、35及36)加下劃線)(seqidno:32)；及含以下氨基酸序列的可變輕鏈：divmtqshkfmftsvgdrvsitckasqdvrntvawyqqktgqspklliysasyrntgvpdrftgsisgtdftftissvqaedlalyycqqhystpytfgggtklevk(cdr1、2及3(分別為seqidno:37、38及39)加下劃線)(seqidno:33)。這些抗體另外包括通過稱為m12的雜交瘤產(chǎn)生的抗體，即，僅具有κ鏈的抗體，其具有以下序列：(信號肽以加下劃線文字陳述，可變區(qū)以無格式文字陳述，并且恒定區(qū)以斜體陳述)(seqidno:40)。m12抗體具有含以下氨基酸序列的可變輕鏈：divmtqsqkfmstsvgdrvsvtckasqnvgtnvawyqqkpgqspkaliysasyrfsgvpdrftgsgsgtdftltisnvqsedlaeyfcqqynsypytfgggtkleik(cdr1、2及3(分別為seqidno:42、43及44)加下劃線)(seqidno:41)。這些抗體另外包括稱為ab0046的小鼠抗體，其具有含以下氨基酸序列的κ輕鏈：(信號肽以加下劃線文字陳述，可變區(qū)以無格式文字陳述，并且恒定區(qū)以斜體陳述)；及含以下氨基酸序列的igg1重鏈：(信號肽以加下劃線文字陳述，可變區(qū)以無格式文字陳述，并且恒定區(qū)以斜體陳述)。以下氨基酸序列包含ab0046的igg1重鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)和互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)(其中cdr加下劃線)：qvqlqqpgsvlvrpgasvklsctasgytftsywmnwvkqrpgqglewigeiypisgrtnynekfkvkatltvdtssstaymdlnsltsedsavyycarsranwddywgqgttltvss(seqidno:47)。以下氨基酸序列包含ab0046的κ輕鏈可變區(qū)的構(gòu)架區(qū)和互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)(其中cdr加下劃線)：diqmtqttsslsaslgdrvtiscsasqgisnylnwyqqkpdgtfklliyytsilhsgvpsrfsgsgsgtdysltisnlepediatyycqqygwlprtfgggtkleik(seqidno:48)。用于目前所提供的方法、組合物及組合中的抗體可包括本文所述抗體中的任一種，包括抗體和抗體片段，包括含有各種示例性重鏈和輕鏈、重鏈和輕鏈可變區(qū)及cdr的任何組合的那些。編碼抗mmp9抗體的核酸本發(fā)明提供了編碼抗mmp9抗體和其功能片段的核酸。因此，本發(fā)明提供了一種編碼如本文所述的抗體或抗原結(jié)合片段的分離的多核苷酸(核酸)、含有這些多核苷酸的載體及用于將這些多核苷酸轉(zhuǎn)錄并翻譯成多肽的宿主細(xì)胞和表達(dá)系統(tǒng)。本發(fā)明還涵蓋呈質(zhì)粒、載體、轉(zhuǎn)錄或表達(dá)盒形式的構(gòu)建體，其包含至少一種如上述的多核苷酸。本發(fā)明還提供一種包含一或多種如上述的構(gòu)建體的重組宿主細(xì)胞，以及制造本文所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，所述方法包含在重組宿主細(xì)胞中表達(dá)編碼重鏈多肽和輕鏈多肽的核酸(在相同或不同宿主細(xì)胞中并且來自相同或不同構(gòu)建體)。表達(dá)可以通過在適當(dāng)條件下培養(yǎng)含有所述核酸的重組宿主細(xì)胞來實(shí)現(xiàn)。在通過表達(dá)進(jìn)行制造之后，可使用任何適合的技術(shù)分離和/或純化抗體或抗原結(jié)合片段，隨后在適當(dāng)時使用。用于在多種不同宿主細(xì)胞中克隆并表達(dá)多肽的系統(tǒng)是眾所周知的。適合宿主細(xì)胞包括細(xì)菌、哺乳動物細(xì)胞、酵母及桿狀病毒系統(tǒng)。所屬領(lǐng)域中可用于表達(dá)異源多肽的哺乳動物細(xì)胞系包括中國倉鼠卵巢細(xì)胞、海拉細(xì)胞(helacell)、幼倉鼠腎細(xì)胞、nso小鼠黑素瘤細(xì)胞及許多其它細(xì)胞。常用的細(xì)菌宿主是大腸桿菌。所選擇或構(gòu)建的適合載體可含有適當(dāng)調(diào)控序列，包括可操作地連接的啟動子序列、終止子序列、聚腺苷酸化序列、增強(qiáng)子序列、標(biāo)記物基因和/或(適當(dāng)時)其它序列。適當(dāng)時，載體可為質(zhì)粒、病毒，例如噬菌體或噬菌粒。有關(guān)進(jìn)一步詳情，參見例如，分子克隆實(shí)驗指南:第2版,薩姆布魯克等人,1989,冷泉港實(shí)驗室出版社(coldspringharborlaboratorypress)。許多已知的用于操作核酸，例如制備核酸構(gòu)建體、誘變、測序、將dna引入細(xì)胞中和基因表達(dá)，以及蛋白質(zhì)分析的技術(shù)和方案詳細(xì)描述于精編分子生物學(xué)實(shí)驗指南(shortprotocolsinmolecularbiology),第二版,奧蘇貝爾等人編,約翰威立出版公司(johnwiley&sons),1992中。薩姆布魯克等人和奧蘇貝爾等人的揭示內(nèi)容以全文引用的方式并入本文中。編碼所關(guān)注多肽的核酸被整合到宿主細(xì)胞基因組中或可維持穩(wěn)定或短暫游離體元件形式。多種表達(dá)控制序列(即，控制可操作地連接到的dna序列的表達(dá)的序列)中的任一種都可用于這些載體中以表達(dá)dna序列。舉例來說，編碼所關(guān)注多肽的核酸可以可操作地連接到啟動子，并且提供于表達(dá)構(gòu)建體中以用于制造重組mmp9蛋白或其部分的方法中。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，編碼本文所揭示的抗體鏈的核酸可使用分子生物學(xué)中的標(biāo)準(zhǔn)知識和程序合成。編碼本文所揭示的重鏈和輕鏈氨基酸序列的核苷酸序列的實(shí)例如下：由于抗體結(jié)構(gòu)，包括可變區(qū)中的cdr和構(gòu)架區(qū)的并置、構(gòu)架區(qū)的結(jié)構(gòu)以及重鏈和輕鏈恒定區(qū)的結(jié)構(gòu)是所屬領(lǐng)域中眾所周知的；故獲得編碼抗mmp-9抗體的相關(guān)核酸正在所屬領(lǐng)域的技能范圍內(nèi)。因此，還提供了包含與本文所揭示的核苷酸序列中的任一種具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％及至少99％同源性的核酸序列的多核苷酸。因此，還提供了包含與本文所揭示的核苷酸序列中的任一種具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％及至少99％一致性的核酸序列的多核苷酸。在一個實(shí)例中，所述多核苷酸與seqidno:21含有至少或約75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性，或包括或為seqidno:21，和/或與seqidno:26含有至少或約75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列一致性，或包括或為seqidno:26。醫(yī)藥組合物提供的mmp9結(jié)合蛋白，以及編碼mmp9結(jié)合蛋白的核酸(例如dna或rna)可為例如與醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑組合的醫(yī)藥組合物形式。所述醫(yī)藥組合物可用于例如在體內(nèi)或離體投予個體，并且用于用mmp9結(jié)合蛋白診斷和/或治療個體，例如用于本文所提供的治療或診斷方法中的任一種中。醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑為經(jīng)投藥的患者生理學(xué)上可接受的并且保持與其一起投予的抗體或肽的治療特性。醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑或賦形劑及其調(diào)配物大體上描述于例如雷氏藥學(xué)大全(remington'pharmaceuticalsciences)(第18版,a.杰納羅(a.gennaro)編,默克出版公司(mackpublishingco.),賓夕法尼亞州伊斯頓(easton,pa)1990)中。一種示例性醫(yī)藥載劑是生理鹽水。在與所述調(diào)配物的其它成分可相容并且對患者實(shí)質(zhì)上無害的意義上看，每種載劑或賦形劑為“醫(yī)藥學(xué)上可接受的”。醫(yī)藥組合物可經(jīng)調(diào)配以與特定投藥途徑(全身或局部)相容。因此，醫(yī)藥組合物包括適于通過各種途徑投藥的載劑、稀釋劑或賦形劑。醫(yī)藥組合物可包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的添加劑。添加劑的實(shí)例包括(但不限于)糖，例如甘露糖醇、山梨糖醇、葡萄糖、木糖醇、海藻糖、山梨糖、蔗糖、半乳糖、葡聚糖、右旋糖、果糖、乳糖及其混合物。醫(yī)藥學(xué)上可接受的添加劑可與醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑和/或賦形劑(例如右旋糖)組合。添加劑還包括表面活性劑，例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。所述調(diào)配物和遞送方法一般將根據(jù)有待治療的部位和疾病來調(diào)整。示例性調(diào)配物包括(但不限于)適于腸胃外投藥(例如靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下投藥)或經(jīng)口投藥的調(diào)配物。供腸胃外遞送的醫(yī)藥組合物包括例如水、生理鹽水、磷酸鹽緩沖的生理鹽水、漢克氏溶液(hank'ssolution)、林格氏溶液(ringer'ssolution)、右旋糖/生理鹽水、及葡萄糖溶液。所述調(diào)配物可含有用于模擬生理條件的輔助物質(zhì)，例如緩沖劑、張力調(diào)節(jié)劑、潤濕劑、清潔劑等。添加劑還可包括其它活性成分，例如殺菌劑或穩(wěn)定劑。舉例來說，所述溶液可含有乙酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、脫水山梨糖醇單月桂酸酯或三乙醇胺油酸酯。其它腸胃外調(diào)配物和方法描述于白(bai)(1997)神經(jīng)免疫學(xué)雜志(j.neuroimmunol.)80:6575；瓦倫(warren)(1997)神經(jīng)科學(xué)雜志(j.neurol.sci.)152:3138；及托尼蓋瓦(tonegawa)(1997)實(shí)驗醫(yī)學(xué)雜志(j.exp.med.)186:507515中。腸胃外制劑可封裝于由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多劑量小瓶中。供靜脈內(nèi)、真皮內(nèi)或皮下投藥的醫(yī)藥組合物可包括無菌稀釋劑，例如水、生理鹽水溶液、非揮發(fā)性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶劑；抗細(xì)菌劑，例如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，例如抗壞血酸、谷胱甘肽或亞硫酸氫鈉；螯合劑，例如乙二胺四乙酸；緩沖劑，例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽；及用于調(diào)整張力的試劑，例如氯化鈉或右旋糖。供注射的醫(yī)藥組合物包括水溶液(在水溶性情況下)或分散液及在臨用前制備無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末。對于靜脈內(nèi)投藥，適合載劑包括生理鹽水、抑菌性水、cremophoreltm(巴斯夫公司(basf)，新澤西州帕西帕尼(parsippany,n.j.))或磷酸鹽緩沖的生理鹽水(pbs)。載劑可為含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇及液體聚乙二醇等)及其適合混合物的溶劑或分散介質(zhì)?？衫缋冒?例如卵磷脂)，在分散液的情況通過保持所需粒度及利用表面活性劑來維持流動性?？辜?xì)菌劑和抗真菌劑包括例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、抗壞血酸及硫柳汞。在所述組合物中可包括等滲劑，例如糖、多元醇(例如甘露糖醇、山梨糖醇)及氯化鈉。所得溶液可經(jīng)包裝以按原樣使用，或經(jīng)凍干；凍干的制劑可以后在投藥之前與無菌溶液組合。醫(yī)藥學(xué)上可接受的載劑可含有使吸收或清除穩(wěn)定、增加或延遲的化合物。所述化合物包括例如碳水化合物，例如葡萄糖、蔗糖或葡聚糖；低分子量蛋白質(zhì)；降低肽清除率或水解的組合物；或賦形劑或其它穩(wěn)定劑和/或緩沖劑。延遲吸收的試劑包括例如單硬脂酸鋁和明膠。也可以使用清潔劑來使醫(yī)藥組合物的吸收穩(wěn)定或者增加或減少，包括脂質(zhì)體載劑。為了防止消化，可使所述化合物與組合物形成復(fù)合物，以使其對酸性和酶促水解具有抗性，或可使所述化合物與具有適當(dāng)抗性的載劑(例如脂質(zhì)體)形成復(fù)合物。保護(hù)化合物免于消化的手段是所屬領(lǐng)域中已知的(參見例如，費(fèi)克斯(fix)(1996)藥學(xué)研究(pharmres.)13:17601764；薩曼倫(samanen)(1996)藥學(xué)與藥理學(xué)雜志(j.pharm.pharmacol.)48:119135；及美國專利第5,391,377號，其描述了供經(jīng)口遞送治療劑的脂質(zhì)組合物)。本發(fā)明的組合物可與如本文所提供的其它治療部分或成像/診斷部分組合。治療部分和/或成像部分可作為單獨(dú)組合物，或作為mmp9結(jié)合蛋白上存在的偶聯(lián)的部分提供。供體內(nèi)投藥的調(diào)配物一般為無菌的。在一個實(shí)施例中，所述醫(yī)藥組合物被調(diào)配成不含熱原質(zhì)，由此使其可接受用于投予人類患者。依據(jù)本發(fā)明，各種其它醫(yī)藥組合物及其制備和使用技術(shù)將為所屬領(lǐng)域技術(shù)人員所知。有關(guān)適合藥理學(xué)組合物和相關(guān)投藥技術(shù)的詳細(xì)清單，可參考本文的詳細(xì)教示，其可通過例如雷氏藥物學(xué)與實(shí)踐(remington:thescienceandpracticeofpharmacy)第20版(利平科特威廉姆斯威爾金斯出版公司(lippincott,williams&wilkins)2003)等課本進(jìn)一步補(bǔ)充。醫(yī)藥組合物可基于需要治療的患者/個體的身體特征、投藥途徑等進(jìn)行調(diào)配。這些可包裝于適合醫(yī)藥包裝中，并附上適當(dāng)標(biāo)記供分配到醫(yī)院和診所，其中所述標(biāo)記是用于指示治療個體的如本文所述的病癥。藥物可按單一或多個單位形式包裝。有關(guān)本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的劑量和投藥的說明書可包括在以下所述的醫(yī)藥包裝和試劑盒中。使用方法本發(fā)明的mmp9結(jié)合蛋白，包括抗mmp9抗體及其片段可用于例如治療和診斷方法中，例如檢測樣品中的mmp9的方法、治療方法(例如，如在抑制血管生成的方法中)及診斷和預(yù)后方法。因此，提供了抗mmp9抗體的診斷和治療方法及用途。使用方法的實(shí)例描述于下。治療方法本文提供了治療方法，包括治療與mmp9表達(dá)和/或活性有關(guān)的疾病和病癥(包括癌癥以及炎癥性疾病和自體免疫性疾病和相關(guān)病況)的方法，以及所提供的抗體和組合物在這些方法中的用途。所述疾病和病癥包括(但不限于)癌癥，例如腫瘤(例如原發(fā)性或轉(zhuǎn)移性腫瘤)，例如表達(dá)mmp9或安置于表達(dá)mmp9的組織中的那些，例如結(jié)腸直腸癌和其它癌癥，例如胃腺癌、結(jié)腸直腸腺癌、肝細(xì)胞癌瘤，和其它腫瘤類型，以及炎癥性和自體免疫性疾病和病況，例如ibd(包括uc、克羅恩氏病)、膠原性結(jié)腸炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，及與炎癥和mmp9介導(dǎo)的組織破壞相關(guān)的其它病癥。在一些情形中，所述疾病或病況是晚期胰腺或食管胃腺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌瘤、肺腺癌、胃腺癌、結(jié)腸直腸癌瘤、胰臟腺癌、頭頸鱗狀細(xì)胞癌瘤或肝細(xì)胞癌瘤。如實(shí)例中所證實(shí)，基質(zhì)金屬蛋白酶(mmp)并且特別是mmp9的表達(dá)與多種疾病的病理學(xué)(包括炎癥性疾病和腫瘤學(xué))相關(guān)。mmp9可通過其對基底膜和其它結(jié)構(gòu)蛋白的破壞性重塑和/或通過增加例如tgfβ、vegf、tnfα、il-6及il-1β等生長因子和細(xì)胞因子的血管滲透性和生物利用率來促進(jìn)疾病。mmp9調(diào)控ecm隔離的vegf和fgf-2，以及膜拴系的egf的生物利用率。如實(shí)例中所述，使用如本文所述的抗體特異性抑制mmp9在公認(rèn)的小鼠癌癥和炎癥性疾病模型(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌，及潰瘍性結(jié)腸炎(uc)模型)中有效。如本文所使用，“治療(treat/treatment)”意謂與本文所述疾病或病癥有關(guān)的一或多種癥狀的停滯或發(fā)生延緩，或改善現(xiàn)有的不受控制或不想要的癥狀、預(yù)防其它癥狀，或改善或預(yù)防癥狀的潛在代謝原因。因此，所述術(shù)語表示已賦予患有疾病或癥狀，或有可能發(fā)生所述疾病或癥狀的哺乳動物個體有益結(jié)果。當(dāng)患者經(jīng)歷疾病的病征或癥狀的部分或完全減輕，或減少時，實(shí)現(xiàn)反應(yīng)，并且具體地包括(不限于)存活期延長。取決于預(yù)后因子，包括復(fù)發(fā)次數(shù)、疾病的階段及其它因素，所測量的預(yù)期無進(jìn)展存活時間可為數(shù)月到數(shù)年。還提供了結(jié)合這些方法使用的醫(yī)藥組合物，例如含有本文所述抗體或其片段中的任一種的醫(yī)藥組合物。組合物可適于通過任何適合途徑局部或全身投予。一般來說，mmp9結(jié)合蛋白是以治療有效量投予，例如以實(shí)現(xiàn)個體中腫瘤生長的抑制、抑制轉(zhuǎn)移、抑制mmp9活性或治療特定疾病或病況(例如癌癥、炎癥性疾病或病況，或自體免疫性疾病或病況)的量投予。如本文所使用，除非另作具體說明，否則術(shù)語“治療有效量”或“有效量”是指當(dāng)投予(單獨(dú)或與另一治療劑組合，如可能具體說明的)個體時有效預(yù)防或改善疾病病況或疾病的進(jìn)展，或使癥狀改善，例如使相關(guān)醫(yī)學(xué)病況得到治療、治愈、預(yù)防或改善，或使這些病況的治療、治愈、預(yù)防或改善的幾率增加的藥劑或化合物或組合物的量。當(dāng)應(yīng)用于單獨(dú)投予的個別活性成分時，治療有效劑量僅指所述成分。當(dāng)應(yīng)用于組合時，治療有效劑量是指引起治療作用的多種活性成分的組合量，無論是依序還是同時組合投予。在一個實(shí)例中，當(dāng)采用抗mmp9抗體的體內(nèi)投予時，取決于投藥途徑，標(biāo)準(zhǔn)劑量可在每天每公斤哺乳動物體重約10ng到100mg或更高，優(yōu)選地每天約1μg/kg到50mg/kg，任選地每天約100μg/kg到20mg/kg、每天500μg/kg到10mg/kg，或每天1mg/kg到10mg/kg間變化。在一些實(shí)例中，所述抗體或其片段是例如以約1mg/kg到30mg/kg或約30mg/kg劑量靜脈內(nèi)投予。在一些實(shí)例中，所述抗體或片段是例如以約2mg/kg到約28mg/kg劑量靜脈內(nèi)投予。在一些實(shí)例中，所述抗體或片段是例如以約4mg/kg到約28mg/kg劑量靜脈內(nèi)投予。在其它實(shí)例中，所述抗體或片段是以約1mg/kg到14mg/kg或約14mg/kg，例如2mg/kg或約2mg/kg到14mg/kg或約14mg/kg劑量，每14天一次(q14d)靜脈內(nèi)投予。在一些實(shí)施例中，有效劑量是每7到28天一次投予。在一個實(shí)施例中，有效劑量是每7天一次投予。在另一個實(shí)施例中，有效劑量是每28天一次投予。在一個實(shí)施例中，所述抗體或其片段是例如以約1mg/kg到30mg/kg或約30mg/kg劑量皮下投予。在其它實(shí)施例中，皮下劑量在1mg/kg或約1mg/kg到28mg/kg或約28mg/kg范圍內(nèi)，例如在2mg/kg或約2mg/kg到28mg/kg或約28mg/kg范圍內(nèi)，每14天一次。在其它實(shí)例中，所述抗體或片段是以約1mg/kg到14mg/kg或約14mg/kg，例如2mg/kg或約2mg/kg到14mg/kg或約14mg/kg劑量，每14天一次皮下投予。在一些實(shí)施例中，有效劑量是每7到28天一次投予。在一個實(shí)施例中，有效劑量是每7天一次投予。在另一個實(shí)施例中，有效劑量是每28天一次投予。在一些實(shí)例中，抗體是例如以每公斤體重50、75、100、125、150、175、200、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、525、550、570、600、625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975或1000mg劑量靜脈內(nèi)投予。在其它實(shí)例中，抗體是例如以1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700或1800mg/kg劑量靜脈內(nèi)投予。在一些實(shí)例中，抗體是例如以每公斤體重100、200、400、600、1200或1800mg劑量，并且在一些實(shí)例中以133、267、400、600或1200mg/kg劑量靜脈內(nèi)投予。在一些事例中，所述抗體是以一周、兩周或三周的間隔，或每一周、兩周或三周一次投予。在一些實(shí)例中，適當(dāng)劑量是用0.9％氯化鈉制備。所選劑量方案將取決于多種因素，包括mmp9結(jié)合蛋白的活性、投藥途徑、投藥時間、所用特定化合物的排泄速率、治療持續(xù)時間、與所用特定組合物組合使用的其它藥物、化合物和/或材料、所治療的患者的年齡、性別、體重、病況、一般健康狀況和前病史，及醫(yī)療技術(shù)中眾所周知的類似因素。在一些實(shí)施例中，劑量是基于展示目標(biāo)介導(dǎo)的處置的抗體的藥物動力學(xué)模型確定。相較于所觀察的針對可溶性受體目標(biāo)的抗體的相對呈線性的藥物動力學(xué)，針對基于組織的目標(biāo)受體的抗體常常展現(xiàn)非線性藥物動力學(xué)。馬格d.e.(mager,d.e.)(2006),先進(jìn)藥物遞送評述(advdrugdelivrev)58(12-13):1326-1356。非線性處置的基礎(chǔ)涉及抗體與目標(biāo)的高親和力結(jié)合以及結(jié)合程度(相對于劑量)，由此使相互作用以抗體的藥物動力學(xué)特征反映。馬格d.e.和w.j.喬斯科(w.j.jusko)(2001),藥物動力學(xué)與藥效學(xué)雜志(jpharmacokinetpharmacodyn)28(6):507-532。目標(biāo)介導(dǎo)的藥物處置內(nèi)包括受體介導(dǎo)的抗體-受體復(fù)合物的內(nèi)吞作用(內(nèi)化作用)。王w.(wang,w.),e.q.王(e.q.wang)等人(2008),臨床藥理學(xué)與治療學(xué)(clinpharmacolther)84(5):548-558。在有關(guān)具有目標(biāo)介導(dǎo)的處置作用的抗體的藥物動力學(xué)模型中，在不存在藥物(抗體)的情況下，目標(biāo)受體是以恒定速率合成并且通過一級過程消除。因此，目標(biāo)受體在不存在藥物(抗體)的情況下是以穩(wěn)態(tài)濃度存在。當(dāng)將藥物添加到體內(nèi)時，其可與目標(biāo)受體通過雙分子反應(yīng)相互作用，分配到灌注不太好的組織中，或經(jīng)由一級過程消除。在較低藥物濃度下，藥物因高親和力結(jié)合而主要移動到受體上。由于進(jìn)入體內(nèi)的藥物量變得足以結(jié)合可用質(zhì)量的受體，故藥物分配到組織中和組織外并且被消除。當(dāng)藥物濃度降低并且組織中的藥物達(dá)到平衡時，此提供另外的儲集器以結(jié)合新合成的受體。具有所屬領(lǐng)域普通技術(shù)的臨床醫(yī)生能容易地確定所需醫(yī)藥組合物的有效量(ed50)并開具處方。舉例來說，醫(yī)師或獸醫(yī)可以比獲得所需治療作用所需水平低的水平的以醫(yī)藥組合物形式使用的本發(fā)明化合物的劑量開始并逐步增加劑量直到達(dá)成所需作用。在一些情形中，治療方法包括腸胃外投藥，例如靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、真皮內(nèi)、肌肉內(nèi)或皮下投藥；或經(jīng)口投予藥物，例如抗mmp9抗體或含有其的組合物。如本文所使用，術(shù)語“個體”意謂哺乳動物個體。示例性個體包括(但不限于)人類、猴、狗、貓、小鼠、大鼠、母牛、馬、山羊及綿羊。在一些實(shí)施例中，所述個體患有癌癥、炎癥性疾病或病況，或自體免疫性疾病或病況，并且可用如以下所述的本發(fā)明的藥劑治療。在某些實(shí)施例中，所述個體是患有癌癥、炎癥性疾病或病況，或自體免疫性疾病或病況的人類，并且可用如以下所述的本發(fā)明的藥劑治療。必要時，為進(jìn)行治療，方法可進(jìn)一步包括其它療法，例如在癌癥的情況下，除mmp9結(jié)合蛋白外，手術(shù)去除癌癥和/或投予抗癌劑或治療。此類抗癌劑或治療的投予可與本文所揭示的組合物的投予同時或依序進(jìn)行。在一些實(shí)施例中，抗體是作為單藥療法單獨(dú)投予的。在其它實(shí)施例中，所述抗體是作為與一或多種其它治療劑的組合療法的一部分投予的。所述治療劑包括(但不限于)適于治療炎癥、自體免疫性疾病、纖維化疾病或癌癥的藥劑。治療劑可為化學(xué)治療劑、免疫治療劑、抗癌劑、消炎劑或抗纖維化藥劑。在組合療法中，本申請案的抗體可作為一次或前線(front-line)藥劑或者二次或另外的藥劑用于治療有需要的患者。在一些方面中，對于治療炎癥性疾病、纖維化疾病或自體免疫疾病，例如ibd、uc、克羅恩氏病、癌癥或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，抗體是單獨(dú)或與抑制或調(diào)節(jié)激酶(例如細(xì)胞凋亡信號調(diào)控激酶、脾酪氨酸激酶、磷脂酰肌醇3-激酶，或賈納斯激酶(januskinase)或賴氨酰氧化酶、賴氨酰氧化酶樣(loxl)蛋白(例如loxl2)和/或盤狀結(jié)構(gòu)域受體(ddr)(例如ddr1))活性的其它治療劑一起投予。舉例來說，抑制或調(diào)節(jié)loxl2和ddr1活性的治療劑是特異性結(jié)合到loxl2和/或ddr1的抗體。在一個方面中，描述于us2009/0104201、us2009/0053224及us2011-0200606中的抗loxl2抗體及描述于美國臨時申請案第61/705,044號中的抗ddr1抗體被用于組合療法中；這些文獻(xiàn)全部以引用的方式并入本文中。在其它方面中，對于治療患有癌癥的患者，抗體是單獨(dú)或與一或多種化學(xué)治療劑或抗贅瘤劑組合投予，所述化學(xué)治療劑或抗贅瘤劑例如為吉西他濱(gemcitabine)、白蛋白結(jié)合型紫杉醇、mfolfox6(mfolfox6由亞葉酸、氟尿嘧啶(5-fu)及奧沙利鉑(oxaliplatin)組成)、folfiri(由亞葉酸、氟尿嘧啶(5-fu)及伊立替康(irinotecan)組成)、卡鉑、紫杉醇、培美曲塞和/或貝伐單抗。在一個實(shí)例中，對于胰臟腺癌，抗體是以兩周的時間間隔單獨(dú)投予或與周期為28天的吉西他濱和/或白蛋白結(jié)合型紫杉醇化學(xué)療法一起投予。在一個實(shí)例中，對于食管胃腺癌，抗體是以兩周的時間間隔單獨(dú)投予或與周期為28天的mfolfox6化學(xué)療法(其以28天周期投予)一起投予。在一個實(shí)例中，對于非小細(xì)胞肺癌，抗體是以三周的時間間隔單獨(dú)投予，或與周期為21天的卡鉑和紫杉醇化學(xué)療法，或與培美曲塞和/或貝伐單抗一起投予。在一個實(shí)例中，對于結(jié)腸直腸癌，抗體是以兩周的時間間隔單獨(dú)投予，或與周期為14天的folfiri化學(xué)療法一起投予。在所述組合治療中，化學(xué)療法可以已知劑量和程序投予。在一些實(shí)施例中，抗體(例如ab0045)被用于治療患有晚期胰臟腺癌或食管胃腺癌、非小細(xì)胞肺癌、潰瘍性結(jié)腸炎、結(jié)腸直腸癌、克羅恩氏病或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者。在這些實(shí)施例的一些方面中，向患者以一周、兩周或三周的時間間隔靜脈內(nèi)投予每公斤體重100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1100、1200、1300、1400、1500、1600、1700或1800mg劑量的所述抗體。在一些方面中，適當(dāng)劑量是用0.9％氯化鈉制備。在一些方面中，患者接受作為單藥療法或作為與其它治療劑的組合療法的一部分的抗體(例如ab0045)。在一些實(shí)施例中，對于治療uc、癌癥(例如結(jié)腸直腸癌、胰臟癌、胃癌)、克羅恩氏病、炎癥性或纖維化疾病或病癥，或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，抗體(例如ab0045)是單獨(dú)或與其它免疫治療劑，包括針對loxl2(賴氨酰氧化酶樣2)和/或ddr1(盤狀結(jié)構(gòu)域受體1)的抗體一起投予。在一些實(shí)施例中，對于胰臟腺癌，抗體是以兩周的時間間隔單獨(dú)投予或與周期為28天的吉西他濱和/或白蛋白結(jié)合型紫杉醇化學(xué)療法一起投予。在一些實(shí)例中，對于食管胃腺癌，抗體是以兩周的時間間隔單獨(dú)投予或與周期為28天的mfolfox6化學(xué)療法(其以28天周期投予)一起投予。在一些實(shí)例中，對于非小細(xì)胞肺癌，抗體是以三周的時間間隔單獨(dú)投予，或與周期為21天的卡鉑和紫杉醇化學(xué)療法，或與培美曲塞和/或貝伐單抗一起投予。在一個實(shí)例中，對于結(jié)腸直腸癌，抗體是以兩周的時間間隔單獨(dú)投予，或與周期為14天的folfiri化學(xué)療法一起投予。在組合治療的一些方面中，化學(xué)療法或免疫療法藥劑是以已知劑量和程序投予。在一些方面中，mmp9抗體的劑量可經(jīng)調(diào)整并以每公斤體重133、267、400、600或1200mg投予。在每個治療周期之后，監(jiān)測患者的mmp9抗體、mmp9或其它適合生物標(biāo)記物的水平。組合療法中的藥劑可經(jīng)由上述適合途徑同時(在同一組合物中或分開地)或以任何次序依序投予。在一些實(shí)施例中，治療方法包括用于監(jiān)測治療，包括監(jiān)測功效或活性(例如藥效學(xué)活性)的步驟。在一些實(shí)例中，這些方法包括使用所述方法和組合物檢測或測量從所治療的個體獲得的生物測試樣品中標(biāo)記物(例如細(xì)胞因子和指示治療功效的其它炎性標(biāo)記物)的存在、不存在、水平和/或表達(dá)。所述樣品通常為血液樣品或血清樣品，還可包括如本文所述的其它生物樣品。用于這些方法中的標(biāo)記物有組織金屬蛋白酶抑制劑1(timp-1)、腫瘤壞死因子α(tnf-α)、巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2(mip-2)、白細(xì)胞介素-17a(il-17a)、cxcl10、淋巴細(xì)胞趨化蛋白、巨噬細(xì)胞炎性蛋白-1β(mip-1β)、抑瘤素-m(osm)、白細(xì)胞介素-6(il-6)、單核細(xì)胞趨化蛋白3(mcp-3)、血管內(nèi)皮生長因子a(vegf-a)、單核細(xì)胞趨化蛋白-5(mcp-5)、白細(xì)胞介素-1α(il-1α)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子-1(m-csf-1)、髓過氧化物酶(mpo)、生長調(diào)控α蛋白(kc/gro)、白細(xì)胞介素-7(il-7)、白血病抑制因子(lif)、載脂蛋白a-i(apoa-i)、c反應(yīng)蛋白(crp)、粒細(xì)胞趨化蛋白-2(gcp-2)、白細(xì)胞介素-11(il-11)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(mcp-1)、溫韋伯氏因子(vonwillebrandfactor，vwf)及干細(xì)胞因子(scf)基因產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，例如，當(dāng)疾病為ibd(例如uc)時，標(biāo)記物選自kc/gro、lif、cxcl10、mpo、mip-2及mcp-5基因產(chǎn)物。在一些實(shí)施例中，在每個治療周期之后，監(jiān)測患者的mmp9抗體、mmp9或其它適合生物標(biāo)記物的水平。所提供的方法是使安全性型態(tài)相較于可用治療和治療方案有所改善和/或在治療所述疾病和病況時持續(xù)長期功效的方法。炎癥性和自體免疫性疾病和病況在一些實(shí)施例中，所述方法和組合物(例如抗體和其片段)例如通過抑制患有炎癥性疾病或自體免疫性疾病的個體中的mmp9而用于治療所述疾病和病況。炎癥性疾病和自體免疫性疾病為炎癥性腸病(ibd)(包括克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎(uc)及未定型結(jié)腸炎)、膠原性結(jié)腸炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、敗血病、多發(fā)性硬化、肌營養(yǎng)不良、狼瘡、過敏癥及哮喘。如實(shí)例中所述，mmp9和其它mmp涉及于炎癥性疾病和自體免疫性疾病中。在ra患者的血清、滑液及滑膜中誘導(dǎo)基質(zhì)金屬蛋白酶-9(mmp9)，并且mmp9/timp-1比率發(fā)生有利于蛋白水解活性增加的改變。mmp9是由疾病介導(dǎo)的破骨細(xì)胞以及單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系的活化細(xì)胞分泌。在mmp9基因敲除小鼠品系中觀察到對于抗體誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎疾病表型的抗性。mmp9使由膠原酶(例如mmp8)的裂解活性所產(chǎn)生的松散的膠原蛋白ii降解，并且由此引起關(guān)節(jié)軟骨的破壞。然而，鑒于其它mmp的重要作用，需要特異性mmp9抑制劑來治療這些疾病。如本文的實(shí)例中所示，使用公認(rèn)的動物模型證實(shí)，本發(fā)明的抗體在包括ibd、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(ra)及敗血病在內(nèi)的各種炎癥性疾病和自體免疫性疾病中有效。因此，在一些實(shí)施例中，所述方法、組合物及用途治療患有炎癥性疾病和自體免疫性疾病的個體。在一些實(shí)施例中，所述抑制劑、方法和用途抑制mmp9，而不抑制其它mmp，例如不抑制mmp2，或不抑制此類其它mmp達(dá)到顯著程度。在一個實(shí)施例中，所述方法防止或減少患有此類疾病或病況的個體的組織損傷、全身炎癥和/或局部炎癥；在一些實(shí)例中，組織損傷和炎癥兩者是通過所述方法治療的。在另一實(shí)施例中，與用泛mmp抑制劑(例如馬立馬司他)所觀察到的相比較，所述方法與毒性降低和/或肌肉骨骼綜合癥(mss)或類似癥狀的誘發(fā)減少相關(guān)。在一些實(shí)例中，個體對針對炎癥性疾病的另一種療法(例如tnf拮抗劑，例如抗tnf抗體，例如英利昔單抗(infliximab))具有不當(dāng)反應(yīng)，即，患有tnf拮抗劑難治性疾病。因此，所提供的方法為有效治療這些個體的炎癥的方法。炎癥性腸病炎癥性腸病(ibd)包括克羅恩氏病、潰瘍性結(jié)腸炎(uc)及未定型結(jié)腸炎。潰瘍性結(jié)腸炎(uc)是兩種主要ibd之一，以結(jié)腸的彌漫性粘膜炎癥及相關(guān)潰瘍?yōu)樘卣?。uc的慢性過程包括間歇性疾病惡化繼之以緩解期。許多患者經(jīng)歷對例如抗tnfα靶向性治療劑等藥劑的不足反應(yīng)并且持續(xù)受到疾病相關(guān)性癥狀的影響。uc患者在疾病活動8-10年之后患結(jié)腸癌的風(fēng)險顯著升高。炎癥性腸病(ibd)治療劑可通過防止炎性細(xì)胞募集及接近疾病部位，防止疾病部位處細(xì)胞的活化和/或抑制細(xì)胞活化的下游效應(yīng)來調(diào)節(jié)疾病。uc的藥理治療一般是基于疾病的嚴(yán)重程度和疾病的位置或范圍‘分期(byline)’進(jìn)行?；诨颊叩陌Y狀、內(nèi)窺鏡檢查發(fā)現(xiàn)及實(shí)驗室結(jié)果，疾病的嚴(yán)重程度是以輕度、中度或重度表征并且在臨床試驗環(huán)境中通常以梅奧評分(mayoscore)定義，如表1b中所示。表1b：uc梅奧評分如實(shí)例中所述，有證據(jù)支持mmp9在潰瘍性結(jié)腸炎(uc)及其它炎癥性腸病(ibd)的病理學(xué)中的作用。廣譜mmp抑制劑在tnbs和dss結(jié)腸炎模型中有效(內(nèi)藤(naito)和吉川(yoshikawa)2005；梅迪納(medina)和拉多米斯基(radomski)2006)。盡管mmp9和mmp2是兩種最密切相關(guān)的mmp，具有類似的底物特異性，但mmp9蛋白和活性在ibd和臨床前結(jié)腸炎動物模型中被誘導(dǎo)達(dá)到較高程度，并且在人類uc中被較強(qiáng)地誘導(dǎo)并且與進(jìn)行性疾病相關(guān)；mmp2較普遍地表達(dá)并且對于未患病組織的動態(tài)平衡很重要。mmp9的缺乏在小鼠硫酸葡聚糖鈉(dss)誘導(dǎo)的模型中防止結(jié)腸炎，而mmp2對于結(jié)腸具有保護(hù)作用。在dss模型中，中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞積累是mmp9依賴性的；存在上皮細(xì)胞來源的mmp9引起組織損害的證據(jù)。mmp9在人類uc組織而非健康結(jié)腸隱窩中檢測到(其中膠原蛋白iv染色的不同環(huán)標(biāo)記出完整基底膜)，而且在具有混亂的膠原蛋白iv的區(qū)域中檢測到，此指示基底膜完整性的喪失。mmp9降解膠原蛋白iv和其它ecm組分，從而允許炎性細(xì)胞浸潤。在結(jié)腸炎中，粘膜中的mmp9活性可導(dǎo)致隱窩下伏的基底膜降解和粘膜損害，并使粘膜下層暴露于內(nèi)腔細(xì)菌。mmp9使血管周圍的基底膜降解可促進(jìn)白細(xì)胞外滲至疾病部位。細(xì)胞外基質(zhì)中mmp9的活性可活化并釋放炎性細(xì)胞因子，例如tnfα、il-6及il1-b，從而引起疾病進(jìn)展?？捎玫膗c療法并不完全令人滿意。舉例來說，不同的治療一般是基于疾病的嚴(yán)重程度、位置和/或范圍給出。對于不太嚴(yán)重的疾病，治療包括5'-氨基水楊酸(5'-asa)灌腸劑、皮質(zhì)類固醇灌腸劑及口服5'-asa制劑?；加休^嚴(yán)重疾病的患者，和/或無法對一線療法起反應(yīng)的患者一般是用一段時間的口服皮質(zhì)類固醇治療。免疫調(diào)節(jié)劑，例如硫唑嘌呤(azathioprine)和6-巰基嘌呤(6-mp)，被用于幫助個體戒掉類固醇并且維持緩解。抗tnfα療法，例如嵌合抗體(英利昔單抗)一般被用于患有較嚴(yán)重疾病的患者及皮質(zhì)類固醇難治或有依賴性的患者。英利昔單抗治療一般無法長期誘導(dǎo)并維持無類固醇緩解。僅20％的患者到第8周時實(shí)現(xiàn)緩解并且保持緩解直到54周，其中大多數(shù)患者在第30周時復(fù)發(fā)。僅26％的患者能夠?qū)崿F(xiàn)完全無皮質(zhì)類固醇的長期緩解。當(dāng)評價不太嚴(yán)格的反應(yīng)終點(diǎn)來代替緩解(指示癥狀的不完全減少)時，約60％的患者無法維持這種程度的減輕達(dá)30或54周。環(huán)孢霉素(cyclosporine)已幫助住院治療爆發(fā)性uc的患者延遲對手術(shù)的需要，但其作為維持療法的功效尚未確定。手術(shù)是有療效的，其由全結(jié)腸切除術(shù)與回腸貯袋肛管吻合術(shù)(ipaa)兩個步驟組成。然而，全結(jié)腸切除術(shù)對于許多患者來說是不合需要的結(jié)果，使其終生經(jīng)歷頻繁的腸移動，具有較高的性功能障礙的風(fēng)險，并且有50％的發(fā)生結(jié)腸袋炎的風(fēng)險，結(jié)腸袋炎是j袋炎癥，其引起腹瀉，伴隨或不伴隨直腸出血、下墜、急迫、疼痛、失禁及發(fā)燒。此外，在ipaa手術(shù)后，雌性不孕的風(fēng)險明顯增加。如本文實(shí)例中所證實(shí)，本發(fā)明的特異性抗mmp9抗體被證實(shí)在公認(rèn)的uc動物模型中有效，有效防止組織破壞和異常組織重塑，以及促炎性因子的局部和全身下調(diào)。這些抗體對于治療小鼠中dss誘發(fā)的結(jié)腸炎(一種充分確立的用于評價考慮用于治療uc的藥劑的臨床前模型)的多個終點(diǎn)具有穩(wěn)固功效。因此，在一些實(shí)施例中，使用了所述方法和組合物來治療患有炎癥性腸病，例如潰瘍性結(jié)腸炎(uc)、克羅恩氏病或未定型結(jié)腸炎的個體。在一些實(shí)施例中，所述方法和抗體抑制mmp9，而不抑制其它mmp，例如mmp2。在一些實(shí)例中，所述方法和組合物防止基底膜破壞、粘膜損害、粘膜下層暴露于內(nèi)腔細(xì)菌、炎癥、細(xì)胞因子活化及白細(xì)胞外滲。在一些實(shí)施例中，個體患有中度到重度uc，例如患有重度uc。在一些實(shí)施例中，個體患有類固醇依賴性uc。在一些方面中，治療方法代替皮質(zhì)類固醇治療或作為皮質(zhì)類固醇治療的替代方案投予。在一些實(shí)施例中，個體對例如tnf(例如tnf-α)拮抗劑，例如抗tnf抗體(例如英利昔單抗和/或阿達(dá)木單抗(adalimumab))等其它uc療法無反應(yīng)，即，tnf拮抗劑難治性患者。舉例來說，在一些實(shí)施例中，個體是用英利昔單抗療法或其它tnf-α靶向性治療無法實(shí)現(xiàn)長期緩解的患者。在其它情形中，個體對另一uc療法無反應(yīng)，所述uc療法例如為口服或直腸施用例如灌腸劑、栓劑及泡沫劑等治療、5-氨基水楊酸(5-asa)、口服和直腸施用皮質(zhì)類固醇、免疫抑制劑(例如6-巰基嘌呤、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤和/或環(huán)孢霉素)。在一些方面中，所述方法提供了使用相較于這些治療安全性有所改善的方案的治療，或提供了具有更持久、長期功效的治療。在一些情形中，所述方法抑制mmp9，而不影響其它mmp或特定的其它mmp，例如mmp2。在一些實(shí)施例中，在uc的情形中，如果在梅奧評分降低至少3分和30％，其中直腸出血分項評分降低至少1分或絕對直腸出血分項評分為0-1分，那么實(shí)現(xiàn)了對治療“反應(yīng)”。在一些實(shí)施例中，“緩解”定義為梅奧評分≤2，其中無個別分項評分>1。在一些實(shí)施例中，“粘膜愈合”定義為內(nèi)窺鏡檢查分項評分≤1。在一些實(shí)施例中，“類固醇節(jié)制”定義為在開始類固醇治療的患者不繼續(xù)使用類固醇的情況下的緩解。在一些實(shí)施例中，生活質(zhì)量是一個終點(diǎn)并且是使用已知方法(例如，經(jīng)過驗證的生活質(zhì)量測量法，例如ibd-qol或sf-36)評估的?？肆_恩氏病(cd)是一種由復(fù)發(fā)和緩解階段定義的胃腸道慢性炎癥性病癥，并伴隨并發(fā)癥的進(jìn)展，例如瘺形成、膿腫或狹窄。在超過40％的患者中發(fā)生腸外表現(xiàn)，例如葡萄膜炎、關(guān)節(jié)炎、皮膚病變及腎結(jié)石。輕度到中度克羅恩氏病的治療范例是抗生素(例如環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)和滅滴靈(flagyl))、5-asa、布地奈德(budesonide)或全身性皮質(zhì)類固醇，不過，全身性類固醇的長期副作用極大地阻礙了其效用。用這些一線療法失敗的患有輕度到中度疾病的患者在一年時通常用硫唑嘌呤來保持改善。對于硫唑嘌呤失敗的患者或患有較嚴(yán)重疾病的患者，用例如英利昔單抗等藥劑阻斷tnf-α成了最終的選擇。與手術(shù)切除有療效的uc相反，此種療法由于兩個原因而更難用于克羅恩氏病患者：1)疾病彌漫到整個gi道并且在孤立性疾病(例如回腸末端)的情況下，切除常常伴隨切除部位處的疾病復(fù)發(fā)；2)由于所述疾病是透壁的，故手術(shù)切除為患者帶來了將來發(fā)生狹窄和/或瘺的風(fēng)險。盡管使用硫唑嘌呤和英利昔單抗的組合療法對于在第26周時誘導(dǎo)緩解和粘膜愈合方面可能優(yōu)于任一單獨(dú)療法，但同時使用這些藥劑增加了感染和惡性疾病(肝脾t細(xì)胞淋巴瘤)的風(fēng)險，從而限制了其效用。與uc相同，反應(yīng)、緩解、粘膜愈合、類固醇節(jié)制及生活質(zhì)量都將是重要的終點(diǎn)，但在cd中，克羅恩氏病活動性指數(shù)(cdai)一般是經(jīng)過驗證的結(jié)果選擇手段，并且描述于表1c中：表1c：克羅恩氏病活動性指數(shù)：評分<150＝緩解中度疾病≥220重度疾病≥450對療法有反應(yīng)＝可使用超過70分降低或者100分降低來確定反應(yīng)。在一些實(shí)施例中，個體患有中度到重度cd，例如患有重度cd。在一些實(shí)施例中，個體患有類固醇依賴性cd。在一些方面中，治療方法代替皮質(zhì)類固醇治療或作為皮質(zhì)類固醇治療的替代方案投予。在一些實(shí)施例中，個體對例如tnf拮抗劑，例如抗tnf抗體(例如英利昔單抗和/或阿達(dá)木單抗)等其它c(diǎn)d療法無反應(yīng)，即，tnf拮抗劑難治性患者。舉例來說，在一些實(shí)施例中，個體是用英利昔單抗療法或其它tnf-α靶向性治療無法實(shí)現(xiàn)長期緩解的患者。在其它情形中，個體對另一cd療法無反應(yīng)。在一些方面中，所述方法提供了安全性方案相較于這些治療有所改善的治療，或提供了具有更持久、長期功效的治療。癌癥在一些實(shí)施例中，所述方法和組合物(例如抗體和其片段)被用于治療癌癥和腫瘤以及相關(guān)疾病和病況。示例性癌癥包括結(jié)腸直腸癌、胃腺癌、結(jié)腸直腸腺癌及肝細(xì)胞癌瘤。tnf-α在惡性疾病的監(jiān)視中起到重要作用，并因此用抗tnf-α藥劑使腫瘤形成的風(fēng)險增加。如本文在本申請案的實(shí)例中所證實(shí)，防止結(jié)腸直腸腫瘤發(fā)生進(jìn)一步使抗mmp9單克隆抗體療法與抗tnf-α療法相區(qū)分。mmp9在細(xì)胞侵入、轉(zhuǎn)移、血管生成及血管發(fā)生中起到作用。與在炎癥性疾病中的觀察結(jié)果類似，ihc分析顯示，mmp9和mmp2在人類腫瘤組織(包括結(jié)腸直腸癌)中具有截然不同的染色模式，其中對于mmp-9觀察到更一致的腫瘤相關(guān)性陽性。mmp9的檢測方法本發(fā)明還涵蓋檢測個體中的mmp9，例如檢測表達(dá)mmp9的腫瘤或腫瘤相關(guān)性組織，或者與如本文所述的疾病(例如自體免疫性疾病或炎癥性疾病)相關(guān)的組織或流體或其它生物樣品的方法。因此，提供了診斷、監(jiān)測、分期或檢測具有mmp9活性的腫瘤的方法?？煞治鰜碜詡€體(例如，懷疑患有或已知患有與mmp9表達(dá)相關(guān)的腫瘤，或懷疑患有或已知患有另一疾病或病況，例如本文所述的炎癥性疾病或自體免疫性疾病的個體)的樣品(例如，測試生物樣品)中mmp9的存在、不存在、表達(dá)和/或水平。舉例來說，可收集這些樣品，并通過檢測mmp9結(jié)合蛋白(例如，如本文所述的抗體或片段)與樣品中的物質(zhì)(例如蛋白質(zhì))的結(jié)合的存在或不存在來進(jìn)行分析。在一些實(shí)例中，所述方法另外包括將檢測到的結(jié)合的量與結(jié)合到對照樣品的量相比較，或?qū)⑺鶛z測的mmp9水平與對照mmp9水平相比較。在一些情形中，所述方法指示如本文所述的疾病或病況的存在、不存在或嚴(yán)重程度。這一分析可在使用如本文所述的mmp9結(jié)合蛋白的治療起始之前進(jìn)行，或可作為監(jiān)測癌癥治療的進(jìn)展的一部分進(jìn)行。在一些實(shí)施例中，提供了治療方法，其是通過進(jìn)行檢測分析，并例如基于診斷分析的結(jié)果起始、改變或中斷個體的治療來進(jìn)行。所述診斷分析可使用任何樣品進(jìn)行，包括(但不限于)組織、從所述組織分離的細(xì)胞等。在一些情形中，所述方法是對例如血液、血漿、血清、全血、唾液、尿液或精液等液體樣品進(jìn)行的。組織樣品包括例如福爾馬林固定或冷凍的組織切片。用于檢測和分析mmp9的任何適合方法均可使用。所屬領(lǐng)域中已知的各種診斷分析技術(shù)可用于所述目的，例如競爭性結(jié)合分析、直接或間接夾心分析和在非均質(zhì)或均質(zhì)相中進(jìn)行的免疫沉淀分析。用于檢測方法中的mmp9結(jié)合蛋白可用可檢測部分標(biāo)記?？蓹z測部分直接或間接地產(chǎn)生可檢測信號。舉例來說，可檢測部分可為本文所述部分中的任一種，例如放射性同位素，例如3h、14c、32p、35s或125i；熒光或化學(xué)發(fā)光化合物，例如熒光素異硫氰酸酯(fitc)、德克薩斯紅(texasred)、花青苷、光青素(photocyan)、羅丹明(rhodamine)或蟲熒光素；或酶，例如堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或辣根過氧化物酶。檢測可通過使樣品在適于mmp9結(jié)合蛋白結(jié)合到mmp9的條件下接觸，并評估m(xù)mp9結(jié)合蛋白-mmp9復(fù)合物的存在(例如水平)或不存在來實(shí)現(xiàn)。將樣品中mmp9的水平與參考樣品中的水平相比較可指示具有mmp9活性的腫瘤或腫瘤相關(guān)性組織的存在。參考樣品可為在較早時間點(diǎn)從個體取得的樣品或來自另一個體的樣品。在一些方面中，例如通過雜交，例如通過顯色原位雜交(cish)來檢測mmp9mrna。在一些方面中，當(dāng)通過其它檢測方法，例如通過ihc不能確定所需細(xì)胞類型(例如腫瘤上皮細(xì)胞)中高水平炎性細(xì)胞源性mmp9的信號時，使用這些檢測方法。本發(fā)明的各種方面將借助于以下若干實(shí)例進(jìn)一步描述并說明，這些實(shí)例不打算限制本發(fā)明的范圍。實(shí)例實(shí)例1.免疫原性結(jié)果證實(shí)，ab0045和ab0041具有相當(dāng)?shù)慕Y(jié)合和抑制特性，并且ab0046可例如在小鼠人類疾病模型中用作相關(guān)小鼠代用抗體。對嵌合mmp9抗體ab0041和人類化mmp9抗體ab0045的潛在臨床免疫原性進(jìn)行評估。使用了離體人類t細(xì)胞活化分析episcreen(安提托普公司，英國劍橋(cambridge,uk))。在episcreen分析中，t細(xì)胞活化已與患者體內(nèi)的抗體/蛋白質(zhì)治療性反應(yīng)相關(guān)。對代表多種hla單體型的20位健康供體中的cd4+t細(xì)胞的反應(yīng)進(jìn)行檢查。結(jié)果顯示，ab0045抗體在任何供體中都不誘導(dǎo)反應(yīng)并且ab0041在20％的供體中誘導(dǎo)反應(yīng)，并且量值為2.29+/-0.36(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差)。klh的陽性對照在95％的供體中誘導(dǎo)反應(yīng)，并且量值為6.34+/-2.77(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)偏差)。這些結(jié)果顯示，ab0045抗體不可能具有免疫原性。實(shí)例2：在患病和健康結(jié)腸樣品中mmp9的表達(dá)通過免疫組織化學(xué)(ihc)分析，使用mmp9特異性抗體檢查來自潰瘍性結(jié)腸炎(uc)人類患者和健康個體的活檢樣品。使用了針對髓過氧化物酶(mpo，一種中性粒細(xì)胞標(biāo)記物；維茲(wirtz)2007)、膠原蛋白iv(coliv，基底膜)及cd31(內(nèi)皮細(xì)胞)的抗體來評估疾病嚴(yán)重程度和組織基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)。還對timp1和mmp2的染色模式進(jìn)行檢查。還評估了pmk2(一種巨噬細(xì)胞標(biāo)記物)。在健康樣品中，僅在固有層和粘膜下區(qū)域內(nèi)的一小組移行組織細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞中檢測到mmp9免疫反應(yīng)性。相比之下，在全部七份uc樣品中，檢測到更強(qiáng)烈的疾病相關(guān)性信號。在這些樣品中，5份是由速凍方法制備并且2份是福爾馬林固定并且石蠟包埋的。在急性疾病區(qū)(包括膿腫和壞死的隱窩以及含有中性粒細(xì)胞浸潤的隱窩炎區(qū)域)中檢測到增加的mmp9信號。更分散的mmp9信號在固有層內(nèi)的廣泛炎癥性浸潤(大型組織細(xì)胞)中顯而易見。mmp9蛋白位于組織細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及粒細(xì)胞中，并且還在與患病隱窩和血管結(jié)構(gòu)的基底膜相關(guān)的細(xì)胞外基質(zhì)(ecm)中檢測到。此外，在隱窩膿腫、潰瘍區(qū)及內(nèi)腔和隱窩上皮細(xì)胞中觀察到mmp9免疫反應(yīng)性。通常與mmp9共表達(dá)的timp1蛋白也與患病隱窩和炎性浸潤相關(guān)，但程度低于mmp9。除少數(shù)淋巴細(xì)胞外，在uc樣品中未檢測到mmp2蛋白。在急性疾病區(qū)域(包括膿腫和壞死的隱窩以及含有中性粒細(xì)胞浸潤的隱窩炎區(qū)域)和疾病區(qū)域的上皮細(xì)胞中觀察到強(qiáng)烈的mmp9表達(dá)。mmp9表達(dá)在固有層內(nèi)的廣泛炎性浸潤中也顯而易見并且主要位于組織細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中。膠原蛋白iv染色的截然不同的環(huán)標(biāo)出了健康隱窩的完整基底膜，而混亂的膠原蛋白iv指示患病隱窩中基底膜完整性的喪失；mmp9染色與基底膜破壞的區(qū)域共定位。timp1蛋白也與患病隱窩和炎性浸潤相關(guān)，但程度比mmp9低。在克羅恩氏病樣品中，mmp9信號也與患病區(qū)域相關(guān)。在肉芽瘤、間質(zhì)組織細(xì)胞中檢測到mmp9并且其與血管基底膜和ecm膠原蛋白iv共定位。此外，在淋巴細(xì)胞和內(nèi)腔上皮細(xì)胞中檢測到mmp。觀察到某種mmp2反應(yīng)性但不太顯著。在健康結(jié)腸隱窩中未檢測到mmp9信號，但其在具有混亂的膠原蛋白iv的區(qū)域中較強(qiáng)，這指示了基底膜完整性的喪失。這指示了mmp9在潰瘍性結(jié)腸炎的病理學(xué)中的作用。在來自用(英利昔單抗，一種治療性抗tnfα抗體)積極治療的uc患者的結(jié)腸組織中評價mmp9的表達(dá)，證實(shí)了與所評估的其它uc患者結(jié)腸組織類似的染色模式。這一觀察結(jié)果與本研究中抗tnf-α療法無法防止uc中mmp9的誘導(dǎo)作用的結(jié)論一致。ihc分析證實(shí)，人類化變體抗mmp9抗體ab0045結(jié)合到uc患者結(jié)腸組織中的mmp9，并且染色模式類似于用經(jīng)過驗證的ihc抗mmp9抗體觀察到的染色模式。實(shí)例3：正常組織中mmp9的表達(dá)通過ihc分析人類、大鼠及食蟹猴的正常健康組織中mmp9蛋白的水平。從3位個體獲得來自淋巴結(jié)、骨骼肌、前列腺、腎、肝、肺、胃、食道、心臟、結(jié)腸、小腸、腦、卵巢、胰腺、胎盤、皮膚、脊髓、脾、骨骼肌、睪丸、甲狀腺及子宮細(xì)胞類型的二十二種人類速凍組織。用在ihc中表現(xiàn)良好的兩種不同抗mmp9抗體進(jìn)行ihc：兔單克隆抗體(艾比康公司(abcam)，目錄號ab76003)和兔多克隆抗體(西格瑪公司(sigma)，目錄號hpa001238)。使用兩種抗體檢測到類似的染色模式。在人類胸腺、扁桃腺及骨髓中也檢測到mmp9。對來自健康食蟹猴(cynomolgusmonkey/macacafascicularis，1只個體動物)和大鼠(斯普拉-道來品系(sprague-dawleystrain)，2只個體動物)的一些速凍組織進(jìn)行其它表征。在心臟、骨骼肌、前列腺、腎、外周神經(jīng)、小腦、大腦、唾液腺、輸尿管及子宮頸中未檢測到mmp9。在其余測試器官中，在例如巨噬細(xì)胞、組織細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、肥大細(xì)胞及中性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染色中檢測到mmp9。在所檢查的所有人類、食蟹猴及大鼠組織中檢測到類似的mmp9蛋白表達(dá)模式。在所分析的組織中，在食蟹猴淋巴結(jié)、胸腺及扁桃腺中檢測到少量mmp9陽性炎性細(xì)胞。在所有物種中，mmp9染色都在細(xì)胞內(nèi)而非分泌或位于細(xì)胞外基質(zhì)中。實(shí)例4：鼠類uc模型中的抗mmp9抗體硫酸葡聚糖鈉(dss)誘發(fā)結(jié)腸炎模型是一種公認(rèn)的用于評價炎癥性腸病治療的模型。在這一模型中，向小鼠或大鼠經(jīng)口投予dss引起結(jié)腸粘膜的損害。接受dss的動物發(fā)生帶血腹瀉和體重減輕。在這一模型中觀察到的炎癥和組織降解局限于粘膜并且大體上影響整個結(jié)腸。dss誘發(fā)的結(jié)腸炎以與在人類uc中所見到相同的炎癥-發(fā)育不良-腺癌疾病進(jìn)程為特征。在這一模型中所觀察到的疾病定位和病理學(xué)被認(rèn)為提示人類潰瘍性結(jié)腸炎(uc)，包括類似的炎性細(xì)胞浸潤、潰瘍和隱窩膿腫。在dss模型中，被批準(zhǔn)用于治療uc的藥物，例如類固醇、甲硝唑(metronidazole)、5-氨基水楊酸、環(huán)孢霉素及抗tnfα免疫療法，已在降低疾病嚴(yán)重程度方面展現(xiàn)功效。ab0046被用于dss結(jié)腸炎模型(一種14天治療的模型)中。根據(jù)以下實(shí)驗設(shè)計，治療在經(jīng)口暴露于含3％dss的飲用水5天之后開始：從第0天開始到第5天，用3％dss誘發(fā)疾病，并且治療在第6天開始(有關(guān)第1-5組中動物的治療詳情提供于下表2中)；在第14天處死動物。在這一模型中，使用依他普特(etanercept；以商品名銷售)作為抗tnfα療法的治療作用的參考化合物。使用ac-1(一種同型相配(igg1)的不相關(guān)抗體)作為對照物。表2：第1-5組中動物的治療詳情n＝動物數(shù)量；roa＝投藥途徑；ip＝腹膜內(nèi)注射通過視頻內(nèi)窺鏡檢查(第6、10及14天)、動物體重測量、糞便稠度觀察及后續(xù)研究結(jié)腸組織病理學(xué)分析來評價疾病過程。在來自dss處理的結(jié)腸的速凍組織切片中進(jìn)行免疫組織化學(xué)分析以評價在研究起始之后14天(dss停止之后9天)的疾病程度并確定這一模型中mmp9的表達(dá)。結(jié)果顯示于圖5中。如所示，患病區(qū)域顯示組織、結(jié)腸上皮邊界和隱窩結(jié)構(gòu)破壞，及炎性細(xì)胞浸潤。在患病結(jié)腸的固有層中觀察到針對mmp9的強(qiáng)染色，并且此與浸潤性中性粒細(xì)胞(mpoihc)和巨噬細(xì)胞相關(guān)。mmp9免疫反應(yīng)性也與在隱窩和血管結(jié)構(gòu)周圍基底膜膠原蛋白iv染色的區(qū)域共定位，表明這種已知的ecm蛋白質(zhì)底物的活性降解有助于疾病進(jìn)展。mmp2的表達(dá)未受到強(qiáng)烈誘導(dǎo)。如圖6中所示，還觀察到dss暴露動物的結(jié)腸上皮細(xì)胞中mmp9的表達(dá)。使用小動物內(nèi)窺鏡以不知情方式進(jìn)行下部結(jié)腸的視頻內(nèi)窺鏡檢查；基于組織中存在的潰瘍程度、易脆性及血管分布，在1-4分量表上進(jìn)行結(jié)腸炎目測評分。對每只小鼠賦予一個單一評分，其對應(yīng)于在所檢查的整個結(jié)腸長度內(nèi)所觀察到的最嚴(yán)重?fù)p害。結(jié)果顯示于圖7中。如所示，在研究終止(第14天)時，相較于媒劑和ac-1同型對照組，ab0046治療的動物顯示平均內(nèi)窺鏡檢查評分的顯著改善。治療也引起內(nèi)窺鏡檢查評分的顯著改善，在第10天較明顯并且在第14天時量值降低。在研究終止時，從每只動物切除大部分遠(yuǎn)端結(jié)腸，用福爾馬林固定，接著包埋于石蠟中，并切片用于組織學(xué)分析。用蘇木精和伊紅對載片染色并由對治療組不知情的經(jīng)過認(rèn)證的獸醫(yī)病理學(xué)家進(jìn)行檢查。根據(jù)有關(guān)每一參數(shù)的1-4分的評分量表，針對炎癥、浮腫及粘膜壞死對組織進(jìn)行評分。通過將三種個別參數(shù)評分的平均值(炎癥、浮腫及壞死)相加來計算總病理學(xué)評分。結(jié)果顯示于圖8中。如圖8中所示，組織學(xué)評估確定，當(dāng)與未治療的對照動物相比較時，投予dss誘導(dǎo)顯著的炎性細(xì)胞浸潤(主要由中性粒細(xì)胞構(gòu)成，含有較低數(shù)量的巨噬細(xì)胞)、浮腫及粘膜組織壞死。粘膜壞死是有變化地存在并且以通常影響約25％的周圍粘膜表面的部分或完全的表面上皮和隱窩損失為特征。相較于媒劑治療，用ab0046或進(jìn)行治療性治療使疾病病理學(xué)的全部三個方面都顯著減少?？筸mp9抗體(ab0046)的功效當(dāng)與媒劑相比較時是顯著的并且類似于通過所實(shí)現(xiàn)的功效。對來自經(jīng)選擇以反映平均組織病理學(xué)和內(nèi)窺鏡檢查評分的每個研究組的三個結(jié)腸進(jìn)行的免疫組織學(xué)分析披露，在抗mmp9抗體(ab0046)治療之后，mmp9表達(dá)減少，此與在這些組織中疾病跡象減少相關(guān)(參見圖9)，指示了抑制mmp9不會引起補(bǔ)償性誘導(dǎo)作用。一般來說，mmp9蛋白的存在與患病區(qū)域充分相關(guān)。mmp9減少也與治療相關(guān)，不過仍檢測到大量的mmp9蛋白。結(jié)果證實(shí)，mmp9減少與總體疾病減輕相關(guān)。在研究過程中，每天記錄下體重和腹瀉發(fā)生率。體重變化的評價是通過用梯形規(guī)則法計算曲線下面積(auc)來進(jìn)行；類似的有關(guān)糞便稠度的auc計算是通過賦予腹瀉發(fā)生率100分和沒有腹瀉0分來進(jìn)行。結(jié)果顯示于圖10中。如所示，當(dāng)與ac-1同型對照或媒劑相比較時，抗mmp9抗體(ab0046)治療引起對于體重減輕的顯著保護(hù)作用。ab0046治療也使腹瀉發(fā)生率降低約30％，這類似于治療的作用，不過任一療法的所述作用都未達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著性。在dss模型中，投予參考化合物很少使內(nèi)窺鏡檢查和組織學(xué)疾病減少超過50％，并且典型的反應(yīng)在25-30％范圍內(nèi)。在這一情形中，考慮了利用ab0046的功效程度。在這一研究中，ab0046在減少組織學(xué)疾病達(dá)到統(tǒng)計學(xué)顯著程度方面的功效，以及所評價的所有參數(shù)之間的相關(guān)性都是特別值得關(guān)注的。盡管(鑒于在起始給藥之后有限的給藥和組織儲存作用的跡象)抗體給藥方案可能未達(dá)到最佳治療水平，但仍觀察到功效。與用內(nèi)窺鏡檢查、組織病理學(xué)分析及體重終點(diǎn)所觀察到的功效一致，對來自確定疾病的治療模型的終末血清樣品的多分析物酶連免疫吸附劑分析(elisa)披露，抗mmp9(ab0046)治療引起uc炎癥性過程中許多已知介體和標(biāo)記物的全身減少，這在dss模型中上調(diào)。如圖11a中所示，這些介體包括中性粒細(xì)胞趨化因子kc/gro、單核細(xì)胞和活性t細(xì)胞趨化分子cxcl10(uc中的治療目標(biāo))、中性粒細(xì)胞標(biāo)記物mpo、il-6類炎性細(xì)胞因子lif、中性粒細(xì)胞趨化因子mip-2及單核細(xì)胞趨化分子mcp-5(與人類mcp-1共有同源性的小鼠因子)。觀察到ab0046使全身疾病相關(guān)性細(xì)胞因子減少的傾向。如圖11b中所示，一些細(xì)胞因子接近或為定量或檢測的下限水平，包括il-17a(觀察到ab0046治療組平均減少的傾向)和tnf-α(信號太低而無法評估各組之間的差異)。用ab0046治療還觀察到il-6的減少，但與ac-1同型對照(一種展現(xiàn)非特異性活性的抗體)無法區(qū)別。血清mmp-9水平未受到誘導(dǎo)(即，無dss組與媒劑組之間無差異；對于mmp9血清水平測量，藥物抗體的干擾無法排除)。除在抗mmp9抗體(ab0046)治療的動物中觀察到mcp-5水平降低外，用這一治療也使疾病相關(guān)性mcp-1和mcp-3增加減少，與嗜酸性粒細(xì)胞親合素(eotaxin)相同。使用ab0047(由不相關(guān)的雜交瘤產(chǎn)生的抗mmp9抗體)進(jìn)行了另一項小鼠dss結(jié)腸炎治療研究。如圖12a中所示，結(jié)果證實(shí)，抗mmp9ab0047與具有類似的減少內(nèi)窺鏡檢查疾病的傾向。另外，如圖12b中所示，ab0047治療引起與用ab0046研究類似的組織病理學(xué)發(fā)現(xiàn)的傾向。實(shí)例5：鼠類dss結(jié)腸炎模型中的抗mmp9抗體對ab0046在預(yù)防環(huán)境中的功效進(jìn)行評估并與參考藥劑潑尼松龍(prednisolone)相比較。治療組顯示于表3中。在第-1天以指定給藥時程給與指定治療。在第0天起始用3％dss誘發(fā)疾病并如以上所述。在第14天處死動物。表3：在預(yù)防性研究中第1-5組中動物的治療詳情n＝動物數(shù)量；roa＝投藥途徑；ip＝腹膜內(nèi)注射如圖13中所示，在第10天內(nèi)窺鏡檢查評價時觀察到ab0046預(yù)防性治療功效。如圖14中所示，在研究終止時，預(yù)防性抗mmp9(ab0046)治療使炎癥、浮腫及壞死減少，并由此使病理學(xué)總分降低。如圖15中所示，預(yù)防性投予ab0046減少腹瀉的發(fā)生率。實(shí)例6：原位直腸結(jié)腸癌模型中的抗mmp9抗體在異種移植小鼠結(jié)腸直腸癌模型中，使用ab0046和ab0041的混合液進(jìn)一步顯示特異性mmp9抑制的有效性。將來源于人類結(jié)腸直腸癌細(xì)胞系(hct-116；krasg13d突變體)的皮下腫瘤的片段手術(shù)植入裸小鼠的結(jié)腸中，并使其生長到100mm3，之后起始治療。如圖16中所示，在起始治療之后第32天，所述抗體混合液使腫瘤體積變化減小并且使最終腫瘤重量減小(圖16)?？贵w混合液還使轉(zhuǎn)移頻率降低(數(shù)據(jù)未示出)。結(jié)果顯示，使用抗體混合液抑制mmp9使原發(fā)腫瘤生長顯著減少。實(shí)例7：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中的抗mmp9抗體抗mmp9抗體ab0041在佐劑和膠原蛋白誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎(aia、cia)大鼠確定性疾病類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中有效治療炎癥和關(guān)節(jié)損傷。結(jié)果示于圖17a中。使用抗mmp9單克隆抗體ab0041治療使關(guān)節(jié)炎臨床評分降低到與在治療模型(確定疾病的治療)中用確定的療法和甲氨蝶呤(mtx)所觀察到的程度類似的程度。對于疾病的客觀關(guān)節(jié)測量和組織病理學(xué)評估觀察到類似的發(fā)現(xiàn)(炎癥和關(guān)節(jié)破壞的多個參數(shù)的總評分，50mg/kg組)。如圖17a中所示，每周兩次(共計4劑)用50mg/kg、10mg/kg及2mg/kg劑量ab0041觀察到關(guān)節(jié)炎臨床評分降低。如圖17b中所示，在大鼠cia中，在研究結(jié)束(eos)時取得抗體滴度以確定暴露，并且還在治療第10天時取得抗體滴度。在2mg/kg劑量水平下，在血清中不可檢測到ab0046。ab0041治療也有效降低例如tnfα、il-6及il-17a等關(guān)鍵炎性細(xì)胞因子的血清水平，這些細(xì)胞因子在人類炎癥性腸病中也為特征性疾病驅(qū)動劑。結(jié)果顯示于圖18a中。圖19a示出了在這一研究中觀察到的其它血清標(biāo)記物。在cia小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中，使用鼠類代用抗體ab0046觀察到臨床和組織病理學(xué)疾病的減少以及抗mmp9治療的全身性消炎作用的類似結(jié)果。細(xì)胞因子結(jié)果顯示于圖18b中；圖19b示出了在這一研究中所觀察的其它血清標(biāo)記物。實(shí)例8：lps誘發(fā)的敗血病模型中的抗mmp9抗體在另一全身性炎癥性疾病模型中，抗mmp9抗體ab0041治療在大鼠敗血病模型(阿戈恩生物科技公司(aragenbiosciences)，加利福尼亞州吉爾羅伊(gilroy,ca))中防止脂多糖(lps)誘發(fā)的動物死亡，其中ab0041治療的動物中有70％在四天之后存活，與在同型對照治療組中20％存活形成對比。結(jié)果顯示于圖20中。實(shí)例9：肌肉骨骼綜合癥(mss)研究在28天的研究中，相較于泛mmp抑制劑馬立馬司他，評價ab0041與在路易斯大鼠(lewisrat)中的安全性。經(jīng)顯示，臨床上投予小分子泛mmp抑制劑(例如馬立馬司他)可引起肌肉骨骼綜合癥(mss)，這是一種以肩關(guān)節(jié)疼痛和僵硬、關(guān)節(jié)痛、手?jǐn)伩s及患者生活質(zhì)量下降為特征的病癥。用泛mmp抑制劑治療的大鼠也展現(xiàn)mss(具有的癥狀包括在后足上休息的能力減弱、無法移動及高跨閾步態(tài))并且被用作這一病癥的模型系統(tǒng)。這些動物的關(guān)節(jié)展示與在人類疾病中所觀察的組織病理學(xué)類似的滑膜增生和細(xì)胞結(jié)構(gòu)增加。使用這一大鼠肌肉骨骼綜合癥(mss)模型(描述于雷凱維茲r(renkiewiczr)等人,“大鼠中廣譜基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑馬立馬司他誘發(fā)的肌肉骨骼副作用(broadspectrummatrixmetalloproteinaseinhibitormarimastat-inducedmusculoskeletalsideeffectsinrats.)”關(guān)節(jié)炎和風(fēng)濕病(arthritisrheum)2003；48(6):1742-9)，馬立馬司他治療被用作mss誘發(fā)的陽性對照。每周兩次，向每組六只大鼠靜脈內(nèi)投予50mg/kg的ab0041或媒劑-a(10mm磷酸鈉(ph6.5)、140mm氯化鈉、0.01％吐溫20(tween20))。此外，通過手術(shù)植入皮下奧澤特泵(alzetpump)(奧澤特公司(alzet)，加利福尼亞州庫比蒂諾(cupertino,ca)，用馬立馬司他或媒劑-m(50％dmso/50％水)治療每組六只大鼠，所述奧澤特泵以每小時2.5μl的速率遞送，持續(xù)28天時間。馬立馬司他的釋放速率介于每天6.8到5.7mg/kg之間。每天觀察動物并針對mss病征(例如不愿移動和避免使用后足)進(jìn)行評分。使用以下系統(tǒng)來對休息姿勢、步態(tài)及移動意愿評分：休息姿勢評分為0分(正常)、1分(在一只足上休息)或2分(既不在一只足上也不在兩只足上休息)。步態(tài)評為0分(正常)、1分(避免使用一只后足)或2分(避免使用兩只后足)。在刺激后的移動意愿評為0分(正常移動)、1分(略有些不愿的移動)、2分(中等地不愿移動)或3分(非常不愿移動)。此外，每周兩次記錄下體重?？傇u分是以每只動物的步態(tài)評分、休息姿勢評分及移動意愿評分的總和計算。每組的平均總評分是以每天每組所有個別動物的總評分的平均值計算。在投藥前一天及投藥后第1、7、10、14、17、21、24、28天，從所有大鼠收集血清。將血清以10,000xg離心10分鐘并收集起來以在-20℃下儲存。對血清進(jìn)行多分析物血清蛋白分析(rodentmapv2.0，idexx實(shí)驗室(idexxlaboratories))。采集大鼠的組織和肢體，并固定于10％中性緩沖福爾馬林中以使用蘇木精和伊紅(h&e)進(jìn)行組織病理學(xué)分析。使用標(biāo)準(zhǔn)分級系統(tǒng)，相對于媒劑組比較微觀變化：0分(無變化)、1分(極少變化)、2分(輕微變化)、3分(中等變化)及4分(重度變化)。通過間接結(jié)合elisa來測量大鼠血清中的ab0041水平。在4℃下用含2μg/mlab0041的50mm硼酸鈉涂覆elisa板過夜。用含5％牛血清白蛋白(bsa)的磷酸鹽緩沖生理鹽水ph7.4(pbs)阻斷這些板并用含0.05％吐溫20的pbs(pbst)洗滌。通過在pbst中連續(xù)稀釋ab0041以產(chǎn)生在3,000ng/ml到1.5ng/ml范圍內(nèi)的連續(xù)稀釋液來制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。血清樣品在pbst中以至少1:100進(jìn)行稀釋，接著添加到預(yù)先涂覆的elisa板中。一小時培育之后，洗滌這些板并將多克隆山羊抗小鼠igg-hrp檢測抗體(賽默科技公司(thermoscientific)，新澤西州法爾勞恩(fairlawn,nj))以于0.5％bsa/pbs中的1:10,000稀釋液添加到板中。洗滌這些板并通過添加3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺(tmb)(西格瑪阿爾德里奇公司(sigmaaldrich)，密蘇里州圣路易斯(st.louis,mo))保持2分鐘來檢測信號。通過添加1m鹽酸(hcl)來停止反應(yīng)并測量在450nm下的吸光度。在softmax軟件包(分子裝置公司(moleculardevices))中使用四參數(shù)曲線擬合來反演計算血清中的ab0041水平。結(jié)果在任一治療組中都未觀察到體重減輕的跡象；所有動物在整個研究中持續(xù)體重增加。每個組的平均每日mss評分±標(biāo)準(zhǔn)偏差概述于圖21中。在整個研究中，在ab0041治療的大鼠中無mss評分的跡象。在研究第12天，五只馬立馬司他治療的大鼠顯示略有跛行并且避免使用一只后足(步態(tài)評分＝1)。在用ab0041、媒劑a或媒劑m治療的任何動物中未檢測到癥狀。在第13天，媒劑m組中的四只動物顯示略有跛行(步態(tài)評分＝1)，這可能是由包埋的泵的重量引起。在第18天，馬立馬司他治療的大鼠展現(xiàn)高于4.0的平均每日總評分，而媒劑m治療的大鼠具有低評分。到第25天，馬立馬司他組的平均評分為5.8分，并且ab0041組的平均評分仍為零。從植入奧澤特泵后第14天起，馬立馬司他組與媒劑-m組之間的每天平均總評分存在統(tǒng)計學(xué)上顯著差異(p<0.05)，其中從第20天到第28天研究終止時，p值<0.0001。用ab0041治療的大鼠和用媒劑-a治療的大鼠在研究過程期間都未顯示肌肉骨骼疾病的任何癥狀。圖22示出了如在第1、7、10、14、17、21、24及28天時在ab0041治療的大鼠中通過elisa測量的ab0041血清水平(血清滴度)。從第0天到第28天，平均穩(wěn)態(tài)水平在2-4mg/ml范圍內(nèi)，指示在研究過程期間，大鼠暴露于抗體。通過血清生化檢查和組織病理學(xué)分析來評估ab0041治療作用與媒劑-a治療作用的比較。血清生化檢查含有堿性磷酸酶、血清谷氨酸丙酮酸和草酰乙酸轉(zhuǎn)胺酶、肌酸磷酸激酶、白蛋白、總蛋白質(zhì)、球蛋白、總膽紅素、血脲氮、肌酸酐、膽固醇、葡萄糖、鈣、磷、碳酸氫鹽、氯化物、鉀及鈉。在兩個組中，血清生化檢查的水平類似并且都在正常范圍內(nèi)并類似(數(shù)據(jù)未示出)。這指示ab0041治療不會對正常動態(tài)平衡引起任何顯著混亂。此外，對來自ab0041和媒劑-a組的初級器官進(jìn)行組織病理學(xué)分析。收集來自心臟、肺、肝、脾、腎、淋巴結(jié)、胃、腸、皮膚、肌肉及胸骨的組織并用h&e染色，并且用顯微鏡檢查。在ab0041組或媒劑-a組中都未觀察到治療相關(guān)性異常(數(shù)據(jù)未示出)。另外，評價來自ab0041治療的大鼠和馬立馬司他治療的大鼠的肢體的軟組織變化以及骨骼和關(guān)節(jié)變化。在馬立馬司他組中觀察到纖維化和滑膜炎，但在ab0041組中未觀察到。在馬立馬司他治療的大鼠中，纖維化在輕度到重度范圍內(nèi)并且常在踝和腕仲觀察到。在馬立馬司他治療的大鼠的大多數(shù)關(guān)節(jié)中還發(fā)現(xiàn)滑膜炎并且為輕度的，并以滑膜細(xì)胞增殖、滑液增加及炎性細(xì)胞浸潤為特征。對來自兩組大鼠的后膝關(guān)節(jié)的h&e染色觀察到類似結(jié)果。在ab0041治療的大鼠中未觀察到滑膜炎或纖維化，而在馬立馬司他治療的大鼠中見到纖維組織形成的組織病理學(xué)證據(jù)。這一發(fā)現(xiàn)與ab0041治療組大鼠的mss臨床癥狀缺乏一致。因此，從起始治療之后第12天開始，路易斯大鼠的治療引起所有動物的肌肉骨骼疾病的多種癥狀，包括mss的特征性病征，包括對步態(tài)、姿勢及移動意愿的顯著影響。相比之下，僅用ab0041或媒劑治療路易斯大鼠不誘導(dǎo)mss的任何臨床、身體或組織學(xué)癥狀。在ab0041組或媒劑組中，以血清化學(xué)或組織學(xué)參數(shù)未檢測到明顯差異或異常。ab0041治療組中mss癥狀的缺乏不是由藥物生物利用率不良引起，因為血清滴度分析顯示，在整個研究持續(xù)期間保持較高的ab0041暴露量。與由馬立馬司他引起的泛mmp抑制作用相比，ab0041對mmp9的特異性抑制不誘發(fā)mss。實(shí)例10：原位異種移植模型中的抗mmp9抗體如實(shí)例6中所述，在原位異種移植小鼠crc模型中檢查ab0041和ab0046的活性。異種移植模型的免疫組織化學(xué)分析顯示，mmp9存在于基質(zhì)炎性細(xì)胞和腫瘤上皮細(xì)胞中。在研究i(植入后17天)、ii(植入后14天)及iii(植入后14天)中，在治療之前，使腫瘤生長到約70mm3。在研究i中，用媒劑、對照iggac-1(ac-1)、ab0041(h)、或ab0041與ab0046的1:1混合物(m+h)治療每組十五只小鼠。在ac-1、h及m+h組中，一周兩次對小鼠腹膜內(nèi)投予15mg/kg的每種抗體。在m+h組中，在治療第一天，對小鼠預(yù)投予50mg/kg的ab0046。在媒劑組中，一周兩次對小鼠腹膜內(nèi)投予媒劑。在研究ii中，用媒劑、ac-1、ab0041(h)、ab0041與ab0046的1:1混合物(m+h)、5-氟尿嘧啶(5-fu)、或5-fu及ab0041與ab0046的1:1混合物的組合(5-fu+m+h)治療每組十五只小鼠。在ac-1、h、m+h及5-fu+m+h組中，一周兩次對小鼠腹膜內(nèi)投予15mg/kg的每種抗體。在m+h和5-fu+m+h組中，在治療第一天，對小鼠預(yù)投予50mg/kg的ab0046。在5-fu和5-fu+m+h組中，一周兩次對小鼠腹膜內(nèi)投予20mg/kg的5-fu。在媒劑組中，一周兩次對小鼠腹膜內(nèi)投予媒劑。在研究iii中，用媒劑或ab0041與ab0046的1:1混合物(m+h)治療每組五只小鼠，其中體重比研究ii中平均重20％。如研究ii中所述，對小鼠投藥。在研究期間，測量ab0041和ab0046的滴度。一周一次，分別使用測徑器和電子秤測量原發(fā)腫瘤大小和體重。通過測量觸及的腫瘤的垂直次要尺寸(w)和主要尺寸(l)來獲得基于測徑器的大小估計值。通過公式(w2xl)/2來計算近似腫瘤體積(mm3)。使用非參數(shù)曼-惠特尼秩和測試來測定p值(*＝0.05到0.01，**＝0.01到0.001，***＝<0.001)。對于rodentmap分析，還使用了錯誤發(fā)現(xiàn)率(fdr)分析來測定q值；最大可接受的錯誤發(fā)現(xiàn)率設(shè)定為0.05。正規(guī)化腫瘤體積計算如下：將在每個測量時間點(diǎn)時個別小鼠的腫瘤體積針對其“第0天”腫瘤體積(在治療起始時的腫瘤體積)正規(guī)化，并且接著對所述組中每只小鼠的這些正規(guī)化值求平均值以得到每個時間點(diǎn)的組平均正規(guī)化體積。當(dāng)觀察到最大腫瘤負(fù)荷時結(jié)束研究，收集并檢查原發(fā)結(jié)腸腫瘤和具有轉(zhuǎn)移的任何器官。用靶向人類mmp9與小鼠mmp9的抗體的1:1混合物治療引起與實(shí)例6中類似的功效(圖16和23)。在研究ii中，m+h組的治療功效與5-fu組中的功效相當(dāng)(圖23c、23d)。5-fu是一種起到抗代謝物作用并具有抗贅生活性的嘧啶類似物。在研究i中，僅抑制hmmp9在限制腫瘤生長方面的作用類似于抑制mmp9的抑制作用(m+h)(圖24)。表4和5概述了如研究i和ii所測量的腫瘤體積和體重的曼-惠特尼p值。表4：研究ii數(shù)據(jù)的曼-惠特尼p值*＝0.05到0.01，**＝0.01到0.001，***＝<0.001表5：研究i數(shù)據(jù)的曼-惠特尼p值*＝0.05到0.01，**＝0.01到0.001，***＝<0.001，-＝>0.05與對照組相比較，hmmp9和mmmp9的關(guān)節(jié)抑制使研究i中的轉(zhuǎn)移發(fā)生率降低。僅抑制腫瘤來源的mmp9也不太有效。這一結(jié)果與基質(zhì)mmp9在導(dǎo)致遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的侵襲過程中的較強(qiáng)作用(相對于腫瘤來源的mmp9)一致。在研究iii中，兩個組的正規(guī)化腫瘤體積之間的差異是顯著的(圖23e和23f)。在植入后36天或在治療后21天，媒劑組相對于m+h組的p值為0.0362。在研究i中，來自媒劑治療的小鼠的腫瘤的免疫組織化學(xué)(ihc)分析證實(shí)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的mmp9水平低于基質(zhì)來源(例如定居巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞)的mmp9。異種移植模型腫瘤中mmp9的表達(dá)模式類似于人類crc中的表達(dá)模式；mmp9的腫瘤細(xì)胞表達(dá)是不均勻的，并且表達(dá)水平在給定的腫塊區(qū)域內(nèi)可變化極大。在研究i中，腫瘤切片的h&e染色和壞死組織百分比的目測評估未披露對照動物相對于抗mmp9治療的動物中壞死程度的任何顯著差異。如果通過最終重量將腫瘤劃分成單獨(dú)組并且接著進(jìn)行分析，那么對于最終重量小于或等于0.4g的腫瘤，在抗mmp9治療組中存在壞死增加的微小傾向(相對于對照組)(所有對照腫瘤為約11％并且所有mmp9抗體治療的腫瘤為約7％)，但所述差異不具有統(tǒng)計學(xué)顯著性(p＝0.146；曼-惠特尼分析)。如實(shí)例6中所述，對研究再進(jìn)行血清分析。通過rodentmap評估一組58種分析物中的血清蛋白質(zhì)。通過曼-惠特尼測試評估顯著性，隨后通過錯誤發(fā)現(xiàn)率分析提供q值。如圖25中所示，當(dāng)與媒劑組相比較時，c反應(yīng)蛋白(一種炎癥標(biāo)記物)、cxcl2/mip-2(一種中性粒細(xì)胞吸引劑和活化劑)、vegf-a及ccl7/mcp-3(一種使大多數(shù)白細(xì)胞類型活化并且刺激單核細(xì)胞釋放mmp9的趨化因子)、t淋巴細(xì)胞及nk細(xì)胞在抗mmp9(m+h)組中顯著減少。在研究i和ii結(jié)束時收集的血清中測量ab0041(抗hmmp9抗體)和ab0046(抗mmmp9抗體)滴度。平均起來，ab0041和ab0046的終末血清濃度在100到300μg/ml范圍內(nèi)(數(shù)據(jù)未示出)。這些研究的結(jié)果證實(shí)，在小鼠異種移植模型中用人類特異性和小鼠特異性單克隆抗體的混合液靶向mmp9使四個獨(dú)立研究中的原發(fā)腫瘤的生長減少，并且也使轉(zhuǎn)移的發(fā)生率降低。僅用抗人類mmp9抗體治療得到與用抗人類mmp9抗體和抗小鼠mmp9抗體治療類似的腫瘤生長減少。這表明，在這一異種移植模型中，腫瘤來源的人類mmp9(而非基質(zhì)來源的小鼠mmp9)是腫瘤細(xì)胞增殖的比較占優(yōu)勢的驅(qū)動劑。用抗人類mmp9和抗小鼠mmp9的混合液治療的小鼠中小鼠血清蛋白水平的變化(如與媒劑處理的小鼠相比較)證實(shí)，如與媒劑治療的小鼠相比較，血管生成因子vegf以及炎性因子c反應(yīng)蛋白cxcl2和ccl7在抗mmp9治療的小鼠中顯著減少，與mmp9在炎癥和血管生成中的作用一致。又，腫瘤上皮來源的mmp9涉及到原發(fā)腫瘤的長出并且靶向基質(zhì)mmp9增加針對轉(zhuǎn)移發(fā)生率的功效。實(shí)例11：使用抗mmp9抗體的治療性治療ab0045被用于治療患有晚期胰臟腺癌或食管胃腺癌、非小細(xì)胞肺癌、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩氏病或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者。以一周、兩周或三周的時間間隔，對這些患者靜脈內(nèi)投予每公斤體重100、200、400、600、1200或1800mg劑量的抗體。適當(dāng)劑量是用0.9％氯化鈉制備。患者接受作為單藥療法或作為與其它治療劑的組合療法的一部分的ab0045。對于治療uc、克羅恩氏病或類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，將ab0045單獨(dú)或與包括針對loxl2(賴氨?；趸笜?)和/或ddr1(盤狀結(jié)構(gòu)域受體1)的抗體在內(nèi)其它免疫治療劑一起投予。對于胰臟腺癌，抗體是以兩周的時間間隔單獨(dú)投予或與周期為28天的吉西他濱和/或白蛋白結(jié)合型紫杉醇化學(xué)療法一起投予。對于食管胃腺癌，抗體是以兩周的時間間隔單獨(dú)投予或與周期為28天的mfolfox6化學(xué)療法(其以28天周期投予)一起投予。對于非小細(xì)胞肺癌，抗體是以三周的時間間隔單獨(dú)投予，或與周期為21天的卡鉑和紫杉醇化學(xué)療法，或與培美曲塞和/或貝伐單抗一起投予。在這些組合治療中，化學(xué)療法是以已知劑量和程序投予。mmp9抗體的劑量可經(jīng)調(diào)整并以每公斤體重133、267、400、600或1200mg投予。在每個治療周期之后，監(jiān)測患者的mmp9抗體、mmp9或其它適合生物標(biāo)記物的水平。實(shí)例12：類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中的抗mmp9抗體實(shí)例7顯示了ab0041在治療大鼠和小鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎方面的功效。本實(shí)例提供了對實(shí)例7中動物的另外表征，所述動物是用媒劑；2、10或50mg/kg的ab0041(在大鼠模型中)或ab0046(在小鼠模型中)；10mg/kg的enbrel；或0.5mg/kg的甲氨蝶呤(mtx)治療。除表6中所示的在實(shí)例7中進(jìn)行的臨床評分外，還測量所治療動物的爪腫脹、踝直徑及體重。這些測量在隨機(jī)分組之前一周一次進(jìn)行并且在隨機(jī)分組之后一周三次進(jìn)行。如圖26(大鼠)和29(小鼠)中所示，在大鼠中投予ab0041和在小鼠中投予ab0046在所有劑量下引起臨床疾病的定性和定量測量值的顯著逆轉(zhuǎn)/緩和。結(jié)果還顯示，用ab0041或ab0046治療在50mg/kg下使軟組織疾病、關(guān)節(jié)損害及破壞的所有測量值減小。抗mmp9抗體的功效與用enbrel和甲氨蝶呤(mtx)所觀察到的功效相當(dāng)。表6：有關(guān)爪臨床評分的量表和標(biāo)準(zhǔn)量表a臨床病征0.0無紅斑或腫脹的跡象0.5局限于一小塊區(qū)域的少量紅斑或腫脹1.0踝或腕的少量紅斑或腫脹1.5局限于踝或腕的中度紅斑和輕度腫脹2.0局限于一半爪的中度紅斑和輕度腫脹2.5擴(kuò)展到超過一半爪的中度紅斑和輕度腫脹3.0擴(kuò)展到超過一半爪的中度紅斑和中度腫脹3.5擴(kuò)展到超過3/4的爪的重度紅斑和腫脹4.0發(fā)生于整個爪的重度紅斑和腫脹a每個爪接受其自身的評分并且對于理論最大值16，合計每只動物的這些值此外，用顯微鏡檢查后肢的軟組織變化(浮腫、組織/血管壞死、炎性細(xì)胞浸潤及纖維組織形成)以及軟骨和骨骼變化(軟骨侵蝕、骨骼侵蝕、骨膜骨骼形成、滑膜炎、關(guān)節(jié)翳形成及關(guān)節(jié)破壞)。使用以下標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)重程度評分：0＝無顯著變化；1＝極少；2＝輕度；3＝中度；以及4＝重度。嚴(yán)重程度評分是基于每個肢體的總體變化。進(jìn)行免疫組織化學(xué)(ihc)分析以評估m(xù)mp9、tnf-α、cd68及組織蛋白酶k的水平。在范圍為0-4分的定性量表上進(jìn)行抗tnf-α染色和抗cd68的評分，其中0分是未患病關(guān)節(jié)的水平，并且4分是在媒劑治療的肢體中觀察到的最高表達(dá)。對于抗tnf-α評分，對肢體在跖跗關(guān)節(jié)前面的整個區(qū)域進(jìn)行評分。使用每個肢體3-4張由距骨形成的關(guān)節(jié)中的滑膜的圖像來評價抗cd68染色，其中每個膜的評分求平均值并且將所述值指定為總體炎癥評分。從ihc得到的結(jié)果顯示了在包括軟骨損害和骨骼侵蝕前面的活動性患病區(qū)的區(qū)域中以及在關(guān)節(jié)翳組織中mmp9的表達(dá)。另外，表達(dá)mmp9的細(xì)胞被鑒別為破骨細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系的細(xì)胞。在用50mg/kgab0041治療的大鼠中，對cd68和tnf-α進(jìn)行定量。由ihc得到的結(jié)果披露，與媒劑治療組相比較，在這一組中cd68和tnf-α顯著減少(圖27)。這些結(jié)果指示了骨骼和軟骨降解細(xì)胞類型(破骨細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞譜系細(xì)胞)以及炎癥和關(guān)節(jié)炎的全身介體(tnf-α)的減少。此外，使用elisa對終末血清樣品的血清盤分析進(jìn)行表征。概述于圖18a和28(大鼠)以及18b和19b(小鼠)中的結(jié)果顯示了炎癥介體和疾病進(jìn)展的一致減少。如圖28中所示，在大鼠中ab0041治療引起內(nèi)源mmp9抑制劑組織金屬蛋白酶抑制劑(timp)-1、白細(xì)胞有絲分裂因子粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(gm-csf)、中性粒細(xì)胞吸引劑和活化劑巨噬細(xì)胞炎性蛋白(mip)-2、自然殺手細(xì)胞和單核細(xì)胞趨化因子mip-1β、造血干細(xì)胞分化劑巨噬細(xì)胞集落刺激因子(m-csf)-1、il-6家族細(xì)胞因子抑瘤素m(osm)、趨化劑c-x-c基元趨化因子(cxcl)10和單核細(xì)胞趨化蛋白(mcp)-5、自然殺手細(xì)胞和t細(xì)胞活化蛋白il-12p70，及免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)劑干擾素(inf)-γ、il-12和il-7的統(tǒng)計學(xué)顯著減少。在enbrel治療的大鼠中未觀察到血清標(biāo)記物的減少，而甲氨蝶呤治療引起這些標(biāo)記物的一致性增加。如圖19b中所示，在小鼠中ab0046治療引起中性粒細(xì)胞吸引劑和/或活化劑kc/gro、mip-2及gcp-2；nk和t細(xì)胞吸引劑淋巴細(xì)胞趨化蛋白；單核細(xì)胞趨化劑mcp-1和mcp-3；淋巴細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞趨化劑cxcl-10；il-6樣細(xì)胞因子osm；粒細(xì)胞活化劑mip-1β和mip-1γ；及載脂蛋白(apo)a-1的統(tǒng)計學(xué)顯著減少。在終末血清樣品中測量ab0046滴度。此外，10mg/kg和50mg/kg的給藥方案引起可測量的藥物水平。這些數(shù)據(jù)顯示，在大鼠cia治療模型中用抑制性抗mmp9單克隆抗體治療引起臨床觀察結(jié)果和關(guān)節(jié)炎癥客觀測量值的緩和及逆轉(zhuǎn)、關(guān)節(jié)炎癥和破壞的組織病理學(xué)表現(xiàn)的減少，及疾病介導(dǎo)的細(xì)胞類型和因子的減少。治療作用與參考化合物enbrel和甲氨蝶呤相當(dāng)。用抗mmp9治療觀察到廣泛的全身消炎作用，但投予enbrel或甲氨蝶呤則未觀察到。實(shí)例13：人類腫瘤中mmp9的表達(dá)通過免疫組織化學(xué)(ihc)并通過顯色原位雜交來檢查mmp9和mmp2的蛋白質(zhì)和mrna水平。對來自人類肺鱗狀細(xì)胞癌瘤、肺腺癌、胃腺癌、結(jié)腸直腸腺癌、胰臟腺癌、肝細(xì)胞癌瘤及頭頸鱗狀細(xì)胞癌瘤的組織進(jìn)行表征。在ihc分析中，使用以下兩種截然不同的mmp9特異性抗體對樣品進(jìn)行染色：多克隆抗體西格瑪hpa001238和單克隆抗體艾比康(ab76003)。通過目測評估對給定腫瘤樣品的mmp9陽性腫瘤上皮細(xì)胞百分比進(jìn)行評分。通過在免疫印跡中針對一組mmp進(jìn)行測試來評價用于ihc分析的抗mmp9抗體的特異性?？贵w未針對除mmp9外的任何所測試的mmp展示任何值得關(guān)注的交叉反應(yīng)性。在所調(diào)查的所有腫瘤中，在數(shù)小組組織細(xì)胞(組織定居巨噬細(xì)胞)、中性粒細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞中，以及在非贅生性上皮細(xì)胞和腫瘤上皮細(xì)胞中見到mmp9的免疫反應(yīng)性。還在細(xì)胞外基質(zhì)中發(fā)現(xiàn)分泌的mmp9蛋白，并且其一般與腫瘤內(nèi)的炎性浸潤相關(guān)。在所有癌癥樣品中，mmp9表達(dá)的檢測通常與壞死區(qū)域相關(guān)。在分散在整個腫瘤中的數(shù)小組組織細(xì)胞中檢測到mmp2信號，并且其存在于腫瘤微環(huán)境的反應(yīng)性平滑肌、內(nèi)皮細(xì)胞、小動脈的平滑肌及非贅生性上皮細(xì)胞中。大多數(shù)腫瘤上皮細(xì)胞對mmp2呈陽性，但彌漫性染色模式多于關(guān)于mmp9所觀察的。與mmp9更不均勻的表達(dá)相比較，mmp2表達(dá)在整個組織(贅生性和非贅生性)中更廣泛分布。圖30概述了在本研究中所觀察到的mmp9陽性腫瘤上皮細(xì)胞的百分比?；|(zhì)mmp9陽性也存在于所有樣品中，但并未評分。圖30的x軸上顯示了歸于“陽性”類別的指定腫瘤類型的樣品的百分比。分析顯示在所有腫瘤類型中表達(dá)以及關(guān)于mmp9陽性的程度和來源的每種癌癥類型的圖案特征。cish分析通過數(shù)小組免疫細(xì)胞(特別是巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞)以及例如內(nèi)皮細(xì)胞等其它基質(zhì)成分檢測到腫瘤上皮細(xì)胞中的mmp9mrna。cish分析的結(jié)果顯示，mmp9mrna存在于巨噬細(xì)胞/組織細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及腫瘤上皮細(xì)胞中。另外，mmp9mrna表達(dá)在腫瘤類型內(nèi)和腫瘤類型間不同。在所分析的所有腫瘤中，表達(dá)mmp9mrna的細(xì)胞類型包括數(shù)小組的組織細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞。類似于在ihc分析中的不均勻性，mmp9mrna表達(dá)水平不同。圖31概述了腫瘤上皮細(xì)胞相關(guān)性mmp9mrna的cish分析。x軸上顯示了歸于每個“陽性”類別的指定腫瘤類型的組織樣品的百分比。分析披露在所有腫瘤類型中表達(dá)以及關(guān)于mmp9陽性的程度和來源的每種癌癥類型的圖案特征。由cish和ihc分析得到的結(jié)果顯示在腫瘤上皮細(xì)胞中mmp9的表達(dá)。在一些樣品中，cish檢測到mmp9mrna，其中未檢測到蛋白質(zhì)信號。由于腫瘤來源的mmp9的豐度常常不如炎性細(xì)胞來源的mmp9，故cish分析適于檢測具有高水平炎性細(xì)胞來源的mmp9的樣品中mmp9的表達(dá)，其使腫瘤上皮細(xì)胞來源的mmp9的ihc信號不明顯。序列表修正本<110>吉聯(lián)亞生物科技有限公司喬安妮?亞當(dāng)肯維克茲維多莉亞?史密斯宗?蔡邁克爾?j?霍金斯<120>抗基質(zhì)金屬蛋白酶9抗體<130>246102008440<140>notyetassigned<141>concurrentlyherewith<150>us61/755,444<151>2013-01-22<150>us61/605,181<151>2012-02-29<150>pct/us2012/027160<151>2012-02-29<160>50<170>fastseqforwindowsversion4.0<210>1<211>470<212>prt<213>小家鼠<220><221>chain<222>(1)...(470)<223>ab0041重鏈<220><221>peptide<222>(1)...(19)<223>信號肽<220><221>misc_feature<222>(135)...(470)<223>igg2b恒定區(qū)<400>1metalavalleuvalleupheleucysleuvalalapheprosercys151015valleuserglnvalglnleulysgluserglyproglyleuvalala202530proserglnserleuserilethrcysthrvalserglypheserleu354045leusertyrglyvalhistrpvalargglnproproglylysglyleu505560glutrpleuglyvaliletrpthrglyglythrthrasntyrasnser65707580alaleumetserargleuserileserlysaspaspserlyssergln859095valpheleulysmetasnserleuglnthraspaspthralailetyr100105110tyrcysalaargtyrtyrtyrglymetasptyrtrpglyglnglythr115120125servalthrvalserseralalysthrthrproproservaltyrpro130135140leualaproglycysglyaspthrthrglyserservalthrleugly145150155160cysleuvallysglytyrpheprogluservalthrvalthrtrpasn165170175serglyserleuserserservalhisthrpheproalaleuleugln180185190serglyleutyrthrmetserserservalthrvalproserserthr195200205trpproserglnthrvalthrcysservalalahisproalaserser210215220thrthr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