本發(fā)明涉及α-倒捻子素作為磷酸二酯酶4（pde4）抑制劑的新用途及其在制備治療pde4介導(dǎo)的疾病藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

磷酸二酯酶（pdes）通過(guò)水解細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使環(huán)腺苷酸（camp）和環(huán)鳥苷酸（cgmp），有效控制細(xì)胞內(nèi)的camp和cgmp濃度，從而調(diào)節(jié)體內(nèi)第二信使所傳導(dǎo)的生化作用。它們?cè)谝曈X、嗅覺、代謝方式、肌肉收縮、記憶、免疫反應(yīng)、神經(jīng)傳遞、胞吐作用、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化等生理過(guò)程中起重要作用，是藥物設(shè)計(jì)的重要靶標(biāo)。

磷酸二酯酶4（pde4）是pde酶家族的一員，主要分布于各種炎癥細(xì)胞內(nèi)，肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和上皮細(xì)胞等，可通過(guò)抑制pde4的活性，提高細(xì)胞內(nèi)camp濃度將有助于減輕炎癥反應(yīng)對(duì)機(jī)體的傷害。因此，pde4被認(rèn)為是一種新型抗炎靶標(biāo)。目前，pde4抑制劑已被開發(fā)成抗炎的藥物，如羅氟司特主要用于肺部的炎癥治療，尤其是哮喘和慢性阻塞性肺疾?。╟opd）。

盡管pde4抑制劑已經(jīng)顯示了其有益藥理作用，但這類抑制劑存在引起腹瀉、惡心等不良作用。因此，研究新型的特異性抑制劑，克服這些不良反應(yīng)，就成為pde4抑制劑藥物研究的熱點(diǎn)之一。天然產(chǎn)物是新藥研發(fā)先導(dǎo)化合物發(fā)現(xiàn)的寶庫(kù)，從中尋找具有新型pde4抑制劑，對(duì)于研發(fā)療效高，副作用小的pde4抑制劑抗炎藥物具有重要意義。

α-倒捻子素是山竹garciniamangostanal.中分離的化學(xué)成分，化學(xué)結(jié)構(gòu)如下式所示。α-倒捻子素可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適當(dāng)方法制的，一種試?yán)缘闹苽浞椒▍⒁娭袊?guó)專利申請(qǐng)公布cn102653533a。

α-倒捻子素目前主要用于抗真菌、抗細(xì)菌、抗腫瘤、瘧疾、α-葡萄糖苷酶抑制劑、唾液酸苷酶抑制劑及芳香酶抑制劑。目前尚未有關(guān)于α-倒捻子素作為pde4抑制劑的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明一方面涉及α-倒捻子素或其藥學(xué)上可接受的鹽作為一種磷酸二酯酶4（pde4）抑制劑的用途。

本發(fā)明另一方面提供α-倒捻子素或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備預(yù)防或治療pde4介導(dǎo)的疾病的藥物中的應(yīng)用。

在一些實(shí)施方式中，所述pde4介導(dǎo)的疾病，包括但不限于哮喘和慢性阻塞性肺疾病。

本發(fā)明證實(shí)了天然產(chǎn)物α-倒捻子素對(duì)于磷酸二酯酶的抑制作用，為治療pde4介導(dǎo)的疾病提供良好的前景。

附圖說(shuō)明

圖1是α-倒捻子素對(duì)pde4d2蛋白的抑制作用的曲線圖。

具體實(shí)施方式

藥學(xué)上可接受的鹽

本發(fā)明預(yù)期α-倒捻子素的“藥學(xué)上可接受的鹽”也具有相同的活性。通常，該鹽例如通過(guò)將游離酸或堿形式的這些化合物與化學(xué)計(jì)算量的適當(dāng)堿或酸在水中或在有機(jī)溶劑中或在兩者的混合物中制備。通常，非水性介質(zhì)如乙醚，乙酸乙酯，乙醇，異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。酸加成鹽的實(shí)例包括無(wú)機(jī)酸加成鹽例如，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，硫酸鹽，硝酸鹽，和有機(jī)酸加成鹽，如例如乙酸鹽，馬來(lái)酸鹽，富馬酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，蘋果酸鹽，扁桃酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽。堿加成鹽的實(shí)例包括無(wú)機(jī)鹽如鈉、鉀、鈣、銨、鎂、鋁和鋰鹽；以及有機(jī)堿如乙二胺、乙醇胺、n,n-二烷基乙醇胺、三乙醇胺、葡糖胺和堿性氨基酸鹽。

根據(jù)不同的基因編碼，pde4家族可分4種亞型（pde4a，pde4b，pde4c和pde4d），每一個(gè)亞型又可分為多種次亞型。其中，pde4d的次亞型包含有pde4d1、pde4d2、pde4d3、pde4d4、pde4d5。

的抑制劑

本發(fā)明涉及pde4的抑制劑，所述抑制劑α-倒捻子素或其藥學(xué)上可接受的鹽，用于抑制環(huán)狀核苷酸、尤其是環(huán)狀腺苷酸（camp）向其無(wú)活性的5′-單核核苷酸形式轉(zhuǎn)化。

施用pde4的抑制劑使得camp水平提高所牽涉的生理作用包括：1)廣泛抑制多種免疫組成細(xì)胞的活性；2)誘使氣道平滑肌松弛；3)抑制平滑肌有絲分裂；和4)對(duì)肺神經(jīng)活性具有有益的調(diào)節(jié)作用。

介導(dǎo)疾病

術(shù)語(yǔ)“pde4介導(dǎo)疾病”，如本文所用，是指任意疾病或其他有害的病況，其中pde4同種型（亞型及次亞型）已知發(fā)揮作用，也指那些通過(guò)pde4抑制劑治療減輕的疾病。

可以施用α-倒捻子素用于預(yù)防或治療其中涉及pde4受體的活性且希望抑制pde4受體活性的任何疾病或由pde4活性介導(dǎo)的疾病狀態(tài)（例如其中pde4被過(guò)表達(dá)或過(guò)度活躍的疾病狀態(tài)）。這樣的疾病的例子包括但不限于：各種原因?qū)е碌募毙约奥裕ㄌ貏e是炎癥性和變應(yīng)原誘發(fā)的)呼吸道疾?。ɡ?，哮喘、慢性閉塞性肺病等）；皮膚?。ㄌ貏e是增殖性、炎癥性及過(guò)敏性種類）（例如，干癬（尋常性）、毒性及過(guò)敏性接觸濕疹、特應(yīng)性皮炎、斑禿及其他增殖性、炎癥性及過(guò)敏性皮膚病)；與精神異常相關(guān)的疾病（例如，躁郁病、分裂癥、焦慮癥等)；全身或局部關(guān)節(jié)?。ɡ?，變形性膝關(guān)節(jié)癥、關(guān)節(jié)炎等）；胃腸道區(qū)域的廣泛化炎癥（例如，克羅恩(crohn)?。簧虾粑溃ㄑ屎砬?、鼻）區(qū)域及相鄰區(qū)域（副鼻腔、眼）的過(guò)敏性或慢性、起因于不適當(dāng)?shù)拿庖叻磻?yīng)的疾病（例如，過(guò)敏性鼻炎/副鼻腔炎、慢性鼻炎/副鼻腔炎、過(guò)敏性結(jié)膜炎）等。

α-倒捻子素對(duì)pde4d2蛋白活性的抑制試驗(yàn)：

先將表達(dá)質(zhì)粒pet15b-pde4d2（催化結(jié)構(gòu)域，86-413）轉(zhuǎn)化入大腸桿菌（e.coli）菌株bl21（codonplus）中。攜帶重組質(zhì)粒的e.coli細(xì)胞在lb培養(yǎng)基中在37℃下生長(zhǎng)至a600＝0.7，然后加入0.1mm異丙基-β-d-硫代吡喃半乳糖苷（iptg）誘導(dǎo)表達(dá)，并在16℃培養(yǎng)20-40h。重組的pde4d2催化結(jié)構(gòu)域通過(guò)ni-nta親和柱純化。經(jīng)十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sds-page）測(cè)試可知pde4d2（催化結(jié)構(gòu)域）蛋白質(zhì)的純度達(dá)到95%以上。

α-倒捻子素和含有重組蛋白pde4d2、20mmtris-hcl（ph7.5）、2mm二硫蘇糖醇(dithiothreitol)、10mmmgcl2以及20,000-30,000cpm的³h-camp在室溫下孵育15分鐘,然后分別用0.2mznso4和ba(oh)2中止反應(yīng)，然后利用perkinelmer2910計(jì)數(shù)儀測(cè)量上清液中未反應(yīng)的³h-cgmp，每個(gè)分子至少測(cè)量三次，對(duì)pde4d2蛋白活性抑制的ic50值通過(guò)濃度測(cè)試及非線性回歸，計(jì)算獲得。結(jié)果見圖1。

技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明通過(guò)天然產(chǎn)物α?倒捻子素或其藥學(xué)上可接受的鹽作為磷酸二酯酶4（PDE4）抑制劑的用途，α?倒捻子素對(duì)PDE4的抑制作用，為治療PDE4介導(dǎo)的疾病提供良好的前景。

技術(shù)研發(fā)人員：何細(xì)新;羅海彬;譚冰心;黃儀有
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣州中醫(yī)藥大學(xué);中山大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：2017.05.03
技術(shù)公布日：2017.10.03