本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)康復(fù)領(lǐng)域，尤其是一種針對靶向基因技術(shù)的局灶性缺血性腦卒中后的神經(jīng)元保護和功能恢復(fù)方法。

背景技術(shù)：

1、腦卒中是一種常見的腦血管急癥，可導(dǎo)致嚴重的腦組織損傷，其原因是由于血管突然閉塞或破裂，阻止血液流向腦。兩種主要的腦卒中類型已被確定：出血性腦卒中和缺血性腦卒中。缺血性腦卒中的特點是高發(fā)病率、高死亡率和高復(fù)發(fā)率，約占所有卒中的80％。永久性或短暫性局灶性腦缺血后的腦損傷可引發(fā)一系列的病理生理事件，包括自由基釋放、小膠質(zhì)細胞極化、血腦屏障功能障礙、神經(jīng)元凋亡和神經(jīng)炎癥。缺血半暗帶在腦缺血急性期顯示神經(jīng)元凋亡增加，這一過程被認為是腦缺血損傷的重要組成部分。挽救缺血半暗帶是缺血性腦卒中神經(jīng)保護概念的核心。

2、在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，小膠質(zhì)細胞作為駐留免疫細胞，在缺血性腦卒中后的腦組織損傷、再生和修復(fù)中具有雙重功能。小膠質(zhì)細胞分為促炎m1型和抗炎m2型。m2型小膠質(zhì)細胞被認為通過促進軸突再生、髓鞘再形成、神經(jīng)發(fā)生和血管生成來發(fā)揮神經(jīng)保護功能。外泌體為直徑為30-150nm的多泡體的內(nèi)囊泡，由大腦內(nèi)不同類型的細胞分泌，包括小膠質(zhì)細胞、神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞。一旦多泡體與質(zhì)膜融合，外泌體就被釋放到細胞外空間，同時保護其內(nèi)容物不被降解。它們參與功能性生物化學(xué)物質(zhì)的運輸，如信使rna(mrna)、microrna(mirnas)、細胞因子和蛋白質(zhì)，因此，通過直接將遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移到靶細胞，參與細胞間的通信。

3、最近的一項研究表明，外泌體mirnas對靶細胞表現(xiàn)出調(diào)節(jié)作用，因此實際上可能代表了一種新的細胞內(nèi)通信的途徑。值得注意的是，mirnas是一種小的非編碼rna分子，被加工成核糖核蛋白復(fù)合物，與靶mrna結(jié)合，導(dǎo)致mrna降解或翻譯抑制。一個mirna可以與多個靶點結(jié)合，同時在功能上抑制多個mirna參與生物過程，從而實現(xiàn)對疾病的治療效果。根據(jù)越來越多的證據(jù)，mirnas在廣泛的神經(jīng)系統(tǒng)疾病中具有重要的功能，如脊髓損傷、創(chuàng)傷性腦損傷和腦卒中。它們是大腦中缺血預(yù)處理的內(nèi)源性神經(jīng)保護反應(yīng)必不可少的介質(zhì)。此外，mirnas通過調(diào)節(jié)神經(jīng)元形態(tài)，在功能神經(jīng)元的建立中發(fā)揮關(guān)鍵作用。一些mirnas在大腦中非常豐富，它們可作為神經(jīng)元表型的發(fā)育和維持所需的效應(yīng)因子。它們也在樹突中表達，它們通過調(diào)節(jié)突觸和樹突棘結(jié)構(gòu)，與突觸可塑性有關(guān)。所以，如何通過靶向?qū)嶒炚业揭恍δX卒中患者起到保護和恢復(fù)作用的mirnas，成為當下急需解決的技術(shù)問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明為了解決上述技術(shù)問題，所述神經(jīng)元保護和功能恢復(fù)方法為通過調(diào)控mir-212-5p/plxna2來抑制神經(jīng)損傷，以促進缺血性腦損傷后的神經(jīng)保護和功能恢復(fù)。所述驗證實驗方法通過對腦組織利用qrt-pcr檢測細胞內(nèi)促炎細胞因子和抗炎細胞因子的水平，定量分析短暫性腦缺血后皮質(zhì)缺血半暗區(qū)小膠質(zhì)細胞表型變化以驗證神經(jīng)保護和功能恢復(fù)情況。所述驗證實驗方法為術(shù)后第3天，從腦卒中動物模型的缺血性半暗帶收集小膠質(zhì)細胞外泌體，使用nta、tem和外泌體表面標記物的western?blot分析對分離的外泌體樣本進行鑒定。所述驗證實驗方法為行為測試，以探討mir-212-5p是否能改善mcao/r動物的運動功能，具體使用階梯步行試驗。

2、通過上述的恢復(fù)方法和實驗方法，能夠進一步的判斷mir-212-5p中的plxna2基因是否能夠更好的抑制神經(jīng)損傷，以促進缺血性腦損傷。

技術(shù)特征：

1.局灶性缺血性腦卒中后的神經(jīng)元保護和功能恢復(fù)方法及驗證實驗方法，其特征在于：所述神經(jīng)元保護和功能恢復(fù)方法為通過調(diào)控mir-212-5p/plxna2來抑制神經(jīng)損傷，以促進缺血性腦卒中后的神經(jīng)保護和功能恢復(fù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的局灶性缺血性腦卒中后的神經(jīng)元保護和功能恢復(fù)方法及驗證實驗方法，其特征在于：腦卒中動物模型腦組織中mir-212-5p靶向其下游plxna2基因來抑制神經(jīng)損傷，對腦組織利用qrt-pcr檢測細胞內(nèi)促炎細胞因子和抗炎細胞因子的水平，定量分析短暫性腦缺血后皮質(zhì)缺血半暗帶小膠質(zhì)細胞表型變化以驗證神經(jīng)保護和功能恢復(fù)情況。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的局灶性缺血性腦卒中后的神經(jīng)元保護和功能恢復(fù)方法及驗證實驗方法，其特征在于：所述驗證實驗方法為術(shù)后第3天，從腦卒中動物模型的缺血性半暗帶收集小膠質(zhì)細胞外泌體，使用nta、tem和外泌體表面標記物的westernblot分析對分離的外泌體樣本進行鑒定。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的局灶性缺血性腦卒中后的神經(jīng)元保護和功能恢復(fù)方法及驗證實驗方法，其特征在于：所述驗證實驗方法為行為學(xué)測試，以探討mir-212-5p是否能改善mcao/r動物的運動功能，具體使用階梯步行試驗。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及局灶性缺血性腦卒中后的神經(jīng)元保護和功能恢復(fù)方法及驗證實驗方法，所述神經(jīng)元保護和功能恢復(fù)方法為通過調(diào)控miR?212?5p/PLXNA2來抑制神經(jīng)損傷，以促進缺血性腦卒中損傷后的神經(jīng)保護和功能恢復(fù)。

技術(shù)研發(fā)人員：李思思,林中嘯,李盛村
受保護的技術(shù)使用者：溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬育英兒童醫(yī)院）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/14