本發(fā)明涉及思茅松松塔，特別涉及思茅松松塔黃酮及多糖的提取方法。

背景技術(shù)：

1、松塔為松科松屬植物的球果，又稱松果，未成熟松塔的周身鱗片未張開，全身通體為青綠色；成熟松塔周身的鱗片完全或半完全張開，全身為棕褐色，頂部較尖銳，關(guān)于松塔的利用，不僅僅在現(xiàn)代才有發(fā)現(xiàn)和研究，很久以前就有古人發(fā)現(xiàn)過關(guān)于松塔的一些藥用功效；

2、松塔在未成熟的時候果實是青色的，堅硬無比，到了成熟的時候，果實逐漸變?yōu)樽睾稚[片張開，果實相對較為堅硬，這些就使得松塔沒有一個合適的處理方式，也就沒有一個好的資源利用的途徑，故將其作為燃料則相對較為簡便，但是卻是資源的巨大浪費。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明為了實現(xiàn)上述目的具體采用以下技術(shù)方案：

2、思茅松松塔黃酮及多糖的提取方法，所述提取方法包括以下步驟；

3、步驟一：材料和試劑以及儀器的準備，兩份松塔鱗片、70％乙醇、95％乙醇、蘆丁標準品、5％亞硝酸鈉溶液、10％硝酸鋁溶液、4％氫氧化鈉溶液、5％苯酚、濃硫酸、蒸餾水、粉碎機、回流裝置、酒精燈、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、電子分析天平、若干燒杯、若干100ml容量瓶、若干50ml容量瓶、紫外分光光度計、量杯、圓底燒瓶、若干試管、恒溫水浴鍋；

4、步驟二：松塔黃酮提取，所述松塔黃酮提取為在燒杯內(nèi)加入70％乙醇和其中一份松塔粉末充分混合，再將其轉(zhuǎn)移至回流裝置中進行加熱，回流一段時間后，趁熱過濾，取濾液，后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行濃縮，濃縮至乙醇味不明顯，最后得思茅松松塔黃酮提取液；

5、步驟三：黃酮標準溶液制備，所述黃酮標準溶液制備為稱取蘆丁標準品0.01g，置于100ml容量瓶中，用70％乙醇定容至刻度線，得到0.1g/l的蘆丁標準品溶液，從蘆丁標準品溶液的容量瓶中吸取0.00ml作為空白對照、2.00ml、4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml、12.00ml已配置好的蘆丁標準液，分別加入至50ml容量瓶中，再加入70％乙醇溶液20ml，后依次加入5％亞硝酸鈉溶液1.0ml，搖勻后靜置6分鐘，再加入10％硝酸鋁溶液1.0ml，搖勻后靜置6分鐘，再加入4％氫氧化鈉溶液10ml，以70％乙醇溶液定容至50ml，搖勻后放置15分鐘，510nm處測定吸光度值a，以標準溶液濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，計算線性回歸方程，并繪制吸光度與濃度的標準曲線，得到回歸線方程y＝7.4196x-0.0066，r2＝0.996；

6、步驟四：黃酮標準溶液樣品的測定；

7、步驟五：松塔多糖提取，所述松塔多糖提取為稱取另一份松塔粉末置于圓底燒瓶中，按料液比加入蒸餾水，在對應(yīng)溫度下加熱浸提對應(yīng)時間，水提后過濾，取濾液進行減壓濃縮，濃縮至50ml，用5倍體積的95％的乙醇沉淀，在4℃下靜置48h，后對提取液進行抽濾，取沉淀物，置于烘箱干燥，恒重，得思茅松多糖提取物；

8、步驟六：多糖標準溶液制備；所述多糖標準溶液制備為稱取葡萄糖標準品0.1g，置于100ml容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度線，搖勻，制成葡萄糖標準品溶液，分別移取標準葡萄糖溶液0.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0m、8.0ml、10.0ml，并分別置于6只100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度線，即得到質(zhì)量濃度分別為0mg/ml、0.02mg/ml、0.04mg/ml、0.06mg/ml、0.08mg/ml、0.10mg/ml的系列標準葡萄糖溶液，分別吸取蒸餾水及系列標準葡萄糖溶液各1ml置于6只試管中，向0-6號試管中沿試管壁各加入5％苯酚1ml，再迅速加入5ml濃硫酸，搖勻后靜置5分鐘，然后置于40℃熱水中水浴加熱15分鐘，冷卻后在490nm波長下測定吸光度，以吸光度a為縱坐標，葡萄糖濃度c為橫坐標，繪制葡萄糖標準曲線，得到回歸線方程y＝5.8729x+0.0079，r2＝0.9976；

9、步驟七：多糖標準溶液樣品的測定。

10、進一步地，所述步驟二中的回流時間為25分鐘，過濾采用兩層濾紙過濾，所述步驟二中的趁熱其中的溫度為在30℃以上進行。

11、進一步地，所述步驟四中的黃酮標準溶液樣品的測定為移取1ml松塔黃酮提取液，加入至50ml容量瓶中，按照步驟三的測定方法加入對應(yīng)的顯色試劑，按實驗方法處理后，測定吸光度，記錄數(shù)據(jù)，做數(shù)據(jù)處理計算含量，松塔提取液黃酮含量計算公式如下；

12、

13、r——思茅松松塔黃酮含量(％)；

14、c——思茅松松塔的黃酮濃度(mg/ml)；

15、v——思茅松松塔溶液體積(ml)；

16、n——思茅松松塔溶液稀釋倍數(shù)

17、m——經(jīng)預(yù)處理后稱取的思茅松松塔質(zhì)量(g)。

18、進一步地，所述步驟五中對應(yīng)溫度下加熱浸提對應(yīng)時間，為56℃下加熱30分鐘。

19、進一步地，所述步驟七中的多糖標準溶液樣品的測定為按照步驟六的測定方法來測定提取液的多糖濃度，再根據(jù)公式計算多糖含量，具體公式如下；

20、

21、x——為思茅松松塔多糖的提取率(％)；

22、v——為思茅松松塔多糖溶液的總體積(ml)；

23、c——為葡萄糖標準曲線上查得的溶液濃度(mg/ml)；

24、m——為經(jīng)預(yù)處理后稱取的思茅松松塔粉末(g)。

25、本發(fā)明的技術(shù)效果和優(yōu)點：

26、本發(fā)明將思茅松松塔的預(yù)處理，具體為選取松塔果實張開的鱗片為原料，經(jīng)過預(yù)處理制成松塔粉末樣品，而后探究思茅松松塔提取工藝的最佳工藝條件，提高思茅松松塔資源的利用率，一定程度上促進思茅松松塔資源的利用，再對其深入研究，在最佳工藝條件下探究不同樹齡思茅松松塔天然產(chǎn)物的含量，進一步優(yōu)化了思茅松松塔資源的利用，可以根據(jù)思茅松的樹齡來提高對思茅松松塔資源的利用，更加高效的提取出思茅松松塔的天然產(chǎn)物資源。

技術(shù)特征：

1.思茅松松塔黃酮及多糖的提取方法，其特征在于：所述提取方法包括以下步驟；

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的思茅松松塔黃酮及多糖的提取方法，其特征在于：所述步驟二中的回流時間為25分鐘，過濾采用兩層濾紙過濾，所述步驟二中的趁熱其中的溫度為在30℃以上進行。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的思茅松松塔黃酮及多糖的提取方法，其特征在于：所述步驟四中的黃酮標準溶液樣品的測定為移取1ml松塔黃酮提取液，加入至50ml容量瓶中，按照步驟三的測定方法加入對應(yīng)的顯色試劑，按實驗方法處理后，測定吸光度，記錄數(shù)據(jù)，做數(shù)據(jù)處理計算含量，松塔提取液黃酮含量計算公式如下；

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的思茅松松塔黃酮及多糖的提取方法，其特征在于：所述步驟五中對應(yīng)溫度下加熱浸提對應(yīng)時間，為56℃下加熱30分鐘。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的思茅松松塔黃酮及多糖的提取方法，其特征在于：所述步驟七中的多糖標準溶液樣品的測定為按照步驟六的測定方法來測定提取液的多糖濃度，再根據(jù)公式計算多糖含量，具體公式如下；

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了思茅松松塔黃酮及多糖的提取方法，涉及到思茅松松塔技術(shù)領(lǐng)域，所述提取方法包括以下步驟；材料和試劑以及儀器的準備，兩份松塔鱗片、70％乙醇、95％乙醇、蘆丁標準品、5％亞硝酸鈉溶液、10％硝酸鋁溶液、4％氫氧化鈉溶液、5％苯酚、濃硫酸、蒸餾水。本發(fā)明提高思茅松松塔資源的利用率，一定程度上促進思茅松松塔資源的利用，再對其深入研究，在最佳工藝條件下探究不同樹齡思茅松松塔天然產(chǎn)物的含量，進一步優(yōu)化了思茅松松塔資源的利用，可以根據(jù)思茅松的樹齡來提高對思茅松松塔資源的利用，更加高效的提取出思茅松松塔的天然產(chǎn)物資源。

技術(shù)研發(fā)人員：馬付婕,韓季岑,黑富江,王興權(quán),陳盟
受保護的技術(shù)使用者：滇西應(yīng)用技術(shù)大學(xué)普洱茶學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10