本發(fā)明涉及一種藥用自微乳制劑及其制備方法，尤其涉及一種乳源外泌體裝載紫杉醇的藥用自微乳制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
1、紫杉醇是一種廣泛應(yīng)用于臨床的廣譜抗癌藥物，但因其在水中幾乎不溶，降低了其口服給藥的生物利用度及藥效。
2、外泌體是由動(dòng)物或植物分泌的30-150?nm之間的細(xì)胞外囊泡，在細(xì)胞通信中發(fā)揮著重要作用，作為一種天然的納米載體，可以采用多種方式將藥物載入外泌體內(nèi)部。
3、自微乳給藥體系能夠使含有藥物的油相乳化劑混合物，在進(jìn)入胃腸道后快速形成穩(wěn)定的微乳，增加了藥物與腸黏膜的接觸面積，有助于藥物的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，其中油相占比一般為20%-50%，安全、穩(wěn)定，在低溫環(huán)境下藥物也不易析出。
4、當(dāng)前已被證明紫杉醇已上市的劑型中，對(duì)腫瘤治療有一定作用，然而
5、紫杉醇不易在水中溶解，直接口服的攝入方式無(wú)法實(shí)現(xiàn)藥物在體內(nèi)的吸收。因此，需要一種有效的載體來(lái)提高紫杉醇的口服利用率。
6、紫杉醇外泌體自微乳制劑可以將自微乳安全穩(wěn)定靶向的特性與外泌體的生物相容性、高載藥率、長(zhǎng)循環(huán)特性相結(jié)合，以更高效地將紫杉醇遞送到靶部位。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的在于針對(duì)紫杉醇極差的水溶性，需要一種有效的載體來(lái)提高紫杉醇的口服利用率，因此提出一種乳源外泌體裝載紫杉醇的藥用自微乳制劑及其制備方法，該方法將裝載紫杉醇的乳源外泌體與自微乳相結(jié)合，開(kāi)發(fā)出的新型口服納米制劑，顯著提高了紫杉醇的溶解度和穩(wěn)定性，以期提升其在體內(nèi)的吸收和生物利用度。
2、本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
3、本發(fā)明采用超速離心法從牛乳中提取外泌體，超聲孵育法將紫杉醇裝載進(jìn)外泌體內(nèi)，再將紫杉醇外泌體裝載入微乳體系中使用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-效應(yīng)面法優(yōu)化工藝條件。確定最適宜紫杉醇外泌體自微乳體系處方及的工藝條件：油相為大豆油；乳化劑和助乳化劑為聚氧乙烯氫化蓖麻油和無(wú)水乙醇。將紫杉醇裝載到乳源性外泌體并進(jìn)一步形成自微乳給藥系統(tǒng)后，紫杉醇的溶解度有了大幅提升，并對(duì)人肝癌細(xì)胞和宮頸癌細(xì)胞的抗腫瘤活性有了顯著提高。
4、優(yōu)選地，所述油相為大豆油；乳化劑和助乳化劑為聚氧乙烯氫化蓖麻油和無(wú)水乙醇。
5、優(yōu)選地，所述油相/乳化劑比例為0.167，乳化劑/助乳化劑比例為2.393。
6、優(yōu)選地，所述紫杉醇的濃度為2?mg/ml，外泌體的濃度為13.825?mg/ml，孵育溫度為4.357?℃。
7、本發(fā)明還提供以上所述的乳源外泌體裝載紫杉醇的自微乳制劑的制備方法。
8、乳源外泌體制備包括以下步驟：
9、步驟一，將脫脂牛奶置于4?℃環(huán)境中，吸取8?ml樣品放進(jìn)離心管內(nèi)，?2000?g條件下離心10?min，并將上清液轉(zhuǎn)移到新的離心管中；
10、步驟二，將上清液以10000?g離心30?min，分離乳清層并通過(guò)0.22?μm濾膜過(guò)濾去除殘留蛋白質(zhì)；
11、步驟三，將溶液以100000?g離心60?min；將離心后的上清液轉(zhuǎn)移至新管中；
12、步驟四，將上清液放置離心管置于離心機(jī)中13500?g離心90?min，丟棄上清液，沉淀即為外泌體；
13、步驟五，向沉淀內(nèi)添加pbs緩沖液進(jìn)行重懸，并100000?g離心1?h進(jìn)行洗滌，收集底部沉淀。
14、乳源外泌體裝載紫杉醇制備包括以下步驟：
15、步驟一，提取出的外泌體用pbs緩沖溶液稀釋成濃度為250?μg/ml，放置于燒杯內(nèi)，將紫杉醇原料藥加入燒杯中，將燒杯放置在超聲機(jī)器內(nèi)進(jìn)行超聲，超聲功率200?w，每90?s一個(gè)大循環(huán)。工作5?s，間歇10?s，共6個(gè)循環(huán)；
16、步驟二，將燒杯置于冰箱內(nèi)冷凍降溫5?min，再次進(jìn)行90?s大循環(huán)；
17、步驟三，將獲得的溶液放入37?℃的搖床，均勻搖晃1?h，恢復(fù)膜的穩(wěn)定性；
18、步驟四，將離心管配平后于離心機(jī)中在100000?g的條件下離心1.5?h，去除游離的紫杉醇，并使用pbs溶液再次重懸沉淀，得到負(fù)載紫杉醇的外泌體。；
19、乳源外泌體裝載紫杉醇的自微乳制劑制備包括以下步驟：
20、步驟一，將大豆油和聚氧乙烯氫化蓖麻油按照1:2的體積比混合，用純凈水稀釋?zhuān)詡溆茫?/p>
21、步驟二，將聚氧乙烯氫化蓖麻油和大豆油按照質(zhì)量比為9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9與無(wú)水乙醇混合，在室溫下緩慢加入純凈水，臨界值形成自微乳制劑。
22、本發(fā)明的有益效果如下：
23、本發(fā)明的乳源外泌體裝載紫杉醇的自微乳制劑及其制備方法，將裝載紫杉醇的乳源外泌體與自微乳相結(jié)合，開(kāi)發(fā)出的新型口服納米制劑，顯著提高了紫杉醇的溶解度和穩(wěn)定性，以期提升其在體內(nèi)的吸收和生物利用度。
1.乳源外泌體裝載紫杉醇的藥用自微乳制劑，其特征在于，所述乳制劑通過(guò)超速離心法從牛乳中提取外泌體，超聲孵育法將紫杉醇裝載進(jìn)外泌體內(nèi)，再將紫杉醇外泌體裝載入微乳體系中優(yōu)化工藝條件；確定最適宜紫杉醇外泌體自微乳體系處方及的工藝條件：油相為大豆油；乳化劑和助乳化劑為聚氧乙烯氫化蓖麻油和無(wú)水乙醇。
2.如權(quán)利要求1所述的乳源外泌體裝載紫杉醇的藥用自微乳制劑，其特征在于，所述油相和乳化劑比例為0.167：1，乳化劑和助乳化劑比例為2.393：1。
3.如權(quán)利要求2所述的乳源外泌體裝載紫杉醇的藥用自微乳制劑，其特征在于，所述孵育溫度為4?℃。
4.如權(quán)利要求3所述的乳源外泌體裝載紫杉醇的藥用自微乳制劑，其特征在于，所述紫杉醇的濃度為2?mg/ml，外泌體的濃度為13.825?mg/ml。
5.乳源外泌體裝載紫杉醇的藥用自微乳制劑制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
6.乳源外泌體裝載紫杉醇的藥用自微乳制劑制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
7.乳源外泌體裝載紫杉醇的藥用自微乳制劑制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：