本發(fā)明屬于生物制劑，尤其是涉及番茄外泌體在制備緩解血管損傷后再狹窄藥物中的應用。

背景技術：

1、外泌體是指包含了復雜rna和蛋白質的小膜泡(30-150nm)，現今，其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。外泌體是作為天然的胞間信息載體，分子結構較小且生物相容性好，具有將其開發(fā)成具有治療效果的生物制劑或者藥物的潛能。

2、植物外泌體的直徑約40～150nm，與動物外泌體形態(tài)結構相類似，具有磷脂雙分子層結構，是由大多數細胞分泌的納米級小囊泡，呈茶托狀或杯狀，由大量脂質、包括微小rna和蛋白質組成。目前，已有證據表明植物外泌體可能不僅參與植物細胞間通訊，還參與了植物和動物之間的種間通訊。與難以大量生產的動物外泌體不同，植物外泌體可以很容易地被大量分離及純化，從葡萄柚、西蘭花和生姜等可食用植物中分離出的天然外泌體，通過提供可持續(xù)、大規(guī)模、安全和經濟的治療方式，克服了合成納米粒子的局限性。例如從100g各種可食用植物中能提取到350～450mg外泌體，表明這些天然植物外泌體可以經濟有效地大規(guī)模生產。在安全方面，植物沒有任何人畜共患或人類病原體，其較低的免疫學體內風險已經得到證實，且沒有誘導促炎細胞因子升高的風險。目前，大多數外泌體的研究都集中在動物外泌體上，而植物外泌體的研究還較少，因此植物外泌體的研究是針對疾病的一個較新的研究方向及研究思路，具有十分廣闊的研究前景。

3、冠心病仍是患者死亡的常見原因之一，目前主要治療手段為經皮冠狀動脈介入治療(percutaneous?transluminal?coronary?intervention，pci)。統(tǒng)計數據顯示冠脈支架置入后6個月，金屬裸支架治療后再狹窄發(fā)生率為25％，藥物洗脫支架后再狹窄發(fā)生率為10％，全球每年至少有25萬例冠脈疾病治療后發(fā)生血管再狹窄需要進行再次干預。既往研究表明，血管損傷后進展性再狹窄是機體應對外界損傷或異物刺激時產生的過度反應的愈合過程，也是內膜過度增生的過程，涉及復雜的多步驟連續(xù)過程。在支架置入后幾小時內，支架對血管壁的擴張會引起局部血管過度拉伸，而拉伸的血管由于其內皮受損進而導致血管壁發(fā)生彈性回縮現象，約30％支架置入術后患者經過此過程會發(fā)生血管再狹窄。由于缺乏有效防治的新靶點，血管再狹窄仍是靶血管干預失敗甚至再發(fā)心血管不良事件的重要原因之一。血管損傷引起的管腔再狹窄與血管平滑肌細胞(vascular?smooth?muscularcells,vsmcs)增殖有關。損傷后前2周vsmcs數量增加3-5倍，占最終新生內膜總體積90％。損傷后血小板聚集并釋放血小板源生長因子(platelet?derived?growth?factors,pdgf)和其他有絲分裂因子，穿透血管壁觸發(fā)vsmcs從收縮型向增殖型轉化。因此對于冠心病行pci術后患者，如何避免血管再狹窄及再發(fā)梗死成為了關系患者中長期預后的社會焦點問題。

技術實現思路

1、有鑒于此，本發(fā)明旨在提出番茄外泌體在制備緩解血管損傷后再狹窄藥物中的應用，以解決介入手術損傷后血管再狹窄的問題。

2、為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案是這樣實現的：

3、本發(fā)明的第一方面提供了番茄外泌體在制備緩解血管損傷后再狹窄藥物中的應用。

4、進一步的，所述血管損傷后再狹窄為血管介入手術后再狹窄。

5、進一步的，所述緩解血管損傷后再狹窄藥物用于抑制血管內膜增生。

6、進一步的，所述緩解血管損傷后再狹窄藥物用于抑制血管平滑肌細胞的增殖和/或轉移。

7、本發(fā)明的第二方面提供了一種番茄外泌體的制備方法，包括以下步驟：

8、s1：將番茄榨汁后過濾，得到番茄原液；

9、s2：將s1得到的番茄原液進行離心提取，得到番茄外泌體；

10、s3：使用蔗糖墊法對s2得到的番茄外泌體進行純化。

11、進一步的，所述s1具體包括以下步驟：將番茄洗凈去皮，和切片器械一起消毒，在超凈臺中將番茄切成小塊，在切成小塊的番茄中加入pbs后榨汁，得到榨汁液，榨汁液經無菌紗布過濾得到番茄原液。

12、進一步的，所述s2具體包括以下步驟：將番茄原液取出進行預處理后移動至離心管內，離心，得到第一離心液；將第一離心液的上清液移至新的離心管內，離心，得到第二離心液；取第二離心液的上清液，過濾，得到過濾液；將過濾液移至新的離心管內，離心，得到第三離心液；去除第三離心液的上清液，用預冷的pbs重懸后，選擇超速轉子，超速離心，得到第四離心液；去除第四離心液的上清液，用預冷的pbs重懸，得到番茄外泌體。

13、進一步的，所述s3具體包括以下步驟：向番茄外泌體中加入預冷的pbs，得到混合液；將混合液緩慢加到蔗糖墊上，離心；取出位于下層30％的蔗糖墊，用pbs稀釋，離心，去除上清，沉淀用預冷的pbs重懸，得到純化的番茄外泌體。

14、本發(fā)明的第三方面提供了本發(fā)明第二方面所述的制備方法得到的番茄外泌體。

15、本發(fā)明的第四方面提供了本發(fā)明第三方面所述的番茄外泌體在制備緩解血管損傷后再狹窄藥物中的應用。

16、相對于現有技術，本發(fā)明具有以下優(yōu)勢：

17、外泌體藥物相對于傳統(tǒng)藥物具有顯著優(yōu)勢，其體現在：外泌體是作為天然的胞間信息載體，分子結構較小且生物相容性好；相對于普通藥物，外泌體的生物利用度高且靶向性好。本方案研發(fā)的緩解血管損傷后再狹窄作用的番茄外泌體類生物制劑，具有理想的應用前景。

技術特征：

1.番茄外泌體在制備緩解血管損傷后再狹窄藥物中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述血管損傷后再狹窄為血管介入手術后再狹窄。

3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述緩解血管損傷后再狹窄藥物用于抑制血管內膜增生。

4.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述緩解血管損傷后再狹窄藥物用于抑制血管平滑肌細胞的增殖和/或轉移。

5.一種番茄外泌體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

6.根據權利要求5所述的一種番茄外泌體的制備方法，其特征在于：所述s1具體包括以下步驟：將番茄洗凈去皮，和切片器械一起消毒，在超凈臺中將番茄切成小塊，在切成小塊的番茄中加入pbs后榨汁，得到榨汁液，榨汁液經無菌紗布過濾得到番茄原液。

7.根據權利要求5所述的一種番茄外泌體的制備方法，其特征在于：所述s2具體包括以下步驟：將番茄原液取出進行預處理后移動至離心管內，離心，得到第一離心液；將第一離心液的上清液移至新的離心管內，離心，得到第二離心液；取第二離心液的上清液，過濾，得到過濾液；將過濾液移至新的離心管內，離心，得到第三離心液；去除第三離心液的上清液，用預冷的pbs重懸后，選擇超速轉子，超速離心，得到第四離心液；去除第四離心液的上清液，用預冷的pbs重懸，得到番茄外泌體。

8.根據權利要求5所述的一種番茄外泌體的制備方法，其特征在于：所述s3具體包括以下步驟：向番茄外泌體中加入預冷的pbs，得到混合液；將混合液緩慢加到蔗糖墊上，離心；取出位于下層30％的蔗糖墊，用pbs稀釋，離心，去除上清，沉淀用預冷的pbs重懸，得到純化的番茄外泌體。

9.根據權利要求5-8任一項所述的制備方法得到的番茄外泌體。

技術總結
本發(fā)明提供了番茄外泌體在制備緩解血管損傷后再狹窄藥物中的應用，所述番茄外泌體能夠抑制血管內膜增生，抑制血管平滑肌細胞的增殖和/或轉移。本發(fā)明所述的番茄外泌體能夠有效預防和緩解介入損傷后血管再狹窄。

技術研發(fā)人員：高文卿,申賀臣,胡曉旻,常蕓,梁曉玉
受保護的技術使用者：天津市第三中心醫(yī)院
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/10