本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥的，尤其涉及一種提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法，以及利用該提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法制備的納米載體，該納米載體的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、脂質(zhì)納米顆粒(lipid?nanoparticle,lnp)是由一個或多個磷脂雙層組成的球形囊泡，通常包括陽離子脂質(zhì)、輔助脂質(zhì)、膽固醇，聚乙二醇化脂質(zhì)等成分。作為一種納米載體，它們能夠有效封裝和遞送多種藥物，例如mrna、sirna和小分子藥物等，以提高藥物的穩(wěn)定性和生物利用度。目前，lnp已在疫苗遞送、基因治療等生物醫(yī)藥領(lǐng)域展示出潛在的應(yīng)用前景。

2、lnp進入細胞的途徑包括網(wǎng)格蛋白依賴的內(nèi)吞機制和巨胞飲。它們隨后被轉(zhuǎn)運至早期內(nèi)體，然后成熟為晚期內(nèi)體和溶酶體。為了有效遞送藥物，lnp必須在內(nèi)體成熟為溶酶體之前逃逸到細胞質(zhì)，這一過程稱為內(nèi)體逃逸，是提高遞送效率的關(guān)鍵步驟。然而，當(dāng)前內(nèi)體逃逸效率較低，因此研究者常需使用高劑量的lnp來達到預(yù)期效果，但這可能導(dǎo)致嚴(yán)重的細胞毒性反應(yīng)。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供了一種提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法，其能夠在提高遞送效率的同時減少藥物用量并減輕毒性反應(yīng)。

2、本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法，其包括以下步驟：

3、(1)將兩性霉素b稀釋為低濃度兩性霉素b，低濃度為0.1～0.3μg/ml；

4、(2)在室溫下將低濃度兩性霉素b與egfp?lnp?mrna共孵育；

5、(3)將步驟(2)獲得的混合物靜脈注射進入生物體。

6、本發(fā)明的方法避免了使用高劑量的lnp來達到提高內(nèi)體逃逸效率的目的，在使用正常劑量的lnp的情況下，顯著增強了lnp的遞送效率，促進了內(nèi)體逃逸過程，并增加了目標(biāo)基因的表達水平。

7、還提供了根據(jù)這種提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法制備的納米載體。

8、還提供了根據(jù)這種提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法制備的納米載體的應(yīng)用，其應(yīng)用在促進內(nèi)體逃逸過程，增加目標(biāo)基因的表達水平。

技術(shù)特征：

1.提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法，其特征在于：其包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法，其特征在于：所述步驟(1)中，低濃度為0.1μg/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法，其特征在于：所述步驟(1)中，將兩性霉素b在pbs中稀釋至所需的低濃度。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，egfp?lnp?mrna的劑量按生物體體重每克為0.4μg。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，共孵育30分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法，其特征在于：該方法還包括步驟(4)，注射24小時后，在對生物體進行心臟灌流后，收集生物體的肝臟樣本，并使用全光譜動物活體成像系統(tǒng)進行成像分析，以便評估egfp?lnp?mrna在生物體的肝臟中的表達及分布情況。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項所述的提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法制備的納米載體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備的納米載體，其特征在于：其應(yīng)用在促進內(nèi)體逃逸過程，增加目標(biāo)基因的表達水平。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種提高脂質(zhì)納米顆粒遞送效率的方法、制備納米載體及應(yīng)用，能夠在提高遞送效率的同時減少藥物用量并減輕毒性反應(yīng)。方法包括：(1)將兩性霉素B稀釋為低濃度兩性霉素B，低濃度為0.1～0.3μg/ml；(2)在室溫下將低濃度兩性霉素B與EGFP?LNP?mRNA共孵育；(3)將步驟(2)獲得的混合物靜脈注射進入生物體。

技術(shù)研發(fā)人員：曹彬,何迪,王在,左文婷,袁英瑛
受保護的技術(shù)使用者：中日友好醫(yī)院（中日友好臨床醫(yī)學(xué)研究所）
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26