本發(fā)明涉及動(dòng)物模型，更具體的說是涉及一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法。

背景技術(shù)：

1、缺血性腦卒中對(duì)大腦功能及其他系統(tǒng)的影響較為復(fù)雜及多變，使得此疾病無法在體外系統(tǒng)進(jìn)行模擬。因此，以嚙齒動(dòng)物、犬科動(dòng)物、兔、豬和非人靈長類動(dòng)物為代表的常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均被用于腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ徒?。其中嚙齒類動(dòng)物因成本低、來源豐富，操作簡單等原因，被廣泛用于腦血栓動(dòng)物模型。然而，嚙齒類與非人靈長類無論從體型、血液動(dòng)力、腦結(jié)構(gòu)與功能、炎癥反應(yīng)等生理上仍存在一定差異，導(dǎo)致許多在嚙齒類有效的療法在臨床試驗(yàn)階段失敗。非人靈長類的大腦通常由多個(gè)腦回組成，具有與人類似的皮層功能柱結(jié)構(gòu)以及擁有與人類相似的完整的腦動(dòng)脈環(huán)路，其頸內(nèi)動(dòng)脈和椎動(dòng)脈的分布也與人類非常相似，因此建立非人靈長類腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?，監(jiān)測缺血性半影區(qū)腦血管及腦功能網(wǎng)絡(luò)的研究具有非常重要的臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用意義。

2、目前，國內(nèi)外已報(bào)道可用于非人靈長類動(dòng)物局部腦缺血模型構(gòu)建的方法通?？煞譃槭中g(shù)法、血管內(nèi)介入法和光化學(xué)法三類，其中，①手術(shù)法包括常用的電凝法、內(nèi)皮素-1誘導(dǎo)閉塞法和微血管夾閉法，上述造模方法可精確定位梗死位置，重復(fù)性較高，但過大的手術(shù)創(chuàng)傷對(duì)動(dòng)物生理和心理影像較大，不利于后期的行為評(píng)價(jià)開展，同時(shí)手術(shù)失敗風(fēng)險(xiǎn)較高易引起動(dòng)物死亡，對(duì)于在老年動(dòng)物上構(gòu)建模型并不適用，此外，由于動(dòng)物腦血管側(cè)支循環(huán)個(gè)體差異較大，導(dǎo)致梗死灶范圍和體積很難控制；②血管內(nèi)介入法包括自體血栓栓塞法、球囊栓塞法、微導(dǎo)管栓塞法等，上述造模方法對(duì)動(dòng)物創(chuàng)傷較小，成模機(jī)制與臨床血管栓塞較為相近，但梗死位置和體積難確定，對(duì)手術(shù)技術(shù)和設(shè)備要求較高開展難度較大；③光化學(xué)誘導(dǎo)法是嚙齒類上常用的缺血性腦卒中造模技術(shù)，近年來也逐漸開始在非人靈長類上應(yīng)用，光化學(xué)誘導(dǎo)法的優(yōu)勢在于采用非侵入式操作，動(dòng)物損傷極小，梗死灶范圍精確穩(wěn)定，光栓形成過程與腦栓塞相似，但其最大的劣勢在于傳統(tǒng)的光化學(xué)法只能誘導(dǎo)腦末端血管(腦表層)形成光栓，梗死灶只能在腦表層形成，且模型無法模擬臨床常見的腦缺血再灌注特征。

3、因此，如何提供一種誘導(dǎo)腦深層組織形成梗死的腦卒中缺血再灌注模型是本領(lǐng)域技術(shù)人員亟需解決的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)上述問題，本發(fā)明提供了一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，可以誘導(dǎo)腦深層組織形成梗死，同時(shí)，可以擴(kuò)展到其它腦區(qū)誘導(dǎo)深層血管閉塞，不僅提升造模成功率，還適用于對(duì)老年動(dòng)物開展模型構(gòu)建。

2、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

3、一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

4、(1)三維坐標(biāo)構(gòu)建：獲取腦磁共振水平切面、矢狀面、冠狀面的醫(yī)學(xué)影像，并進(jìn)行三維分割，確定血管的x、y、z三維坐標(biāo)；

5、(2)腦動(dòng)脈缺血再灌注模型構(gòu)建：將樣本固定在腦立體定位儀上，根據(jù)步驟(1)血管的x、y、z三維坐標(biāo)，對(duì)樣本進(jìn)行處理后再進(jìn)行激光照射；

6、(3)步驟(2)完成后對(duì)樣本進(jìn)行處理，造模后3天，磁共振t2wi序列掃描成像顯示在激光照射位置周圍出現(xiàn)高信號(hào)，即建模成功。

7、優(yōu)選的，步驟(1)所述磁共振采用的掃描序列為t2?mx3d?sag，參數(shù)為：tr＝3400ms，te＝398ms，層厚＝0.5mm。

8、優(yōu)選的，步驟(1)所述血管的x坐標(biāo)的確定方法為：在水平切面圖中，以眉間和枕內(nèi)隆凸之間的基準(zhǔn)線與在顱骨矢狀縫平行，兩條線構(gòu)成的平面為腦正中水平面，以上述基準(zhǔn)線為腦中線，血管到腦中線的水平距離即為x坐標(biāo)。

9、優(yōu)選的，步驟(1)所述血管的y坐標(biāo)的確定方法為：在矢狀面圖中，確定血管位置后，使該血管位于腦中線上，以額骨與眉弓間的最低點(diǎn)到腦血管之間的垂直距離為y坐標(biāo)。

10、優(yōu)選的，步驟(1)所述血管的z坐標(biāo)的確定方法為：在冠狀面圖中，確定血管位置后，硬腦膜到腦血管的垂直距離為z坐標(biāo)。

11、優(yōu)選的，步驟(2)所述處理為注射玫瑰紅。

12、優(yōu)選的，步驟(2)所述處理為注射抗生素和甘露醇，維持顱內(nèi)壓。

13、經(jīng)由上述的技術(shù)方案可知，本發(fā)明公開提供了一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，利用磁共振掃描獲得實(shí)驗(yàn)樣本腦中動(dòng)脈三維定位坐標(biāo)，可以精確定位腦中動(dòng)脈遠(yuǎn)端，通過設(shè)定血管照射位置、玫瑰紅劑量、激光照射強(qiáng)度和時(shí)間，誘導(dǎo)腦中動(dòng)脈在照射后發(fā)生閉塞，并在4-5小時(shí)隨血液沖擊，引起血管再通，最終形成缺血再灌注模型。

14、本發(fā)明的構(gòu)建方法相比傳統(tǒng)的開顱電凝腦中動(dòng)脈(永久閉塞)和球囊栓塞中動(dòng)脈(缺血再灌注)，對(duì)動(dòng)物的創(chuàng)傷更小，動(dòng)物易存活，相比傳統(tǒng)光化學(xué)誘導(dǎo)只能在腦表層形成梗死灶，本發(fā)明的方法可以誘導(dǎo)腦深層組織形成梗死，也可以擴(kuò)展到其它腦區(qū)誘導(dǎo)深層血管閉塞。同時(shí)，也適用于對(duì)老年動(dòng)物開展模型構(gòu)建。

技術(shù)特征：

1.一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(1)所述磁共振采用的掃描序列為t2?mx3d?sag，參數(shù)為：tr＝3400ms，te＝398ms，層厚＝0.5mm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(1)所述血管的x坐標(biāo)的確定方法為：在水平切面圖中，以眉間和枕內(nèi)隆凸之間的基準(zhǔn)線與在顱骨矢狀縫平行，兩條線構(gòu)成的平面為腦正中水平面，以上述基準(zhǔn)線為腦中線，血管到腦中線的水平距離即為x坐標(biāo)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(1)所述血管的y坐標(biāo)的確定方法為：在矢狀面圖中，確定血管位置后，使該血管位于腦中線上，以額骨與眉弓間的最低點(diǎn)到腦血管之間的垂直距離為y坐標(biāo)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(1)所述血管的z坐標(biāo)的確定方法為：在冠狀面圖中，確定血管位置后，硬腦膜到腦血管的垂直距離為z坐標(biāo)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(2)所述處理為注射玫瑰紅。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，其特征在于，步驟(3)所述處理為注射抗生素和甘露醇，維持顱內(nèi)壓。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種腦動(dòng)脈缺血再灌注模型的構(gòu)建方法，屬于動(dòng)物模型技術(shù)領(lǐng)域。通過利用磁共振掃描獲得腦中動(dòng)脈三維定位坐標(biāo)，可以精確定位腦中動(dòng)脈遠(yuǎn)端，通過設(shè)定血管照射位置、玫瑰紅劑量、激光照射強(qiáng)度和時(shí)間，誘導(dǎo)腦中動(dòng)脈在照射后發(fā)生閉塞，并在4?5小時(shí)隨血液沖擊，引起血管再通，最終形成缺血再灌注模型。該構(gòu)建方法相比傳統(tǒng)的開顱電凝腦中動(dòng)脈(永久閉塞)和球囊栓塞中動(dòng)脈(缺血再灌注)，對(duì)動(dòng)物的創(chuàng)傷更小，動(dòng)物易存活，相比傳統(tǒng)光化學(xué)誘導(dǎo)只能在腦表層形成梗死灶，本發(fā)明的方法可以誘導(dǎo)腦深層組織形成梗死，也可以擴(kuò)展到其它腦區(qū)誘導(dǎo)深層血管閉塞。同時(shí)，也適用于對(duì)老年動(dòng)物開展模型構(gòu)建，提升造模成功率。

技術(shù)研發(fā)人員：李舸,李韻峰,關(guān)雅倫,黃忠強(qiáng),劉書華,李雪嬌,陳洪毅,張鈺
受保護(hù)的技術(shù)使用者：廣東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/17