本發(fā)明涉及醫(yī)藥，尤其涉及一種生物堿類化合物在防治腹主動(dòng)脈瘤中的研究及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、腹主動(dòng)脈瘤(abdominal?aortic?aneurysm,?aaa)是由于多種原因?qū)е碌闹鲃?dòng)脈直徑不可逆地?cái)U(kuò)張，超過(guò)正常直徑50%以上的一種主動(dòng)脈擴(kuò)張性疾病。在人體中，當(dāng)主動(dòng)脈直徑(尤其是腎動(dòng)脈分支以下的主動(dòng)脈段的直徑)>3cm時(shí)，可認(rèn)為aaa發(fā)生，aaa是血管外科風(fēng)險(xiǎn)最高的血管退行性疾病之一。aaa發(fā)病隱匿，隨著主動(dòng)脈的不斷擴(kuò)張，瘤體不斷變大，其破裂的風(fēng)險(xiǎn)也在逐漸增加；一旦破裂，其致死率高達(dá)80%。他汀類、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑和血管緊張素ii受體拮抗劑等，可在一定程度上延緩aaa進(jìn)展，但其確切療效有待明確。迄今尚無(wú)明確適應(yīng)癥為aaa的藥物出現(xiàn)，尋找aaa的防治新靶點(diǎn)和新的治療藥物，亟須深入探索和研究。

2、秋水仙堿是一種從百合科植物秋水仙的種子和球莖中提取出來(lái)的中性親脂性三環(huán)類生物堿，最早于1820年由pelletier和caventou首次粗提獲得。1955年corrodi和hardegger揭示了秋水仙堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)，拓寬了其臨床應(yīng)用。美國(guó)食品藥物管理局(america's?food?and?drug?administration,?fda)先后批準(zhǔn)秋水仙堿用于治療家族性地中海熱、痛風(fēng)、關(guān)節(jié)炎和膽汁性肝硬化等。秋水仙堿主要通過(guò)抑制中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能，發(fā)揮抗炎和抑制免疫作用；同時(shí)通過(guò)阻斷微管形成，抑制細(xì)胞有絲分裂，發(fā)揮抗纖維化作用。2023年fda發(fā)布公告：秋水仙堿0.5mg片劑可用于治療已有動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的患者，或有多個(gè)心血管危險(xiǎn)因素的成年人。同時(shí)，歐洲預(yù)防心臟病學(xué)雜志的一項(xiàng)研究也表明，使用低劑量的秋水仙堿可使已接受降壓和降脂藥物治療的患者獲益。

3、研究發(fā)現(xiàn)：高血壓、高血脂均是誘發(fā)aaa導(dǎo)致瘤體破裂的重要危險(xiǎn)因素。但是目前尚無(wú)秋水仙堿用于治療aaa的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、1.要解決的技術(shù)問(wèn)題

2、本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)中尚無(wú)秋水仙堿用于治療aaa的問(wèn)題，而提出的一種生物堿類化合物在防治腹主動(dòng)脈瘤中的研究及應(yīng)用。

3、2.技術(shù)方案

4、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

5、一種生物堿類化合物，所述生物堿類化合物為秋水仙堿。

6、本發(fā)明中還提出了一種生物堿類化合物，在改善腹主動(dòng)脈瘤病理?yè)p傷中的應(yīng)用。

7、本發(fā)明中還提出了一種生物堿類化合物，在防治腹主動(dòng)脈瘤中的應(yīng)用。

8、本發(fā)明中還提出了一種生物堿類化合物，在制備腹主動(dòng)脈瘤防治藥物中的應(yīng)用。

9、本發(fā)明中還提出了一種生物堿類化合物在防治腹主動(dòng)脈瘤中的研究方法，包括以下步驟：

10、步驟1：先進(jìn)行小鼠aaa造模，利用豬胰蛋白酶ppe孵育聯(lián)合飲水給予富馬酸氨基丙腈bapn誘導(dǎo)小鼠形成腹主動(dòng)脈瘤；

11、步驟2：在小鼠aaa造模的同時(shí)，向小鼠腹腔注射0.1mg/kg秋水仙堿，其中秋水仙堿是在aaa造模的同時(shí)同步給予小鼠，一天腹腔注射一次，連續(xù)給予2周；

12、步驟3：在2周后分離小鼠腹主動(dòng)脈，通過(guò)對(duì)血管he/evg/masson染色評(píng)估主動(dòng)脈的擴(kuò)張程度及損傷情況，具體方法為利用生物顯微鏡去除主動(dòng)脈周圍黏連組織，通過(guò)電子游標(biāo)卡尺聯(lián)合he染和image軟件測(cè)量測(cè)量最大主動(dòng)脈直徑；

13、步驟4：最后檢測(cè)小鼠腹主動(dòng)脈組織，探究秋水仙堿改善小鼠aaa損傷的可能分子機(jī)制。

14、優(yōu)選地，所述步驟1中小鼠aaa造模具體包括以下步驟：

15、s1：小鼠使用1%戊巴比妥鈉溶液(40mg/kg)麻醉后，腹部朝上，固定在泡沫板上；使用75%的酒精消毒小鼠腹部及周圍區(qū)域，使用滅菌后的剪刀和鑷子輕輕剪開(kāi)小鼠腹部皮膚，逐層開(kāi)腹；使用棉簽將小腸、大腸等輕輕拉出，放在浸泡過(guò)生理鹽水的紗布條上；使用棉簽和鑷子輕輕游離小鼠腹主動(dòng)脈，尤其是髂動(dòng)脈以上，腎動(dòng)脈分支以下的主動(dòng)脈段；

16、s2：將提前剪好的化妝棉條浸泡于ppe溶液中，隨后將其包裹在游離的主動(dòng)脈組織上；孵育時(shí)間為40min，其中可10min補(bǔ)加一次約5μl的ppe溶液；

17、s3：待孵育時(shí)間結(jié)束后，取出化妝棉條，使用棉簽沾取生理鹽水后輕輕擦拭3次；逐層關(guān)腹、縫合小鼠，待其蘇醒后放回動(dòng)物房；

18、s4：給予小鼠0.4%的bapn飲用水，正常狀態(tài)對(duì)照組為使用生理鹽水孵育小鼠腹主動(dòng)脈組，并給予不含bapn的飲用水，所有小鼠自由飲水、飲食，在飼養(yǎng)籠內(nèi)自如活動(dòng)或休息。

19、優(yōu)選地，所述步驟4中通過(guò)western?blot檢測(cè)vsmcs表型相關(guān)蛋白和mmps的表達(dá)，通過(guò)免疫熒光染色分析血管壁中炎癥因子和氧化應(yīng)激水平的變化，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血管壁外膜中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。

20、3.有益效果

21、相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：

22、1.本發(fā)明中，首次提出具有明確抗炎作用的秋水仙堿，可通過(guò)抑制血管壁外膜炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、抑制血管平滑肌細(xì)胞向合成型轉(zhuǎn)化和基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)等方面來(lái)改善小鼠aaa損傷，有助于揭示臨床常用藥物秋水仙堿的新用途，為腹主動(dòng)脈瘤的防治提供了新的干預(yù)策略和研發(fā)思路；

23、2.本發(fā)明中，證明了低劑量的秋水仙堿可通過(guò)抑制血管平滑肌細(xì)胞(vesselsmooth?muscle?cells,?vsmcs)向合成型轉(zhuǎn)化和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinase,?mmps)的表達(dá)、降低血管壁炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激水平等發(fā)揮改善小鼠aaa病理?yè)p傷的作用；且經(jīng)過(guò)進(jìn)一步研究，發(fā)現(xiàn)秋水仙堿可能通過(guò)抑制血管外膜炎性細(xì)胞浸潤(rùn)來(lái)發(fā)揮血管保護(hù)作用。

技術(shù)特征：

1.一種生物堿類化合物，其特征在于，所述生物堿類化合物為秋水仙堿。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物堿類化合物，其特征在于，在改善腹主動(dòng)脈瘤病理?yè)p傷中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物堿類化合物，其特征在于，在防治腹主動(dòng)脈瘤中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物堿類化合物，其特征在于，在制備腹主動(dòng)脈瘤防治藥物中的應(yīng)用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物堿類化合物在防治腹主動(dòng)脈瘤中的研究方法，其特征在于，包括以下步驟：

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種生物堿類化合物在防治腹主動(dòng)脈瘤中的研究方法，其特征在于，所述步驟1中小鼠aaa造模具體包括以下步驟：

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種生物堿類化合物在防治腹主動(dòng)脈瘤中的研究方法，其特征在于，所述步驟4中通過(guò)western?blot檢測(cè)vsmcs表型相關(guān)蛋白和mmps的表達(dá)，通過(guò)免疫熒光染色分析血管壁中炎癥因子和氧化應(yīng)激水平的變化，通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)血管壁外膜中炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)情況。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開(kāi)了一種生物堿類化合物在防治腹主動(dòng)脈瘤中的應(yīng)用，其研究方法包括以下步驟：步驟1：先進(jìn)行小鼠AAA造模；步驟2：向小鼠腹腔注射0.1mg/kg秋水仙堿，一天腹腔注射一次，連續(xù)給予2周；步驟3：在2周后分離小鼠腹主動(dòng)脈，通過(guò)對(duì)血管HE/EVG/Masson染色評(píng)估主動(dòng)脈的擴(kuò)張程度及損傷情況；步驟4：最后檢測(cè)小鼠腹主動(dòng)脈組織，探究秋水仙堿改善小鼠AAA損傷的可能分子機(jī)制。本發(fā)明首次提出具有明確抗炎作用的秋水仙堿，可通過(guò)抑制血管壁外膜炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、抑制血管平滑肌細(xì)胞向合成型轉(zhuǎn)化和基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)等方面來(lái)改善小鼠AAA損傷，有助于揭示臨床常用藥物秋水仙堿的新用途，為腹主動(dòng)脈瘤的防治提供了新的干預(yù)策略和研發(fā)思路。

技術(shù)研發(fā)人員：付慧,趙熠,沈啟睿,李冬潔,沈甫明,陳雨欣
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海市第十人民醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10