本發(fā)明屬于分子生物，具體涉及rhoa基因作為靶分子在豬格拉瑟氏病防治中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、豬格拉瑟氏病，又稱多發(fā)性纖維素性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎，是由副豬嗜血桿菌(g.parasuis)引起的細(xì)菌性傳染病。臨床上表現(xiàn)為體溫升高、關(guān)節(jié)腫脹、呼吸困難、多發(fā)性漿膜炎和高死亡率，對斷奶仔豬和保育豬的健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。雖然存在疫苗和抗生素藥物，但對豬格拉瑟氏病的預(yù)防和治療效果并不理想。目前，該病的致病機(jī)制尚不清楚，缺乏關(guān)鍵有效的治療靶點(diǎn)。因此，尋找新的基因靶點(diǎn)對宿主靶向抗細(xì)菌藥物的開發(fā)顯得尤為緊迫和重要。

2、rhoa基因(ras?homolog?family?member?a)編碼小gtp酶rhoa，屬于rho家族。rhoa能夠在活躍的gtp結(jié)合狀態(tài)和無活性的gdp結(jié)合狀態(tài)之間循環(huán)，作為細(xì)胞內(nèi)的分子開關(guān)，調(diào)節(jié)多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。rhoa通過激活信號級聯(lián)反應(yīng)來調(diào)控囊泡運(yùn)輸、細(xì)胞粘附、融合和運(yùn)動等活動，參與多種病毒感染宿主過程，如皰疹病毒、腺病毒、登革熱病毒、痘病毒、偽狂犬病毒等。

3、盡管rhoa在多種病毒感染中發(fā)揮重要作用，其在副豬嗜血桿菌引發(fā)的豬格拉瑟氏病中的作用尚未明確。進(jìn)一步研究rhoa在這種特定細(xì)菌性疾病中的功能，有望為未來治療策略提供新思路。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明公開了rhoa基因作為靶點(diǎn)用于制備防治豬格拉瑟氏病的藥物，所述藥物為靶向抑制rhoa基因表達(dá)的物質(zhì)。具體地，所述的藥物包括靶向敲低rhoa基因的sgrna或其表達(dá)載體。

2、進(jìn)一步優(yōu)選地，靶向敲除rhoa基因的sgrna序列為5’-gaggtatatgtacctaccgt-3’。

3、本發(fā)明還公開了一種藥物，包含靶向敲低rhoa基因的sgrna，該藥物可用于防治豬格拉瑟氏病。

4、本發(fā)明還公開了rhoa基因作為靶點(diǎn)在制備抗副豬嗜血桿菌細(xì)菌感染的基因編輯細(xì)胞或動物模型中的應(yīng)用。具體地，包括：(1)利用慢病毒載體，通過hek293t細(xì)胞進(jìn)行包裝，獲得crispr/cas9系統(tǒng)慢病毒顆粒；(2)將慢病毒顆粒感染目的細(xì)胞株，流式分選法傳代篩選，獲得rhoa基因敲低的細(xì)胞株。

5、進(jìn)一步地，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)rhoa基因與副豬嗜血桿菌黏附入侵具有相關(guān)性。在本發(fā)明的具體實(shí)施例中，當(dāng)敲低rhoa基因時(shí)，可以降低副豬嗜血桿菌感染pk1細(xì)胞的能力，提高細(xì)胞增殖能力和存活率。

6、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

7、本發(fā)明提供rhoa基因在防治豬格拉瑟氏病中的應(yīng)用。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)副豬嗜血桿菌感染宿主細(xì)胞后rhoa基因表達(dá)水平上調(diào)，通過靶向敲低rhoa基因表達(dá)可有效抑制副豬嗜血桿菌感染宿主細(xì)胞，從而防治g.parasuis感染所引發(fā)的豬格拉瑟氏病。因此，rhoa基因可以作為豬格拉瑟氏病防治的潛在靶點(diǎn)，具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)特征：

1.rhoa基因抑制劑的用途，其特征在于，用于制備預(yù)防或治療豬格拉瑟氏病的藥物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述rhoa基因抑制劑包括靶向敲低rhoa基因的核苷酸或其表達(dá)載體。

3.用于制備預(yù)防或治療豬格拉瑟氏病的藥物，其特征在于，包括靶向敲低rhoa基因的核苷酸或其表達(dá)載體。

4.根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物，其特征在于，包括靶向敲低rhoa基因的特異性sgrna，所述sgrna序列為5’-gaggtatatgtacctaccgt-3’。

5.抗豬格拉瑟氏病的細(xì)胞模型或動物模型，其特征在于，細(xì)胞中rhoa基因被敲低，rhoa蛋白表達(dá)被抑制。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了RHOA基因在防治豬格拉瑟氏病中的應(yīng)用，通過靶向抑制RHOA基因表達(dá)，可有效抑制副豬嗜血桿菌黏附入侵宿主細(xì)胞，并減少細(xì)胞病變。這種方法有助于抵抗副豬嗜血桿菌感染誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，從而預(yù)防豬格拉瑟氏病的發(fā)生。因此，RHOA基因可以作為治療豬格拉瑟氏病的重要靶點(diǎn)，具有重要的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)研發(fā)人員：周煥煥,陳洪波,陳雪雪,李新云,謝勝松
受保護(hù)的技術(shù)使用者：武漢輕工大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19