本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，具體涉及一種血小板膜包被的納米顆粒及其在制備治療膿毒癥相關(guān)性急性肺損傷藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、膿毒癥的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，急性肺損傷（ali）引起的炎癥免疫反應(yīng)失調(diào)是膿毒癥高死亡率的重要原因，ali表現(xiàn)為非心源性肺水腫和低血氧癥，因此，開發(fā)出針對ali的精準(zhǔn)安全的藥物干預(yù)措施十分必要。

2、中性粒細(xì)胞是感染的第一反應(yīng)者，通過快速募集到感染部位，吞噬病原體并產(chǎn)生殺微生物介質(zhì)而在宿主免疫防御中起著關(guān)鍵作用。2004年，?brinkmann等首次提出中性粒細(xì)胞新的效應(yīng)功能，即中性粒細(xì)胞胞外陷進(jìn)（neutrophil?extracellular?traps,?nets）的形成。近年來，中性粒細(xì)胞的浸潤和nets的釋放已被證明參與ali發(fā)生發(fā)展的重要病理過程。nets的形成會進(jìn)一步加重肺組織損傷并促進(jìn)炎癥反應(yīng)。研究表明，清除過量nets能夠抑制lps誘導(dǎo)的ali的炎癥反應(yīng)，重塑免疫穩(wěn)態(tài)。因此，有效清除炎癥性肺組織中的nets可能是治療ali的潛在策略。

3、nets的結(jié)構(gòu)骨架dna和附著在其上的主要蛋白酶類如ne、髓過氧化物酶（myeloperoxidase,?mpo）等都在其形成過程中扮演著不同的作用。最近的研究表明，活性氧（reactive?oxygen?species,?ros）可促使ne從顆粒轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，在細(xì)胞核中ne處理組蛋白，導(dǎo)致nets釋放到細(xì)胞外空間。因此，ne在nets的形成過程中起著關(guān)鍵作用，抑制ne的活性可能是防止nets?形成的一種可行方法。nets中dna的降解是靶向netosis的最后一步，dnaase能降解nets的dna主干，但dnase并不能抑制裝飾在nets上的蛋白酶的活性。因此，dnase和ne抑制劑se的聯(lián)合使用能有效抑制過量nets形成。然而，nets的系統(tǒng)性抑制不利于保留免疫系統(tǒng)的內(nèi)在防御機(jī)制，并可能導(dǎo)致細(xì)菌感染的易感性增加。除此之外，這些抑制藥物靶向性差、循環(huán)半衰期短、藥代動力學(xué)差以及不穩(wěn)定性等在臨床使用過程中仍然面臨著很大問題，需要設(shè)計新的藥物遞送策略來提高藥物在體內(nèi)的攝取利用率。

4、目前，研究者們在以nets為突破點(diǎn)治療ali時，主要集中在抑制或阻斷nets主要成分中的某一個關(guān)鍵物質(zhì)，這種治療策略存在著藥效不明顯、易被機(jī)體清除等局限。而nets的多重抑制，由于多方位的清除nets組分，在腫瘤等疾病中已得到充分應(yīng)用。雖然研究者們?yōu)樘岣咚幬镞f送效率開發(fā)出了多種細(xì)胞膜如中性粒細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等包被的納米藥物遞送系統(tǒng)，仍然存在被機(jī)體當(dāng)做外來物清除的風(fēng)險。而血小板膜因其特異性蛋白的存在能夠抑制吞噬細(xì)胞的吞噬作用，從而有效躲避免疫系統(tǒng)清除，更好發(fā)揮藥理作用。但是目前對于血小板膜包被藥物治療ali的研究尚未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種血小板膜包被的納米顆粒及其在制備治療膿毒癥相關(guān)性急性肺損傷藥物中的應(yīng)用。

2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種血小板膜包被的納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：

4、s1、將介孔納米二氧化硅和氧化鈰分散在去離子水中，隨后向其中加入西維來司他鈉溶液，攪拌混合均勻，經(jīng)離心沉淀，得到納米二氧化硅負(fù)載材料；

5、s2、從富含血小板的血漿中提取制備血小板膜；

6、s3、將步驟s2中得到的血小板膜與步驟s1中得到的納米二氧化硅負(fù)載材料加入到去離子水中，混合均勻后超聲處理，隨后使用脂質(zhì)體擠出器反復(fù)擠出10-30次，即得到血小板膜包被的納米顆粒。

7、在本發(fā)明一些實施例中，步驟s1中，介孔納米二氧化硅的制備方法如下：將十六烷基三甲基氯化銨（ctac）和三乙胺（tea）加入到去離子水中，攪拌均勻，隨后加入均三甲苯和正硅酸乙酯，攪拌反應(yīng)，待反應(yīng)結(jié)束后，經(jīng)乙醇回流去除ctac，離心，所得到的沉淀為介孔納米二氧化硅（簡稱msn）。

8、具體的，十六烷基三甲基氯化銨、三乙胺、均三甲苯和正硅酸乙酯的用量比為1.5-2.5g：0.01-0.03g：1-2ml：1-2ml。

9、具體的，攪拌反應(yīng)的溫度為80-95℃，攪拌反應(yīng)的時間為1-3h。

10、在本發(fā)明一些實施例中，步驟s1中，氧化鈰的制備方法如下：將乙酸鈰和油胺加入到二甲苯中，室溫下攪拌18-24h，隨后在氮?dú)獗Ｗo(hù)下老化2-4h，經(jīng)丙酮沉淀得到氧化鈰（ceo2）。

11、具體的，乙酸鈰和油胺的質(zhì)量比為0.4-0.5:3-4。

12、在本發(fā)明一些實施例中，步驟s1中，介孔納米二氧化硅、氧化鈰和西維來司他鈉的質(zhì)量比為1:1-2:3-5，例如可以選擇1:1:3、1:1:4、1:1:5、1:1.5:3、1:1.5:4、1:1.5:5、1:2:3、1:2:4、1:2:5，但不限于所列舉的數(shù)值，數(shù)值范圍內(nèi)其它未列舉的數(shù)值同樣適用。

13、在本發(fā)明一些實施例中，步驟s2中，提取制備血小板膜的具體工藝如下：麻醉小鼠后取血，經(jīng)離心分離，得到富含血小板的血漿，加入到含edta的磷酸鹽緩沖液中，抑制血小板活化，隨后離心收集血小板沉淀，-80℃反復(fù)凍融后離心，收集血小板膜沉淀。

14、具體的，磷酸鹽緩沖液中edta的含量為0.5-2mm。

15、在本發(fā)明一些實施例中，步驟s3中，血小板膜和納米二氧化硅負(fù)載材料的質(zhì)量比為1-3:1。

16、在本發(fā)明一些實施例中，步驟s3中，超聲功率為100-200w，例如可以選擇100w、120w、140w、150w、160w、180w、200w；超聲時間為5-10min，例如可以選擇5min、6min、7min、8min、9min、10min；但不限于所列舉的數(shù)值，數(shù)值范圍內(nèi)其它未列舉的數(shù)值同樣適用。

17、第二方面，本發(fā)明提供由上述制備方法所制備得到的血小板膜包被的納米顆粒。

18、第三方面，本發(fā)明還提供上述血小板膜包被的納米顆粒在制備治療膿毒癥相關(guān)性急性肺損傷藥物中的應(yīng)用。

19、具體的，所述藥物的劑型為注射劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、口服液或乳劑。

20、具體的，所述藥物還包括藥學(xué)上或藥理上可接受的載體。

21、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：

22、（1）本發(fā)明通過分離提取血小板膜，與納米二氧化硅負(fù)載材料共擠出得到血小板膜包被的納米顆粒（記為pm@mcs），具有良好的生物安全性、生物相容性和高靶向能力，能夠有效治療ali。

23、（2）本發(fā)明利用介孔二氧化硅負(fù)載ceo2納米酶和西維來司他鈉兩種藥物，ceo2納米酶和西維來司他鈉共同作用，既能有效抑制nets生成，同時還能增強(qiáng)清除nets的能力，從而實現(xiàn)治療ali的目的。

24、（3）本發(fā)明利用血小板膜包被納米顆粒，能夠躲避免疫系統(tǒng)清除，實現(xiàn)靶向遞送藥物，具有良好的生物安全性和生物相容性。

技術(shù)特征：

1.一種血小板膜包被的納米顆粒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟s1中，介孔納米二氧化硅、氧化鈰和西維來司他鈉的質(zhì)量比為1:1-2:3-5。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟s2中，提取制備血小板膜的具體工藝如下：麻醉小鼠后取血，經(jīng)離心分離，得到富含血小板的血漿，加入到含edta的磷酸鹽緩沖液中，抑制血小板活化，隨后離心收集血小板沉淀，-80℃反復(fù)凍融后離心，收集血小板膜沉淀。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟s3中，血小板膜和納米二氧化硅負(fù)載材料的質(zhì)量比為1-3:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟s3中，超聲功率為100-200w，超聲時間為5-10min。

6.如權(quán)利要求1-5任一項所述制備方法所制備得到的血小板膜包被的納米顆粒。

7.如權(quán)利要求6所述的血小板膜包被的納米顆粒在制備治療膿毒癥相關(guān)性急性肺損傷藥物中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，藥物的劑型為注射劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、口服液或乳劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，藥物還包括藥學(xué)上或藥理上可接受的載體。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種血小板膜包被的納米顆粒及其在制備治療膿毒癥相關(guān)性急性肺損傷藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明通過分離提取血小板膜，與納米二氧化硅負(fù)載材料共擠出得到血小板膜包被的納米顆粒，具有良好的生物安全性、生物相容性和高靶向能力，能夠有效治療ALI；本發(fā)明利用介孔二氧化硅負(fù)載CeO<subgt;2</subgt;納米酶和西維來司他鈉兩種藥物，CeO<subgt;2</subgt;納米酶和西維來司他鈉共同作用，既能有效抑制NETs生成，同時還能增強(qiáng)清除NETs的能力，從而實現(xiàn)治療ALI的目的，同時利用血小板膜包被納米顆粒，能夠躲避免疫系統(tǒng)清除，實現(xiàn)靶向遞送藥物，具有良好的生物安全性和生物相容性。

技術(shù)研發(fā)人員：周慧婷,汪健,東珍珍,黃潔,柏振江,郝文燕,徐鈴琪
受保護(hù)的技術(shù)使用者：蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19