專利名稱:活性無細胞真皮基質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體地涉及用于皮膚移植的活性無細胞真皮基質(zhì)及其制備方法。
背景技術(shù)：
全層皮膚缺損創(chuàng)面的現(xiàn)代治療仍以移植刃厚自體皮(即薄皮)為主。由于刃厚自體皮含有較少的真皮成分，創(chuàng)面愈合后會產(chǎn)生不同程度的疤痕增生。若移植較厚的自體皮，則往往在供皮區(qū)造成明顯的疤痕增生。
1981年Bell等人利用提取的天然膠原蛋白與成纖維細胞按一定的比例混合，形成一個真皮層。再將表皮細胞懸液接種在這個真皮層上，制成一個類似正常皮膚的復(fù)合皮。
Hznsbrough也利用可被生物降解的聚合物作為細胞生長的基質(zhì)框架，在體外將新生兒成纖維細胞接種于基質(zhì)框架內(nèi)。隨著細胞在框架上的生長，它們不斷地分泌出許多蛋白質(zhì)和糖蛋白等成分，充填在網(wǎng)狀框架中，形成一個天然的細胞外基質(zhì)。經(jīng)過實驗表明這個具有生命活性的真皮替代物覆蓋在深度創(chuàng)面上能夠迅速血管化，并且覆蓋在其上的自體表皮也隨之上皮化。
Heck于1985年報道，以同種異體真皮作為自體表皮的移植載體并應(yīng)用于大鼠和人體上。他采用經(jīng)過冷凍處理過的天然同種異體皮膚通過真空吸引法將所得的自體皮覆蓋在異體真皮表面。
上述的一些復(fù)合移植方法，已部分建立具有類似真皮的結(jié)構(gòu)和功能。植皮區(qū)創(chuàng)面變得光滑、平整；減少了疤痕增生，愈后功能也較為完善。
Cuono等人借助體外培養(yǎng)后的單層表皮細胞，覆蓋于去除表皮的異體真皮表面。這種方法雖然已初步應(yīng)用于臨床，但效果難以肯定。原因是這種方法雖然脫除了表皮，從而降低了免疫抗原性，不會招致急性排斥反應(yīng)，但是由于保留了真皮層內(nèi)含有的表皮細胞成分、成纖維細胞和血管內(nèi)皮細胞等，它們依然會引發(fā)機體產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。
1995年美國生命細胞公司的Livesey[Livesey SA，Herndon DN，Hollyoak MA，et alTransplanted Acellular Allograft Dermal Matrix.Transplantation，1995，60(l)1～9]等首先報道了無細胞真皮基質(zhì)的制備方法。同年美國的Wainwright[Wainwright DJUse of an Acellular Allograft Dermal Matrix(AlloDerm)in the Management of Full-thickness Burns.Burns，1995，21(4)243～248]首先報道了無細胞真皮基質(zhì)的臨床應(yīng)用，引起了國際燒傷學(xué)界的廣泛重視；國內(nèi)許多單位也相繼開展了臨床應(yīng)用，其應(yīng)用范圍擴大到整形外科，領(lǐng)面外科等，取得了較好的臨床效果。
無細胞真皮基質(zhì)(Acellular Dermal Matrix，ADM)是一種用于全層皮膚缺損創(chuàng)面的真皮替代物，來源于天然皮膚。它是天然皮膚經(jīng)過一定的理化方法處理后，去除了表皮和真皮中所有細胞成分，但保留了真皮的膠原成分和其三維空間結(jié)構(gòu)，同時也保留了基底膜復(fù)合物。由于去除了皮膚中具強抗原性的細胞成分，而僅殘留具微弱抗原性的膠原蛋白等細胞外基質(zhì)成分，同時由于它具有天然真皮結(jié)構(gòu)，可以誘導(dǎo)移植后宿主的細胞成分(如成纖維細胞、內(nèi)皮細胞等)循其支架結(jié)構(gòu)生長，真皮基質(zhì)還可支持成纖維細胞的浸潤、新生血管形成，使成纖維細胞合成和分泌具有正常結(jié)構(gòu)和功能的細胞外基質(zhì)如膠原，使肉芽組織快速成熟及真皮深層再生，減少成纖維細胞向肌成纖維細胞分化，并與其上移植的自體表皮成分融合，形成較為完整的皮膚結(jié)構(gòu)，基本恢復(fù)了皮膚原有的功能，從而產(chǎn)生了良好的少疤或無疤的臨床效果。無細胞真皮基質(zhì)與自體表皮復(fù)合移植是目前治療需要植皮的全層皮膚缺損中很有前途的方法。
然而，無細胞真皮基質(zhì)應(yīng)用過程中遇到的突出問題是無細胞真皮基質(zhì)移植后，在短時間(3～5天)內(nèi)，如未能與創(chuàng)面基底建立良好的血液循環(huán)，則可引起嚴重的不良后果，表現(xiàn)為(1)移植物抗感染能力差，易因發(fā)生感染導(dǎo)致移植失敗；(2)未能為其上移植的自體表皮提供足夠的營養(yǎng)，從而影響后者的存活。
因此，本領(lǐng)域迫切需要提供新的、有效治療全層皮膚缺損創(chuàng)面的移植物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種新的有效治療全層皮膚缺損創(chuàng)面的移植物及其制法。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種移植物，它包括(a)真皮基質(zhì)，所述的真皮基質(zhì)基本上不含細胞；(b)有效量的選自下組的細胞因子成纖維細胞生長因子、血管內(nèi)皮細胞生長因子、血小板衍生生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-α或其混合物。
在一優(yōu)選例中，所述的真皮基質(zhì)還含有基底膜復(fù)合物。
在另一優(yōu)選例中，所述的真皮基質(zhì)中細胞數(shù)量小于5％，較佳地小于1％，更佳地小于0.5％，最佳地小于0.1％，按真皮基質(zhì)的體積計。
在另一優(yōu)選例中，所述的細胞因子選自成纖維細胞生長因子、血管內(nèi)皮細胞生長因子或其混合物。
在另一優(yōu)選例中，所述的有效量是100-30000AU/立方厘米。
在另一優(yōu)選例中，所述的真皮基質(zhì)的厚度是0.2-2mm，且所述的細胞因子是堿性成纖維細胞生長因子。
在另一優(yōu)選例中，所述的真皮基質(zhì)來自下列動物的皮膚豬、牛、人、鼠。
在本發(fā)明的第二方面，提供了一種制備移植物的方法，包括步驟(a)提供一真皮基質(zhì)，所述的真皮基質(zhì)中基本上不含細胞；(b)將真皮基質(zhì)與選自下組的細胞因子接觸，從而使真皮基質(zhì)中含有濃度為100-30000AU/立方厘米的所述細胞因子成纖維細胞生長因子、血管內(nèi)皮細胞生長因子、血小板衍生生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-α或其混合物。
在一優(yōu)選例中，在步驟(b)中，用無針高壓注射槍用所述細胞因子的溶液注入真皮基質(zhì)中；且所述的溶液的濃度是240-24000AU/ml或0.1-10ng/ml。
在另一優(yōu)選例中中，所述的細胞因子是堿性成纖維細胞生長因子。
在本發(fā)明的第三方面，提供了一種試劑盒，它含有本發(fā)明所述的移植物和任選的其他試劑和說明書。
具體實施方式
針對上述本領(lǐng)域存在的問題，本發(fā)明人經(jīng)過深入而廣泛的研究，發(fā)現(xiàn)通過加入能促進血管生成的生長因子，可促使無細胞真皮基質(zhì)移植后在短時間內(nèi)與創(chuàng)面基底建立良好的血液循環(huán)，提高移植成功率，并改善其移植效果。在此基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。
術(shù)語術(shù)語“純化的或分離的”指純化的或分離的物質(zhì)基本上不含有其他細胞、蛋白質(zhì)或多肽，例如純化的細胞因子或分離的細胞因子。
術(shù)語“異種移植”指將所需生物材料(如皮膚)從某一物種中取出并再施用于另一物種對象的方法。
術(shù)語“自體移植”指將所需生物材料(如皮膚)從某病人中取出并再施用于同一病人的方法。
術(shù)語“異體移植”指將所需生物材料(如皮膚)從某病人中取出并再施用于另一不同病人的方法。
術(shù)語“同基因移植”指在遺傳上相同的人之間發(fā)生的細胞移植。
無細胞真皮基質(zhì)可用于本發(fā)明的無細胞真皮基質(zhì)沒有特別限制，可以是用來源人、豬、牛等哺乳動物的天然皮膚，通過已知方法制備的無細胞真皮基質(zhì)。
就無細胞真皮基質(zhì)的主要成分而言，為去除了正常皮膚中的表皮成分和真真皮中所有細胞成分，而保留了真皮中的膠原成分和其三維空間結(jié)構(gòu)，同時較佳地還保留了基底膜復(fù)合物。無細胞真皮基質(zhì)中的膠原為存在于基質(zhì)中的III型膠原，存在于基底膜中的III型、VII型膠原。另外，基質(zhì)中還有彈力纖維、硫酸軟骨素、纖維連接蛋白、氨基聚糖。
在本發(fā)明的真皮基質(zhì)中，細胞數(shù)量小于5％，較佳地小于1％，更佳地小于0.5％，最佳地小于0.1％，按真皮基質(zhì)的體積計。一種簡便的檢測方法是在光學(xué)顯微鏡高倍視野(×40)下觀察時，細胞計數(shù)小于3只，較佳地小于2個，更佳地小于1只。
一種優(yōu)選的真皮基質(zhì)還含有基底膜復(fù)合物，其作用是加強真皮和表皮之間的連接，并改善皮片愈合后的質(zhì)量。
無細胞真皮基質(zhì)的厚度沒有特別限制，通常約為0.2-2mm，更佳地約為0.30-0.50mm。
無細胞真皮基質(zhì)的大小沒有特別限制，可以根據(jù)創(chuàng)面不同而制作，也可以制作成例如100mm×100mm的特定規(guī)格，然后在使用時裁剪下所需大小的真皮基質(zhì)。
促進血管生成的細胞因子如本文所用，術(shù)語“促進血管生成的因子或細胞因子”指對血管生成有促進或激活作用的物質(zhì)，主要包括成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor，F(xiàn)GF)、血管內(nèi)皮細胞生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、血小板衍生生長因子(Platelet-derived growth factor，PDGF)、轉(zhuǎn)化生長因子-o(transforming growth factor-α，TGF-α)等。優(yōu)選的細胞因子是FGF(包括堿性成纖維細胞生長因子bFGF)和VEGF，最佳的是成纖維細胞生長因子bFGF。
VEGF血管內(nèi)皮細胞生長因子被認為是作用最強、特異性最高的促內(nèi)皮細胞增殖、遷移的調(diào)控因于。在創(chuàng)面愈合過程中，VEGF促進創(chuàng)面血管化；迄今只發(fā)現(xiàn)血管內(nèi)皮細胞對VEGF有高特異性的增殖反應(yīng)，還未見其它細胞對VEGF反應(yīng)的報道。因此，創(chuàng)面組織中VEGF的多少與血管形成密切相關(guān)。此外，VEGF參與調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細胞(endothelial cell，EC)遷移、增殖和管樣結(jié)構(gòu)的形成。VEGF不足會導(dǎo)致血管腔閉合、血管退化。
堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)是哺乳動物和人體內(nèi)存在的一種非常微量的多肽類物質(zhì)，能刺激中胚胎層和外胚胎層來源的細胞如成纖維細胞、血管內(nèi)皮細胞等的分裂和增殖，生理功能非常廣泛。bFGF對創(chuàng)傷修復(fù)過程的三個階段，即局部炎癥反應(yīng)階段、細胞增殖分化及肉芽組織形成階段、組織重建階段均有顯著的促進作用。在細胞增殖和修復(fù)期，最關(guān)鍵的步驟之一是肉芽組織的形成，肉芽組織的本質(zhì)是大量的毛細血管和豐富的成纖維細胞，bFGF正是成纖維細胞、血管內(nèi)皮細胞及血管平滑肌細胞的高效促生長劑，能夠強烈刺激新生毛細血管的形成，顯著增加肉芽組織毛細血管數(shù)量和血液流量，改善創(chuàng)面微循環(huán)，為組織修復(fù)提供所必須的氧及豐富的營養(yǎng)物質(zhì)。所以，創(chuàng)面bFGF的含量與創(chuàng)面愈合中新生血管的形成密切相關(guān)。
利用bFGF和VEGF等生長因子的這種生物作用，可以提高無細胞真皮基質(zhì)移植后的存活率，進而改善其移植效果。VEGF來源有限，價格昂貴，限制了其應(yīng)用。
近十年多來，國內(nèi)外生物學(xué)和醫(yī)學(xué)工作者對bFGF進行了廣泛而深入的基礎(chǔ)和應(yīng)用研究。美國、日本、法國等發(fā)達國家都投入大量力量研究和生產(chǎn)基因重組bFGF；中國國家科委也相繼將bFGF的研究列入“八五”和“九五”攻關(guān)項目。1998年，中國自己研制的重組牛堿性成纖維細胞生長因子(rb-bFGF)獲得衛(wèi)生部頒發(fā)的正式生產(chǎn)批文，標志著bFGF終于完成了從實驗室到產(chǎn)業(yè)化的歷程。
可用于本發(fā)明的各細胞因子的來源沒有特別限制，可以使用天然的、分離的、重組的或合成的細胞因子，而分離、重組表達和/或人工合成各種細胞因子的技術(shù)是本領(lǐng)域中已知的。此外，還可從市場上購得各細胞因子，例如bFGF可購自珠海東大集團東大生物工程公司。
其他添加劑在本發(fā)明的活性無細胞真皮基質(zhì)中，除了含有上述的促進血管生成的細胞因子之外，還可以含有其他一些添加劑，例如防止傷口感染發(fā)炎的抗生素、防止生長因子降解的保護劑(如肝素)。
制備方法在獲得了無細胞真皮基質(zhì)和純化的細胞因子后，將真皮基質(zhì)與細胞因子接觸，從而使真皮基質(zhì)中含有有效量的細胞因子。如本文所用，與細胞因子連用的術(shù)語“有效量”指為了實現(xiàn)所需水平的細胞增殖而所需要的增殖因子的量。特定的細胞增殖因子的有效量取決于各種變量因素，其中包括，所需的增殖水平、某個因子是否與其他因子一起使用以及待增殖的細胞類型。例如，對于bFGF而言，其有效量通常為為100-30000AU/立方厘米，較佳地200-10000AU/立方厘米，更佳地500-7500AU/立方厘米，最佳地1000-5000AU/立方厘米。
在本發(fā)明中，制備方法沒有特別限制，只要該方法能使細胞因子均勻地分布在真皮基質(zhì)之中和或之上即可。例如，將無細胞真皮基質(zhì)在含細胞因子的溶液中放置(孵育)一段時間。
有二種制備方法是特別優(yōu)選的。第一種是用無針高壓注射槍(例如可購自MadaJet XL，USA的無針高壓注射槍)將促進血管生成的生長因子注入無細胞真皮基質(zhì)中。這種方法的優(yōu)點是利用壓力使細胞因子均勻地滲透到真皮基質(zhì)之中，并能維持一定時間(約24-48小時或更長)。
第二種方法是在無細胞真皮基質(zhì)與創(chuàng)面基底交界處加入一定濃度的促進血管生成的生長因子。這種方法的優(yōu)點是簡單方便，缺點是生長因子較難滲透入真皮基質(zhì)中且維持時間短。
這兩種方法都能促使內(nèi)皮細胞長入無細胞真皮基質(zhì)并形成毛細血管，從而提高無細胞真皮基質(zhì)移植成功率從而改善其移植效果。
創(chuàng)面愈合過程中血管化的檢測，可通過檢測以下指標進行。
1)VIII因子，又稱血友病因子或VWF。血管內(nèi)皮細胞能分泌釋放VIII因子，帶有標記物的VIII因子抗體與血管內(nèi)皮細胞膜上的VIII因于抗原特異性結(jié)合，通過顯色反應(yīng)，使血管內(nèi)皮細胞顯色。
2)CD31血小板內(nèi)皮細胞粘附分子(Platelet endothelial cell adhesionmolecule)。CD31是一種130Kda整合粘膜蛋白，屬于免疫球蛋白超基因家族，介導(dǎo)細胞與細胞粘附。CD31在內(nèi)皮細胞中持續(xù)表達，因此可以作為血管化標志。
3)CD34，在內(nèi)皮細胞粘附過程中，扮有重要角色，是血管形成的重要標志。實驗研究顯示，在創(chuàng)面新生生成的血管，其CD34表達普遍增加，抗CD34抗體能很好標記內(nèi)皮細胞，并能區(qū)分新生血管和正常組織血管。
上述這些指標可應(yīng)用免疫學(xué)和組織化學(xué)原理進行檢測，并對創(chuàng)面組織切片中血管內(nèi)皮細胞帶有的抗原進行顯色，利用光學(xué)顯微鏡對創(chuàng)面組織中的微血管計數(shù)，從而得出創(chuàng)面組織中的微血管密度，反映創(chuàng)面的血管化程度。
本發(fā)明的實驗已表明，使用本發(fā)明的活性無細胞真皮基質(zhì)后，能促使無細胞真皮基質(zhì)移植后在短時間內(nèi)與創(chuàng)面基底建立良好的血液循環(huán)，提高移植成功率，從而改善其移植效果。
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1活性無細胞真皮基質(zhì)的制備在該實施例中，通過以下步驟制備活性無細胞真皮基質(zhì)，以下步驟均要求無菌操作。
步驟一清潔級SD大鼠，背部脫毛后24小時，切取背部全厚皮膚(大小約15×20平方厘米)；在取皮鼓上反取中厚皮；①去表皮處理加入2.5單位/ml分散酶II(Dispase II，Roche公司)，4℃條件下作用24小時，在作用結(jié)束后以彎頭皮鑷揭除表皮，并吸去去表皮液。②脫細胞處理加入0.5％十二烷基硫酸鈉(SDS，簡稱去污劑)160ml，20～26℃作用24小時；吸除去污劑，用Hanks液沖洗兩遍，最后，吸除Hanks液，即可得到無細胞真皮基質(zhì)。然后將其置于含青霉素(100u/ml)、氯霉素(100μg/ml)和卡那霉素(100μg/ml)的Hanks液中，4℃保存?zhèn)溆谩?br> 合格的無細胞真皮基質(zhì)符合以下要求去除了表皮和真皮中所有細胞成分，包括完整的細胞和細胞碎屑(細胞碎屑≤1/10個高倍視野)，但保留了真皮的三維空間結(jié)構(gòu)，保留了基底膜復(fù)合物。
步驟二含5毫升的240、2400、24000AU/ml(0.1、1、10ng/ml)的bFGF溶液，以無針高壓注射槍(購自MadaJet XL，USA)注入無細胞真皮基質(zhì)，得到含bFGF無細胞真皮基質(zhì)。獲得的活性無細胞真皮基質(zhì)中bFGF的濃度分別約為150AU/立方厘米，1500AU/立方厘米，和15000AU/立方厘米。
實施例2活性無細胞真皮基質(zhì)的動物試驗在該實施例中，利用動物實驗進行測試。測試方法如下選擇一定數(shù)量的清潔級SD大鼠，背部脫毛后24小時，用手術(shù)刀在人鼠背部切取一定大小的全層皮膚，在鼓式取皮刀上反取刃厚皮，作為白體皮。創(chuàng)面隨機分為三組組1創(chuàng)面作為實驗創(chuàng)面，止血后，先移植在實施例1中制備的活性無細胞真皮基質(zhì)，然后在其上移植自體皮，加壓包扎；組2創(chuàng)面作為實驗創(chuàng)面，止血后，加入濃度為240～24000AU/ml或0.1～10ng/ml的bFGF(體積為5-10毫升)，然后先后移植無細胞真皮基質(zhì)和自體皮，加壓包扎；
組3創(chuàng)面作為對照創(chuàng)面，止血后，不加入bFGF，但同樣先后移值無細胞真皮基質(zhì)和自體皮，加壓包扎。
二周后，上述每組動物均于取材后處死。取材時每組動物再隨機分為二小組。第一小組動物打開創(chuàng)面，取標本，其石蠟切片免疫組織化學(xué)檢測VIII因子(vonWillebrand因子)、CD31和CD34；第二小組動物，靜脈注射Evans Blue(EB)染料后處死動物，取標本，石蠟切片，HE染色后光鏡下觀察[按Record R，Tuttle P，Tullius R，et alQuantitative Assessment of Angiogensis in Response toImplants.Tissue Engineering，2001，7(5)637中所述的方法]。利用光學(xué)顯微鏡對上述切片創(chuàng)面組織中所標記的微血管計數(shù)，可以得出創(chuàng)面組織中的微血管密度。
根據(jù)創(chuàng)面組織中所標記的微血管計數(shù)值，比較添加與不加細胞因子，以及不同添加方法所產(chǎn)生的創(chuàng)面不同血管化程度。結(jié)果如下●加入促進血管生成的生長因子后的活性無細胞真皮基質(zhì)，能促使無細胞真皮基質(zhì)移植后在短時間內(nèi)與創(chuàng)面基底建立良好的血液循環(huán)，提高了移植成功率、改善移植效果。
●組1的效果優(yōu)于組2的效果。
實施例3活性無細胞真皮基質(zhì)的制備基本上按實施例1的步驟制備活性無細胞真皮基質(zhì)，不同點僅在于選用的皮膚是脫毛后的豬皮。
實施例4活性無細胞真皮基質(zhì)的制備基本上按實施例1的步驟制備活性無細胞真皮基質(zhì)，不同點僅在于，用濃度為2500AU/ml的VEGF替換bFGF。
實施例5活性無細胞真皮基質(zhì)的制備基本上按實施例1的步驟制備活性無細胞真皮基質(zhì)，不同點僅在于，用濃度2500AU/ml VEGF和濃度為2500AU/ml bFGF的混合溶液替換原bFGF溶液。
實施例6活性無細胞真皮基質(zhì)的動物試驗基本上按實施例2的方法，對實施例3-5中制備的活性無細胞真皮基質(zhì)進行動物實驗。結(jié)果表明，這些活性無細胞真皮基質(zhì)可在短時間內(nèi)與創(chuàng)面基底建立良好的血液循環(huán)，提高移植成功率，并改善移植效果。
在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求
書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種移植物，其特征在于，它包括(a)真皮基質(zhì)，所述的真皮基質(zhì)中細胞數(shù)量小于5％，按真皮基質(zhì)的體積計；(b)有效量的選自下組的細胞因子成纖維細胞生長因子、血管內(nèi)皮細胞生長因子、血小板衍生生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-α或其混合物，其中所述的有效量是100-30000AU/立方厘米。
2.如權(quán)利要求
1所述的移植物，其特征在于，所述的真皮基質(zhì)還含有基底膜復(fù)合物。
3.如權(quán)利要求
1所述的移植物，其特征在于，所述的真皮基質(zhì)中細胞數(shù)量小于1％，按真皮基質(zhì)的體積計。
4.如權(quán)利要求
1所述的移植物，其特征在于，所述的細胞因子選自成纖維細胞生長因子、血管內(nèi)皮細胞生長因子或其混合物。
5.如權(quán)利要求
1所述的移植物，其特征在于，所述的有效量是200-10000AU/立方厘米。
6.如權(quán)利要求
1所述的移植物，其特征在于，所述的真皮基質(zhì)的厚度是0.2-2mm，且所述的細胞因子是堿性成纖維細胞生長因子。
7.如權(quán)利要求
1所述的移植物，其特征在于，所述的真皮基質(zhì)來自下列動物的皮膚豬、牛、人、鼠。
8.一種制備移植物的方法，其特征在于，包括步驟(a)提供一真皮基質(zhì)，所述的真皮基質(zhì)中的細胞數(shù)量小于5％，按真皮基質(zhì)的體積計；(b)將真皮基質(zhì)與選自下組的細胞因子接觸，從而使真皮基質(zhì)中含有濃度為100-30000AU/立方厘米的所述細胞因子成纖維細胞生長因子、血管內(nèi)皮細胞生長因子、血小板衍生生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-α或其混合物。
9.如權(quán)利要求
8所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中，用無針高壓注射槍用所述細胞因子的溶液注入真皮基質(zhì)中；且所述的溶液的濃度是240-24000AU/ml或0.1-10ng/ml。
10.如權(quán)利要求
8所述的方法，其特征在于，所述的真皮基質(zhì)中細胞數(shù)量小于1％，按真皮基質(zhì)的體積計。
11.一種試劑盒，其特征在于，它含有權(quán)利要求
1所述的移植物。
專利摘要
本發(fā)明提供了一種用于皮膚移植的活性無細胞真皮基質(zhì)及其制備方法。所述的基質(zhì)含有(a)真皮基質(zhì)，所述的真皮基質(zhì)基本上不含細胞；(b)有效量的選自下組的細胞因子成纖維細胞生長因子、血管內(nèi)皮細胞生長因子、血小板衍生生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-α或其混合物。本發(fā)明的活性無細胞真皮基質(zhì)可在短時間內(nèi)與創(chuàng)面基底建立良好的血液循環(huán)，提高移植成功率，并改善移植效果。
文檔編號A61L27/60GKCN1274370SQ02112455
公開日2006年9月13日 申請日期2002年7月10日
發(fā)明者陸樹良, 向軍, 賈生賢 申請人:上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan