專利名稱:黃連黃芪黃芩組合物在制備防治糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及防治糖尿病并發(fā)癥的藥物，具體的涉及黃連黃芪黃芩三味中藥有效部位組合物及其在防治糖尿病并發(fā)癥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
糖尿病并發(fā)癥是隨糖尿病(diabetes mellitus, DM)病程的延長而導(dǎo)致的眼、腎、神經(jīng)、血管及心臟等多組織的慢性病變，是糖尿病致死致殘的主要原因。早期糖尿病腎病、早期糖尿病心臟病和糖尿病視網(wǎng)膜病變是糖尿病微血管病變的“三聯(lián)征”，也是糖尿病最常見的并發(fā)癥。
目前，防治糖尿病并發(fā)癥主要從以下幾個方面進(jìn)行:1，消除胰島素抵抗作用，血清胰島素代償性升高可促使血栓形成，促使動脈壁沉積和動脈平滑肌增殖，促使水鈉潴留和血壓升高，加速動脈硬化，造成糖尿病大血管病變；2，調(diào)整血脂，血脂紊亂是糖尿病大血管病變的重要危險因素之一；3，阻斷蛋白質(zhì)的非酶糖基化反應(yīng)，糖尿病的每種慢性并發(fā)癥都與蛋白質(zhì)糖化密切相關(guān)。糖尿病個體體內(nèi)蛋白質(zhì)發(fā)生非酶糖基化反應(yīng)(NEG)，致使終末糖基化產(chǎn)物(AGEs)增多，是導(dǎo)致糖尿病并發(fā)癥的重要原因之一。AGEs存在于血管、腎臟和神經(jīng)組織中，通過影響蛋白質(zhì)的正常功能，從而導(dǎo)致這些臟器損傷，尤其是在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。抑制NEG發(fā)生，減少AGEs的產(chǎn)生是目前研究開發(fā)糖尿病并發(fā)癥藥物的熱點(diǎn)；4 ，抗氧化反應(yīng)，高葡萄糖血癥伴有大量自由基產(chǎn)生，脂質(zhì)氧化增加又反過來刺激糖的自身氧化，造成血管通透性增加，基底膜增厚以及組織器官的損傷；5，抑制多元醇途徑的過度活化，糖尿病的高葡萄糖血癥狀態(tài)下，醛糖還原酶活性增加，合成大量山梨醇，山梨醇不能自由進(jìn)出細(xì)胞，造成細(xì)胞水腫破裂，另外又影響了對神經(jīng)功能重要的肌醇。
目前西藥化學(xué)合成制劑雖能較有效地控制血糖，但對糖尿病并發(fā)癥的防治仍缺乏理想的藥物和有效的措施。目前中成藥中的消渴靈具有良好的糾正脂肪及蛋白質(zhì)代謝紊亂的作用，糖腎安膠囊可改善血液流變性和坐骨神經(jīng)內(nèi)微血管狀態(tài)。
黃連總生物堿、黃苗多糖和黃岑總黃酮，分別是中藥黃連(Coptis chinensisFranch.),黃苗(Astragalus membranaceus Bge.)和黃岑(Scutellaria baicalensisGeorgi)的主要有效成分，迄今為止，尚未見有將上述中藥的有效聯(lián)合應(yīng)用于預(yù)防治療糖尿病并發(fā)癥的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種中藥有效部位組合物在預(yù)防治療糖尿病并發(fā)癥的新用途，具體涉及黃連黃芪黃芩有效部位組合物在制備防治糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述的中藥有效部位組合物由黃連黃芪黃芩提取物組成，制備方法見專利公開號CN101433607。所述的黃連總生物堿、黃芪多糖和黃芩總黃酮由原生藥黃連、黃芪和黃芩提取所得，純度分別為黃連總生物堿彡60% (HPLC檢測)，黃芪多糖彡80% (UV檢測)，黃芩總黃酮≥80% (UV檢測)。[0008]黃連、黃芪、黃芩有效部位組成的組合物重量百分比為:1:1:1或2: 2:1或 1:2:1。[0009]本發(fā)明將黃連總生物堿、黃芪多糖和黃芩總黃酮聯(lián)合應(yīng)用，可按常規(guī)方法制成藥物組合物臨床常用制劑，所述藥物組合物制劑的劑型可包括:顆粒劑、片劑和膠囊劑等口服固體制劑。[0010]本發(fā)明所述藥物組合物經(jīng)體外酶學(xué)和動物模型試驗，結(jié)果證實，組合物體外可顯著抑制NEG的進(jìn)行和糖化終產(chǎn)物AGEs的生成，且優(yōu)于各自單用效果；體內(nèi)可改善糖尿病動物糖脂代謝、腎功能相關(guān)指標(biāo)，顯著抑制糖尿病動物腎臟、晶狀體、紅細(xì)胞內(nèi)的醛糖還原酶活性和山梨醇的生成，抑制肝、腎、晶狀體組織內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)的含量，降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(MDA)，提高動物抗氧化能力。表明組合物具有預(yù)防和治療糖尿病并發(fā)癥的功效，能預(yù)防和治療糖尿病腎病、心臟病和視網(wǎng)膜病變。


[0011]附圖是不同濃度DMF與OD值的線性關(guān)系。
具體實施方式
[0012]本發(fā)明中藥組合物的有益效果通過下述實驗證實:[0013]實施例1制備藥物組合物臨床常用制劑[0014]根據(jù)所述重量百分比，取黃連總生物堿，黃芪多糖和黃芩總黃酮，其配伍的重量百分比為1:1:1或2: 2:1或1: 2:1。按常規(guī)方法制成藥物組合物臨床常用制劑， 所述藥物組合物制劑的劑型，包括顆粒劑、片劑和膠囊劑等口服固體制劑。[0015]實施例2[0016]一、體外實驗:黃連黃芪黃芩組合物對非酶化反應(yīng)及其終產(chǎn)物的抑制作用[0017](一)材料[0018]小牛血清白蛋白(BSA)購自上海伯奧生物科技有限公司，批號080325 ;D_葡萄糖，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，氯化鈉，氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)，疊氮鈉購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號分別為 F20050712, F20080619, F20070810, F20080114, F20080408 ;碳酸鈉，碳酸氫鈉購自上海虹光化工廠，批號分別為071014，080212 ;鹽酸二甲雙胍片購自上海華氏制藥有限公司，批號071113 ;1_脫氧-1-嗎啉果糖(DMF)購自Sigma公司，批號 011H4030。[0019](二)方法[0020]I體外蛋白NEG體系的建立及黃連黃芪黃芩組合物各組分干預(yù)實驗[0021]在PBS(pH7.4)中加入牛血清白蛋白和葡萄糖使其終濃度分別為40g/L、200mmol/ L。上述體系中分別加入終濃度為0.01,0.l、l、5、10mg/mL濃度的氨基胍、二甲雙胍、黃連總生物堿、黃芪多糖和黃芩總黃酮以及三者組合物(三種藥濃度相等)，每個濃度設(shè)4管。另設(shè)不加藥、不加糖、不加糖和藥的對照組。反應(yīng)體系中加入0.1%的疊氮鈉防腐，37°C恒溫水浴箱中孵育，于第4周測定非酶糖基化白蛋白的含量，第8周測定非酶糖基化終產(chǎn)物的含量。[0022]2非酶糖基化白蛋白的測定
(I)試劑配制
3mg氯化硝基四氮唑藍(lán)溶于0.lmol/L, pH 10.8碳酸鹽緩沖液中，以新鮮配制為佳。精確稱取DMF 9.96mg于IOml容量瓶中加小牛血清至刻度，配置成4mmol/L 1-脫氧-1-嗎啉果糖標(biāo)準(zhǔn)液，分裝保存于_20°C冰箱中。
(2)測定步驟
整個反應(yīng)體系在96孔板上進(jìn)行，每個測定孔加入250 μ I碳酸鹽緩沖液，10 μ I待測定標(biāo)本10μ 1，另設(shè)空白孔和標(biāo)準(zhǔn)孔分別以10μ I小牛血清和4.0mmo I/L DMF標(biāo)準(zhǔn)液取代測定標(biāo)本。37°C預(yù)溫lOmin，然后以加入NBT試劑20 μ I (終濃度為0.25mmol/L)，37°C下反應(yīng)15min,反應(yīng)后立即加入10%乙酸20 μ I終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀波長530nm進(jìn)行比色,記錄吸光度。根據(jù)DMF濃度與相應(yīng)吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線求得測定標(biāo)本中糖化白蛋白含量。
(3)DMF標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定
在96孔板上分別設(shè)定不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)孔和相應(yīng)對照孔。標(biāo)準(zhǔn)孔分別加入2 μ 1、5μ 1、10μ 1、20μ 1、30μ 1、50μ I的DMF標(biāo)準(zhǔn)液，每個濃度設(shè)3個復(fù)孔，取其平均值?？瞻卓追謩e加入相同量的小牛血清，多于10μ I的孔減少相應(yīng)量的碳酸鹽緩沖液。37°C預(yù)溫lOmin，然后以加入NBT試劑20μ I (終濃度為0.25mmol/L)，37°C下反應(yīng)15min，反應(yīng)后立即加入10%乙酸20 μ I終止反應(yīng)。酶標(biāo)儀波長530nm進(jìn)行比色，記錄吸光度。根據(jù)吸光度和相應(yīng)DMF的濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(4) AGEs 的測定
取200 μ I測定樣本于96孔板上,用Biotek熒光酶標(biāo)儀370nm/440nm檢測各樣本的熒光吸光值F。并按下式計算抑制率。抑制率=1-[(F藥物-F不加糖)/(F不加藥-F不加藥和糖)]X 100%。
(三)結(jié)果
I黃連總生物堿、黃芪多糖和黃芩總黃酮不同濃度下NEG的抑制率
反應(yīng)體系37°C恒溫水浴箱中孵育4周后，各組對NEG的抑制率如表3_1所示，氨基胍和二甲雙胍組對NEG的最高抑制率分別為33.9±2.7%和16.7±9.6%。黃芪多糖和黃芩總黃酮具有比較好的NEG抑制活性，最高抑制率分別達(dá)到了 37.0±7.9%,44.1±7.8%，均超過了兩組西藥對照，且具有較好的劑量依賴關(guān)系。黃連總生物堿對NEG僅有微弱的抑制作用。但是當(dāng)三者合用時，組合物對NEG的抑制率有較大的提高，最高抑制率達(dá)到了61.4±7.4%，超過了各單個組分的抑制作用。
表I黃連總生物堿、黃芪多糖和黃芩總黃酮不同濃度下NEG的抑制率(x±s%，η=6)
權(quán)利要求
1.黃連總生物堿、黃芪多糖和黃 芩總黃酮按重量百分比為1:1:1或2: 2:1或 1:2:1組成的組合物在制備抑制非酶糖基化反應(yīng)及其終產(chǎn)物制劑中的應(yīng)用。
專利摘要
本發(fā)明提供了一種中藥有效部位組合物在預(yù)防治療糖尿病并發(fā)癥的新用途，具體是黃連、黃芪、黃芩有效部位以重量百分比1∶1∶1或2∶2∶1或1∶2∶1的比例組成的組合物，在制備防治糖尿病并發(fā)癥藥物中的應(yīng)用，特別是在抑制非酶化反應(yīng)及其終產(chǎn)物藥物中的應(yīng)用。
文檔編號A61P3/10GKCN102068513 B發(fā)布類型授權(quán) 專利申請?zhí)朇N 200910199158
公開日2013年6月5日 申請日期2009年11月20日
發(fā)明者周明眉, 趙愛華, 楊紅舟, 范自全, 賈偉 申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan專利引用 (1), 非專利引用 (1),